毛鉤藤的快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物栽培領(lǐng)域，更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種毛鉤藤的快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 毛鉤藤為茜草科、金雞納亞科鉤藤屬植物，別名倒吊風(fēng)藤和臺(tái)灣風(fēng)藤，屬藤本植物 具攀援習(xí)性，嫩枝纖細(xì)，圓柱形或略具四棱角，被硬毛。毛鉤藤是我國(guó)的特有種，主要分布在 廣東、廣西、貴州、福建及中國(guó)臺(tái)灣等地，生于山谷林下溪畔成灌叢中。鉤藤屬植物的根和帶 鉤的莖枝中鉤藤堿含量高，具有降血壓、鎮(zhèn)靜、抗血小板聚集和抗血栓形成的作用，還有一 定抗癌作用。毛鉤藤多為野生資源，而人工栽培多是野外引種（其中包括種子播種，分株及 扦插），但其出芽率、成活率低，繁殖系數(shù)低，因此規(guī)模也小。隨著市場(chǎng)需求量越來(lái)越大，現(xiàn) 有的野生資源采集量逐漸增大而栽培資源同樣跟不上采集需求。利用組織培養(yǎng)快繁技術(shù)， 可以有效快速的增加其繁殖系數(shù)，不僅能滿足市場(chǎng)對(duì)毛鉤藤藥材的需求，又有利于毛鉤藤 野生資源的保護(hù)。目前鉤藤屬中其他種的組織快繁已有報(bào)道，而以毛鉤藤枝條作為繁殖材 料的組織培養(yǎng)與快速繁殖尚未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明通過(guò)建毛藤組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具有繁 殖率高、繁殖速率快等優(yōu)點(diǎn)，便于在生產(chǎn)上大面積推廣種植，滿足了中藥資源開(kāi)發(fā)的迫切需 要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題和缺陷，并提供后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
[0004] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種毛鉤藤的快速繁殖方法，首先利用針對(duì)毛鉤藤的 第一培養(yǎng)基和第二培養(yǎng)基培養(yǎng)毛鉤藤的無(wú)菌外植體至生根，加快毛鉤藤苗的生根速率。
[0005] 本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種適用于毛鉤藤苗的基質(zhì)，保證毛鉤藤苗減少蟲(chóng)害 的侵蝕，提高毛鉤藤的存活率。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種毛鉤藤的快速繁殖方 法，包括以下步驟：
[0007] 步驟一、制作毛鉤藤的無(wú)菌外植體；
[0008] 步驟二、將所述無(wú)菌外植體轉(zhuǎn)入第一培養(yǎng)基中進(jìn)行光照培養(yǎng)，控制溫度為24°C~ 26°C，誘導(dǎo)腋芽形成；所述第一培養(yǎng)基包括white培養(yǎng)基、1~1. 3mg/L的竹醋液、35g/L的 蜜二糖和4g/L的瓊脂；
[0009] 步驟三、將步驟二培養(yǎng)的帶有腋芽的無(wú)菌外植體轉(zhuǎn)入第二培養(yǎng)基中進(jìn)行光照培 養(yǎng)，控制溫度為24°c~26°C，培養(yǎng)直至生根；其中，所述第二培養(yǎng)基包括固態(tài)培養(yǎng)基和液態(tài) 培養(yǎng)基，所述第二培養(yǎng)基放置于培養(yǎng)盒中，使固態(tài)培養(yǎng)基在所述液態(tài)培養(yǎng)基的上方；
[0010] 所述固態(tài)培養(yǎng)基包括white培養(yǎng)基、0. 1~0. 2mg/L的珍珠粉、0. 1~0. 5mg/L的 激動(dòng)素KT、0. 7~0? 8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的瓊脂和0? 1~0? 5g/L的活性炭；
[0011] 所述液態(tài)培養(yǎng)基包括B5培養(yǎng)基、0. 6~0. 9mg/L的竹醋液和0. 2~0. 4mg/L的火 龍果提取液；所述火龍果提取液的制作方法為將火龍果果皮破碎，用火龍果果皮質(zhì)量10倍 的50 %的乙醇水溶液浸泡7小時(shí)，之后在55°C下萃取8小時(shí)，過(guò)濾，取濾液，將所述濾液真 空減壓濃縮至6mg/L，設(shè)置真空度為0. 05~0. 06MPa，減壓濃縮時(shí)控制溫度為55°C，即得所 述火龍果提取液。
[0012] 優(yōu)選的是，在進(jìn)行所述步驟三之前，還將所得的帶腋芽的毛鉤藤的無(wú)菌外植體進(jìn) 行脈沖電擊處理：將帶腋芽的毛鉤藤的無(wú)菌外植體下方的1/3處浸泡于導(dǎo)電液中，控制電 壓為22(^，脈沖頻率為38〇111抱，進(jìn)行電擊處理3-5 8;所述導(dǎo)電液為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為25%的硝酸 鉀溶液。
[0013] 優(yōu)選的是，所述步驟三中，從無(wú)菌外植體的下方開(kāi)始，將帶有腋芽的無(wú)菌外植體的 1/5浸沒(méi)于所述液態(tài)培養(yǎng)基，將帶有腋芽的無(wú)菌外植體的1/3置于所述固態(tài)培養(yǎng)基中。 [0014] 優(yōu)選的是，所述培養(yǎng)盒包括：
[0015] 盒體，其為中空?qǐng)A柱狀；
[0016] 隔板，其為圓形，所述隔板的直徑略小于所述盒體的直徑，所述隔板可拆卸的固定 于所述盒體內(nèi)，使所述盒體形成上部空間和下部空間，所述隔板平行于所述盒體的底部，所 述隔板上間隔設(shè)置有2~4個(gè)使所述無(wú)菌外植體通過(guò)的第一通孔；
[0017] 其中，所述盒體的底部設(shè)置有排水管，所述排水管上設(shè)有第一控制閥，所述盒體的 下部空間的側(cè)壁設(shè)置有進(jìn)水管，所述進(jìn)水管上設(shè)有第二控制閥，所述固態(tài)培養(yǎng)基設(shè)置于所 述上部空間中，所述液態(tài)培養(yǎng)基置于所述下部空間中。
[0018] 優(yōu)選的是，還包括：步驟四、將生根的毛鉤藤苗移栽至基質(zhì)中培養(yǎng)，移栽后在所述 基質(zhì)表面鋪設(shè)一層聚乙烯緩釋膜，所述聚乙烯緩釋膜中注入有質(zhì)量配比為10 : 1 : 10 : 2 的硫酸亞鐵、有機(jī)螯合肽、硼砂和七水硫酸鋅；
[0019] 所述基質(zhì)從下到上由草灰層、細(xì)胞分裂劑層、魚(yú)骨層和膨潤(rùn)土層按厚度比為 4 : 1 : 2 : 5構(gòu)成。
[0020] 優(yōu)選的是，所述步驟一中，選取毛鉤藤靠近頂芽的帶節(jié)嫩莖段，摘除多余葉片，用 細(xì)毛刷在流水下輕輕刷洗外植體表面，然后剪成2-4cm長(zhǎng)的帶腋芽的嫩莖段作為毛鉤藤的 無(wú)菌外植體。
[0021] 優(yōu)選的是，所述步驟一中，對(duì)毛鉤藤的外植體進(jìn)行消毒，具體消毒的過(guò)程為：用質(zhì) 量比為1 : 100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植體5min，再用無(wú)菌水潤(rùn)洗所述外 植體三遍，之后將所述外植體下方的1/3處及以下部分浸泡于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的竹醋液中 25-30min，之后用消毒后的茶葉水持續(xù)沖洗所述外植體20-30s。
[0022] 優(yōu)選的是，毛鉤藤的無(wú)菌外植體在第一培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，調(diào)節(jié)pH為5. 7,控制光 照強(qiáng)度為18001x，每天的光照時(shí)間為10小時(shí)；毛鉤藤的無(wú)菌外植體在第二培養(yǎng)基中培養(yǎng) 時(shí)，調(diào)節(jié)所述固態(tài)培養(yǎng)基的pH為5. 7,調(diào)節(jié)所述液態(tài)培養(yǎng)基的pH為5. 3,控制光照強(qiáng)度為 20001x，每天的光照時(shí)間為12小時(shí)。
[0023] 本發(fā)明至少包括以下有益效果：
[0024] 1、毛鉤藤苗的外植體消毒采用的是由大蒜素和乙醇混合而成的消毒液，相較于 一般消毒液和洗潔精，本發(fā)明的消毒液提取的是大蒜中的有效成分，在保證毛鉤藤苗的外 植體殺菌消毒的同時(shí)，可以提高毛鉤藤苗的外植體在組織培養(yǎng)時(shí)的成活率，成活率可提高 22%左右。用消毒后的茶水對(duì)帶節(jié)嫩莖端沖洗，使外植體上附著一層茶水膜，茶水中的茶多 酚對(duì)植物的病原真菌和分生孢子的萌發(fā)有極強(qiáng)的抑制作用，防止外植體的生長(zhǎng)感染真菌， 提高外植體的存活率。
[0025] 2、毛鉤藤的快速培養(yǎng)首先通過(guò)組織培養(yǎng)，培養(yǎng)毛鉤藤的外植體生根，之后再移栽， 采用本發(fā)明的培養(yǎng)基配合毛鉤藤的生長(zhǎng)，大大加快了毛鉤藤的生長(zhǎng)速度，其中毛鉤藤無(wú)菌 外植體腋芽的形成僅需一周左右、在得到有腋芽的無(wú)菌外植體后植入第二培養(yǎng)基中培養(yǎng) 7-10天就可得到毛鉤藤的生根苗。比普通的培養(yǎng)基培養(yǎng)不僅提高了存活率，同時(shí)還大大縮 短了培育時(shí)間。
[0026] 3、第一培養(yǎng)基和第二培養(yǎng)基中添加有竹醋液，竹醋液能有效地促進(jìn)毛鉤藤無(wú)菌外 植體腋芽的形成，縮短腋芽形成的時(shí)間，明顯改善毛鉤藤的組織細(xì)胞分裂，生長(zhǎng)，使毛鉤藤 的根分化出來(lái)，同時(shí)促進(jìn)形成層細(xì)胞分裂，長(zhǎng)大，使莖逐漸加粗。同時(shí)竹醋液有利于提高毛 鉤藤對(duì)光的吸收，促進(jìn)毛鉤藤的光合作用，促進(jìn)毛鉤藤苗的營(yíng)養(yǎng)吸收。
[0027] 4、在生根階段，采用固態(tài)培養(yǎng)基和液態(tài)培養(yǎng)基的搭配，液態(tài)培養(yǎng)基中采用的是竹 醋液和火龍果提取液，保證了毛鉤藤快速繁殖的同時(shí)，不會(huì)出現(xiàn)畸形化，使組織培養(yǎng)出的毛 鉤藤苗和自然生長(zhǎng)的毛鉤藤苗生長(zhǎng)順序相同，不會(huì)出現(xiàn)異化現(xiàn)象，在后期的移栽存活率也 很高。
[0028] 5、整個(gè)組織培養(yǎng)中所用的激素相較于一般的組織培養(yǎng)所用的激素要少，由于在激 素環(huán)境下會(huì)導(dǎo)致根原基維管束的排列紊亂，有時(shí)會(huì)導(dǎo)致根無(wú)法順利的萌發(fā)，將根原基維管 束浸泡于液態(tài)培養(yǎng)基中，將上面一部分設(shè)置于固態(tài)培養(yǎng)基中，保證了毛鉤藤生根所需的環(huán) 境，同時(shí)提高了毛鉤藤根的萌發(fā)率。
[0029] 6、針對(duì)固液兩用培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)了一種培養(yǎng)盒，培養(yǎng)盒通過(guò)隔板分隔成兩個(gè)空間，上 面一個(gè)空間可以擱置固態(tài)培養(yǎng)基，下面一個(gè)空間可放置液態(tài)培養(yǎng)基，隔板上設(shè)置有2~4個(gè) 第一通孔，用于放置毛鉤藤的無(wú)菌外植體，同時(shí)也可保證固液兩個(gè)培養(yǎng)基之間一定的連通， 設(shè)置進(jìn)水管和排水管，可在不更換固態(tài)培養(yǎng)及且不移出毛鉤藤苗的情況下定期更換液態(tài)培 養(yǎng)基，隔板也可從盒體中抽出。
[0030] 7、基質(zhì)的表面鋪設(shè)聚乙烯醇緩釋膜，可緩慢釋放毛鉤藤所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，不需人 工管理，保證了毛鉤藤生長(zhǎng)所需。
[0031] 8、魚(yú)骨層中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是水溶性物質(zhì)，全是毛鉤藤生長(zhǎng)所需，且很容易被毛鉤藤 吸收，減少了難降解的有機(jī)化學(xué)物質(zhì)的使用，從而減少了對(duì)環(huán)境的污染。
[0032] 9、在毛鉤藤外植體分化出腋芽后進(jìn)行脈沖電擊處理，控制時(shí)間為3_5s，頻率為 380mHz，能促進(jìn)毛鉤藤的外植體生根，控制合適的時(shí)間和頻率不會(huì)造成毛鉤藤苗的畸形化， 至畸率低于0. 5%。
[0033] 本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過(guò)下面的說(shuō)明體現(xiàn)，部分還將通過(guò)對(duì)本 發(fā)明的研宄和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。