一種三角梅無菌播種與快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種三角梅無菌播種與快速繁殖方法，該方法包括：用種子進(jìn)行無菌播種誘導(dǎo)發(fā)芽：對種子消毒滅菌后接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，在適宜的溫度、光照時(shí)間、光照強(qiáng)度下進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；繼而利用芽增殖擴(kuò)繁再誘導(dǎo)生根繁育種苗：萌發(fā)出的新芽接入芽增殖培養(yǎng)基中，在適宜的溫度、光照時(shí)間、光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行芽增殖繼代培養(yǎng)；芽增殖繼代培養(yǎng)后的芽苗接入生根培養(yǎng)基，在適宜的溫度、光照時(shí)間、光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行生根繁育種苗。本發(fā)明用種子作為繁殖外植體，種子處理簡單，污染率低，種子的發(fā)芽率達(dá)到100﹪，30天芽增殖倍數(shù)達(dá)到5.22倍，生根率95.6﹪，且種苗的繁育不受時(shí)間季節(jié)的限制可周年生產(chǎn)。
【專利說明】
一種三角梅無菌播種與快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種三角梅無菌播種與快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]三角梅(Bougainvilleaglabra)系紫茉莉科葉子花屬灌木，其花色多、花期長、花感繁榮，且耐瘠薄、耐干旱、適應(yīng)性強(qiáng)，目前幾乎全世界都有引種栽培，廣泛應(yīng)用于城市園林綠化與盆栽觀賞，是贊比亞共和國國花和我國海南省省花、珠海市、深圳市、廈門市、柳州市、三亞市、?？谑械仁械氖谢?。三角梅還是一種多用途的資源植物，所含的甜菜色素已用于開發(fā)天然食用色素;其葉片和根中分離得到的松醇可替代胰島素治療糖尿病且無胰島素療法帶來的副作用;葉片和根中至少含有2種抗病毒蛋白，對于多種植物病毒具有不同程度的抑制作用，可用于開發(fā)低毒高效的生物農(nóng)藥，其產(chǎn)業(yè)前景非常廣闊。
[0003]三角梅一般是用插條繁殖，難以用扦插繁殖的品種，可以通過壓條法或嫁接法來繁殖。因此，繁殖材料需要量大，一些品種的繁殖時(shí)間較長，而珍貴品種則難以快速繁殖推廣應(yīng)用。同時(shí)這類傳統(tǒng)的繁殖方法還可能受到惡劣天氣的影響。
[0004]目前種子的采集與處理;種子的消毒滅菌方法;種子萌發(fā)和誘芽培養(yǎng)基配方的研制;芽增殖培養(yǎng)基配方的研制;誘導(dǎo)芽生根培養(yǎng)基配方的研制不很完善。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種三角梅無菌播種與快速繁殖方法，旨在解決目前種子的采集與處理;種子的消毒滅菌方法;種子萌發(fā)和誘芽培養(yǎng)基配方的研制;芽增殖培養(yǎng)基配方的研制;誘導(dǎo)芽生根培養(yǎng)基配方的研制不很完善的問題。
[0006]本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種三角梅無菌播種與快速繁殖方法，該三角梅無菌播種與快速繁殖方法包括以下步驟:
[0007]用種子進(jìn)行無菌播種誘導(dǎo)發(fā)芽:對種子消毒滅菌后接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+蔗糖中，在適宜的培養(yǎng)溫度，光照時(shí)間，光照強(qiáng)度下進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0008]繼而利用芽增殖擴(kuò)繁再誘導(dǎo)生根繁育種苗:萌發(fā)出的新芽接入芽增殖培養(yǎng)基MS+6-BA+NAA+蔗糖中，在適宜的培養(yǎng)溫度，光照時(shí)間，光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行芽增殖繼代培養(yǎng);芽增殖繼代培養(yǎng)后的芽苗接入生根培養(yǎng)基MS+NAA+蔗糖中，在適宜的培養(yǎng)溫度，光照時(shí)間，光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行生根繁育種苗。
[0009]進(jìn)一步、三角梅無菌播種與快速繁殖方法具體包括:
[0010]種子消毒:選取飽滿的三角梅種子，在超凈工作臺(tái)上放置于已消毒的玻璃瓶中，先用75 %酒精浸泡20s，倒去酒精，用無菌水涮洗3次，每次涮洗時(shí)間Imin，然后再用0.1 %HgCl2消毒8min，消毒液應(yīng)高過種子約Icm，消毒過程中用手不停搖動(dòng)玻璃瓶，倒去消毒液后用無菌水沖洗5次，每次涮洗時(shí)間Imin;
[0011]種子萌發(fā)和芽誘導(dǎo)培養(yǎng):
[0012]種子接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+蔗糖中，每袋接入I粒種子，在溫度24_26°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度15001x的培養(yǎng)條件下，進(jìn)行種子萌發(fā)和芽誘導(dǎo)培養(yǎng)，5d后先長出根，15d后苗高2?3cm，長出1-3個(gè)莖節(jié)，誘導(dǎo)率100% ；
[0013]芽增殖繼代培養(yǎng):萌發(fā)出的新芽用解剖刀切分成長1.5cm的小段，含有一個(gè)的莖節(jié)，除去葉片，將下端插入芽增殖培養(yǎng)基中，在溫度26-28°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度I5001x的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。培養(yǎng)30d，芽的生長勢好，莖粗壯，平均芽的高度由接種時(shí)的1.5增加到4.01cm，彡3cm可用于生根的芽數(shù)量多，占85.7%，每隔25-30d切分后轉(zhuǎn)入相同的培養(yǎng)基中繼代增殖；
[0014]生根培養(yǎng):將高約3cm的芽苗從基部切下插入生根培養(yǎng)基中，在溫度26_28°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度I 5001x的培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)周期為30天，生根率達(dá)到95.6%，平均根數(shù)達(dá)到6.39條，植株健壯，葉色深綠。
[0015]進(jìn)一步，種子消毒前需進(jìn)行種子的采集與處理方法為:于夏季2月中、下旬采集三角梅種子，置于冰箱中貯藏備用，貯藏溫度4°C。
[0016]進(jìn)一步，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+蔗糖30g/L，pH值6.0。
[0017]進(jìn)一步，芽增殖繼代培養(yǎng)基為:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L，pH值
6.0ο
[0018]進(jìn)一步，生根培養(yǎng)基為:MS+NAA1.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.0。
[0019]三角梅現(xiàn)有技術(shù)主要采用其枝條扦插繁殖，一般選用1-2年生的枝條，切成長度12-15cm的插穗，插條和扦插基質(zhì)均需消毒處理，20-30天長新根，40天后抽芽，扦插繁殖易受季節(jié)、氣候影響，成活率70-95%。雖然枝條扦插成型較快，但一個(gè)插穗只可繁殖一株，因此需種量極大。現(xiàn)有技術(shù)的三角梅組培繁殖主要用莖段、葉片、葉柄、苞片等作為外植體，此類外植體均不易消毒且成活率低，以葉片、葉柄和苞片作為外植體還需經(jīng)過愈傷組織誘導(dǎo)階段，培養(yǎng)時(shí)間較長。本發(fā)明是用種子作為繁殖外植體，種子處理簡單，成功率高，未污染種子發(fā)芽率達(dá)到100%，且無需誘導(dǎo)愈傷組織，30天芽增殖倍數(shù)達(dá)到5.22倍，生根率95.6%，且種苗的繁育不受時(shí)間季節(jié)的限制可周年生產(chǎn)。
[0020]本發(fā)明是以種子作為外植體的組織培養(yǎng)繁殖種苗方法，其種子處理簡單，發(fā)芽率高;繁殖材料少，繁殖速度快;培養(yǎng)條件可控，不受季節(jié)限制，可周年生產(chǎn);保存成本低，便于種質(zhì)交換;利用胚培養(yǎng)技術(shù)克服雜交的不親和性和雜交種胚的早期敗育，增加新品種出現(xiàn)的機(jī)率和速度；
[0021]以種子為外植體的組織培養(yǎng)方法，經(jīng)滅菌后不污染的種子發(fā)芽率達(dá)到100%，待發(fā)芽后以I個(gè)莖節(jié)為單位約1.5cm長度繁殖30天即可得到5.22個(gè)新芽，而扦插繁殖枝條長度為12-15cm，且一個(gè)插穗只可繁殖I株，因此，從繁殖材料的長度看，組織培養(yǎng)所需的繁殖材料約為扦插繁殖材料的1/10，增殖倍數(shù)卻是扦插繁殖的5倍以上，而且無需再次采用新材料，每月均可以幾何倍數(shù)增加。因全程培養(yǎng)均在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行，溫度和光照等培養(yǎng)條件均可根據(jù)需要調(diào)節(jié)。目前三角梅主要通過雜交育種和芽變選種兩種方法培育新的品種；大多數(shù)三角梅品種開完花后即自然落花，不易結(jié)種子，且種子土壤播種發(fā)芽率低(我們自播發(fā)芽率為O)，因此通過雜交培育新種有一定的難度;芽變選種是從優(yōu)良芽變的植株上選取變異部分的芽或枝條，用無性繁殖的方法使變異性狀得到延續(xù)和固定，經(jīng)過初選、復(fù)選、決選等程序的選擇、觀察和鑒定，最后選出優(yōu)系育成新品種；
[0022]利用種子無菌播種的組織培養(yǎng)方法獲得新品種出現(xiàn)的途徑有:1、種子有性繁殖性狀分離可以獲得多種表型的繁殖材料;2、培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的芽變材料。在我們研究的10多個(gè)品種的無菌播種繁殖材料，每個(gè)品種均出現(xiàn)2 — 5個(gè)不同的表型，為培育新的品種提供了種質(zhì)材料。
【附圖說明】
[0023]圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的三角梅無菌播種與快速繁殖方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0024]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0025]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步描述。
[0026]如圖1所示:本發(fā)明提供的三角梅無菌播種與快速繁殖方法包括以下步驟:
[0027]SlOl:用種子進(jìn)行無菌播種誘導(dǎo)發(fā)芽:對種子消毒滅菌后接入培養(yǎng)基MS+蔗糖中，在適宜的培養(yǎng)溫度，光照時(shí)間，光照強(qiáng)度下進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0028]S102:繼而利用芽增殖擴(kuò)繁再誘導(dǎo)生根繁育種苗:萌發(fā)出的新芽接入培養(yǎng)基MS+6-BA+NAA+蔗糖中，在適宜的溫度，光照時(shí)間，光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行芽增殖繼代培養(yǎng);芽增殖繼代培養(yǎng)后的芽苗接入生根培養(yǎng)基MS+NAA+蔗糖中，在適宜的溫度，光照時(shí)間，光照強(qiáng)度條件下進(jìn)行生根繁育種苗。
[0029]本發(fā)明三角梅無菌播種與快速繁殖方法具體步驟包括:
[0030]種子消毒:選取飽滿的三角梅種子，在超凈工作臺(tái)上放置于已消毒的玻璃瓶中，先用75 %酒精浸泡20s，倒去酒精，用無菌水涮洗3次，每次涮洗時(shí)間Imin，然后再用0.1 %HgCl2消毒8min，消毒液應(yīng)高過種子約lcm，其間用手不停搖動(dòng)玻璃瓶，倒去消毒液后用無菌水沖洗5次，每次涮洗時(shí)間Imin。
[0031]種子萌發(fā)和芽誘導(dǎo)培養(yǎng):
[0032]培養(yǎng)基配方
[0033]|^+蔗糖3(^/1，？田直6.0。
[0034]培養(yǎng)條件
[0035]培養(yǎng)溫度24_26°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度15001x。
[0036]接種
[0037]種子接入培養(yǎng)基中5d后萌動(dòng)，根先長出，15d后苗高2_3cm，長出1-3個(gè)莖節(jié)，誘導(dǎo)率100%，30(1污染率30%。
[0038]芽增殖繼代培養(yǎng)
[0039]培養(yǎng)基配方
[0040]MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖 30g/L，pH 值 6.0。
[0041]培養(yǎng)條件
[0042]培養(yǎng)溫度26_28°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度I 5001x。
[0043]接種
[0044]萌發(fā)出的新芽用解剖刀切分成長約1.5cm的單個(gè)莖節(jié)接入培養(yǎng)基中培養(yǎng)，30d增殖系數(shù)達(dá)到5.22。以后每隔25-30d切分后轉(zhuǎn)入相同的培養(yǎng)基中繼代增殖。
[0045]生根培養(yǎng)
[0046]培養(yǎng)基配方
[0047]MS+NAA I.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.0。
[0048]培養(yǎng)條件
[0049]培養(yǎng)溫度26_28°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度I 5001x。
[0050]接種
[0051 ] 切取高約3cm的芽苗接入生根培養(yǎng)基中，14d開始生根，30d生根率95.6%,平均每株生根6.39條，植株健壯，葉色濃綠。
[0052]進(jìn)一步，種子消毒前需進(jìn)行種子的采集與處理:
[0053]種子采集:于夏季2月中、下旬采集三角梅種子，置于冰箱中貯藏備用，貯藏溫度4-C。
[0054]三角梅插條繁殖易受季節(jié)、氣候影響，繁殖系數(shù)低且需種量大，現(xiàn)有三角梅組培繁殖主要用莖段、葉片、葉柄和苞片作為外植體，其不易消毒且成活率低，以葉片、葉柄和苞片作為外植體還需經(jīng)過愈傷組織誘導(dǎo)階段，培養(yǎng)時(shí)間較長。本發(fā)明是用種子作為繁殖外植體，種子處理簡單，污染率低，成功率高，未污染種子發(fā)芽率達(dá)到100 %，無需誘導(dǎo)愈傷組織，30天芽增殖倍數(shù)達(dá)到5.22倍，生根率95.6 %，且種苗的繁育不受時(shí)間季節(jié)的限制可周年生產(chǎn)。
[0055]本發(fā)明是以種子作為外植體的組織培養(yǎng)繁殖種苗方法，其種子處理簡單，發(fā)芽率高;繁殖材料少，繁殖速度快;培養(yǎng)條件可控，不受季節(jié)限制，可周年生產(chǎn);保存成本低，便于種質(zhì)交換;利用胚培養(yǎng)技術(shù)克服雜交的不親和性和雜交種胚的早期敗育，增加新品種出現(xiàn)的機(jī)率和速度。
[0056]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種三角梅無菌播種與快速繁殖方法，其特征在于，該三角梅無菌播種與快速繁殖方法包括以下步驟: 用種子進(jìn)行無菌播種誘導(dǎo)發(fā)芽:對種子消毒滅菌后接入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+蔗糖中，在適宜的培養(yǎng)溫度，光照時(shí)間，光照強(qiáng)度下進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)； 繼而利用芽增殖擴(kuò)繁再誘導(dǎo)生根繁育種苗:萌發(fā)出的新芽接入芽增殖培養(yǎng)基MS+6-BA+NAA+蔗糖中，在適宜的培養(yǎng)溫度，光照強(qiáng)度，光照時(shí)間條件下進(jìn)行芽增殖繼代培養(yǎng);芽增殖繼代培養(yǎng)后的芽苗接入生根培養(yǎng)基MS+NAA+蔗糖中，在適宜的培養(yǎng)溫度，光照強(qiáng)度，光照時(shí)間條件下進(jìn)行生根繁育種苗。2.如權(quán)利要求1所述的三角梅無菌播種與快速繁殖方法，其特征在于，三角梅無菌播種與快速繁殖方法具體包括: 種子消毒:選取飽滿的三角梅種子，在超凈工作臺(tái)上放置于已消毒的玻璃瓶中，先用75%酒精浸泡20s，倒去酒精，用無菌水涮洗3次，每次涮洗時(shí)間Imin，然后再用0.1 %HgCl2消毒8min，消毒液高過種子lcm，消毒過程中用手不停搖動(dòng)玻璃瓶，倒去消毒液后用無菌水沖洗5次，每次涮洗時(shí)間Imin; 種子萌發(fā)和芽誘導(dǎo)培養(yǎng): 種子接種入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+蔗糖中，每袋接入I粒種子，在培養(yǎng)溫度24-26°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度15001x的條件下，5d后萌動(dòng)，15d后苗高2-3cm，有1-3個(gè)莖節(jié)； 芽增殖繼代培養(yǎng):萌發(fā)出的新芽用解剖刀切分成長1.5cm的小段，含有一個(gè)的莖節(jié)，除去葉片，將下端插入芽增殖培養(yǎng)基中，在溫度26-280C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度15001x的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，每隔25-30d切分后轉(zhuǎn)入相同的培養(yǎng)基中繼代增殖； 生根培養(yǎng):將高約3cm的芽苗從基部切下插入生根培養(yǎng)基中，在溫度26-28°C，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度I 5001x的培養(yǎng)條件下誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)周期為30d。3.如權(quán)利要求1所述的三角梅無菌播種與快速繁殖方法，其特征在于，種子消毒前需進(jìn)行種子的采集與處理方法為:于夏季2月中、下旬采集三角梅種子，置于冰箱中貯藏備用，貯藏溫度4°C。4.如權(quán)利要求2所述的三角梅無菌播種與快速繁殖方法，其特征在于，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為13+蔗糖3(^/1，？田直6.0。5.如權(quán)利要求2所述的三角梅無菌播種與快速繁殖方法，其特征在于，芽增殖繼代培養(yǎng)基為:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖 30g/L，pH 值 6.0。6.如權(quán)利要求2所述的三角梅無菌播種與快速繁殖方法，其特征在于，生根培養(yǎng)基為:MS+NAA 1.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.0。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK106069753SQ201610429327
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月16日
【發(fā)明人】潘梅, 云勇, 符瑞侃, 楊珺, 戚華沙, 黃賽, 呂德任, 王景飛, 任軍方
【申請人】海南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶園藝研究所