專利名稱：益菌奶及其制造方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種牛奶制品及其制造方法，特別涉及一種以牛奶作載體、添加益生菌及低聚糖的牛奶制品及其制造方法。
在現(xiàn)有市場中銷售的益生菌制品有益生菌酸奶、益生菌口服液和益生菌粉劑。益生菌酸奶在配方上需加入一定量的穩(wěn)定劑、白砂糖等配料，而這些輔料并不是消費者真正想攝入的，并且由于酸奶的pH值較低(一般在pH4.5以下)，故益生菌不容易生存，產(chǎn)品的活菌數(shù)不穩(wěn)定，達不到產(chǎn)品的預期效果。益生菌口服液一般都需要某些基地培養(yǎng)基(如黃豆芽)，成分比較單一，而且常溫保存口服液幾乎不存在活菌，故也達不到產(chǎn)品的預期效果。益生菌粉劑含有少量糊精、淀粉、脫脂奶粉等，營養(yǎng)元素非常有限，且粉劑中的益生菌基本上都處于休眠狀態(tài)，也很難達到產(chǎn)品的預期效果。在產(chǎn)品的口感方面，一般牛奶具有奶香味，但口感比較平淡；益生菌酸奶味尖酸(味似醋酸)，略具苦味，因此，其為了克服口感缺陷，一般的益生菌酸奶中的益生菌含量都非常低，故產(chǎn)品效果不好；益生菌口服液味如“黃豆湯“，口感很差。
本發(fā)明的目的是針對目前市場上益生菌制品的缺陷，提供一種適合益生菌生存，改善口感，強化保健功能的益菌奶及其制造方法。
本發(fā)明提供了一種益菌奶，含有脂肪、蛋白質(zhì)、非脂乳固體，其特點在于還含有重量百分比為1％-10％的低聚糖(一種或幾種混合)和1.0×106-3.6×108菌落數(shù)/毫升的益生菌(一種或幾種混合)，且該益菌奶的酸度為14-25滴定梯度；所含低聚糖的重量百分比優(yōu)選為1.2％-7.6％；所含益生菌優(yōu)選為6.0×107-3.2×108菌落數(shù)/毫升；該益菌奶的酸度優(yōu)選為17-21滴定梯度。
本發(fā)明還提供了一種益菌奶的制造方法，其原料為90％-98.5％的無抗奶，0.02％-0.5％的益生菌，1.4％-9.7％的低聚糖，以上百分比為重量百分比；該制造方法如下將無抗奶加入低聚糖中攪拌5-10分鐘，加熱至60-80℃，再均質(zhì)，然后在65-140℃殺菌3秒-30分鐘，再冷卻致4-25℃，添加益生菌，最后攪拌5-10分鐘；均質(zhì)有兩種方法一級均質(zhì)和二級均質(zhì)，一級均質(zhì)壓力為150-300bar，二級均質(zhì)為30-50bar和180-250bar。
無抗奶的定義普通不含有抗生素的牛奶或用奶粉、乳清粉、稀奶油或其他牛奶組分配制成的不含有抗生素的還原奶或含乳飲料。
益生菌主要包括雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌(lactobacillus.acidophilus)、干酪乳桿菌(lactobacillus.casei)、唾液乳桿菌(lactobacillus salivarius)、乳鏈球菌(Strept.lactis)、屎鏈球菌(Enterococcus faecium)、LGG(lactobacillusGG)、Saccharomyces boulardii和Saccharomyces Cerecisiae等。
雙歧桿菌包括青春雙歧桿菌(bifid.adolescentis)、嬰兒雙歧桿菌(bifid.infantis)、長雙歧桿菌(bifid.longum)、短雙歧桿菌(bifid.breve)、動物雙歧桿菌(bifid.breve)、兩歧雙歧桿菌(bifid.bifidum)和嗜熱雙歧桿菌(bifid.themophilus)等。
低聚糖包括低聚(異)麥芽糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、大豆低聚糖、棉子糖、乳果糖等。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2為本發(fā)明另一種工藝流程圖。
圖3為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
圖4為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
圖5為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
圖6為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
下面給出具體實施例對本發(fā)明作出詳細說明實施例1配方
生產(chǎn)工藝如圖1所示。檢驗結(jié)果
實施例2配方
生產(chǎn)工藝如圖2所示。檢驗結(jié)果
實施例3配方
生產(chǎn)工藝如圖3所示。檢驗結(jié)果
實施例4配方
生產(chǎn)工藝如圖4所示。檢驗結(jié)果
實施例5配方
生產(chǎn)工藝如圖5所示。檢驗結(jié)果
實施例6配方
生產(chǎn)工藝如圖6所示。檢驗結(jié)果
上述實施例中原料的來源益生菌的來源法國Crhodia，日本W(wǎng)isby，丹麥Hansen等。
低聚糖廣東江門市江山生物工程有限公司，云南天元健康食品有限責任公司，丹尼斯克-科特(上海)公司無抗奶上海光明乳業(yè)股份有限公司第七、九牧場無抗奶驗收標準按照GB6914-86檢驗一般指標，抗生素的指標檢驗方法如下取原料奶1000ml，接入20-30ml工作發(fā)酵劑(乳酸桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑)，于40-42℃發(fā)酵3小時，測試該樣品的滴定酸度，若酸度低于65°T，則判不合格，否則合格。
本發(fā)明的積極效果在于以近中性的牛奶作為益生菌的載體，而且又有益生素(低聚糖)，實現(xiàn)了益生菌的最佳保存方法，從而益生菌的活性保持較好，故而本發(fā)明具有調(diào)節(jié)腸道菌群、降解膽固醇、調(diào)節(jié)免疫等功能。另外，本發(fā)明口感微甜，又有濃郁的奶香味，較一般的益生菌制品的口感好得多。
下面以上述實施例6為實驗樣品，給出效果實施例。
效果實施例1潤腸通便作用樣品性狀及處理樣品為白色液體，以蒸餾水配制成各濃度，供試。
劑量設計本品人體推薦劑量為每天20ml/60kg，本實驗設低、中、高三劑量組，分別為17、33、100ml/kg，另設空白對照組給予廠方提供的空白奶液和地芬諾酯便秘模型對照組。
給樣方式灌胃(高劑量組24h內(nèi)分多次灌胃)。
實驗動物昆明種小白鼠，18-22克，由上海醫(yī)科大學實驗動物部提供的清潔級動物(本站SPF動物房飼養(yǎng))，合格證號02-22-1，實驗動物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對濕度50-70％，動物房合格證號02-28，動物飼養(yǎng)料，由蘇杭實驗動物科技發(fā)展公司提供。
致便秘劑復方地芬諾酯片(國營武進制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格2.5mg/片)實驗方法與結(jié)果樣品對小鼠小腸推進運動的影響
取昆明種小白鼠50只，稱重，按體重隨機分層分為5組，每組10只，按劑量設計方法連續(xù)喂養(yǎng)10天。末天禁食24小時后，稱重，口服樣品或溶劑一次，30分鐘后，口服地芬諾酯50mg/kg，空白對照組除外，60分鐘后用炭末懸液按0.2ml/10g灌胃，20分鐘后脫頸椎處死動物，開腹取小腸，剪去上端至幽門，下端至回盲部的腸管，輕輕拉成直線，測量炭末推進長度及小腸全長，計算炭末推進移動率。
計算公式
樣品對小腸推進試驗動物體重的影響
由上表可見，樣品對動物體重無明顯影響樣品對抗地芬諾酯抑制腸推進的作用
*P＜0.05與地芬諾酯對照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對照組與地芬諾酯對照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，能對抗地芬諾酯引起的腸抑制作用，與地芬諾酯對照組相比，高劑量組有顯著性差異。
排便粒數(shù)、排便時間和排便總重量的測定取昆明重小鼠50只，按體重分層隨機分為5組，每組10只。按劑量設計方法連續(xù)喂養(yǎng)10天，末天禁食24小時，口服樣品或溶劑一次，30分鐘后，口服復方地芬諾酯10mg/kg(0.2ml/10g)，空白對照組除外。給復方地芬諾酯30分鐘后，各組以炭末懸液按0.2ml/10g灌胃1次，給藥后將小鼠分別放入小鼠籠內(nèi)，籠內(nèi)墊有濾紙，5組動物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進食，記錄小鼠的首粒排黑便時間，在6小時內(nèi)觀察和記錄每組小鼠的排便粒數(shù)，排便總重量。
樣品對便秘試驗動物體重的影響
由上表可見，樣品對動物體重無明顯影響樣品對便秘模型動物糞便粒數(shù)的影響
*P＜0.05與地芬諾酯對照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對照組與地芬諾酯對照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，樣品高劑量組糞便粒數(shù)與地芬諾酯對照組相比，有顯著性差異。
樣品對便秘模型動物排便時間的影響
*P＜0.05與地芬諾酯對照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對照組與地芬諾酯對照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，樣品高劑量組排便時間與地芬諾酯對照組相比，有顯著性差異。
樣品對便秘模型動物排便總重量的影響
*P＜0.05與地芬諾酯對照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對照組與地芬諾酯對照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，樣品高劑量組排便總重量與地芬諾酯對照組相比，有顯著性差異。
總結(jié)經(jīng)口給予小鼠不同劑量樣品10天，具有潤腸通便作用。
效果實施例2免疫調(diào)節(jié)作用樣品性狀及處理樣品為白色液體，以蒸餾水配制成各濃度，供試。
動物來源BALB/C種小白鼠，合格證號02-22-1，體重18-22克，雄性，由上海醫(yī)科大學實驗動物部提供的清潔級動物(本站SPF動物房飼養(yǎng))。實驗動物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對濕度50-70％，動物房合格證號02-28，動物飼養(yǎng)料，由蘇杭實驗動物科技發(fā)展公司提供。
劑量設計本樣品人體推薦劑量為每天20ml/60kg，本實驗設低、中、高三劑量組，分別為17、33、100ml/kg，空白對照組飲用由廠方提供的空白奶液。
給樣方式灌胃(高劑量組24h內(nèi)分多次灌胃)。
實驗方法與結(jié)果體重動物稱重，按體重隨機分層，分為4組，每組10只，按劑量設計連續(xù)喂養(yǎng)28天，在實驗中期和實驗末分別稱重一次。
樣品(免疫一組)對動物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。
樣品(免疫二組)對動物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。
樣品(免疫三組)對動物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。
樣品(免疫四組)對動物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對照組相比，均無顯著性差異。
血清溶血素試驗動物連續(xù)給樣四周后，眼眶采血，頸椎脫臼處死，分離血清。在96孔微量血凝板上加25μl生理鹽水，再分別在第一排加25μl血清，以后各排做對倍稀釋，每孔加1％SRBC1滴，振蕩后室溫放置3小時，當血球?qū)φ粘霈F(xiàn)沉落后觀察結(jié)果。
血清溶血素試驗
*P＜0.05與空白對照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品高劑量組與空白對照組相比，有顯著性差異。
抗體生成檢測試驗動物連續(xù)給樣四周后，將脫纖維綿羊紅細胞免疫5天后，動物頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細胞懸液，調(diào)整細胞濃度為5×106/ml。將表層培養(yǎng)基(1g瓊脂糖加雙蒸水100ml)加熱溶解后，放入45℃水浴保溫，與等量PH7.2-7.2、2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加入50μl10％SRBC，20μl脾細胞懸液，迅速混勻，傾倒于已刷瓊脂薄層的6cm平皿上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5h，然后用SA緩沖液稀釋的補體(1∶100)加入到平皿中，繼續(xù)溫育1.5h后，計數(shù)溶血空斑數(shù)。結(jié)果用方差分析進行統(tǒng)計。
*P＜0.05與空白對照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品高劑量組與空白對照組相比，有顯著性差異。
胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的測定動物連續(xù)給樣四周后，每鼠稱重，頸椎脫臼處死，取胸腺、脾臟稱重，分別計算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。
胸腺指數(shù)、脾指數(shù)
經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品各劑量組與空白對照組相比，均無顯著性差異。
小鼠碳廓清試驗小鼠尾靜脈注射1∶3稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計時。注入墨汁后2、10分鐘，分別從眼靜脈叢取血20μl，并將其加到2ml Na2CO3溶液中，用分光光度計在600nm波長處測OD值，以Na2CO3溶液作空白對照。根據(jù)動物體重、肝重和脾重計算吞噬指數(shù)，結(jié)果以方差分析進行統(tǒng)計。
*P＜0.05與空白對照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品高劑量組與空白對照組相比，有顯著性差異。
ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗動物連續(xù)給樣四周后；頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細胞懸液，調(diào)整細胞濃度為2×106/ml，將細胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加50μlConA液(相當于5μg/ml)，另一孔作為對照，置5％CO2，37℃培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRM1640培養(yǎng)液，同時加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解后，以570nm波長進行比色，結(jié)果用方差分析進行分析。
*P＜0.05與空白對照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品各劑量組與空白對照組相比，均有顯著性差異。
DTH測定致敏動物連續(xù)給樣四周后，每鼠腹部去毛，范圍約3×3cm，將1％的DNFB溶液50μl均勻涂抹致敏。
DTH的產(chǎn)生與測定5日后，用1％DNFB溶液10μl均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進行攻擊。24小時后，頸椎脫臼處死小鼠，用打孔器取下直徑8mm的左右耳片，稱重并計算腫脹度。
DTH測定結(jié)果
*P＜0.05與空白對照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品中、高劑量組與空白對照組相比，均有顯著性差異。
NK細胞活性測定動物連續(xù)給樣四周后，頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細胞懸液(效應細胞)，取傳代后24h YAC-1細胞加1640完全培養(yǎng)液，調(diào)整細胞濃度為1×105/ml(靶細胞)，取靶細胞和效應細胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培養(yǎng)板，靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養(yǎng)液各100μl，最大釋放孔加靶細胞和1％NP40各100μl，上述各項均設三個復孔，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時，然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培養(yǎng)板中，同時加入LDH基質(zhì)業(yè)100μl，反應3min，每孔加入1mol/L的HCL30μl，用酶標儀在490nm處測定光密度值(OD)。
NK細胞活性測定
*P＜0.05與空白對照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品高劑量組與空白對照組相比，有顯著性差異。
小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗動物連續(xù)給樣四周后，每鼠腹腔注射20％雞紅細胞懸液1ml，間隔30分鐘，頸椎脫臼處死，固定于鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃孵箱濕孵30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸緩沖液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計算吞噬％和吞噬指數(shù)。
巨噬細胞吞噬試驗
*P＜0.05與空白對照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計學分析樣品高劑量組吞噬％和吞噬指數(shù)與空白對照組相比，均存在顯著性差異。
結(jié)論動物經(jīng)口喂養(yǎng)樣品30天后，具有免疫調(diào)節(jié)作用。
效果實施例3
說明總共20人參加感官評定，評定內(nèi)容分三部分(即上表“行“的內(nèi)容)，總體評價按100％計。
權(quán)利要求
1.一種益菌奶，含有脂肪、蛋白質(zhì)、非脂乳固體，其特征在于還含有重量百分比為1％-10％的低聚糖和1.0×106-3.6×108菌落數(shù)/毫升的益生菌，且該益菌奶的酸度為14-25滴定梯度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌，其特征在于所含低聚糖的重量百分比為1.2％-7.6％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌，其特征在于所含益生菌為6.0×107-3.2×108菌落數(shù)/毫升。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌，其特征在于該益菌奶的酸度為17-21滴定梯度。
5.一種權(quán)利要求1所述益菌奶的制造方法，其原料為90％-98.5％的無抗奶，0.02％-0.5％的益生菌，1.4％-9.7％的低聚糖，以上百分比為重量百分比；該制造方法如下將無抗奶加入低聚糖中攪拌5-10分鐘，加熱至60-80℃，再均質(zhì)，然后在65-140℃殺菌3秒-30分鐘，再冷卻致4-25℃，添加益生菌，最后攪拌5-10分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種益菌奶的制造方法，其特征在于該均質(zhì)在150-300bar下進行。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種益菌奶的制造方法，其特征在于該均質(zhì)為二級均質(zhì)，第一次在30-50bar，第二次在180-250bar。
全文摘要
一種益菌奶,含有脂肪、蛋白質(zhì)、非脂乳固體,其特點在于還含有重量百分比為1%－10%的低聚糖和1.0×10
文檔編號A23C9/127GK1383727SQ01112799
公開日2002年12月11日 申請日期2001年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月29日
發(fā)明者龔廣予 申請人:上海光明乳業(yè)股份有限公司