專利名稱：用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種核酸檢測技術(shù)，特別是涉及一種用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片。
背景技術(shù)：
研究證實(shí)，疾病的發(fā)生與環(huán)境因素和遺傳因素有關(guān)。通常認(rèn)為在個體具有遺傳易感性背景的基礎(chǔ)上，環(huán)境致病因子作用于機(jī)體遂可引發(fā)疾病，如吸煙與肺癌的關(guān)系。個體易感性決定了為什么有人吸煙后得肺癌，有人吸煙后不得。在后基因組時代，人們將注意力集中到基因突變與疾病的關(guān)系上，已開始啟動了許多疾病相關(guān)基因研究，易感性基因研究是其中一個重要的組成部分。
易感性基因的特點(diǎn)是該基因突變本身并不直接導(dǎo)致疾病的發(fā)生，而只是使人體患病的幾率的升高，一旦有外界致病因子介入，便可引發(fā)疾??；另一種情況則出現(xiàn)在藥物治療中，易感基因突變會改變機(jī)體對藥物的敏感性，進(jìn)而降低藥物的療效或者導(dǎo)致不良反應(yīng)的出現(xiàn)。
生物學(xué)領(lǐng)域中的基因芯片技術(shù)是一種同時將大量的探針分子固定在固相支持物上，借助核酸分子雜交配對的特性對DNA樣品的序列信息進(jìn)行高效解讀和分析的方法。該技術(shù)目前在基因表達(dá)譜分析、突變檢測、多態(tài)性分析、基因測序等方面已有廣泛的應(yīng)用。但在人類腫瘤易感基因檢測方面，基因芯片技術(shù)尚未得到應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的空白，提供一種可用于人類腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片(寡核苷酸探針陣列)。
本發(fā)明之用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片，其結(jié)構(gòu)是在平面型支撐載體的平面上被覆有帶正電荷材料的膜層，在該膜層的表面以微點(diǎn)陣方式排布有供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針。其中所述的平面型支撐載體可采用目前同類技術(shù)中已有使用的玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜等材料制成的片狀支持基體中的一種。在該平面型支撐載體上被覆的帶正電荷材料的膜層可以為聚賴氨酸材料或氨基硅烷材料膜層中的一種。以微點(diǎn)陣方式排布于該膜層表面的供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針，可以以平面附著的方式位于所述膜層的表面，也可以使所述膜層的表面具有按微點(diǎn)陣形式排布的凹窩狀結(jié)構(gòu)，所述供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針以被覆于凹窩狀結(jié)構(gòu)內(nèi)凹表面的形式，或者以其他需要或適當(dāng)?shù)男问椒謩e位于各凹窩狀結(jié)構(gòu)內(nèi)。根據(jù)使用目的和/或領(lǐng)域的不同，所述以微點(diǎn)陣方式排布的供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針可以集中于所述的帶正電荷材料的膜層的一個區(qū)域內(nèi)，也可以使各以微點(diǎn)陣方式排布的供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針分布在所述帶正電荷材料的膜層表面處保持有空間間隔距離的復(fù)數(shù)個區(qū)域內(nèi)。
越來越多的研究結(jié)果證實(shí)，多種人類疾病與基因突變密切相關(guān)。例如在人類2號染色體2q14-q23區(qū)域存在高血壓的易感基因；在中國漢族人群X染色體短臂1區(qū)1帶上的HSU93305基因座與精神分裂癥存在關(guān)聯(lián)；人類16號染色體長臂上的IBD1是Crohn’s病的易感區(qū)域，IBD1中的NOD2基因與Crohn’s病(克隆病)之間存在相關(guān)性；定位于17號染色體長臂的BRCA1基因突變與乳腺癌，特別是家族性乳腺癌的關(guān)系非常密切；中國人II型糖尿病的易感基因定位在人體9號染色體短臂21帶區(qū)域；中國漢族人銀屑病的易感基因定位在4號染色體長臂(4q31.2)和6號染色體短臂(6p21.1)上等。其中，研究的較為深入的是幾種最重要的腫瘤相關(guān)基因的多態(tài)性和突變，這些基因分別是(1)細(xì)胞色素p450酶類基因，可催化香煙中苯丙吡、鹵代甲烷等毒性物質(zhì)反應(yīng)生成對身體有害的代謝物，與DNA結(jié)合產(chǎn)生致癌效應(yīng)。該基因突變導(dǎo)致有害物質(zhì)增加，檢測位點(diǎn)m1，m2；(2)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶解毒酶類基因的主要作用是催化有害的代謝物，易被機(jī)體排除掉。該基因的突變會導(dǎo)致有害物質(zhì)在體內(nèi)殘留。檢測位點(diǎn)GSTM1缺失型；(3)p53基因是一種腫瘤抑制基因，正常情形下p53基因可防止受損或突變細(xì)胞的繼續(xù)分裂，但當(dāng)其發(fā)生突變時，則細(xì)胞內(nèi)的正常調(diào)控會被破壞而造成細(xì)胞的不當(dāng)增生，尤其是導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。檢測位點(diǎn)密碼子157，175，245，248，249，273，282；(4)癌基因K-ras研究發(fā)現(xiàn)該基因突變造成激活是腫瘤發(fā)生的重要原因，檢測位點(diǎn)密碼子12；(5)APC基因也是一種腫瘤抑制基因，當(dāng)APC基因發(fā)生突變時，經(jīng)其轉(zhuǎn)譯出的蛋白產(chǎn)物會失去功能，而造成細(xì)胞病變之產(chǎn)生，尤其與結(jié)腸癌的罹患及預(yù)后最相關(guān)。本發(fā)明之供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針即實(shí)現(xiàn)對上述多種腫瘤易感基因突變的檢測。


以下通過附圖所示的實(shí)例對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題范圍僅限于下述的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述主題所實(shí)現(xiàn)的產(chǎn)品均屬于本發(fā)明的范圍。
圖1本發(fā)明用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片的一種結(jié)構(gòu)示意圖。
圖2本發(fā)明用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片的另一種結(jié)構(gòu)示意圖。
如圖1所示的用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片中，在常用的玻璃片或高分子有機(jī)材料等的平面型支撐載體1的上被覆有帶正電荷材料的膜層2，該膜層可以為聚賴氨酸材料或氨基硅烷材料膜層中的一種。在該膜層2的表面以平面附著的微點(diǎn)陣方式排布有供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針3。該供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針可以集中于所述的帶正電荷材料的膜層2表面處的一個區(qū)域內(nèi)，也可以使各以微點(diǎn)陣方式排布的供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針分布在所述帶正電荷材料的膜層2表面處保持有空間間隔距離5的復(fù)數(shù)個區(qū)域內(nèi)。
圖2所示的用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片在結(jié)構(gòu)上與圖1的不同之處在于，所述帶正電荷材料的膜層2的表面具有按微點(diǎn)陣形式排布的凹窩狀結(jié)構(gòu)4，所述供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針3以被覆于凹窩狀結(jié)構(gòu)4內(nèi)凹表面的形式，或者以其他需要或適當(dāng)?shù)男问椒謩e位于各凹窩狀結(jié)構(gòu)4內(nèi)。
權(quán)利要求
1.用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸探針陣列，其特征在于，在平面型支撐載體(1)的平面上被覆有帶正電荷材料的膜層(2)，在該膜層的表面以微點(diǎn)陣方式排布有供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針(3)。
2.如權(quán)利要求1所述的寡核苷酸探針陣列，其特征在于，所述帶正電荷材料的膜層(2)的表面具有按微點(diǎn)陣形式排布的凹窩狀結(jié)構(gòu)(4)，所述供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針(3)分別位于各凹窩狀結(jié)構(gòu)(4)內(nèi)。
3.如權(quán)利要求2所述的寡核苷酸探針陣列，其特征在于，所述供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針(3)以被覆于凹窩狀結(jié)構(gòu)(4)內(nèi)凹表面的形式設(shè)置。
4.如權(quán)利要求1至3之一所述的寡核苷酸探針陣列，其特征在于，所述以微點(diǎn)陣方式排布的供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針(3)分布在所述帶正電荷材料的膜層(2)表面處保持有空間間隔距離的復(fù)數(shù)個區(qū)域內(nèi)。
5.如權(quán)利要求1至3之一所述的寡核苷酸探針陣列，其特征在于，所述帶正電荷材料的膜層(2)為聚賴氨酸材料或氨基硅烷材料膜層中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于腫瘤易感基因檢測的寡核苷酸芯片，屬于核酸檢測技術(shù)，其技術(shù)方案為，在平面型支撐載體的平面上被覆有帶正電荷材料的膜層，在該膜層的表面以微點(diǎn)陣方式排布有供腫瘤易感基因檢測用的寡核苷酸探針。
文檔編號C12Q1/68GK1502703SQ0214535
公開日2004年6月9日 申請日期2002年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月21日
發(fā)明者李瑤, 吳海, 劉三震, 毛裕民, 謝毅, 李 瑤 申請人:上海博德基因開發(fā)有限公司