一種春石斛品種‘火鳥’組培快繁的方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物組培領(lǐng)域，公開了一種春石斛品種‘火鳥’組培快繁的方法。主要步驟包括：春季采取‘火鳥’當年生莖段為外植體，依次進行1)外植體在NaClO和HgCl2中消毒，2)轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6?BA 3mg·L?1+NAA0.2mg·L?1中培養(yǎng)，3)后換入增殖培養(yǎng)基MS+TDZ 0.1mg·L?1+NAA 0.2mg·L?1+200g·L?1土豆泥+1g·L?1活性炭中培養(yǎng)，4)換入壯苗生根培養(yǎng)基1/2MS+0.5mg·L?1IBA+200g·L?1土豆泥中培養(yǎng)，5)煉苗移栽，得到春石斛品種‘火鳥’組培苗。本發(fā)明提供的一種‘火鳥’組培快繁方法，可以在最短時間內(nèi)達到繁殖系數(shù)的最大化，有利于洋蘭石斛屬品種‘火鳥’的快速育苗，縮短苗期和生長周期，達到繁殖速度快、節(jié)約生產(chǎn)成本并適用于規(guī)模育苗的目的。使用的植物材料極少，生長快，周期短，重復(fù)性強，可周年試驗或生產(chǎn)。
【專利說明】
一種春石斛品種‘火鳥’組培快繁的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及的是一種春石斛品種‘火鳥’的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]春石斛品種‘火鳥’(Dendrobium stardust‘Fire Bird’)為蘭科石斛屬品種，目前文獻中尚無關(guān)于春石斛品種‘火鳥’的組培快繁的報道。該方法為春石斛品種‘火鳥’的快速繁殖提供了一種新的方法，為春石斛品種‘火鳥’作為春石斛的產(chǎn)業(yè)化提供了一種繁殖的新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了改變目前春石斛品種‘火鳥’繁殖、栽培不良的狀況，本發(fā)明的目的在于加快春石斛品種‘火鳥’的栽培和開發(fā)力度，提高春石斛品種‘火鳥’的繁殖效率，加快春石斛品種‘火鳥’種苗的規(guī)?；庇?，有利于春石斛品種‘火鳥’作為能源木本植物和觀賞春石斛的生產(chǎn)和開發(fā)。本發(fā)明方法特別適用于春季生產(chǎn)初期采集嫩枝進行誘導(dǎo)叢生芽。
[0004]—種春石斛品種‘火鳥，組培快繁的方法，包括如下步驟:
[0005]采集春石斛品種‘火鳥’當年生嫩莖為外植體，依次進行I)嫩莖消毒、2)嫩莖誘導(dǎo)培養(yǎng)、3)叢生芽增殖培養(yǎng)、4)叢生芽壯苗生根培養(yǎng)、5)煉苗移栽，得到春石斛品種‘火鳥’組培苗。
[0006]所述采集春石斛品種‘火鳥’當年生嫩枝，是在春天采集春石斛品種‘火鳥’芽萌發(fā)形成的未封頂?shù)闹l，要求枝條木質(zhì)化程度低，要求每個莖段都長有I?2個腋芽。
[0007]所述I)嫩莖外植體消毒，是流水沖洗嫩莖2?3h，在超凈臺上用75%酒精處理30?40s，無菌水漂洗3?4次，用5%次氯酸鈉(NaClO,Sodium hypochlorite)消毒5min，再用
0.3%升萊(二氯化萊，Mercury chloride)中消毒6min，之后無菌水漂洗3?4次，并用無菌濾紙吸去多余水分。
[0008]所述2)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng):在無菌條件下將獲得的嫩莖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在25±2°(:，光照14?1611，？!1值為5.8?6.0，光強300011條件下培養(yǎng)，接種22(1后新芽開始萌發(fā)，22?35d，獲得叢生芽;45d后葉片展開。
[0009]所述的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有3.0mg/L的6-BA(6-芐基氨基嘌呤，benzylaminmopurine)、0.2mg/L的NAA(萘乙酸，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基。
[0010]所述萌發(fā)新的叢生芽，時間為接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上18d后。
[0011]所述葉片展開，時間為接種到叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上42d后。
[0012]所述3)叢生芽增殖繼代培養(yǎng)，為將經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)萌發(fā)的叢生芽，接種到增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，置于溫度25 土 IV的培養(yǎng)室內(nèi)，每30?40d繼代轉(zhuǎn)瓶一次，擴大叢生芽數(shù)量，并使叢生芽繼續(xù)生長。
[0013]所述叢生芽增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有0.lmg/L的TDZ、0.2mg/L的NAA、200g.L—1 土豆泥、Ig.L—1活性炭、4.5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基。
[0014]所述3)壯苗生根:將繼代后大量形成的叢生芽，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基進行生根誘導(dǎo)，促進生根，38d后長成帶根的幼苗。
[0015]所述長成帶根的幼苗，時間為接種到生根培養(yǎng)基上38天后。
[0016]所述4)叢生芽壯苗生根培養(yǎng)，為將經(jīng)過充分繼代的無根叢生芽接種到壯苗生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d后，基部產(chǎn)生白色不定根、培養(yǎng)35d毛根明顯，形成完整植株。
[0017]所述叢生芽壯苗生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有0.5mg/L的IBA(口引噪丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基。
[0018]所述5)煉苗移栽，為將形成完整根系的組培苗連瓶放入溫室中煉苗4?6d，增加光照，后出瓶洗凈放入干凈基質(zhì)中栽培，保持較高濕度。
[0019]所述基質(zhì)為草炭土:珍珠巖按體積比3:1混合所得的基質(zhì)。
[0020]所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、叢生芽增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基的pH值優(yōu)選為5.80。
[0021]所述的培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為每天光照1h?12h，溫度為25 °C ± 2 °C、光照12h/d、光照強度 2000 ?30001x。
[0022]本發(fā)明的創(chuàng)新之處是公開了春石斛品種‘火鳥’生芽誘導(dǎo)、增殖、生根的配方及其組培快繁的種苗規(guī)?；庇囊环N方法。目前國內(nèi)外未見同類報道。
[0023]本發(fā)明有利于加快春石斛品種‘火鳥’的繁殖，加快其種苗基數(shù)，有益于后期洋蘭中春石斛的普及和生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0024]圖1:本發(fā)明所述春石斛品種‘火鳥’組培及煉苗情況
[0025]其中:a:叢生芽誘導(dǎo)，b:叢生芽增殖，c:春石斛品種‘火鳥’生根，d:春石斛品種‘火鳥’出瓶煉苗后定植的組培苗。
【具體實施方式】
[0026]—種春石斛品種‘火鳥’組培快繁方法，該方法包括以下步驟:(下面實施例用于對本發(fā)明的進一步說明，但不用來限制本發(fā)明的范圍)。
[0027]實施例1:以本發(fā)明的方法篩選春石斛品種‘火鳥’誘導(dǎo)培養(yǎng)基
[0028]I)選取外植體:選取當年生生長健壯無病蟲害的春石斛品種‘火鳥’枝條嫩莖為外植體，剪成3cm莖段，每個莖段留I?2個芽，用洗滌劑清洗lOmin，然后用用自來水沖洗3h，最后晾干材料表面水分備用；
[0029]2)嫩莖誘導(dǎo)培養(yǎng):將處理好的春石斛品種‘火鳥’莖段，在超凈工作臺上用質(zhì)量濃度為75%酒精浸泡30s，再用質(zhì)量濃度為0.3%升汞消毒7min，最后用無菌水沖洗3次，再將嫩莖置于無菌濾紙上吸干表面多余水分，接種在莖段誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，將接種的外植體置于溫度22±1°C、光照12h/d、光照強度1500?20001x的培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)20d后芽萌發(fā)，待第42d葉片展開，將芽取下，轉(zhuǎn)接到叢生芽增殖培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)室內(nèi)，40d后愈傷組織上分化叢生芽(通過40d培養(yǎng)誘導(dǎo)單芽平均誘導(dǎo)叢生芽增殖系數(shù)達到2.6).春石斛品種‘火鳥’組培苗開始形成。
[0030]實施例2:以本發(fā)明的方法進行春石斛品種‘火鳥’叢生芽增殖繼代
[0031]將叢生芽接入?yún)采吭鲋忱^代培養(yǎng)基上，置于溫度25±2°C、光照12h/d、光照強度2000?30001x的培養(yǎng)室內(nèi)，每30?40d繼代一次，繼代3次生成生長健壯的組培苗(在繼代第3次時其叢生芽增殖系數(shù)平均達到5.3);
[0032]3)壯苗生根:將生長健壯的試管苗采用2/3DKW培養(yǎng)基進行生根培養(yǎng)，30d后長成帶根的春石斛品種‘火鳥’幼苗；
[0033]4)煉苗移栽:將帶根的春石斛品種‘火鳥’幼苗進行煉苗移栽，即培養(yǎng)成春石斛品種‘火鳥’組培苗。
[0034]該發(fā)明方法誘導(dǎo)叢生芽分化達到快速增殖，進而誘導(dǎo)叢生芽生根，本發(fā)明可以使繁殖效率可達到8.0，生根率達到95 %，煉苗成活率96%。每株春石斛品種‘火鳥’在規(guī)模化的育苗條件下，一年能繁育幾十萬株，大大提高春石斛品種‘火鳥’的繁育效率。
[0035]以上所述實施舉例僅是本發(fā)明之優(yōu)選實施方式，是對本發(fā)明的進一步說明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。同時指出，對于本專業(yè)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離該發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視作本發(fā)明的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種春石斛品種‘火鳥，組培快繁方法，包括如下幾個步驟: 采春石斛品種‘火鳥’嫩莖為外植體，依次進行I)嫩莖消毒、2)嫩莖誘導(dǎo)培養(yǎng)、3)叢生芽增殖培養(yǎng)、4)叢生芽壯苗生根培養(yǎng)、5)煉苗移栽，組培苗出瓶上盆。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述春石斛品種‘火鳥’的組培快繁方法，其特征在于:所述I)嫩莖消毒，為剪取春石斛品種‘火鳥’植株的當年生嫩莖，流水沖洗2?3h，在超凈臺上用75 %酒精處理30?40s，無菌水漂洗3?4次，用5 %次氯酸鈉(NaClO，Sodium hypochlorite)消毒5min，再用0.3%升萊(二氯化萊，Mercury chloride)中消毒6min，之后無菌水漂洗3?4次，并用無菌濾紙吸去多余水分。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述品種‘火鳥’組培快繁方法，其特征在于:所述2)叢生芽誘導(dǎo)的方法是:在無菌條件下將獲得的嫩莖接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在25 土 2°C，光照14?16h，pH值為5.8?6.0，光強30001x條件下培養(yǎng)，接種22d后新芽開始萌發(fā)，22?35d，獲得叢生芽;45d后葉片展開。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的春石斛‘火鳥’莖段組培快繁的方法，其特征在于，所述叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有3.0mg/L的6-BA(6-芐基氨基嘌呤，benzyIaminmopurine)、0.2mg/L的NAA(萘乙酉愛，1-Naphthaleneacetic acid)、5g/L瓊月旨、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述‘火鳥，組培快繁方法，其特征在于:所述3)叢生芽增殖培養(yǎng)，為將經(jīng)過誘導(dǎo)培養(yǎng)萌發(fā)的叢生芽，接種到增殖培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，擴大叢生芽數(shù)量，并使叢生芽繼續(xù)生長。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的‘火鳥，莖段組培快繁的方法，其特征在于，所述叢生芽增殖培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有0.lmg/1的TDZ、0.2mg//L的NAA、200g.L—1 土豆泥、Ig.L—1活性炭、4.5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述‘火鳥，組培快繁方法，其特征在于:所述4)叢生芽壯苗生根培養(yǎng)基，為將經(jīng)過充分繼代的無根叢生芽接種到壯苗生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)12d后，基部產(chǎn)生白色不定根、培養(yǎng)35d毛根明顯，形成完整植株。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的‘火鳥，莖段壯苗生根組培快繁的方法，其特征在于:所述叢生芽壯苗生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有0.5mg/L的IBA(吲哚丁酸，Indole-3-Butytric acid)、4.5g/L瓊脂、20g/L葡萄糖的培養(yǎng)基。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述‘火鳥’組培快繁方法，其特征在于:所述5)煉苗移栽，為將形成完整根系的組培苗連瓶放入溫室中煉苗4?6d，增加光照，后出瓶洗凈放入干凈基質(zhì)中栽培，保持較高濕度。10.權(quán)利要求1-9任一項所述的品種‘火鳥’莖段組培快繁的方法在春石斛品種繁殖中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01H4/00GK106069751SQ201610412130
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月14日 公開號201610412130.5, CN 106069751 A, CN 106069751A, CN 201610412130, CN-A-106069751, CN106069751 A, CN106069751A, CN201610412130, CN201610412130.5
【發(fā)明人】李振堅, 孫振元, 張俊民, 楊業(yè)波, 劉俊祥, 彭向永, 龔曉慧
【申請人】中國林業(yè)科學(xué)研究院林業(yè)研究所