專利名稱：Hla－b51基因亞型檢測(cè)芯片及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因分析檢測(cè)產(chǎn)品，具體地說(shuō)是基因檢測(cè)芯片，更具體的說(shuō)是適用于檢測(cè)HLA-B51基因亞型的基因檢測(cè)芯片及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
白塞病是一種頑固性的多系統(tǒng)炎癥綜合癥，主要表現(xiàn)為口瘡潰瘍、眼睛癥狀、皮膚損傷、生殖道潰瘍等。目前其病因?qū)W和病理學(xué)均不清楚，治療效果很不理想。同時(shí)由于該病的發(fā)病率并不高，發(fā)現(xiàn)其高危人群并進(jìn)行有針對(duì)性的預(yù)防也十分重要。國(guó)內(nèi)外的研究表明，HLA-B51基因與白塞病密切相關(guān)，參見(jiàn)Yabuki K等。沙特阿拉伯白塞病患者的HLAI類和II類分型。組織抗原。1999；54273-277(Yabuki K et al.HLA class Iand II typing of the patients with Behcet′s disease in Saudi Arabia.Tissue Antigens.1999；54273-277)。HLA-B51基因存在9種亞型(5101-5109)，對(duì)疾病的預(yù)防和治療有不同影響，因此測(cè)定HLA-B51基因亞型對(duì)于白塞病的防治具有重大意義，見(jiàn)Gonzalez-Escnbano MF等。HLA-B51亞型與西班牙白塞病患者的相關(guān)性。組織抗原。1998；5278-80(Gonzalez-Escribano MF，et al.Association of HLA-B51 subtypes andBehcet′s disease in Spain.Tissue Antigens.1998；5278-80)。但目前測(cè)定HLA-B51基因亞型的方法主要采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)、手工或自動(dòng)測(cè)序、序列特異性引物PCR等方法，不僅操作繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，而且影響檢測(cè)結(jié)果的因素多，不易控制，難以滿足臨床檢驗(yàn)的要求，使臨床至今還無(wú)法開展有關(guān)白塞病易感基因的檢測(cè)。
基因芯片是近幾年在高科技領(lǐng)域內(nèi)出現(xiàn)的最具時(shí)代特征的重大科技進(jìn)展之一。它是將能反映樣本中大量基因信息的基因探針(寡核苷酸探針、cDNA克隆、PCR產(chǎn)物等)，有序固定在固相支持物(如醛基、氨基、巰基、羧基等活性基團(tuán)修飾的載玻片或硅片、尼龍膜、硝酸纖維素膜)上形成陣列，通過(guò)與實(shí)際樣本(或擴(kuò)增產(chǎn)物)進(jìn)行雜交反應(yīng)，只需一次實(shí)驗(yàn)，就可高通量獲得所有待檢基因的信息。這種平行檢測(cè)、高信息通量的特點(diǎn)使其在基因表達(dá)、基因多態(tài)性檢測(cè)等方面的應(yīng)用受到廣泛重視。用基因芯片檢測(cè)HLA-B51基因亞型，發(fā)揮基因芯片檢測(cè)操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)，對(duì)于臨床篩選白塞病高危人群，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于檢測(cè)HLA-B51基因亞型的基因檢測(cè)芯片，還提供一種利用該芯片檢測(cè)HLA-B51基因亞型的方法。
本發(fā)明的HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片，包括固相支持物和有序固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包含以下序列中的包括HLA-B-Exon3-Loci1 C/I，HLA-B-Exon3-Loci2I/G，HLA-B-Exon3-Loci3 CIG/CGG/GAC，HLA-B-Exon3-Loci4CTTGG/TCATC/CCCTC，HLA-B-Exon2-Loci5T/C，HLA-B-Exon3-Loci6A/T在內(nèi)的17-26個(gè)連續(xù)核苷酸，其中SEQ ID NO1和SEQ ID NO2包含Loci1，SEQ ID NO3和SEQ ID NO4包含Loci2，SEQ ID NO5、SEQ ID NO6和SEQ ID NO7包含Loci3，SEQ ID NO8、SEQ ID NO9和SEQ ID NO10包含Loci4，SEQ ID NO11和SEQ ID NO12包含Loci5，SEQ ID NO13和SEQ ID NO14包含Loci6SEQ ID NO1ggctccgcagaCacctggagaacgggSEQ ID NO2ggctccgcagaTacctggagaacgggSEQ ID NO3cctgtgcgtggagTggctccgcagaSEQ ID NO4cctgtgcgtggagGggctccgcagaSEQ ID NO5ggcggagcagCTGagagcctacctggaSEQ ID NO6ggcggagcagCGGagagcctacctggaSEQ ID NO7ggcggagcagGACagagcctacctggaSEQ ID NO8ccagggtctcacaCTTGGcagacgatgtatgSEQ ID NO9ccagggtctcacaTCATCcagacgatgtatgSEQ ID NO10ccagggtctcacaCCCTCcagacgatgtatgSEQ ID NO11ggaacacacagatctTcaagaccaacacacaSEQ ID NO12ggaacacacagatctCcaagaccaacacacaSEQ ID NO13gggaggcggcccgtgAggcggagcagSEQ ID NO14gggaggcggcccgtgTggcggagcag。
為了增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率，所述Loci1C/T，Loci2T/G，Loci3CTG/CGG/GAC，Loci4CTTGG/TCATC/CCCTC，Loci5T/C，Loci6A/T最好位于所述探針的中部。
所述探針還可以在其5′端包含一段氨基修飾的16聚的聚脫氧胸苷酸(聚dT)。
所述固相支持物可采用各種基因芯片領(lǐng)域的常用材料，例如但不限于尼龍膜，經(jīng)活性基團(tuán)(如醛基、氨基、異硫氰酸基等)修飾的玻片或硅片、未修飾的玻片、塑料片等。
本發(fā)明基因芯片的制備可按照生物芯片的常規(guī)制造方法進(jìn)行。例如，如果固相支持物采用的是修飾玻片或硅片，探針的5′端含有氨基修飾的聚dT串，可將寡核苷酸探針配制成溶液，然后用點(diǎn)樣儀將其點(diǎn)在修飾玻片或硅片，排列成預(yù)定的序列或陣列，然后通過(guò)放置過(guò)夜來(lái)固定，就可得到本發(fā)明的基因芯片。如果寡核苷酸探針不含氨基修飾，則其制備方法也可參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》；Derisi，JL，Iyer VR和Brown PO于1997年在《科學(xué)》278(5338)680-686發(fā)表的“探討基因組內(nèi)基因表達(dá)的代謝和遺傳控制”(Derisi，JL，Iyer VR，Brown PO.Exploring the metablicand genetic control of gene expression on a genomic scale.Science.1997；278(5338)680-686)及馬立人，蔣中華主編。生物芯片。北京化學(xué)工業(yè)出版社，2000，1-130。
HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，一種非以診斷為目的檢測(cè)HLA-B51基因亞型的方法。
HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，包括以下步驟(1)制備染色體DNA；(2)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增HLA-B基因中包含Loci1C/T，Loci2T/G，Loci3CTG/CGG/GAC，Loci4CTTGG/TCATC/CCCTC，Loci5T/C，Loci6A/T的基因片段；(3)將所得擴(kuò)增產(chǎn)物變性后與含有檢測(cè)探針的雜交緩沖液混合；(4)將上述混合液與基因芯片雜交；(5)檢測(cè)基因芯片的雜交信號(hào)。
制備用于PCR擴(kuò)增的染色體DNA的方法有很多，可以從全血中制備、也可以從發(fā)根中制備，還可以從口腔粘膜的脫落物中制備。具體方法可參閱文獻(xiàn)(丁振諾，蘇明權(quán)主編?！杜R床PCR基因診斷技術(shù)》，世界圖書出版公司。1998年第一版)。
用PCR方法擴(kuò)增染色體基因特定片段的方法已經(jīng)是本領(lǐng)域公知技術(shù)。其中的關(guān)鍵在于引物設(shè)計(jì)，有關(guān)引物設(shè)計(jì)的方法、軟件均可以從商業(yè)途徑獲得。本發(fā)明涉及的HLA-B基因的擴(kuò)增引物和體系可根據(jù)以上方法及有關(guān)文獻(xiàn)(KB穆里斯，F(xiàn).費(fèi)里，R.吉布斯等主編《PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)》，科學(xué)出版社)方法由使用者獨(dú)立完成。
在所述步驟(3)中所用的檢測(cè)探針，是選自HLA-B-Exon3-Loci0A序列的包含所述Loci0A的18-20聚寡核苷酸，其5‘端帶有標(biāo)記基團(tuán)HLA-B-Exon3-Loci0AtacgcctacgacggcaaAgattacatcgccct(SEQ ID NO15)為了增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率，所述Loci0A最好位于所述探針的中部。檢測(cè)探針在合成時(shí)，其5′端帶標(biāo)記基團(tuán)，所述標(biāo)記基團(tuán)包括但不限于地高辛分子(DIG)、生物素分子(Bio)、熒光素及其衍生物分子(FITC等)、其他熒光分子(如Cy3、Cy5等)、堿性磷酸酶(AP)、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)等。這些標(biāo)記及其標(biāo)記方法以及各標(biāo)記物的檢測(cè)方法都已是本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)技術(shù)，也可以參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》；J.薩姆布魯克，E.F.弗里奇，T.曼尼阿蒂斯主編，《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，科學(xué)出版社，1995年；馬立人，蔣中華主編，《生物芯片》，北京化學(xué)工業(yè)出版社，2000，1-130。
在所述步驟(5)中檢測(cè)雜交信號(hào)的方法選自堿性磷酸酶催化的四氮唑藍(lán)顯色反應(yīng)，辣根過(guò)氧化物酶催化的5-溴-4-氯-3-吲哚酚-磷酸-4-甲苯胺鹽顯色反應(yīng)或辣根過(guò)氧化物酶催化的四甲基聯(lián)苯胺顯色反應(yīng)。
擴(kuò)增產(chǎn)物的變性可采用常規(guī)變性方法如加熱至94～98℃，并保溫2～10min，然后迅速置冰上。
取適量變性的擴(kuò)增產(chǎn)物與適量的檢測(cè)探針溶液一同加入雜交緩沖液中與基因芯片雜交。與基因芯片雜交時(shí)，可以先將基因芯片與預(yù)雜交緩沖液進(jìn)行預(yù)雜交。
本發(fā)明擴(kuò)增產(chǎn)物與基因芯片之間的固相雜交按照本領(lǐng)域的經(jīng)典方法進(jìn)行，本領(lǐng)域一般人員依據(jù)經(jīng)驗(yàn)容易確定有關(guān)緩沖液、探針和樣品濃度、預(yù)雜交溫度、雜交溫度以及時(shí)間等的最適條件?；蛘咭部蓞⒄胀跎晡逯骶幍摹痘蛟\斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》；J.薩姆布魯克，E.F.弗里奇，T.曼尼阿蒂斯主編，《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，科學(xué)出版社，1995年。
然后根據(jù)標(biāo)記信號(hào)在基因芯片上的位置、強(qiáng)度等信息獲取待測(cè)信息。本發(fā)明所述檢測(cè)基因芯片雜交信號(hào)的方法是基于與抗生物素抗體或親合素或鏈親合素或抗地高辛抗體或抗熒光素抗體復(fù)合在一起的堿性磷酸酶或辣根過(guò)氧化物酶催化的四氮唑藍(lán)(NBT)和5-溴-4-氯-3-吲哚酚-磷酸-4-甲苯胺鹽(BCIP)或四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的顯色反應(yīng)。具體方法可參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》。若擴(kuò)增產(chǎn)物用熒光基團(tuán)標(biāo)記，也可以直接用熒光檢測(cè)設(shè)備(如激光共聚焦掃描儀Scanarray3000等)獲取待測(cè)信息。
本發(fā)明還提供一種用于檢測(cè)HLA-B51基因亞型的試劑盒，該試劑盒包含本發(fā)明所說(shuō)的基因芯片和應(yīng)用方法。
本發(fā)明提供基因芯片及其試劑盒，可用于檢測(cè)白塞病的易感基因，這為臨床篩選出白塞病高危人群，并提供有針對(duì)性的治療提供了一種簡(jiǎn)便易行的解決方案。


圖1是本發(fā)明基因芯片上的一種點(diǎn)樣列陣；圖2是用本發(fā)明基因芯片檢測(cè)HLA-B51基因亞型所得結(jié)果的照片。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的更詳細(xì)的說(shuō)明，而不是對(duì)本發(fā)明范圍的限定。
實(shí)施例1、基因芯片的制備(1)醛基修飾的載玻片(產(chǎn)品編號(hào)BSM03011，上海百傲科技有限公司)。人工合成(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)以下探針，用水溶解成(100pmol/ul)濃度，然后用2×點(diǎn)樣buffer(產(chǎn)品編號(hào)BST02010，上海百傲科技有限公司)等比混合。接著，用Affymetrix公司的GSM417點(diǎn)樣儀按說(shuō)明書所述方法點(diǎn)制如圖1的陣列。然后室溫放置過(guò)夜。
其中各探針序列為L(zhǎng)oci1CNH2-5’-tttttttttttttttt ctccgcagaCacctggagaa-3’(20聚)(SEQ ID NO16)Loci1TNH2-5’-tttttttttttttttt ctccgcagaTacctggagaac-3’(21聚)(SEQ ID NO17)Loci2TNH2-5’-tttttttttttttttt gcgtggagTggctccgca-3’(18聚)(SEQ ID NO18)Loci2GNH2-5’-tttttttttttttttt cgtggagGggctccgca-3’(17聚)(SEQ ID NO19)Loci3CTGNH2-5’-tttttttttttttttt cggagcagCTGagagcctacct-3’(22聚)(SEQ ID NO20)Loci3CGGNH2-5’-tttttttttttttttt cggagcagCGGagagcctacc-3’(21聚)(SEQ ID NO21)
Loci3GACNH2-5’-tttttttttttttttt cggagcagGACagagcctacc-3’(21聚)(SEQ ID NO22)Loci4CTTGGNH2-5’-tttttttttttttttt ctcacaCTTGGcagacgatgtatg-3’(24聚)(SEQ ID NO23)Loci4TCATCNH2-5’-tttttttttttttttt ggtctcacaTCATCcagaggatgt-3’(24聚)(SEQ ID NO24)Loci4CCCTCNH2-5’-tttttttttttttttt ctcacaCCCTCcagaggatgtacg-3’(24聚)(SEQ ID NO25)Loci5TNH2-5’-tttttttttttttttt acacacagatctTcaagaccaacaca-3’(26聚)(SEQ ID NO26)Loci5CNH2-5’-tttttttttttttttt acacacagatctCcaagaccaacac-3’(25聚)(SEQ ID NO27)Loci6ANH2-5’-tttttttttttttttt ggcccgtgAggcggagc-3’(17聚)(SEQ ID NO28)Loci6TNH2-5’-tttttttttttttttt ggcccgtgTggcggagc-3’(17聚)(SEQ ID NO29)實(shí)施例2、染色體DNA的制備取待檢者全血500μl，用一次性無(wú)菌注射針頭抽取，收集于含50ul的2％EDTA溶液的無(wú)菌1.5ml離心管中，將管蓋蓋上，上下顛倒數(shù)次，使混勻。取無(wú)菌的1.5ml離心管，向其中加入混勻的待檢全血100μl和純水300μl，充分混勻，室溫靜置8分鐘；將離心管置離心機(jī)中，6000g離心1分鐘；取出離心管，傾去上清液，離心管底部可見(jiàn)少量白色沉淀；向離心管中加入抽提液(產(chǎn)品編號(hào)BST01010，上海百傲科技有限公司)60μl，充分振蕩使沉淀溶解；沸水浴中15分鐘；取出離心管，置離心機(jī)中，12,000g離心15分鐘。離心后上清液可直接用于PCR擴(kuò)增。
實(shí)施例3、用PCR方法擴(kuò)增HLA-B基因片段合成以下引物(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)上游引物5’-ccggagtattgggaccgcaac-3’(SEQ ID NO30)下游引物5’-gcgcgctgcagcgtctcc-3’ (SEQ ID NO31)然后用水溶解并稀釋至10pmol/μl。將購(gòu)置的Taq酶(產(chǎn)品編號(hào)Lot，CE1101-1，TaKaRa)、10×緩沖液(產(chǎn)品編號(hào)Lot，A2401-2，TaKaRa)、dNTP(產(chǎn)品編號(hào)D0056，上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)、純水以及實(shí)施例2獲得的PCR擴(kuò)增模板按以下配方配制PCR擴(kuò)增體系反應(yīng)體系 體積(μl)10×緩沖液2.5dNTP(各2.5mM) 2.5引物1(10pmol/ul) 1引物2(10pmol/ul) 1
Taq酶(2.5U/ul)0.8H2O 14.2模板 3總體積25μl用PCR擴(kuò)增儀Tc-25/H(杭州大和熱磁電子有限公司)按以下程序擴(kuò)增94℃，5min，然后按94℃25sec，59℃25sec，72℃45sec做35個(gè)循環(huán)，最后72℃5min。實(shí)施例4、HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，PCR產(chǎn)物與基因芯片的雜交。
合成以下檢測(cè)探針(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)生物素-5’-cgacggcaaagattacatcgc-3’(SEQ ID NO32)然后用水溶解并稀釋至10pmol/μl。
采用上海百傲科技有限公司的芯片雜交試劑盒與芯片顯色試劑盒進(jìn)行此雜交試驗(yàn)。所述芯片雜交試劑盒(產(chǎn)品編號(hào)BST05010，上海百傲科技有限公司)包含預(yù)雜交液，雜交緩沖液，洗液1，反應(yīng)艙。所述芯片顯色試劑盒(產(chǎn)品編號(hào)BST06010，上海百傲科技有限公司)包含抗體液，洗液2，洗液3，顯色液。
(1)將實(shí)施例1的基因芯片用預(yù)雜交液預(yù)雜交5min，然后除去預(yù)雜交液。A芯片和B芯片的預(yù)雜交溫度為45℃，C芯片用雜交緩沖液進(jìn)行預(yù)雜交，預(yù)雜交溫度為58℃。
(2)將實(shí)施例3獲得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合后先98℃變性5min，然后取10μl和檢測(cè)探針溶液1μl一同加至200μl雜交緩沖液中混勻，與預(yù)雜交完畢的基因芯片進(jìn)行30分鐘雜交反應(yīng)，雜交溫度為45℃。
(3)將雜交完畢的基因芯片用已預(yù)熱至雜交溫度的洗液1洗兩次，每次10分鐘；(4)然后用洗液2室溫洗2分鐘；(5)將基因芯片與抗體液室溫反應(yīng)20分鐘；(6)然后將基因芯片用洗液2室溫洗5分鐘，再重復(fù)此步驟一次；再用洗液3室溫洗2分鐘。
(7)在基因芯片上加顯色液200μl，45℃放置40分鐘。然后用水沖洗干凈，晾干。
實(shí)施例5、基因芯片雜交信號(hào)的檢測(cè)將雜交并洗滌完畢的基因芯片置于Baio BE3.0生物芯片識(shí)讀儀(BSE01021，上海百傲科技有限公司)上掃描后得到如圖2所示的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明受檢者的HLA-B51基因?qū)儆贐5101亞型，是白塞病易感的高危人群。檢測(cè)結(jié)果經(jīng)測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證完全符合。
權(quán)利要求
1.一種HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片，包括固相支持物和固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探針，其特征在于所述寡核苷酸探針包含以下序列中的包括HLA-B-Exon3-Loci1C/T，HLA-B-Exon3-Loci2T/G，HLA-B-Exon3-Loci3 CTG/CGG/GAC，HLA-B-Exon3-Loci4CTTGG/TCATC/CCCTC，HLA-B-Exon2-Loci5T/C，HLA-B-Exon3-Loci6A/T在內(nèi)的17-26個(gè)連續(xù)核苷酸，其中SEQ ID NO1和SEQ ID NO2包含Loci1，SEQ ID NO3和SEQ ID NO4包含Loci2，SEQ ID NO5、SEQ ID NO6和SEQ IDNO7包含Loci3，SEQ ID NO8、SEQ ID NO9和SEQ ID NO10包含Loci4，SEQ IDNO11和SEQ ID NO12包含Loci5，SEQ ID NO13和SEQ ID NO14包含Loci6SEQ ID NO1ggctccgcagaCacctggagaacgggSEQ ID NO2ggctccgcagaTacctggagaacgggSEQ ID NO3cctgtgcgtggagTggctccgcagaSEQ ID NO4cctgtgcgtggagGggctccgcagaSEQ ID NO5ggcggagcagCTGagagcctacctggaSEQ ID NO6ggcggagcagCGGagagcctacctggaSEQ ID NO7ggcggagcagGACagagcctacctggaSEQ ID NO8ccagggtctcacaCTTGGcagacgatgtatgSEQ ID NO9ccagggtctcacaTCATCcagacgatgtatgSEQ ID NO10ccagggtctcacaCCCTCcagacgatgtatgSEQ ID NO11ggaacacacagatctTcaagaccaacacacaSEQ ID NO12ggaacacacagatctCcaagaccaacacacaSEQ ID NO13gggaggcggcccgtgAggcggagcagSEQ ID NO14gggaggcggcccgtgTggcggagcag。
2.如權(quán)利要求1所述的基因芯片，所述Loci1C/T，Loci2T/G，Loci3CTG/CGG/GAC，Loci4CTTGG/TCATC/CCCTC，Loci5T/C，Loci6A/T位于所述探針的中部。
3.如權(quán)利要求1所述的基因芯片，所述探針的5′端還包含一段氨基修飾的16聚的聚脫氧胸苷酸。
4.HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，其特征在于非以診斷為目的檢測(cè)HLA-B51基因亞型。
5.如權(quán)利要求4所述的HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，其特征在于檢測(cè)HLA-B51基因亞型包括以下步驟(1)制備染色體DNA；(2)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增HLA-B基因中包含Loci1C/T，Loci2T/G，Loci3CTG/CGG/GAC，Loci4CTTGG/TCATC/CCCTC，Loci5T/C，Loci6A/T的基因片段；(3)將所得擴(kuò)增產(chǎn)物變性后與含有檢測(cè)探針的雜交緩沖液混合；(4)將上述混合液與基因芯片雜交；(5)檢測(cè)基因芯片的雜交信號(hào)。
6.如權(quán)利要求5所述的HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，其特征在于步驟(3)中所用的檢測(cè)探針，是選自如下序列的包含所述Loci0A的18-20聚5‘端帶有標(biāo)記基團(tuán)的寡核苷酸SEQ ID NO15tacgcctacgacggcaaAgattacatcgccct。
7.如權(quán)利要求6所述的HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，其特征在于，所述Loci0A位于所述檢測(cè)探針的中部。
8.如權(quán)利要求5所述的HLA-B51基因亞型檢測(cè)芯片的應(yīng)用，其特征在于，步驟(5)中檢測(cè)雜交信號(hào)的方法選自堿性磷酸酶催化的四氮唑藍(lán)顯色反應(yīng)，辣根過(guò)氧化物酶催化的5-溴-4-氯-3-吲哚酚-磷酸-4-甲苯胺鹽顯色反應(yīng)或辣根過(guò)氧化物酶催化的四甲基聯(lián)苯胺顯色反應(yīng)。
9.一種用于檢測(cè)HLA-B51基因型的試劑盒，該試劑盒包含權(quán)利要求1所述的基因芯片和應(yīng)用方法。
全文摘要
一種HLA－B51基因亞型的基因芯片及其應(yīng)用，包含該基因芯片的試劑盒和使用該芯片或試劑盒檢測(cè)HLA－B51基因亞型的方法。HLA－B51基因亞型檢測(cè)芯片，包括固相支持物和固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探針，寡核苷酸探針包含HLA－B－Exon3－Loci1C/T，HLA－B－Exon3－Loci2T/G，HLA－B－Exon3－Loci3 CTG/CGG/GAC，HLA－B－Exon3－Loci4CTTGG/TCATC/CCCTC，HLA－B－Exon2－Loci5T/C，HLA－B－Exon3－Loci6A/T在內(nèi)的17－26個(gè)連續(xù)核苷酸。本發(fā)明的基因芯片和應(yīng)用方法可用于檢測(cè)白塞病的易感基因，為預(yù)測(cè)白塞病發(fā)生危險(xiǎn)提供必要信息。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1563423SQ200410023799
公開日2005年1月12日 申請(qǐng)日期2004年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月8日
發(fā)明者汪運(yùn)山, 朱彬, 孫悅 申請(qǐng)人:濟(jì)南市中心醫(yī)院