五指那藤的繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種五指那藤的繁殖方法，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種利用組織培養(yǎng)快速繁殖五指那藤的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]五指那藤，俗名尾葉那藤、牛藤、木通七葉蓮等，為木通科野木瓜屬植物尾葉那藤的干燥藤莖。五指那藤具有祛風(fēng)止痛、舒筋活絡(luò)、消腫散毒、散熱利尿的作用。用于風(fēng)濕骨痛、三叉神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛、胃痛、手術(shù)后疼痛、跌打損傷、水腫、急性腎炎、尿血及乳腺增生。五指那藤原植物主要分布于廣西、廣東、福建、江西、浙江等省區(qū)的山谷林緣或山腳灌叢中。近年來(lái)隨著市場(chǎng)需求量的不斷增加，對(duì)野生資源的采集量逐漸增大，野生五指那藤資源瀕臨枯竭，因此引種栽培、人工繁殖等將成為有效利用五指那藤資源的新途徑，目前未見(jiàn)有關(guān)于五指那栽培、繁殖等方面的研宄報(bào)道。本發(fā)明通過(guò)建立五指那藤組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具有繁殖率高、繁殖速率快等優(yōu)點(diǎn)，便于在生產(chǎn)上大面積推廣種植，滿足了中藥資源開(kāi)發(fā)的迫切需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題和/或缺陷，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
[0004]本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種五指那藤的繁殖方法，首先利用組織培養(yǎng)使五指那藤生長(zhǎng)出根，再利用基質(zhì)栽培五指那藤。
[0005]本發(fā)明還有一個(gè)目的是利用紅藍(lán)光燈管的組合來(lái)調(diào)整光強(qiáng)度貫穿在整個(gè)五指那藤的組織培養(yǎng)中，提高五指那藤苗的成活率，縮短培育時(shí)間。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種五指那藤的繁殖方法，包括以下步驟:
[0007]S1:制作五指那藤的無(wú)菌外植體；
[0008]S2:利用誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)無(wú)菌外植體，得到腋芽，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中含有MS、I?2mg/L的6-節(jié)氨基腺嘌呤和0.5?1.5mg/L的卩引噪丁酸；
[0009]S3:利用增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)腋芽，得到叢生芽，所述增殖培養(yǎng)基中含有MS、0.3?0.6mg/L的1-萘乙酸、1.5?2.5mg/L的TDZ植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和50?100mg/L的半胱氨酸；
[0010]S4:利用壯苗培養(yǎng)基培養(yǎng)叢生芽，得到五指那藤苗，所述壯苗培養(yǎng)基中含有MS、0.1?0.5mg/L的1-萘乙酸、0.1?0.5mg/L的卩引噪丁酸和0.1?0.5g/L的活性炭；
[0011]S5:利用生根培養(yǎng)基培養(yǎng)五指那藤苗，得到生根的五指那藤苗，所述生根培養(yǎng)基中含有MS、0.3?1.3mg/L的吲哚丁酸和0.1?0.5g/L的活性炭；
[0012]S6:將生根的五指那藤苗移栽至基質(zhì)中培養(yǎng)。
[0013]優(yōu)選的是，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基培、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均含有5g/L的瓊脂和30g/L的蔗糖，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基培、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的pH值均為5.8。
[0014]優(yōu)選的是，所述S6中基質(zhì)由體積比為3: I: I的塘泥、蛭石和椰糠混合而成。
[0015]優(yōu)選的是，所述SI中，選取五指那藤枝條接近頂芽的2?4cm的帶節(jié)嫩莖段作為無(wú)菌外植體。
[0016]優(yōu)選的是，所述SI中，對(duì)所述無(wú)菌外植體進(jìn)行消毒，具體消毒的過(guò)程為:用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為I %洗潔精水溶液浸泡5-10min，自來(lái)水沖洗15_20min，無(wú)菌水潤(rùn)洗兩次，然后在超凈工作臺(tái)用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精浸泡30-50s，再用添加了 2-3滴吐溫-20的150mL質(zhì)量濃度為0.1 %升未消毒5-8min，無(wú)菌水沖洗3_5次。
[0017]優(yōu)選的是，所述S2中，培養(yǎng)溫度為26 °C，米用發(fā)射紅光的第一燈管與發(fā)射藍(lán)光的第二燈管按數(shù)量比為10: 3排布后將光源照射所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基，光照強(qiáng)度為38umol.πΓ2.s4，培養(yǎng)28天；所述S3中，培養(yǎng)溫度為26°C，米用發(fā)射紅光的第一燈管與發(fā)射藍(lán)光的第二燈管按數(shù)量比為8: 3排布后將光源照射所述增殖培養(yǎng)基，光照強(qiáng)度為60umol.πΓ2.s4，培養(yǎng)28天；所述S4中，培養(yǎng)溫度為26°C，米用發(fā)射紅光的第一燈管與發(fā)射藍(lán)光的第二燈管按數(shù)量比為7: 3排布后將光源照射所述壯苗培養(yǎng)基，光照強(qiáng)度為65umol.πΓ2.s4，培養(yǎng)21天；所述S5中，培養(yǎng)溫度為26°C，米用發(fā)射紅光的第一燈管與發(fā)射藍(lán)光的第二燈管按數(shù)量比為7: 4排布后將光源照射所述生根培養(yǎng)基，光照強(qiáng)度為65umol.m 2.s S 培養(yǎng) 21 天。
[0018]優(yōu)選的是，所述基質(zhì)還經(jīng)過(guò)了預(yù)處理步驟:將所述基質(zhì)表面噴灑營(yíng)養(yǎng)液，所述營(yíng)養(yǎng)液由體積比為2:I的米醋和煙酸組成。
[0019]優(yōu)選的是，所述S6中生根的五指那藤苗移栽至基質(zhì)中培養(yǎng)時(shí)，每相鄰的兩個(gè)生根的五指那藤苗之間的間距為35cm，在基質(zhì)中培養(yǎng)6-8天后，在所述基質(zhì)表面噴施營(yíng)養(yǎng)肥，并在鋪設(shè)營(yíng)養(yǎng)肥后的基質(zhì)表面鋪設(shè)一層相對(duì)濕度為75%的苔蘚。
[0020]優(yōu)選的是，所述營(yíng)養(yǎng)肥為重量比為30: 20: I的苔蘚、豆渣和發(fā)酵菌混合后在55 °C下密封發(fā)酵6-8天而成。
[0021]本發(fā)明至少包括以下有益效果:
[0022]1、在五指那藤生長(zhǎng)的壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中既有五指那藤代謝的有害物質(zhì)，又有促進(jìn)植物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，要提高五指那藤的生長(zhǎng)速度以及存活率，在培養(yǎng)基中加入活性炭，能有效抑制有害物質(zhì)的生長(zhǎng)，吲哚丁酸和活性炭的配合使用，使活性炭有選擇性的吸附物質(zhì)，即吸附有害物質(zhì)的同時(shí)不會(huì)吸附有利于五指那藤生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
[0023]2、五指那藤在培養(yǎng)基中不同的培養(yǎng)時(shí)期，采用數(shù)量比不同的紅藍(lán)燈管照射五指那藤，當(dāng)在培養(yǎng)五指那藤的腋芽時(shí)，光強(qiáng)度為38umol.πΓ2 是五指那藤的光飽和點(diǎn)，可保證五指那藤適應(yīng)弱光的能力，加快五指那藤的生長(zhǎng)速率，當(dāng)?shù)玫轿逯改翘僖秆亢螅黾铀{(lán)光燈管數(shù)量，有利于提高五指那藤的色素含量，其中藍(lán)光尤其可調(diào)控葉綠素的形成，有利于五指那藤的氣孔開(kāi)啟，加快光合節(jié)律，加快五指那藤的生根。
[0024]五指那藤是中國(guó)特有的一種植物，目前尚未由人工引種栽培，本發(fā)明通過(guò)組織培養(yǎng)和基質(zhì)栽培成功栽培了五指那藤這種野生植物。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，原料易得且價(jià)格便宜。反應(yīng)條件，例如，溫度和時(shí)間以及光強(qiáng)度均可以調(diào)控，所得五指那藤成活率高，解決了五指那藤的規(guī)?；a(chǎn)，相較于五指那藤的自然生長(zhǎng)，縮短了五指那藤的培育時(shí)間。
[0025]本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本發(fā)明的研宄和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【具體實(shí)施方式】
[0026]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0027]實(shí)施例1
[0028]一種五指那藤的繁殖方法，包括以下步驟:
[0029]S1:制作五指那藤的無(wú)菌外植體；
[0030]S2:利用誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)無(wú)菌外植體，得到腋芽，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中含有MS、lmg/L的6-芐氨基腺嘌呤和0.5mg/L的吲哚丁酸；
[0031]S3:利用增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)腋芽，得到叢生芽，所述增殖培養(yǎng)基中含有MS、0.3mg/L的1-萘乙酸、1.5mg/L的TDZ植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和50mg/L的半胱氨酸；
[0032]S4:利用壯苗培養(yǎng)基培養(yǎng)叢生芽，得到五指那藤苗，所述壯苗培養(yǎng)基中含有MS、
0.lmg/L的1-萘乙酸、0.lmg/L的吲噪丁酸和0.lg/L的活性炭；
[0033]S5:利用生根培養(yǎng)基培養(yǎng)五指那藤苗，得到生根的五指那藤苗，所述生根培養(yǎng)基中含有MS、0.3mg/L的吲哚丁酸和0.lg/L的活性炭；在五指那藤生長(zhǎng)的壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中既有五指那藤代謝襯衫的有害物質(zhì)，又有促進(jìn)植物生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，要提高五指那藤的生長(zhǎng)速度以及存活率，在培養(yǎng)基中加入活性炭，能有效抑制有害物質(zhì)的生長(zhǎng)，吲哚丁酸和活性炭的配合使用，使活性炭有選擇性的吸附物質(zhì)，即吸附有害物質(zhì)的同時(shí)不會(huì)吸附有利于五指那藤生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。
[0034]S6:將生根的五指那藤苗移栽至基質(zhì)中培養(yǎng)。
[0035]其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基培、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基中均含有5g/L的瓊脂和30g/L的蔗糖，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基培、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的pH值均為5.8。培養(yǎng)基中的細(xì)菌適宜的pH值為6.8-7.4，將培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)為5.8，能抑制培養(yǎng)基中細(xì)菌的滋生，同時(shí)能給五指那藤苗提高一個(gè)適宜的生長(zhǎng)環(huán)境。
[0036]其中，所述S6中基質(zhì)由體積比為3: