專利名稱：黃蝦花的繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體地講，是指一種采用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)黃蝦花離體培養(yǎng)進(jìn)行快速繁殖的方法。
背景技術(shù)：
植物組織培養(yǎng)是指用植物的任何器官、組織或細(xì)胞，在人工控制條件下進(jìn)行無(wú)菌培養(yǎng)生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程。該技術(shù)取材少，培養(yǎng)植物材料成本低，生長(zhǎng)周期短，管理方便。利用植物組織培養(yǎng)這種快速繁殖技術(shù)，能在短時(shí)間內(nèi)繁衍出大量保持母本生物特性和遺傳性狀的植株。據(jù)了解，我國(guó)快速繁殖的植物已有近千種。通常使用的基本培養(yǎng)基有數(shù)種，如MS、B5、White、N6等。在組織培養(yǎng)中，植物外植體要在植物生長(zhǎng)物質(zhì)的作用下，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)脫分化、恢復(fù)細(xì)胞分裂的能力、影響再分化、促進(jìn)器官形成等過(guò)程。植物外植體繁殖系數(shù)的大小，直接影響著生產(chǎn)后代植株的數(shù)量和質(zhì)量。
黃蝦花(Pachystachys lutea/Calliaspidia guttata)，別名金苞花、蝦衣花，是爵床科厚穗爵床屬多年生小灌木。原產(chǎn)地?zé)釒乐?、墨西哥和秘魯，花期長(zhǎng)，花型美，適合花壇、盆栽、庭院觀賞，具有很高的觀賞價(jià)值。
黃蝦花的繁殖主要靠扦插繁殖，但自然繁殖易受季節(jié)、環(huán)境條件等限制。通過(guò)組織培養(yǎng)可以達(dá)到短時(shí)間內(nèi)快速繁殖的目的，提高產(chǎn)量，并且可以克服季節(jié)、環(huán)境對(duì)繁殖的影響。用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行規(guī)?；⒎敝?，是獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗的有效途徑。針對(duì)這樣的情況我們旨在利用組織培養(yǎng)方法，通過(guò)無(wú)性繁殖手段來(lái)提高黃蝦花的繁殖率，為其周年生產(chǎn)提供技術(shù)方案。
目前，有關(guān)黃蝦花無(wú)性繁殖幼苗的組織培養(yǎng)方法在國(guó)際上尚未有人報(bào)道，國(guó)內(nèi)僅三例報(bào)道(1.李文安，張映璜，傅婉華，金苞花莖尖、腋尖的離體培養(yǎng)及快速繁殖，植物生理學(xué)通訊，1988(2)55；2.畢可華，金苞花組織培養(yǎng)成苗初報(bào)，煙臺(tái)師范學(xué)院學(xué)報(bào)，1988，4(1)；3.蔣澤平，朱鹿鳴，金苞花莖段的離體培養(yǎng)，江蘇林業(yè)科技，1991(4)17-19。)但這三例黃是花的培養(yǎng)方法存在一定的缺點(diǎn)第一例的分化率低，繁殖系數(shù)不高；第二例只采用MS+3mg/L6-芐基氨基嘌呤(簡(jiǎn)稱6-BA)+0.1mg/L萘乙酸(簡(jiǎn)稱NAA)一種方法來(lái)誘導(dǎo)分化芽；第三例所使用激素種類繁多，操作不方便，且分化率、繁殖系數(shù)也不高。
(三)發(fā)明的內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種黃蝦花的繁殖方法，它能夠明顯提高黃蝦花的無(wú)性繁殖系數(shù)，繁殖速度快而且操作簡(jiǎn)便。
具體地講，本發(fā)明方法包括如下步驟(1)外植體消毒將黃蝦花頂芽或側(cè)芽置于體積百分比濃度為65-75％的乙醇中浸泡30-90s(表示“秒”，下同)，質(zhì)量百分比濃度為0.1％的升汞中滅菌4-12min(表示“分鐘”，下同)，再用無(wú)菌水沖洗3-6次；(2)無(wú)菌苗的獲得將消毒后的黃蝦花頂芽或側(cè)芽接種到MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～30天獲得無(wú)菌苗，培養(yǎng)條件為溫度25±2℃，光照強(qiáng)度1500Lux，光照時(shí)間12h·d-1(表示“小時(shí)/天”，下同)；(3)誘導(dǎo)叢生芽發(fā)生將無(wú)菌苗的莖尖置于配方為MS+1-3.0mg/L 6-BA+0-0.3mg/L NAA的培養(yǎng)基上培養(yǎng)10～25天獲得叢生芽(高度一般為1～2cm)，培養(yǎng)條件同步驟(2)；(4)誘導(dǎo)生根將步驟(3)所得到的叢生芽分切成單株，在1/2MS+0-1mg/L吲哚丁酸(簡(jiǎn)稱IBA)或NAA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5～20天得到再生植株，培養(yǎng)條件同步驟(2)。
(5)再生植株移栽將步驟(4)獲得的再生植株經(jīng)煉苗后，移栽入蛭石土或者花卉土中，用自來(lái)水或者1/4MS培養(yǎng)液澆灌。
上述方法中，在步驟(3)中，培養(yǎng)基的優(yōu)選方案是MS+1-3.0mg/L6-BA+0.1-0.3mg/LNAA，最好是MS+2.0mg/L6BA+0.2mg/LNAA。步驟(4)中培養(yǎng)基的優(yōu)選配方是采用1/2MS+0.5-1mg/LIBA或NAA配方，其中IBA或NAA的濃度最好是0.5mg/L。
本發(fā)明具有如下的優(yōu)點(diǎn)和效果
1.經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明方法步驟(3)中不定芽的誘導(dǎo)率100％，每個(gè)外植體都可以分化出多個(gè)不定芽，其中以2.0mg/L 6BA+0.2mg/LNAA的培養(yǎng)基中的不定芽最多，每個(gè)外植體有7～12個(gè)芽，在步驟(4)中，采用IBA、NAA進(jìn)行誘導(dǎo)，生根率100％，而且長(zhǎng)勢(shì)良好，保證了試管苗不定根質(zhì)量。與原有的繁殖技術(shù)相比，該方法繁殖效率高，周年可以大量生產(chǎn)，克服了常規(guī)方法受季節(jié)、環(huán)境對(duì)繁殖的影響。
2.本發(fā)明方法無(wú)需專有設(shè)備，操作簡(jiǎn)便。
(四)具體的實(shí)施方式實(shí)施例1(1)外植體的消毒取黃蝦花頂芽或側(cè)芽置于65％乙醇中浸泡90s，0.1％升汞中滅菌12min，再用無(wú)菌水沖洗6次；(2)無(wú)菌苗的獲得將已消毒的黃蝦花外植體接種到MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)30天，獲取無(wú)菌苗，培養(yǎng)條件為溫度25±2℃，光照強(qiáng)度1500Lux，光照時(shí)間12h·d-1(表示“小時(shí)/天”，下同)；(3)芽的分化一個(gè)月后接種到附加有1mg/L6-BA的MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)10天，不定芽分化率為100％，能分化的每個(gè)外植體有1～3個(gè)不定芽，培養(yǎng)25天，能分化的每個(gè)外植體有4個(gè)不定芽。
(4)根的形成形成的小苗，轉(zhuǎn)接入附加1.0mg/LIBA的1/2MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)5天時(shí)，生根率為75％；培養(yǎng)10天后，生根率為100％，根放射狀生出，較粗短，呈淺黃色，培養(yǎng)20天后，誘導(dǎo)根生長(zhǎng)變長(zhǎng)，苗的生長(zhǎng)狀況良好。
(5)試管苗移栽在誘導(dǎo)根實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)20天后，將試管苗煉苗后轉(zhuǎn)入蛭石土，以1/4MS培養(yǎng)液澆灌，15天后苗生長(zhǎng)良好，成活率100％。
實(shí)施例2其它操作同實(shí)施例1，所不同的是步驟(1)中，取黃蝦花頂芽或側(cè)芽置于70％乙醇中浸泡60s，0.1％升汞中滅菌8min，再用無(wú)菌水沖洗5次；步驟(2)中，培養(yǎng)時(shí)間為25天；步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有2～4個(gè)分化芽，培養(yǎng)25天時(shí)，每個(gè)外植體平均有6個(gè)分化芽；步驟(4)中，培養(yǎng)基改為1/2MS+1.0mg/LNAA，培養(yǎng)5天時(shí)，生根率為75％；培養(yǎng)10天后，生根率為100％，根放射狀生出，較粗短，呈淺黃色，培養(yǎng)20天后，誘導(dǎo)根生長(zhǎng)變長(zhǎng)，苗的生長(zhǎng)狀況良好；步驟(5)中，蛭石土改為花卉土，以自來(lái)水澆灌，15天后，苗生長(zhǎng)良好，成活率為100％。
實(shí)施例3其它操作同實(shí)施例1，所不同的是步驟(1)中，取黃蝦花頂芽或側(cè)芽置于75％乙醇中浸泡30s，0.1％升汞中滅菌4min，再用無(wú)菌水沖洗3次；步驟(2)中，培養(yǎng)時(shí)間為20天；步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天時(shí)，不定芽分化率為100％，能分化的每個(gè)外植體有3～4個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體有5～7個(gè)分化芽；步驟(4)中，培養(yǎng)基改為1/2MS+0.5mg/L NAA，培養(yǎng)5天時(shí)，誘導(dǎo)根成放射狀生出，生根率為50％，培養(yǎng)10天后，生根率為100％，根放射狀生出，較粗短，呈淺黃色；培養(yǎng)20天后，誘導(dǎo)根生長(zhǎng)變長(zhǎng)，苗的生長(zhǎng)狀況良好。
實(shí)施例4其它操作同實(shí)施例1，所不同的是步驟(2)中，培養(yǎng)時(shí)間為15天；步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+1mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天時(shí)，不定芽分化率為100％，能分化的每個(gè)外植體有3～5個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天，每個(gè)外植體有5～7個(gè)分化芽，且部分外植體會(huì)有根生成；步驟(4)中，培養(yǎng)基改為1/2MS+0.5mg/LIBA，培養(yǎng)5天時(shí)，根成放射狀生出，生根率為100％，根較長(zhǎng)，且增長(zhǎng)狀況較好，培養(yǎng)10天后，根長(zhǎng)得更長(zhǎng)，側(cè)根也較多，培養(yǎng)20天后，根布滿瓶底。苗的生長(zhǎng)狀況良好。
實(shí)施例5其它操作同實(shí)施例2，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+2mg/L6-BA，培養(yǎng)時(shí)間為10天，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有3～5個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的分化芽增至5～7個(gè)；步驟(4)中，培養(yǎng)基改為1/2MS，5天時(shí)，生根率為50％，10天后生根率為75％，培養(yǎng)20天后，生根率為100％，誘導(dǎo)根較少。苗的生長(zhǎng)狀況良好。
實(shí)施例6其它操作同實(shí)施例2，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+2mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天時(shí)，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有4～5個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的分化芽增至6～8個(gè)。苗的長(zhǎng)勢(shì)良好。
實(shí)施例7其它操作同實(shí)施例2，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天時(shí)，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有3～5個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的分化芽增至7～12個(gè)。苗的長(zhǎng)勢(shì)良好。
實(shí)施例8其它操作同實(shí)施例3，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+2mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有3～4個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的不定芽增至6～8個(gè)。苗的長(zhǎng)勢(shì)良好。
實(shí)施例9其它操作同實(shí)施例3，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+3mg/L 6-BA，培養(yǎng)時(shí)間為10天，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有3～4個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的不定芽增至5～7個(gè)。苗的長(zhǎng)勢(shì)良好。
實(shí)施例10其它操作同實(shí)施例1，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+3mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有3～4個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的不定芽增至4～5個(gè)。苗的長(zhǎng)勢(shì)良好。
實(shí)施例11其它操作同實(shí)施例2，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+3mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有4～5個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的不定芽增至5～9個(gè)。苗的長(zhǎng)勢(shì)良好。
實(shí)施例12其它操作同實(shí)施例3，所不同的是步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+3mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA，培養(yǎng)時(shí)間為10天，不定芽分化率為100％，每個(gè)外植體有4～5個(gè)分化芽，培養(yǎng)時(shí)間為25天時(shí)，每個(gè)外植體的不定芽增至5～9個(gè)。苗的長(zhǎng)勢(shì)良好。
權(quán)利要求
1.一種黃蝦花的繁殖方法，其特征在于包括如下步驟(1)外植體消毒將黃蝦花頂芽或側(cè)芽置于體積百分比濃度為65-75％的乙醇中浸泡30-90s，質(zhì)量百分比濃度為0.1％的升汞中滅菌4-12min，再用無(wú)菌水沖洗3-6次；(2)無(wú)菌苗的獲得將消毒后的黃蝦花頂芽或側(cè)芽接種到MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～30天獲得無(wú)菌苗，培養(yǎng)條件為溫度25±2℃，光照強(qiáng)度1500Lux，光照時(shí)間12h·d-1；(3)誘導(dǎo)叢生芽發(fā)生將無(wú)菌苗的莖尖置于配方為MS+1-3.0mg/L 6-BA+0-0.3mg/L NAA的培養(yǎng)基上培養(yǎng)10～25天獲得叢生芽，培養(yǎng)條件同步驟(2)；(4)誘導(dǎo)生根將步驟(3)所得到的叢生芽分切成單株，在1/2MS+0-1mg/L IBA或NAA的培養(yǎng)基上培養(yǎng)5～20天得到再生植株，培養(yǎng)條件同步驟(2)；(5)再生植株移栽將步驟(4)得到的再生植株煉苗后，移栽入蛭石土或者花卉土中，用自來(lái)水或者1/4MS培養(yǎng)液澆灌。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在步驟(3)中，培養(yǎng)基配方為MS+1-3.0mg/L6-BA+0.1-0.3mg/L NAA。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于步驟(3)中培養(yǎng)基的配方為MS+2.0mg/L 6BA+0.2mg/L NAA。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(4)中，培養(yǎng)基的配方為1/2MS+0.5-1mg/L IBA或NAA。
5.如權(quán)利要求1或4所述的方法，其特征在于步驟(4)中培養(yǎng)基的配方為1/2MS+0.5mg/L IBA或NAA。
全文摘要
黃蝦花的繁殖方法，包括五步驟(1)外植體消毒采用65－75％乙醇和0.1％升汞消毒；(2)無(wú)菌苗的獲得采用MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)15～30天，溫度25±2℃，光照強(qiáng)度1500Lux，光照時(shí)間12h·d
文檔編號(hào)A01H4/00GK1748480SQ200510037068
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2005年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月7日
發(fā)明者劉吉升, 譚武賢, 陳剛, 李玲 申請(qǐng)人:華南師范大學(xué)