專利名稱：中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及對(duì)中草藥中減肥降脂活性成分進(jìn)行分子水平和細(xì)胞水平的篩選方法。
目前國(guó)際上減肥藥物的開發(fā)主要依據(jù)兩個(gè)原理第一，抑制食欲，比如西布曲明(sibutramine)；第二，減少吸收，比如奧利斯他(orlistat)。二者也是目前中國(guó)市場(chǎng)上僅有的兩個(gè)減肥藥，前者商品名為曲美、可秀和奧曲輕；后者商品名為仙尼克。二者的副作用十分明顯，西布曲明導(dǎo)致口干、心悸、乏力，奧利斯他導(dǎo)致油性便和脂溶性維生素缺乏。西方國(guó)家也一直在依據(jù)新的原理開發(fā)減肥藥物，比如，發(fā)現(xiàn)黃嘌呤衍生物類物質(zhì)可以通過加快體內(nèi)氧化代謝而加大能量支出，大量臨床試驗(yàn)證明咖啡因(caffeine)，麻黃素(ephedrine)單獨(dú)使用或聯(lián)合使用具有一定的減肥效果，但由于其可導(dǎo)致心率過速和心悸的副作用一直未獲得臨床許可；上世紀(jì)九十年代中期發(fā)現(xiàn)并克隆了小鼠ob基因的表達(dá)產(chǎn)物瘦素(leptin)，并證明其對(duì)于遺傳型肥胖的大鼠具有一定的減肥作用，但遺傳型肥胖的個(gè)體只占肥胖個(gè)體總數(shù)的5-10％，且此物質(zhì)注射給藥時(shí)導(dǎo)致嚴(yán)重局部紅腫疼痛，因此也至今未獲得臨床許可。綜上所述，現(xiàn)有減肥藥物的主要不足之處是副作用大和臨床有效率低下，而這兩點(diǎn)不足都和藥物靶點(diǎn)設(shè)計(jì)不夠科學(xué)有關(guān)。
中草藥是中國(guó)獨(dú)具優(yōu)勢(shì)的藥物資源，古今中醫(yī)典籍中記載有大量的中草藥減肥降脂的實(shí)例。但由于中草藥活性成分不明確，藥理機(jī)制不清楚等限制，使傳統(tǒng)中草藥不能走向世界，因此迄今我國(guó)還沒有具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的減肥藥物。2000年北京國(guó)際肥胖及減肥大會(huì)提出盡快開發(fā)出我國(guó)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的減肥降脂新藥的目標(biāo)。
本發(fā)明的技術(shù)方案如下本發(fā)明的篩選方法是將脂肪酸合成酶(Fatty Acid Synthase，F(xiàn)AS)(EC2.3.1.85)、脂酰輔酶A合成酶(Acyl-CoA Synthase，ACS)(EC 6.2.1.3)和小鼠、大鼠或人前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化三項(xiàng)指標(biāo)中的一種或幾種相結(jié)合作為靶點(diǎn)，用于篩選減肥降脂天然活性成分。
一、將脂肪酸合成酶作為靶點(diǎn)進(jìn)行分子水平篩選的步驟是1.分離純化大鼠體內(nèi)脂肪酸合成酶摘取大鼠皮下、腎周圍及睪丸周圍脂肪，合并，剪碎。加入約3倍體積的0.25M蔗糖溶液，勻漿。勻漿液于100000×g離心60分鐘，取上清液，為FAS粗提液。在此粗提液中邊攪動(dòng)邊加入固體硫酸銨至25％飽和度，繼續(xù)攪動(dòng)10分鐘，12000×g離心10分鐘，棄去沉淀，在上清中再加入固體硫酸銨至40％飽和度，攪動(dòng)15分鐘，離心收集沉淀，溶于適量含1mM DTT，1mM EDTA，pH7.0的4mM磷酸鉀緩沖液中，為純化的FAS。以上操作均在0-4℃下進(jìn)行。
2.制備中草藥的水提取物或乙醇提取物A、水提取物制備方法為各單味中草藥取飲片，預(yù)制、粉碎。加5倍體積蒸餾水，煮沸30分鐘，8層白紗布過濾取清液；沉渣重新加入5倍體積蒸餾水，煮沸30分鐘，8層白紗布過濾取清液。兩次清液合并，冷凍干燥。將所得干粉溶于適量蒸餾水中，得到棕黃色或棕紅色透明液體提取物，用減壓蒸干法測(cè)定可溶性固形物含量，使各單味中草藥的各次提取中穩(wěn)定在30-100mg/ml。此提取物2-8℃下保存72小時(shí)以上有渾濁出現(xiàn)。
B、乙醇提取物制備方法為各單味中草藥取飲片，預(yù)制、粉碎。無水乙醇回流3次，回流液合并，得到棕黃色或棕紅色透明液體提取物，用減壓蒸干法測(cè)定可溶性固形物含量，使各單味中草藥的各次提取中穩(wěn)定在20-40mg/ml。
3.建立脂肪酸合成酶測(cè)活體系，在測(cè)活體系中加入中草藥提取物，進(jìn)行脂肪酸合成酶活性抑制實(shí)驗(yàn)，計(jì)算抑制程度，確認(rèn)中草藥中是否含有抑制脂肪酸合成酶活性的成分。
建立脂肪酸合成酶測(cè)活體系用分光光度法。測(cè)活體系總體積1.0ml，包括反應(yīng)啟動(dòng)物丙二酰輔酶A0.05ml。用37℃下每分鐘催化1.0μmol依賴于丙二酰輔酶A的NADPH氧化的酶量為FAS的一個(gè)活力單位，每毫克酶蛋白含有的活力單位數(shù)為FAS的比活力(u/mg)。
進(jìn)行脂肪酸合成酶活性抑制實(shí)驗(yàn)在測(cè)活體系中加入中草藥水提取物或乙醇提取物，使其和酶作用5分鐘后加入反應(yīng)起始物。中草藥提取液加入量為每毫升測(cè)活體系5μl中草藥提取液，以5μl雙蒸水或無水乙醇為對(duì)照。計(jì)算抑制程度，確認(rèn)有抑制作用的活性成分。
二、將脂酰輔酶A合成酶作為靶點(diǎn)進(jìn)行分子水平篩選的步驟是1.分離純化大鼠肝組織脂酰輔酶A合成酶摘取大鼠肝臟約200g，切碎。加入約3倍體積的0.25M蔗糖溶液，勻漿。勻漿液于600×g離心10分鐘，沉淀顆粒重新置于約3倍體積的0.25M蔗糖溶液中再次離心，兩次離心上清液合并。用230000×g離心60分鐘，取沉淀；將沉淀懸浮于適量混合液中(此混合液含有5mM Triton X-100，50mM pH7.4磷酸鉀緩沖液，5mMβ-巰基乙醇和1mM EDTA，蛋白質(zhì)濃度約4.5mg/ml)，靜置1小時(shí)，230000×g離心60分鐘，取上清液，為ACS粗提液。用約5倍體積的含2mMTriton X-100和5mMβ-巰基乙醇的溶液稀釋ACS粗提液，將稀釋液上Blue-Sepherose層析柱(CL-6B，2.6×18cm)用5倍體積的含10mM ATP和0.8M NaCl的Buffer A(100mM磷酸鈉，25mM檸檬酸鉀，pH7.0)洗柱，最后用含10mM ATP和0.8M NaCl的Buffer A洗脫，流速15ml/小時(shí)，每15ml收集。將含有最大酶活性的部分合并，為純化的ACS。以上操作均在0-4℃下進(jìn)行。
2.制備中草藥水提取物或乙醇提取物方法同將脂肪酸合成酶作為靶點(diǎn)進(jìn)行分子水平篩選方法中的步驟。
3.建立脂酰輔酶A合成酶測(cè)活體系，在測(cè)活體系中加入中草藥水提取物或乙醇提取物，進(jìn)行脂酰輔酶A合成酶活性激活實(shí)驗(yàn)，計(jì)算激活程度，確認(rèn)中草藥中是否含有對(duì)脂酰輔酶A合成酶有激活作用的活性成分。
建立脂酰輔酶A合成酶測(cè)活體系用同位素法。測(cè)活體系總體積1.0ml，包括反應(yīng)啟動(dòng)物輔酶A 0.05ml。用35℃下每分鐘生成1.0μmol C14-標(biāo)記棕櫚酸輔酶A的酶量代表ACS的一個(gè)活力單位，以每毫克酶蛋白含有的活力單位數(shù)代表ACS的比活力(u/mg)。
進(jìn)行脂酰輔酶A合成酶活性激活實(shí)驗(yàn)在測(cè)活體系中加入中草藥水提取物或乙醇提取物，使其和酶作用5分鐘后加入反應(yīng)起始物。中草藥提取液加入量為每毫升測(cè)活體系5μl中草藥提取液，以5μl雙蒸水或無水乙醇為對(duì)照。計(jì)算激活程度，確認(rèn)中草藥中是否含有對(duì)脂酰輔酶A合成酶有激活作用的活性成分。
三、將小鼠、大鼠或人前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化速度作為靶點(diǎn)進(jìn)行細(xì)胞水平篩選的步驟是1.制備中草藥水提取物或乙醇提取物方法同將脂肪酸合成酶作為靶點(diǎn)進(jìn)行分子水平篩選方法中的步驟。
2.進(jìn)行小鼠、大鼠或人脂肪細(xì)胞分化抑制實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)細(xì)胞分化被抑制的程度，從而確認(rèn)中草藥中是否含有對(duì)細(xì)胞分化有抑制作用的活性成分。方法可以為將小鼠、大鼠或人前脂肪細(xì)胞以一定密度接種于96孔板中，用生長(zhǎng)培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)。細(xì)胞匯合后換成分化培養(yǎng)基，并加入不同濃度的中草藥提取液，以相同體積的雙蒸水或無水乙醇為對(duì)照，培養(yǎng)6天，期間根據(jù)需要換液。用油紅O染色法測(cè)定細(xì)胞中脂肪含量，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)確定分化程度，檢測(cè)細(xì)胞分化被抑制的程度，從而確認(rèn)中草藥中是否含有對(duì)細(xì)胞分化有抑制作用的活性成分。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果本發(fā)明在國(guó)際上首次提出將脂肪酸合成酶(FattyAcid Synthase，F(xiàn)AS)(EC 2.3.1.85)、脂酰輔酶A合成酶(Acyl-CoA Synthase，ACS)(EC 6.2.1.3)和小鼠、大鼠或人前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化三項(xiàng)指標(biāo)用作具有減肥降脂作用的天然活性成分的篩選靶點(diǎn)；該方法靶點(diǎn)明確、機(jī)理清楚可靠；該方法可以采用分子和細(xì)胞多靶點(diǎn)篩選體系，這與最新的藥物作用機(jī)制的多靶點(diǎn)綜合作用理論相吻合。本發(fā)明的篩選方法可以用來對(duì)具有減肥降脂作用的天然活性成分進(jìn)行大規(guī)?？焖俸Y選，用于開發(fā)減肥新藥。
2.取大黃200g，煎制，得大黃的水提取物，測(cè)得可溶性固形物含量約80mg/ml。提取純化大鼠脂肪酸合成酶，測(cè)定此提取物對(duì)此酶活性的影響。結(jié)果表明當(dāng)上述可溶性固形物在測(cè)活體系中的濃度高于0.5mg/ml時(shí)，此酶的活性隨著大黃提取物的濃度的升高而降低。證明大黃中含有對(duì)脂肪酸合成酶起抑制作用的活性成分。
3.取茵陳200g，煎制，得茵陳的水提取物，測(cè)得可溶性固形物含量約80mg/ml。提取純化大鼠脂肪酸合成酶，測(cè)定此提取物對(duì)此酶活性的影響。結(jié)果表明當(dāng)上述可溶性固形物在測(cè)活體系中的濃度高于1.0mg/ml時(shí)，此酶的活性隨著茵陳提取物的濃度的升高而降低。證明茵陳中含有對(duì)脂肪酸合成酶起抑制作用的活性成分。
4.取烏龍茶200g，煎制，得烏龍茶的水提取物，測(cè)得可溶性固形物含量約90mg/ml。提取純化大鼠脂肪酸合成酶，測(cè)定此提取物對(duì)此酶活性的影響。結(jié)果表明當(dāng)上述可溶性固形物在測(cè)活體系中的濃度高于1.0mg/ml時(shí)，此酶的活性隨著烏龍茶提取物的濃度的升高而降低。證明烏龍茶中含有對(duì)脂肪酸合成酶起抑制作用的活性成分。
5.取玉米須300g，煎制，得玉米須的水提取物，測(cè)得可溶性固形物含量約40mg/ml。提取純化大鼠脂酰輔酶A合成酶，測(cè)定此提取物對(duì)此酶活性的影響。結(jié)果表明當(dāng)上述可溶性固形物在測(cè)活體系中的濃度高于0.5mg/ml時(shí)，此酶的活性顯著升高。證明玉米須中含有對(duì)脂酰輔酶A合成酶起激活作用的活性成分。
6.取大黃500g，乙醇回流，得大黃的乙醇提取物，測(cè)得可溶性固形物含量約20mg/ml。96孔板培養(yǎng)小鼠前脂肪細(xì)胞，顯微觀察細(xì)胞形態(tài)和油紅0染色法確定細(xì)胞分化程度。結(jié)果表明，在上述濃度范圍內(nèi)大黃醇提取物對(duì)小鼠前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞的分化有明顯的抑制作用。證明大黃中含有對(duì)前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞的分化有明顯的抑制作用作用的活性成分。大黃醇提取物對(duì)小鼠前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化的抑制作用見

圖1，其中A和A’為未分化的小鼠前脂肪細(xì)胞，細(xì)胞為梭形，細(xì)胞內(nèi)無脂肪積累；B和B’為正在分化的小鼠前脂肪細(xì)胞，但其分化受到大黃乙醇提取物的抑制，細(xì)胞形狀開始改變但不明顯，細(xì)胞內(nèi)有較少的脂肪積累；C和C’是完全分化了的小鼠脂肪細(xì)胞，細(xì)胞形狀完全變圓，細(xì)胞內(nèi)有大量脂肪積累。A、B和C是沒有處理的細(xì)胞，與其相對(duì)應(yīng)的A’、B’和C’分別是經(jīng)油紅0染色的細(xì)胞。
權(quán)利要求
1.中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于是以脂肪酸合成酶活性作為靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。
2.中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于是以脂酰輔酶A合成酶活性作為靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。
3.中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于是以小鼠大鼠或人前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化速度作為靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。
4.如權(quán)利要求1所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于還以脂酰輔酶A合成酶活性作為靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。
5.如權(quán)利要求1或2所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于還以小鼠和人前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化速度作為靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。
6.如權(quán)利要求4所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于還以小鼠和人前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化速度作為靶點(diǎn)進(jìn)行篩選。
7.如權(quán)利要求1所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于篩選方法包括以下步驟(1)分離純化大鼠體內(nèi)脂肪酸合成酶；(2)制備中草藥的水提取物或乙醇提取物；(3)建立脂肪酸合成酶測(cè)活體系，在測(cè)活體系中加入中草藥水提取物或乙醇提取物，使其和酶作用5分鐘后加入反應(yīng)起始物；中草藥提取物加入量為每毫升測(cè)活體系5μl中草藥提取液，以5μl雙蒸水或無水乙醇為對(duì)照，進(jìn)行脂肪酸合成酶活性抑制實(shí)驗(yàn)，計(jì)算抑制程度，確認(rèn)中草藥中是否含有抑制脂肪酸合成酶活性的成分。
8.如權(quán)利要求2所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于篩選方法包括以下步驟(1)分離純化大鼠肝組織脂酰輔酶A合成酶；(2)制備中草藥水提取物或乙醇提取物；(3)建立脂酰輔酶A合成酶測(cè)活體系，在測(cè)活體系中加入中草藥水提取物或乙醇提取物，使其和酶作用5分鐘后加入反應(yīng)起始物；中草藥提取物加入量為每毫升測(cè)活體系5μl中草藥提取液，以5μl雙蒸水或無水乙醇為對(duì)照，進(jìn)行脂酰輔酶A合成酶活性激活實(shí)驗(yàn)，計(jì)算激活程度，確認(rèn)中草藥中是否含有對(duì)脂酰輔酶A合成酶有激活作用的活性成分。
9.如權(quán)利要求3所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于篩選方法包括以下步驟(1)制備中草藥水提取物或乙醇提取物；(2)用上述提取物進(jìn)行小鼠、大鼠或人脂肪細(xì)胞分化抑制實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)細(xì)胞分化被抑制的程度，從而確認(rèn)中草藥中是否含有對(duì)細(xì)胞分化有抑制作用的活性成分。
10.如權(quán)利要求7所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于分離純化大鼠體內(nèi)脂肪酸合成酶的方法是摘取大鼠皮下、腎周圍及睪丸周圍脂肪，合并，剪碎；加入約3倍體積的0.25M蔗糖溶液，勻漿；勻漿液于100000×g離心60分鐘，取上清液，為FAS粗提液；在此粗提液中邊攪動(dòng)邊加入固體硫酸銨至25％飽和度，繼續(xù)攪動(dòng)10分鐘，12000×g離心10分鐘，棄去沉淀，在上清中再加入固體硫酸銨至40％飽和度，攪動(dòng)15分鐘，離心收集沉淀，溶于適量含lmM DTT，1mM EDTA，pH7.0的4mM磷酸鉀緩沖液中，為純化的FAS；以上操作均在0-4℃下進(jìn)行。
11.如權(quán)利要求7所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于制備中草藥的水提取物的方法是單味中草藥取飲片，預(yù)制、粉碎；加5倍體積蒸餾水，煮沸30分鐘，8層白紗布過濾取清液；沉渣重新加入5倍體積蒸餾水，煮沸30分鐘，8層白紗布過濾取清液；兩次清液合并，冷凍干燥；將所得干粉溶于適量蒸餾水中，得到棕黃色或棕紅色透明液體提取物，用減壓蒸干法測(cè)定可溶性固形物含量，使各單味中草藥的各次提取中穩(wěn)定在30-100mg/ml，此提取物2-8℃下保存72小時(shí)以上有渾濁出現(xiàn)。
12.如權(quán)利要求7所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于制備中草藥的乙醇提取物的方法是單味中草藥取飲片，預(yù)制、粉碎；無水乙醇回流3次，回流液合并，得到棕黃色或棕紅色透明液體提取物，用減壓蒸干法測(cè)定可溶性固形物含量，使各單味中草藥的各次提取中穩(wěn)定在20-40mg/ml。
13.如權(quán)利要求7所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于建立脂肪酸合成酶測(cè)活體系的方法是用分光光度法；測(cè)活體系總體積1.0ml，包括反應(yīng)啟動(dòng)物丙二酰輔酶A0.05ml；用37℃下每分鐘催化1.0μmol依賴于丙二酰輔酶A的NADPH氧化的酶量為FAS的一個(gè)活力單位，每毫克酶蛋白含有的活力單位數(shù)為FAS的比活力(u/mg)。
14.如權(quán)利要求8所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于分離純化大鼠肝組織脂酰輔酶A合成酶的方法是摘取大鼠肝臟約200g，切碎；加入約3倍體積的0.25M蔗糖溶液，勻漿；勻漿液于600×g離心10分鐘，沉淀顆粒重新置于約3倍體積的0.25M蔗糖溶液中再次離心，兩次離心上清液合并；用230000×g離心60分鐘，取沉淀；將沉淀懸浮于適量混合液中(此混合液含有5mM Triton X-100，50mM pH7.4磷酸鉀緩沖液，5mMβ-巰基乙醇和1mM EDTA，蛋白質(zhì)濃度約4.5mg/ml)，靜置1小時(shí)，230000×g離心60分鐘，取上清液，為ACS粗提液；用約5倍體積的含2mMTriton X-100和5mM β-巰基乙醇的溶液稀釋ACS粗提液，將稀釋液上Blue-Sepherose層析柱(CL-6B，2.6×18cm)用5倍體積的含10mM ATP和0.8M NaCl的Buffer A(100mM磷酸鈉，25mM檸檬酸鉀，pH7.0)洗柱，最后用含10mM ATP和0.8M NaCl的Buffer A洗脫，流速15ml/小時(shí)，每15ml收集；將含有最大酶活性的部分合并，為純化的ACS；以上操作均在0-4℃下進(jìn)行。
15.如權(quán)利要求8所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于建立脂酰輔酶A合成酶測(cè)活體系的方法是用同位素法；測(cè)活體系總體積1.0ml，包括反應(yīng)啟動(dòng)物輔酶A 0.05ml；用35℃下每分鐘生成1.0μmol C14-標(biāo)記棕櫚酸輔酶A的酶量代表ACS的一個(gè)活力單位，以每毫克酶蛋白含有的活力單位數(shù)代表ACS的比活力(u/mg)。
16.如權(quán)利要求9所述的中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法，其特征在于進(jìn)行小鼠、大鼠或人脂肪細(xì)胞分化抑制實(shí)驗(yàn)的方法是將小鼠、大鼠或人前脂肪細(xì)胞以一定密度接種于96孔板中，用生長(zhǎng)培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)；細(xì)胞匯合后換成分化培養(yǎng)基，并加入不同濃度的中草藥提取液，以相同體積的雙蒸水或無水乙醇為對(duì)照，培養(yǎng)6天，期間根據(jù)需要換液；用油紅0染色法測(cè)定細(xì)胞中脂肪含量，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)確定分化程度，檢測(cè)細(xì)胞分化被抑制的程度，從而確認(rèn)中草藥中是否含有對(duì)細(xì)胞分化有抑制作用的活性成分。
全文摘要
本發(fā)明公開了中草藥中減肥降脂活性成分的篩選方法,屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的篩選方法是將脂肪酸合成酶、脂酰輔酶A合成酶和小鼠及人前脂肪細(xì)胞向成熟脂肪細(xì)胞分化三項(xiàng)指標(biāo)中的一種或幾種相結(jié)合作為靶點(diǎn),用于篩選減肥降脂天然活性成分。本發(fā)明的篩選方法靶點(diǎn)明確、機(jī)理清楚可靠,與最新的藥物作用機(jī)制的多靶點(diǎn)綜合作用理論相吻合,可以用來對(duì)具有減肥降脂作用的天然活性成分進(jìn)行大規(guī)?？焖俸Y選,用于開發(fā)減肥新藥。
文檔編號(hào)C12Q1/25GK1363686SQ0210016
公開日2002年8月14日 申請(qǐng)日期2002年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年1月18日
發(fā)明者張崇本, 鄧宏魁, 丁明孝 申請(qǐng)人:北京大學(xué), 深圳市賽泰克生物科技有限公司