專利名稱：一種規(guī)?；敝碂o毒煙蚜的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物保護(hù)領(lǐng)域蚜蟲的生物防治，特別是一種規(guī)模化繁殖無毒煙蚜的方法。
背景技術(shù)：
煙蟲牙苗蜂(Aphidius gifuensis)是專門寄生蟲牙蟲的ー種內(nèi)寄生蜂,是煙田煙蟲牙的重要寄生性天故。煙蚜繭蜂在蚜蟲生物防治方面利用廣泛。蚜繭蜂防治蚜蟲的主要步驟有種植植物，在植物上飼養(yǎng)蚜蟲，利用植物上飼養(yǎng)的蚜蟲，飼養(yǎng)蚜繭蜂。通過田間人工釋放飼養(yǎng)的蚜繭蜂，寄生田間作物上的蚜蟲，達(dá)到防治蚜蟲的目的。蚜繭蜂飼養(yǎng)包括兩個主要階段1)種蚜和種蜂的越冬；2)商品蚜繭蜂的生產(chǎn)和釋放階段。在規(guī)模化飼養(yǎng)蚜繭蜂的小棚或大棚網(wǎng)室或溫室中，需要常年種植蚜蟲繁殖植物，需要頻繁接觸植物。 蚜蟲與蚜蟲傳播的病毒病。桃蚜、棉蚜、蘿卜蚜、甘藍(lán)蚜是傳播煙草病毒病的主要介體。主要通過蚜傳的病毒有PVY、黃瓜花葉病毒(CMV)等。蚜蟲傳播上述病毒為非持久性傳播，在毒源物上取食幾秒至幾分鐘即可獲毒，獲毒后不需要潛伏期即可傳毒，持毒時間較短，一般不超過一小吋，脫皮后即喪失傳毒能力。蚜蟲傳毒是煙草苗期和大田移栽期PVY和CMV初侵染的來源之一,也是病毒在田塊內(nèi)和田塊間的主要傳播途徑之一。蚜蟲的繁殖寄主常用為煙草或蘿卜。蚜蟲的規(guī)?；曫B(yǎng)，要求繁殖寄主適應(yīng)于高密度種植，葉面積較大，適應(yīng)蚜蟲快速大量繁殖。在生產(chǎn)上首選為商業(yè)化種植的煙草品種或蘿卜品種。目前采用煙草品種或蘿卜品種，如國內(nèi)專利或文獻(xiàn)報道的煙草品種K326、煙草品種云煙202等，易感TMV和/或PVY病毒。煙苗或蘿卜苗感染病毒病之后，表現(xiàn)生長緩慢，植株提前衰老，顯著降低蚜蟲的繁殖數(shù)量。更為重要的是，在感病的寄主上飼養(yǎng)的蚜蟲可攜帶并傳播PVY。由于蚜蟲和蚜繭蜂個體很小但群體數(shù)量很大，繁殖蚜繭蜂的蚜蟲一旦攜帶病毒，現(xiàn)有技術(shù)不能保證在釋放蚜繭蜂吋，不會釋放混雜的帶毒蚜蟲。因為在蚜繭蜂中難以避免混雜有少量的有翅蚜、或有少量未被蚜繭蜂寄生的若蚜或寄生早期的若蚜。這些有翅蚜、若蚜、寄生蚜隨蚜繭蜂釋放到田間之后，可能成為田間TMV和PVY的初侵染源之一攜帯的病毒可能感染田間作物。降低釋放蚜繭蜂伴隨的蚜蟲和僵蚜載體攜帯植物病毒風(fēng)險的策略主要有1)降低蚜繭蜂中混雜的蚜蟲比例。技術(shù)手段包括通過改進(jìn)蚜繭蜂和蚜蟲的分選方法、提高若蚜的寄生比例；2)嚴(yán)格隔離和消毒飼養(yǎng)棚體、人員和植物寄主，減少飼養(yǎng)棚體內(nèi)的植物病毒初侵染源和傳播途徑。蚜繭蜂規(guī)?；a(chǎn)主要采用以上兩種策略。但存在成本較高、步驟繁瑣、落實難度較大、難以達(dá)到高效等問題。主要問題體現(xiàn)在以下幾方面1)蚜繭蜂和蚜蟲的個體細(xì)小但群體數(shù)量巨大，難以分選，蚜繭蜂成蜂和有翅蚜尚能徹底分開的分選方法。2)由于長期進(jìn)化的結(jié)果，規(guī)?；娘曫B(yǎng)棚中，無法達(dá)到百分之百的若蚜寄生率。3)常見的植物病毒病防控難度大。在操作頻繁、重復(fù)使用的網(wǎng)室或溫室內(nèi)，TMV和PVY等危害重的植物病毒，具有初侵染來源多、易于傳播、傳播速度快、隱癥帶毒、藥劑防治效果差等特點。一旦某個棚體帶毒，徹底消滅成本高、難度大。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有蚜繭蜂生物防治中繁殖蚜蟲的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種規(guī)模化繁殖無毒煙蚜的方法，該方法高效經(jīng)濟(jì)、能有效降低蚜蟲攜帯病毒。本發(fā)明目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)采用高抗煙草花葉病毒(TMV)和馬鈴薯Y病毒(PVY)煙草材料作為蚜蟲的繁殖寄主；通過育苗或盆栽或移栽后，在網(wǎng)室或溫室內(nèi)人工繁殖蚜蟲，選擇雙抗且蚜蟲繁殖效率高的株系，用于繁殖無毒蚜蟲。所述的高抗TMV和PVY的煙草材料，采用常規(guī)雜交育種方法獲得，同時攜帶對TMV免疫的N基因和高抗PVY的va基因位點；對TMV和PVY的抗性到達(dá)人工接種病毒后，接種植株不表現(xiàn)花葉病癥狀、且非接種葉片病毒酶聯(lián)免疫檢測為陰性的水平。
通過常規(guī)雜交育種的方法，將攜帶對TMV免疫的N基因煙草材料與攜帶對PVY高抗的va基因煙草材料雜交，轉(zhuǎn)育整合成雙抗TMV和PVY的煙草材料；所述攜帶對TMV免疫的N基因煙草材料為Cokerl76、CV87、SC71、SC72或Coker86等種質(zhì)資源之一；所述的攜帶對PVY高抗的va基因位點的煙草材料為VAM、TN86、TN90、NC55或VSCR等種質(zhì)資源之一。本發(fā)明采用同時高抗TMV和PVY煙草材料作為蚜蟲的繁殖寄主，飼養(yǎng)不攜帶TMV和PVY的蚜蟲，確保伴隨蚜繭蜂釋放的蚜蟲和僵蚜載體不攜帶病毒。本發(fā)明的技術(shù)原理為采用TMV和PVY不能増殖的煙草材料飼養(yǎng)蚜蟲，從源頭上杜絕蚜蟲及僵蚜載體攜帯植物病毒。TMV和PVY兩種植物病毒，為專性寄生生物，只能通過寄主植物増殖，主要初侵染源為植物殘體和蚜蟲。蚜蟲只能通過取食感染PVY的植株，才能攜帶PVY。采用高抗TMV和PVY的雙抗煙草材料，煙草整個生育期均不會増殖TMV和PVY，可顯著降低煙草的殘體成為大田TMV的初侵染源的風(fēng)險，同時可顯著降低煙蚜成為大田PVY的初侵染源的風(fēng)險。在煙蚜和煙蚜繭蜂繁殖過程中，人、工具、苗棚等物質(zhì)污染的TMV和PVY，人工操作過程中，也不能系統(tǒng)感染高抗TMV和PVY的煙株。本發(fā)明的高抗TMV和PVY的雙抗煙草材料，通過以下途徑獲得。通過常規(guī)雜交育種的方法，將對TMV免疫的N基因和對PVY免疫的va基因，轉(zhuǎn)育整合成雙抗TMV和PVY的煙草。煙草N基因為顯性的單基因，攜帯N基因的純合或雜合煙草，在低于30°C條件下，接種TMV產(chǎn)生枯斑反應(yīng)，TMV被局限在枯斑內(nèi)，不能移動到煙草其他組織，保證了非接種葉片無TMV。攜帶隱性va基因的純合煙草，由于缺失PVY増殖的植物因子，PVY不能侵染煙草，保證了即使有外來帶毒蚜蟲取食，也不會被PVY侵染，不會成為PVY的毒源。本發(fā)明的高抗TMV和PVY的雙抗煙草材料，用于繁殖無毒蚜蟲，不作為的生產(chǎn)煙葉的品種使用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下的優(yōu)點和有益效果現(xiàn)有繁殖無毒蚜蟲的方法，大多采用感TMV和/或感PVY的煙草寄主，通過嚴(yán)格的隔離消毒方法，控制TMV和PVY的初侵染源，切斷傳播途徑，保護(hù)易感寄主，來達(dá)到繁殖無毒煙蚜的目的。但因為寄主易感病毒，在長達(dá)幾個月的過程中，大規(guī)模下很難保證無ー株煙草感病。本發(fā)明根據(jù)煙草已有單抗TMV或PVY種質(zhì)的特點，轉(zhuǎn)育雙抗TMV和PVY的煙草材料，替代原有易感寄主，達(dá)到高效的多重保險的繁殖無毒蚜蟲的目的。具有徹底有效降低寄主帶毒風(fēng)險的優(yōu)點，在繁殖蚜蟲過程中，不增加工效和成本。
本發(fā)明的實用性在于雙抗TMV和PVY的材料一旦獲得，可繁種長期使用，獲得的成本低。雙抗TMV和PVY的材料，不作為種植的煙草品種使用，不會影響煙草生產(chǎn)上的品種管理。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但以下實施例不是對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。實施例1以攜帶N基因的Cokerl76為抗TMV親本和攜帶va基因位點的NC55為抗PVY親本，常規(guī)方法雜交，得到F1代。該F1的基因型為NnVava，表現(xiàn)為抗TMV但感PVY。F1通過常規(guī)方法自交，得到F2群體，在F2群體中通過混合接種TMV和PVY，或檢測N基因與va基 因的分子標(biāo)記，篩選雙抗TMV和PVY的單株，也就是基因型為NNvava或基因型為Nnvava的單株。通過測交篩選出基因型為NNvava的單株。在基因型為NNvava的單株中，挑選出生長旺盛的單株，自交留種，得到抗性穩(wěn)定的雙抗TMV和PVY煙草材料(RTP)。進(jìn)一步人工接種TMV和PVY病毒，驗證對TMV和PVY的抗性，并通過育苗，繁殖蚜蟲，選擇雙抗且蚜蟲繁殖效率高的株系，采用常規(guī)方法育苗或盆栽或移栽后，在網(wǎng)室或溫室內(nèi)人工繁殖無毒蚜蟲。NNvava基因型煙草材料(RTP)的抗病效果與蚜蟲繁殖效果在氣溫低于30的網(wǎng)室內(nèi)，RTP材料6片真葉時，人工接種TMV和PVY病葉混合汁液100倍，接種后21天調(diào)查，RTP僅在接種葉表現(xiàn)枯斑。非接種葉無TMV花葉癥狀和PVY花葉癥狀。非接種葉片采用Agdia酶聯(lián)免疫檢測試紙條檢測，為TMV陰性和PVY陰性。對照品種Cokerl76接種后21天，接種葉表現(xiàn)TMV枯斑、非接種葉表現(xiàn)PVY花葉癥狀；對照品種NC55接種后21天，接種葉和非接種葉表現(xiàn)TMV花葉。表明RTP高抗TMV和PVY。在RTP上，煙蚜的繁殖效率與對照品種無明顯差異。實施例2重復(fù)實施例1，有以下不同點以攜帶N基因的CV87為抗TMV親本，攜帶va基因位點的NC55為抗PVY親本。實施例3重復(fù)實施例1，有以下不同點以攜帶N基因的CV87為抗TMV親本，攜帶va基因位點的VSCR為抗PVY親本。實施例4重復(fù)實施例1，有以下不同點以攜帶N基因的Coker 176為抗TMV親本，攜帶va基因位點的VSCR為抗PVY親本。
權(quán)利要求
1.一種規(guī)?；敝碂o毒煙蚜的方法，其特征在于采用高抗煙草花葉病毒(Tbhcc0 mosaic Firw1S, TMV)和馬鈴薯Y病毒(Zbia ο virus 7, PVY)煙草材料作為姆蟲的繁殖寄主；通過育苗或盆栽或移栽后，在網(wǎng)室或溫室內(nèi)人工繁殖蚜蟲，選擇雙抗且蚜蟲繁殖效率高的株系，用于繁殖無毒蚜蟲。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于高抗煙草花葉病毒(TbAaccomosaic TMV)和馬鈴薯Y病毒GdWo virus 7，PVY)煙草材料，采用常規(guī)雜交育種方法獲得，同時攜帶對TMV免疫的N基因和高抗PVY的va基因位點；對TMV和PVY的抗性達(dá)到人工接種病毒后，接種植株不表現(xiàn)花葉病癥狀、且非接種葉片病毒酶聯(lián)免疫檢測為陰性的水平。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于通過常規(guī)雜交育種的方法，將攜帶對TMV 免疫的N基因煙草材料與攜帶對PVY高抗的va基因煙草材料雜交，轉(zhuǎn)育整合成雙抗TMV和 PVY的煙草材料；所述的攜帶對TMV免疫的N基因煙草材料為Cokerl76、CV87、SC71、SC72或 Coker86等種質(zhì)資源之一；所述的攜帶對PVY高抗的va基因位點的煙草材料為VAM、TN86、 TN90、NC55或VSCR等種質(zhì)資源之一。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種規(guī)?；敝碂o毒煙蚜的方法，采用高抗煙草花葉病毒(TMV)和馬鈴薯Y病毒(PVY)煙草材料作為蚜蟲的繁殖寄主；通過育苗或盆栽或移栽后，在網(wǎng)室或溫室內(nèi)人工繁殖蚜蟲，選擇雙抗且蚜蟲繁殖效率高的株系，用于繁殖無毒蚜蟲，本發(fā)明通過采用高抗煙草花葉病毒和馬鈴薯Y病毒的煙草材料繁殖蚜蟲，在不增加現(xiàn)有蚜繭蜂繁殖工序和成本的情況下，能有效降低蚜蟲攜帶病毒病的潛在風(fēng)險；本發(fā)明具有簡便易行、經(jīng)濟(jì)可靠等特點；可促進(jìn)蚜繭蜂防治作物蚜蟲的應(yīng)用推廣。
文檔編號A01H1/02GK103004705SQ20131000361
公開日2013年4月3日 申請日期2013年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月6日
發(fā)明者劉勇, 吳興富, 朱艱, 李梅云, 許美玲, 盧秀萍, 李永平, 楊華兵 申請人:云南省煙草農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院