專利名稱：茶多酚在制備預(yù)防和治療因化療引起脫發(fā)藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域。具體涉及茶多酚在制備預(yù)防和治療因化療引起脫發(fā)藥物或功能性食品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前治療腫瘤的化療藥物最大的副反應(yīng)之一就是脫發(fā)，這給病人造成很大的生理和心理上的傷害，至今沒有藥物能夠治療。
茶多酚是從茶葉中提取的活性成分，主要含黃烷醇類、黃酮類、花青素類和酚酸類化合物，據(jù)報(bào)道它有抗氧化、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、強(qiáng)心、抗心律失常、防治腦缺血再灌注損傷、抗齲護(hù)齒、抑菌等多種藥理作用，可用于開發(fā)保健食品、抗心腦血管病和抗腫瘤藥品、防紫外線化妝品、抗齲牙膏、天然食用色素和食品抗氧化劑等。但至今未見有關(guān)將其用于防止和治療因化療引起的脫發(fā)的各種藥品和功能性食品的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于開發(fā)茶多酚的新用途，提供茶多酚在制備預(yù)防和治療因化療引起脫發(fā)藥物或功能性食品中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述茶多酚是指從茶葉中提取的含黃烷醇類結(jié)構(gòu)的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epi-gallo-catechin-gallate，簡(jiǎn)稱EGCG)含量至少在30％以上的提取物或單一成分的表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
本發(fā)明所述的茶多酚從茶葉中提取的方法為常規(guī)茶多酚提取方法，即以茶葉為原料，經(jīng)稀乙醇浸泡后，加熱提取，提取液回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮干燥即得。采用高壓液相檢測(cè)其中EGCG的含量，至少30％。
茶葉為山茶科植物茶Camellia sinensis O.Ktze.的葉，性涼，味苦、甘，為常用的食品原料。由其提取得到的EGCG具有下述式I結(jié)構(gòu) 茶多酚具極強(qiáng)的清除自游基作用，并能改善微循環(huán)、促進(jìn)血循環(huán)狀態(tài)的改善，有利于維持細(xì)胞和機(jī)體內(nèi)困境的穩(wěn)定，防止毛囊細(xì)胞的損傷，這是茶多酚能促進(jìn)毛發(fā)生長(zhǎng)的主要原因。
本發(fā)明將從茶葉中提取含表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)30％以上的茶多酚復(fù)合成分進(jìn)行有關(guān)預(yù)防和治療因化療引起脫發(fā)的藥效試驗(yàn)，結(jié)果顯示EGCG可以明顯抑制環(huán)磷酰胺(CYP)引起的小鼠毛發(fā)脫落，說明EGCG在臨床防治化療藥物引起的脫發(fā)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明實(shí)施例2對(duì)此有進(jìn)一步的描述。
藥效試驗(yàn)表明，含EGCG 30％以上的茶多酚提取物可作為預(yù)防和治療因腫瘤化療引起脫發(fā)的藥物或輔助治療的功能性食品，其使用方法為化療開始前一星期服用茶多酚(EGCG 30％以上的茶多酚)，每天3次，每次300mg-900mg，連服5周為一療程，下次化療前同樣服用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1I、制備工藝取茶葉粗干粉10公斤加5倍量50％乙醇浸泡12小時(shí)，加熱提取2小時(shí)，過濾，濾液減壓回收乙醇，水液加中等量乙酸乙酯萃取2次；合并乙酸乙酯萃取液，用適量水洗，減壓回收萃取液中的乙酸乙酯，殘留物加溫水溶解至相對(duì)密度為1.08-1.09的濃縮液，濃縮液進(jìn)行噴霧干燥，得棕色粉末約120克。
II、EGCG含量測(cè)定1.檢測(cè)設(shè)備(HPLC)高效液相設(shè)備，產(chǎn)地日本島津公司2.檢測(cè)條件溫度30℃，波長(zhǎng)280nm，液速1.0ml/min流動(dòng)相液用甲醇∶水∶磷酸，27∶78∶0.1進(jìn)樣量10μl3.計(jì)算方法峰面積歸一計(jì)算方法(標(biāo)樣由美國西格曼公司提供)4.結(jié)果上述提取物測(cè)得EGCG含量為55％。
實(shí)施例2 動(dòng)物試驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)藥物EGCG，純度為55％以上(實(shí)施例1獲得)，使用前用蒸餾水溶解。
環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，CYP，注射用)，上海華聯(lián)制藥有限公司，批號(hào)為030501，臨用前溶于蒸餾水。
2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物近交系C57BL/6雌性小鼠，6-8周齡(青年期)，15-20g，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。小鼠在正常條件下喂養(yǎng)，即飼養(yǎng)室溫度為18-20℃，光照和黑暗各12h交替進(jìn)行，小鼠可以自由進(jìn)食和飲水。所有實(shí)驗(yàn)小鼠均處于毛發(fā)生長(zhǎng)終止期。動(dòng)物分組為正常組，對(duì)照組，EGCG低劑量組，EGCG高劑量組，每組15只小鼠。
3.實(shí)驗(yàn)方法(1)誘導(dǎo)毛發(fā)生長(zhǎng)初期的第VI階段用戊巴比妥鈉(80mg/kg)將小鼠麻醉，在小鼠背部涂上熔融的蜂蠟和松香的混合物，變硬后，剝掉，使所有的毛囊均處于生長(zhǎng)初期。至第8-9天時(shí)，毛發(fā)生長(zhǎng)即進(jìn)入生長(zhǎng)初期的第VI階段，此時(shí)毛囊發(fā)育成熟，皮膚顏色由灰變黑，并出現(xiàn)新生的、均一的黑色毛桿。
(2)脫發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立到第9天時(shí)，給對(duì)照組和EGCG組小鼠一次性腹腔注射環(huán)磷酰胺，注射劑量為100mg/kg，正常組小鼠只注射蒸餾水。
(3)給藥方案從脫毛后第3天開始直至第15天，給小鼠口服EGCG，低劑量組為300mg/kg.d，高劑量組為600mg/kg.d，分兩次灌胃(早、晚各一次)。
(4)脫毛后第13天(注射CYP后第4天)和第20天(注射CYP后第11天)的脫毛情況注射CYP后第4天，將小鼠麻醉，用統(tǒng)一的分辨率(1024×768，SONY DSC-P30數(shù)碼照相機(jī))給各組的每只小鼠拍照，利用圖像分析系統(tǒng)(復(fù)日FR-988)對(duì)照片進(jìn)行分析，選定背部的整個(gè)脫毛區(qū)域和明顯沒有毛桿生長(zhǎng)的區(qū)域，分別測(cè)量其面積，并計(jì)算每只小鼠的脫毛面積比例脫毛面積比例＝?jīng)]有毛桿生長(zhǎng)區(qū)域的面積/背部整個(gè)脫毛區(qū)域的面積)×100％。統(tǒng)計(jì)每組小鼠的脫毛面積比例，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示(x±s)，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果從脫毛后第3天開始，皮膚逐漸出現(xiàn)色素沉著，顏色開始變灰，至第5天時(shí)，整個(gè)背部已全部變?yōu)榛疑逸^光滑。至7-8天時(shí)，在背部的上半部分的脊柱兩側(cè)已出現(xiàn)較短且稀疏的毛桿。
至脫毛后第10天，即注射CYP后第二天，即可見對(duì)照組小鼠背部長(zhǎng)出的毛桿有明顯脫落，脫落區(qū)域的皮膚又恢復(fù)為較光滑的狀態(tài)，顏色仍為灰色，EGCG高、低劑量組亦有毛桿脫落現(xiàn)象，但程度較輕。至脫毛后第13天時(shí)，即注射CYP后第4天，對(duì)照組和EGCG組脫毛現(xiàn)象更加嚴(yán)重，但可見明顯差異，結(jié)果見表1。
至第20天時(shí)，即注射CYP后第4天，毛發(fā)已逐漸恢復(fù)再生，并且各組脫毛面積比例均明顯縮小，但對(duì)照組的脫毛面積比例仍明顯高于EGCG組。結(jié)果見表1。
表1 EGCG對(duì)CYP致小鼠脫毛的面積的影響動(dòng)物數(shù) 脫毛后第13天的脫毛后第20天的分組 給藥方案(只) 脫毛面積比例(％) 脫毛面積比例(％)正常組 15 蒸餾水 10.26±4.11**3.13±1.41**對(duì)照組 15 CYP+蒸餾水 88.42±18.36 39.72±11.34CYP+EGCGEGCG低劑量 15 52.47±14.62**27.85±8.28**(300mg/kg.d)CYP+EGCGEGCG高劑量 15 42.55±12.97**21.26±6.55**(600mg/kg.d)**與對(duì)照組相比，P＜0.015.結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中所使用的CYP致小鼠脫發(fā)的動(dòng)物模型，模擬了臨床上化療藥物引起的脫發(fā)副作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EGCG可以明顯抑制CYP引起的小鼠毛發(fā)脫落，說明EGCG在臨床防治化療藥物引起的脫發(fā)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
權(quán)利要求
1.茶多酚在制備預(yù)防和治療因化療引起脫發(fā)藥物或功能性食品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述的茶多酚是指從茶葉中提取的含表沒食子兒茶素沒食子酸酯含量至少在30％以上的提取物或單一成分的表沒食子兒茶素沒食子酸酯。
全文摘要
本發(fā)明涉及茶多酚在制備預(yù)防和治療因化療引起脫發(fā)藥物或功能性食品中的應(yīng)用。所述茶多酚是指從茶葉中提取的含黃烷醇類結(jié)構(gòu)的表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epi－gallo－catechin－gallate，簡(jiǎn)稱EGCG)含量至少在30％以上的提取物或單一成分的表沒食子兒茶素沒食子酸酯。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，EGCG可以明顯抑制CYP引起的小鼠毛發(fā)脫落，說明EGCG在臨床防治化療藥物引起的脫發(fā)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A23L1/30GK1640393SQ200410015898
公開日2005年7月20日 申請(qǐng)日期2004年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月17日
發(fā)明者欒德剛, 張漢明, 周靜 申請(qǐng)人:欒德剛, 張漢明, 周靜