專利名稱：采用多種dna聚合酶的dna測(cè)序方法和所用的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及DNA核苷酸序列分析方法和所用的試劑盒，更具體地，涉及通過對(duì)DNA核苷酸序列進(jìn)行一次分析而比常規(guī)方法能更準(zhǔn)確地分析DNA全長(zhǎng)核苷酸序列的DNA核苷酸序列分析方法和試劑盒。
背景技術(shù)：
已經(jīng)知道，桑格雙脫氧核苷酸介導(dǎo)的鏈終止法是用于分析DNA核苷酸序列的常規(guī)方法。在桑格法中，DNA核苷酸鏈通過和在戊糖的C-3位含有取代的羥基的脫氧核苷酸(dNTP)反應(yīng)而延長(zhǎng)，并通過和在戊糖的C-3位不含有取代的羥基的雙脫氧核苷酸(ddNTP)反應(yīng)而終止。
在桑格法中，四種dNTP如脫氧鳥苷三磷酸(dGTP)、脫氧腺苷三磷酸(dATP)、脫氧胸苷三磷酸(dTTP)和脫氧胞苷三磷酸(dCTP)用作產(chǎn)生與模板DNA互補(bǔ)的DNA片段的底物。四種ddNTP如雙脫氧鳥苷三磷酸(ddGTP)、雙脫氧腺苷三磷酸(ddATP)、雙脫氧胸苷三磷酸(ddTTP)和雙脫氧胞苷三磷酸(ddCTP)用作用于終止互補(bǔ)DNA片段的鏈延長(zhǎng)反應(yīng)的底物。與dNTP不同，ddNTP在戊糖的C-3位不含有羥基。因此，當(dāng)ddNTP和延長(zhǎng)反應(yīng)中的互補(bǔ)DNA片段的末端反應(yīng)時(shí)，互補(bǔ)DNA片段的鏈延長(zhǎng)反應(yīng)被終止。
因此，在桑格法中產(chǎn)生了不同長(zhǎng)度的其末端被ddNTP終止的DNA片段。在桑格法中，產(chǎn)生了與模板DNA的核苷酸數(shù)目相對(duì)應(yīng)的不同的互補(bǔ)DNA片段，進(jìn)而通過電泳，按分子量的順序?qū)⑵溥M(jìn)行分離。之后，通過測(cè)定每個(gè)互補(bǔ)DNA片段的末端堿基來識(shí)別模板DNA的核苷酸序列。
然而，盡管桑格法很方便，但是它的一個(gè)缺陷在于，由于互補(bǔ)DNA延長(zhǎng)反應(yīng)的持續(xù)合成能力是有限的，只有長(zhǎng)度在500-700bp的DNA可以被準(zhǔn)確測(cè)定。例如，為了準(zhǔn)確和完整地識(shí)別平均長(zhǎng)度為2Kb的人類cDNA，DNA測(cè)序步驟需要通過對(duì)人類cDNA的分割來重復(fù)三次以上。如上所解釋的，作為長(zhǎng)DNA的測(cè)序方法，桑格法是一種費(fèi)時(shí)、費(fèi)力和昂貴的方法。
同時(shí)，在所謂的鳥槍法(已知是用于基因組DNA的大規(guī)模核苷酸測(cè)序方法)中，全長(zhǎng)DNA被分割為幾個(gè)DNA片段，分別識(shí)別每個(gè)片段的堿基的序列。之后，使用計(jì)算機(jī)相互比較每個(gè)片段的序列，通過刪除重疊部分來分析全長(zhǎng)DNA序列。在上述鳥槍法中，利用可通過一次DNA序列分析識(shí)別的DNA長(zhǎng)度的擴(kuò)展來縮減全長(zhǎng)DNA序列分析所需的時(shí)間和勞力。
通常，在常規(guī)的桑格雙脫氧核苷酸介導(dǎo)的鏈終止方法中，采用單個(gè)的DNA聚合酶。因此，對(duì)應(yīng)于模板DNA 20-30bp的短DNA片段和對(duì)應(yīng)于模板DNA 600-700bp的長(zhǎng)DNA片段少量生成。然而，對(duì)應(yīng)于模板DNA 40-500bp的DNA片段大量生成。所以，短DNA片段和長(zhǎng)DNA片段的含量相對(duì)較低，從而DNA兩端末端部分的核苷酸序列比其中間部分難以測(cè)定。
由于上述原因，可通過對(duì)核苷酸序列的一次分析進(jìn)行分析的DNA的長(zhǎng)度實(shí)際上受到限制。因此，人們長(zhǎng)期以來為得到一種新方法進(jìn)行了多種研究，該方法應(yīng)能擴(kuò)展通過核苷酸序列的一次分析來識(shí)別的DNA長(zhǎng)度，所述核苷酸序列的一次分析是借助對(duì)模板DNA兩端末端部分更準(zhǔn)確的測(cè)定進(jìn)行的。
發(fā)明的公開因此，本發(fā)明的目的在于提供一種通過核苷酸序列的一次分析測(cè)定較長(zhǎng)DNA序列的方法以及該方法所用的試劑盒。本發(fā)明的方法是對(duì)常規(guī)桑格DNA測(cè)序方法的改進(jìn)，它可以用于測(cè)定比可由桑格測(cè)序方法所測(cè)定的更長(zhǎng)的DNA。
本發(fā)明的目的可以通過提供一種DNA序列分析方法來實(shí)現(xiàn)，該方法采用了兩種以上的DNA聚合酶，該聚合酶包括其對(duì)ddNTP的親和力高于常規(guī)桑格法中所用的DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力的DNA聚合酶，和其對(duì)ddNTP的親和力低于常規(guī)桑格法中所用的DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力的DNA聚合酶。
更具體地，其對(duì)ddNTP的親和力高于桑格法中所用的DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力的DNA聚合酶大量產(chǎn)生相對(duì)短的DNA片段，而其對(duì)ddNTP的親和力低于桑格法中所用的DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力的DNA聚合酶則大量生成相對(duì)長(zhǎng)的DNA片段。因此，通過本發(fā)明的方法，同時(shí)采用對(duì)ddNTP的親和力相互不同的多種DNA聚合酶，可以無差別地得到從10bp到大于1,000bp的不同長(zhǎng)度的DNA片段。所以，對(duì)于那些比可通過常規(guī)桑格法分析的DNA片段還長(zhǎng)的DNA片段，可以通過本發(fā)明的方法進(jìn)行DNA序列分析。
用于本發(fā)明的術(shù)語“DNA聚合酶對(duì)dNTP或ddNTP的親和力”是代表特定DNA聚合酶對(duì)dNTP或ddNTP與進(jìn)行延長(zhǎng)的DNA片段的一端的反應(yīng)頻率的貢獻(xiàn)程度的相對(duì)值。在本發(fā)明中，由韓國(guó)BIONEERCORPORATION制造的TopTM DNA聚合酶對(duì)dNTP或ddNTP的親和力作為DNA聚合酶對(duì)dNTP或ddNTP的親和力的標(biāo)準(zhǔn)。
圖2是DNA片段的電泳照片，該DNA片段是利用對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP親和力0.5倍的DNA聚合酶生成的。
圖3是DNA片段的電泳照片，該DNA片段是利用對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP親和力8000倍的DNA聚合酶生成的。
圖4是DNA片段的電泳照片，該DNA片段是利用同時(shí)包含對(duì)ddNTP的親和力不同的


圖1到圖3中的三種DNA聚合酶的DNA聚合酶混合物而生成的。
圖5是DNA片段的電泳照片，該DNA片段是利用同時(shí)包含對(duì)ddNTP的親和力不同的圖2和圖3中的兩種DNA聚合酶的DNA聚合酶混合物而生成的。
本發(fā)明的最佳實(shí)施模式下面將詳細(xì)地描述本發(fā)明。
在常規(guī)桑格法中，使用對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶。
本發(fā)明的方法是對(duì)桑格法的改進(jìn)，其特征在于，使用DNA聚合酶混合物，該混合物同時(shí)包含其對(duì)ddNTP的親和力和對(duì)dNTP的親和力的比率高于常規(guī)用于桑格法中的DNA聚合酶的該比率的DNA聚合酶和其對(duì)ddNTP的親和力和對(duì)dNTP的親和力的比率低于常規(guī)用于桑格法中的DNA聚合酶的該比率的DNA聚合酶。
用于常規(guī)桑格法中DNA測(cè)序分析的DNA聚合酶對(duì)dNTP的親和力和對(duì)ddNTP的親和力的比率，可以代表通過由DNA聚合酶催化的將dNTP引入到DNA片段末端的鏈延長(zhǎng)反應(yīng)頻率和通過由DNA聚合酶催化的將ddNTP引入到DNA片段末端的鏈終止反應(yīng)頻率之間的比率。
在本發(fā)明的方法中，同時(shí)使用兩類DNA聚合酶，一類是其參與dNTP引入反應(yīng)的頻率小于參與進(jìn)行延長(zhǎng)的DNA片段的鏈終止反應(yīng)的ddNTP引入反應(yīng)頻率的3000倍，優(yōu)選不超過1000倍，更優(yōu)選不超過0.5倍的DNA聚合酶；另一類是其參與dNTP引入反應(yīng)的頻率高于參與進(jìn)行延長(zhǎng)的DNA片段的鏈終止反應(yīng)的ddNTP引入反應(yīng)頻率的3000倍，優(yōu)選不小于5000倍，更優(yōu)選不小于8000倍的DNA聚合物。
因此，本發(fā)明的方法包括(i)核苷酸混合物的制備步驟，該混合物同時(shí)包含對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不超過1000倍，更優(yōu)選不超過0.5倍的DNA聚合酶，和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不小于5000倍，更優(yōu)選不小于8000倍的DNA聚合酶；(ii)通過將模板DNA連同引物一起加入所述核苷酸混合物而生成互補(bǔ)DNA片段的步驟；和(iii)識(shí)別按照分子量順序分離的所述互補(bǔ)DNA片段的末端堿基以測(cè)定模板DNA的核苷酸序列的步驟。
作為本發(fā)明的另一個(gè)目的，DNA測(cè)序試劑盒由四種氣密性容器組成，該容器裝有核苷酸混合物以及對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不超過1000倍，更優(yōu)選不超過0.5倍的DNA聚合酶，和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不小于5000倍，更優(yōu)選不小于8000倍的DNA聚合酶。
更詳細(xì)地，本發(fā)明的試劑盒包括(i)一氣密性容器，裝有ddATP、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、緩沖溶液、穩(wěn)定劑、對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不超過1000倍，更優(yōu)選不超過0.5倍的DNA聚合酶，和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不小于5000倍，更優(yōu)選不小于8000倍的DNA聚合酶；
(ii)一氣密性容器，裝有ddGTP、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、緩沖溶液、穩(wěn)定劑、對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不超過1000倍，更優(yōu)選不超過0.5倍的DNA聚合酶，和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不小于5000倍，更優(yōu)選不小于8000倍的DNA聚合酶；(iii)一氣密性容器，裝有ddCTP、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、緩沖溶液、穩(wěn)定劑、對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不超過1000倍，更優(yōu)選不超過0.5倍的DNA聚合酶，和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不小于5000倍，更優(yōu)選不小于8000倍的DNA聚合酶；和(vi)一氣密性容器，裝有ddTTP、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、緩沖溶液、穩(wěn)定劑、對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不超過1000倍，更優(yōu)選不超過0.5倍的DNA聚合酶，和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍，優(yōu)選不小于5000倍，更優(yōu)選不小于8000倍的DNA聚合酶。
下面，參照下面的實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明。這些實(shí)施例用于闡明本發(fā)明，并不意味著對(duì)本發(fā)明的限定。
同時(shí)，將對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力的3000倍的TopTM聚合酶(由Bioneer公司制造)分別加入上述四(4)種核苷酸混合物中以制備用于生成互補(bǔ)DNA片段的混合物，其目的是用于與本發(fā)明的結(jié)果相比較。
1.5μg的pUC19質(zhì)粒DNA作為模板DNA、M13 Universal Forward17聚體(5’-gtaaaacgacggccagt，30pmoles)作為引物和蒸餾水分別加入上述三(3)種混合物，每種制備40μg的用于生成互補(bǔ)DNA片段的反應(yīng)混合物。之后，將互補(bǔ)DNA片段生成反應(yīng)順序地重復(fù)30個(gè)循環(huán)在94℃240秒，94℃ 30秒，50℃ 30秒，72℃ 60秒，最后再在72℃進(jìn)行300秒處理，制成DNA片段混合物。向每一DNA片段混合物加入40μl終止(Stop)溶液(2.5％溴酚藍(lán)，2.5％氰基二甲苯，10mMNaOH)，從而終止互補(bǔ)DNA片段的生成反應(yīng)。將這樣得到的DNA片段通過由8M尿素和6％丙烯酰胺制成的聚丙烯酰胺凝膠電泳，以其分子量順序進(jìn)行分離。每個(gè)DNA片段的末端堿基通過使用銀-染色法(通過使用Bioneer公司制造的Silverstar染色試劑盒)識(shí)別。
將10X反應(yīng)緩沖溶液(500mM Tris-HCl，20mM MgCl2)、5M的Betain穩(wěn)定劑、5個(gè)單位的DNA聚合酶混合物(其由2.5個(gè)單位的Thermo測(cè)序酶和2.5個(gè)單位的Tfi突變DNA聚合酶組成)，和由3μM的dGTP、30μM的dATP、30μM的dTTP、30μM的dCTP和3.02μM的ddTTP組成的核苷酸混合物加入一氣密性容器；和將10X反應(yīng)緩沖溶液(500mM Tris-HCl，20mM MgCl2)、5M的Betain穩(wěn)定劑、5個(gè)單位的DNA聚合酶混合物(其由2.5個(gè)單位的Thermo測(cè)序酶和2.5個(gè)單位的Tfi突變DNA聚合酶組成)，和由3μM的dGTP、30μM的dATP、30μM的dTTP、30μM的dCTP和1μM的ddCTP組成的核苷酸混合物加入一氣密性容器，這樣制成本發(fā)明的DNA測(cè)序試劑盒，其包含四種氣密性容器。
向所述DNA核苷酸測(cè)序試劑盒的每個(gè)氣密性容器中分別加入1.5μg作為模板DNA的pUC19質(zhì)粒DNA、作為引物的M13 UniversalForward 17聚體(5’-gtaaaacgacggccagt，30pmoles)和蒸餾水，制成40μg的用于生成互補(bǔ)DNA片段的反應(yīng)混合物。這樣生成的DNA片段分別按其分子量順序進(jìn)行分離。然后，根據(jù)實(shí)施例1的方法分析DNA片段的末端堿基。
圖1是利用常規(guī)DNA聚合酶(TopTMDNA聚合酶，5個(gè)單位)生成的DNA片段的電泳照片，其中所述DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力是常規(guī)的。
圖2是利用DNA聚合酶(Tfi突變DNA聚合酶，5個(gè)單位)生成的DNA片段的電泳照片，其中所述DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力高于常規(guī)DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力。
圖3是利用DNA聚合酶(Thermo測(cè)序酶，5個(gè)單位)生成的DNA片段的電泳照片，其中所述DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力低于常規(guī)DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力。
圖4是利用由
圖1到圖3中的三種DNA聚合酶(分別為2個(gè)單位，2個(gè)單位，1個(gè)單位)組成的DNA聚合酶混合物生成的DNA片段的電泳照片，其中這些DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力彼此互不相同。
圖5是利用由圖2和圖3中的兩種DNA聚合酶(分別為2.5個(gè)單位，2.5個(gè)單位)組成的本發(fā)明的DNA聚合酶混合物生成的DNA片段的電泳照片，其中這些DNA聚合酶對(duì)ddNTP的親和力不同。
工業(yè)實(shí)用性如上所述，利用本發(fā)明的方法或試劑盒可以比利用常規(guī)桑格法更準(zhǔn)確和完整地分析10-1000bp的DNA的核苷酸序列。所以，有可能通過對(duì)核苷酸序列的一次分析而測(cè)定比桑格法可測(cè)定的更長(zhǎng)的DNA序列。
權(quán)利要求
1.一種采用雙脫氧核苷酸介導(dǎo)的鏈終止反應(yīng)的DNA核苷酸序列分析方法，其特征在于，包括(i)核苷酸混合物的制備步驟，該混合物同時(shí)包含對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶；(ii)通過將模板DNA連同引物一起加入所述核苷酸混合物中生成DNA片段的步驟；和(iii)識(shí)別按照分子量順序分離的所述DNA片段的末端堿基以測(cè)定模板DNA的核苷酸序列的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物同時(shí)包含對(duì)dNTP的親和力不超過對(duì)ddNTP的親和力1000倍的DNA聚合酶和對(duì)dNTP的親和力不小于對(duì)ddNTP的親和力5000倍的DNA聚合酶。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物同時(shí)包含對(duì)dNTP的親和力不超過對(duì)ddNTP的親和力0.5倍的DNA聚合酶和對(duì)dNTP的親和力不小于對(duì)ddNTP的親和力8000倍的DNA聚合酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物還包含對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物還包含對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力1000-5000倍的DNA聚合酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中核苷酸混合物還包含對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力0.5-8000倍的DNA聚合酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進(jìn)行分離。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個(gè)DNA片段的末端堿基通過銀染色法進(jìn)行識(shí)別。
9.根據(jù)權(quán)利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進(jìn)行分離。
10.根據(jù)權(quán)利要求2的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個(gè)DNA片段的末端堿基通過銀染色法進(jìn)行識(shí)別。
11.根據(jù)權(quán)利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進(jìn)行分離。
12.根據(jù)權(quán)利要求3的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個(gè)DNA片段的末端堿基通過銀染色法進(jìn)行識(shí)別。
13.根據(jù)權(quán)利要求4的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進(jìn)行分離。
14.根據(jù)權(quán)利要求4的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個(gè)DNA片段的末端堿基通過銀染色法進(jìn)行識(shí)別。
15.根據(jù)權(quán)利要求5的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序進(jìn)行分離。
16.根據(jù)權(quán)利要求5的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個(gè)DNA片段的末端堿基通過銀染色法進(jìn)行識(shí)別。
17.根據(jù)權(quán)利要求6的DNA核苷酸序列分析方法，其中將DNA片段通過電泳按照其分子量順序分離。
18.根據(jù)權(quán)利要求6的DNA核苷酸序列分析方法，其中每個(gè)DNA片段的末端堿基通過銀染色法進(jìn)行識(shí)別。
19.一種DNA核苷酸測(cè)序試劑盒，包括一裝有反應(yīng)緩沖液、穩(wěn)定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddATP和DNA聚合酶的氣密性容器，一裝有反應(yīng)緩沖液、穩(wěn)定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddGTP和DNA聚合酶的氣密性容器，一裝有反應(yīng)緩沖液、穩(wěn)定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddCTP和DNA聚合酶的氣密性容器，和一裝有反應(yīng)緩沖液、穩(wěn)定劑、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、ddTTP和DNA聚合酶的氣密性容器；其特征在于，所述DNA聚合酶是對(duì)dNTP的親和力小于對(duì)ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶和對(duì)dNTP的親和力高于對(duì)ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶的混合物。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的DNA核苷酸測(cè)序試劑盒，其中所述DNA聚合酶混合物由對(duì)dNTP的親和力不超過對(duì)ddNTP的親和力1000倍的DNA聚合酶和對(duì)dNTP的親和力不小于對(duì)ddNTP的親和力5000倍的DNA聚合酶組成。
21.根據(jù)權(quán)利要求19的DNA核苷酸測(cè)序試劑盒，其中所述DNA聚合酶混合物由對(duì)dNTP的親和力不超過對(duì)ddNTP親和力0.5倍的DNA聚合酶和對(duì)dNTP的親和力不小于對(duì)ddNTP的親和力8000倍的DNA聚合酶組成。
22.根據(jù)權(quán)利要求19的DNA核苷酸測(cè)序試劑盒，其中所述DNA聚合酶混合物還包含對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力3000倍的DNA聚合酶。
23.根據(jù)權(quán)利要求20的DNA核苷酸測(cè)序試劑盒，其中所述DNA聚合酶混合物還包含對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力1000-5000倍的DNA聚合酶。
24.根據(jù)權(quán)利要求21的DNA核苷酸測(cè)序試劑盒，其中所述DNA聚合酶混合物還包含對(duì)dNTP的親和力是對(duì)ddNTP的親和力0.5-8000倍的DNA聚合酶。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用雙脫氧核苷酸介導(dǎo)的鏈終止反應(yīng)的DNA核苷酸序列分析方法和所用的試劑盒,更具體地,直接涉及利用多種對(duì)雙脫氧核苷酸的親和力相互不同的DNA聚合酶進(jìn)行分析的DNA核苷酸序列分析方法。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1336960SQ00802714
公開日2002年2月20日 申請(qǐng)日期2000年11月25日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月26日
發(fā)明者樸韓浯, 俞在亨 申請(qǐng)人:株式會(huì)社百尼爾