專利名稱：艾納香的快速繁殖與移栽方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及艾納香的快速繁殖與移栽方法。
背景技術(shù)：
菊科Compositae艾納香屬Blumea DC.植物全世界.約80余種，分布于熱帶和亞熱帶的亞洲、非洲及大洋洲；我國(guó)30種，分布于長(zhǎng)江流域以南各省區(qū)；貴州有14種，羅甸有艾納香屬植物8種，其中艾納香財(cái).balsamifera (L.)DC、千頭艾納香
7a/ c<9o7ar7aRoxb、柔毛艾納香 mollis (D.Don)Merr.、見(jiàn)霜黃Iacera (Burm.f.) DC.、六耳鈴財(cái).Zacifliaia (Roxb.) DC均有較好的藥用價(jià)值。艾納香為多年生草本植物,全草入藥,主治感冒、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、產(chǎn)后風(fēng)痛、痛經(jīng)；外用治跌打損傷、瘡癤痛腫、濕疹、皮炎等，是重要中藥材冰片的原材料。艾納香人工種植有較長(zhǎng)的歷史，早在1938年前后，羅甸、望謨兩縣民間就有種植艾納香提取艾粉的習(xí)俗，歷史上羅甸是中國(guó)艾納香人工種植原產(chǎn)地，有豐富的艾納香植物資源，目前，種苗繁殖困難是制約艾納香植物規(guī)?；N植發(fā)展利用的主要原因。艾納香植物為頭狀花序，花序外圍的雌花多層，能育，中央的兩性花多數(shù)或較少數(shù)，能育或極少不完全發(fā)育。外圍種子育性好，但成熟后易隨風(fēng)飄逝，不易采集；內(nèi)層種子易采集，但育性差，有休眠現(xiàn)象。何元農(nóng)等(2007)對(duì)艾納香種子進(jìn)行人工育苗試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，艾納香種子有一定的休眠期，低溫有助于打破種子休眠，但發(fā)芽率低于5.8%,難于人工育苗為生產(chǎn)上提供大量的種子實(shí)生苗。艾納香種植長(zhǎng)期以枝干、根系的萌生苗分生繁殖為主。何元農(nóng)等(2004)對(duì)艾納香分生苗的類 型和移栽性能進(jìn)行系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)艾納香無(wú)性繁殖以根生苗為主要苗源，苗質(zhì)參差不齊導(dǎo)致苗源地點(diǎn)、供苗量和時(shí)間以及種苗群體統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的可控性有限，是艾納香GAP規(guī)?；亟ㄔO(shè)的一大障礙；通過(guò)對(duì)羅甸、荔波地區(qū)1995年-2003年多個(gè)艾納香規(guī)模化種植基地種苗移栽成活率較低的原因進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)莖腐病是導(dǎo)致分生苗移栽死亡的主要病因；分生苗根系弱，遠(yuǎn)距離運(yùn)輸易失水萎蔫也是導(dǎo)致移栽死亡的主要原因(何元農(nóng)等，2005)。艾納香屬植物組培快繁育苗技術(shù)研究目前有少量報(bào)道。姚紹嫦等(2012)對(duì)馥芳艾納香QBl.Aromatica)種用帶腋芽莖段采用常規(guī)氯化萊消毒后接種在MS+2.0mg/L6_BA+0.2mg/LNAA 培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，用 MS+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT+0.2mg/LNAA 進(jìn)行繼代增殖，最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.3mg/LNAA ;并對(duì)該方法申報(bào)專利保護(hù)(申請(qǐng)?zhí)?20120051539.0)。張明珍(2007)在碩士學(xué)位論文“滇桂艾納香組織培養(yǎng)體系建立的研究”中，認(rèn)為不同外植體需用不同比例的次氯酸鈉、氯化汞和雙氧水溶液組合后才能達(dá)到較好的消毒效果；初誘導(dǎo)和繼代增殖最佳培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，最佳激素組合為6-BA+NAA，最佳生根培養(yǎng)為1/2MS+NAA。包國(guó)慶等(2007)在“滇桂艾納香藥材的快速繁殖方法”專利申請(qǐng)說(shuō)明書中做了與張明珍碩士論文相似的論述。菲律賓國(guó)家農(nóng)業(yè)部的Thelma L.(2009)博士用艾納香種幼嫩莖尖用MS+1.0mg/L6-BA進(jìn)行莖段培養(yǎng)，用MS+0.5-1.0mg/LNAA可從莖段誘導(dǎo)生根。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是:提供一種能在短時(shí)間內(nèi)培育出遺傳性狀與優(yōu)質(zhì)母本相同的大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是:
一種艾納香的快速繁殖方法，包含以下步驟:
(O外植體抗褐化及消毒處理:將從野外采集的艾納香帶葉柄的嫩葉或帶腋芽的幼嫩莖段外植體沖洗干凈后，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大霉素的蒸懼水溶液浸泡60min，然后用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水沖洗3_5次，再用1000mg/L氯化汞水溶液常規(guī)消毒；
(2)初誘導(dǎo)培養(yǎng): 將消毒后的外植體接種在基本培養(yǎng)基+0.5mg/LTDZ+1.0mg/L6-BA+0.5 mg/L IBA的初誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；
(3)繼代增殖培養(yǎng):將初誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基+0.2mg/L TDZ +0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的繼代增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)；
(4)生根誘導(dǎo)培養(yǎng):將繼代增殖形成的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基 +1000mg/L 花寶 I 號(hào) + 1000mg/L 活性炭 +0.3 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IBA 的生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。一種艾納香的移栽方法，包含以下步驟:
(1)煉苗方法:將權(quán)利要求1中生根誘導(dǎo)培養(yǎng)的艾納香，生根培養(yǎng)50天，苗高3-5cm，根系5-10根，長(zhǎng)度l-5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環(huán)境溫度20_30°C的條件下煉苗培養(yǎng)7-10天；
(2)基質(zhì)處理:將蛭石+砂質(zhì)黃壤按體積比1:1混合成混合基質(zhì)，然后用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理后裝入5cmX8cm的營(yíng)養(yǎng)袋中；
(3)幼苗移栽及管理方法:將煉苗后的瓶苗取出，用水清洗干凈根系，置于有少量水分的磁盤中，將幼苗植入步驟(2)中已消毒裝袋的基質(zhì)中，每袋I株，然后澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內(nèi)，每天噴霧2-3次，半月后噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對(duì)濕度在85%以上，溫度20-30°C。本發(fā)明提供的整套艾納香種苗快速繁殖與移栽方法，能在短時(shí)間內(nèi)培育質(zhì)量整齊的大量種苗，成本低廉。該方法育苗不僅能使選育出的優(yōu)質(zhì)種源得到快速繁殖利用，而且沒(méi)有莖腐病的危害，同時(shí)采用營(yíng)養(yǎng)袋育苗的方法，可隨時(shí)上山定植，且保障上山定植的成活率。該方法適用于工廠化育苗生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
①外植體抗褐化、消毒處理:3-4月份采取萌發(fā)5-10天的幼嫩葉片，將葉片沖洗干凈后，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大霉素的蒸餾水溶液浸泡60min，然后用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水沖洗3_5次，將嫩葉在超凈工作臺(tái)上修剪成葉柄長(zhǎng)0.2-0.5cm,葉面積大小0.5-1.0cm2的外植體,再用1000mg/L氯化萊水溶液常規(guī)消毒lOmin，取出清水沖洗4-5次。
②各階段均采用相同基本培養(yǎng)基:l/2MS+12g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH值6.0 ; 各階段培養(yǎng)條件為:溫度24-26°C，光照為1500-2000Lux，光照時(shí)間為12_14hr/d。③外植體初誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒后的葉片外植體葉柄基部植入基本培養(yǎng)基(1/21^+128/1瓊脂+308/1蔗糖，？!1值5.8。下同)+0.5mg/L TDZ (噻苯隆)+1.0mg/L 6-BA(6芐氨基嘌呤)+0.5 mg/L IBA (吲哚丁酸)的初誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。每瓶接種5片，接種10瓶。接種3d后，92%外植體成活，8%褐化死亡；接種25天后，葉柄基部產(chǎn)生1_3株叢生芽，每株芽2-3片葉，誘導(dǎo)率70%。外植體分泌的黃色次生代謝物質(zhì)是使接種成活外植體褐化死亡的主要原因。④叢生芽繼代增殖培養(yǎng):初誘導(dǎo)45-50天后，叢生芽高度約l-2cm，每芽2_4葉，將叢生芽取出剪切成葉柄基部帶l_2mm長(zhǎng)莖段的完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基+0.2mg/L TDZ+0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的繼代增殖培養(yǎng)基上，繼代培養(yǎng)7_10d后，在葉柄與莖段交接處產(chǎn)生高0.5cm的腋芽，培養(yǎng)35天左右，腋芽長(zhǎng)成高2-3cm的有6_8葉的單株幼苗，重復(fù)剪取每片嫩葉作為繼代增殖材料，反復(fù)繼代6-8次，幼苗品質(zhì)均未退化，繼代增殖誘導(dǎo)率達(dá)100%，增殖倍數(shù)6.0以上。
⑤叢生芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng):將繼代增殖形成的叢生芽剪切成葉柄基部帶l_2mm長(zhǎng)莖段的完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基+1000mg/L花寶I號(hào)+ 1000mg/L活性炭+0.3 mg/L 6-BA+1.0mg/L IBA的生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30天后，腋芽長(zhǎng)成高2-3cm的有3_4葉的單株幼苗，產(chǎn)生5-10條根系，長(zhǎng)度0.5-1.0cm,培養(yǎng)50天后，苗高3_5cm，根系長(zhǎng)l_5cm，生根率達(dá)100%。⑥瓶苗煉苗:將生根培養(yǎng)50天，苗高3_5cm，根系5_10根，長(zhǎng)度l_5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環(huán)境溫度20-30°C的條件下煉苗培養(yǎng)7-10d。⑦基質(zhì)處理:將體積比為1:1的蛭石+砂質(zhì)黃壤混合基質(zhì)提前7-10d用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理后裝入5cmX8cm的營(yíng)養(yǎng)袋中。⑧幼苗移栽及管理方法:將煉苗后的瓶苗取出，用水清洗干凈根系，置于有少量水分的磁盤中，將幼苗植入已消毒裝袋的基質(zhì)中，每袋I株，然后澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內(nèi)，每天噴霧2-3次，半月后噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對(duì)濕度在85%以上，溫度20-30°C，移栽成活率可達(dá)90%以上。實(shí)施例2
①外植體抗褐化、消毒處理:3-4月份采取有5-6片嫩葉的幼嫩莖段，將莖段沖洗干凈后，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大霉素的蒸餾水溶液浸泡60min，然后用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水沖洗3_5次，將莖段在超凈工作臺(tái)上修剪成長(zhǎng)0.5-1.0cm帶I個(gè)腋芽的莖段外植體,再用1000mg/L氯化汞水溶液常規(guī)消毒lOmin，取出清水沖洗4-5次。②各階段均采用相同基本培養(yǎng)基:l/2MS+12g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH值5.8 ; 各階段培養(yǎng)條件為:溫度24-26°C，光照為1500-2000Lux，光照時(shí)間為12_14hr/d。③外植體初誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒后的莖段外植體按照莖段極性生長(zhǎng)方向下端植入基本培養(yǎng)基(l/2MS+12g/L 瓊脂 +30g/L 蔗糖，pH 值 5.8。下同)+0.5mg/L TDZ(噻苯隆)+1.0mg/L 6-BA (6芐氨基嘌呤)+0.5 mg/L IBA (吲哚丁酸)的初誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。每瓶接種5個(gè)，接種10瓶。接種3d后 ，90%外植體成活，10%褐化死亡；接種15天后，腋芽萌動(dòng)，每個(gè)株芽1-3片葉，誘導(dǎo)率76%。外植體染菌、褐化是使接種成活外植體死亡的主要原因。
④叢生芽繼代增殖培養(yǎng):初誘導(dǎo)35-45天后，腋芽高度約2-3cm，每芽3_5葉，將腋芽取出剪切成葉柄基部帶l_2mm長(zhǎng)莖段的完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基+0.2mg/L TDZ+0.8mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA的繼代增殖培養(yǎng)基上，繼代培養(yǎng)7_10d后，在葉柄與莖段交接處產(chǎn)生高0.5cm的腋芽，培養(yǎng)35天左右，腋芽長(zhǎng)成高2-3cm的有6_8葉的單株幼苗，重復(fù)剪取每片嫩葉作為繼代增殖材料，反復(fù)繼代6-8次，幼苗品質(zhì)均未退化，繼代增殖誘導(dǎo)率達(dá)100%，增殖倍數(shù)6.0以上。
⑤叢生芽生根誘導(dǎo)培養(yǎng):將繼代增殖形成的叢生芽剪切成葉柄基部帶l_2mm長(zhǎng)莖段的完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基+1000mg/L花寶I號(hào)+ 1000mg/L活性炭+0.3 mg/L 6-BA+1.0mg/L IBA的生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30天后，腋芽長(zhǎng)成高2-3cm的有3_5葉的單株幼苗，產(chǎn)生5-10條根系，長(zhǎng)度0.5-1.0cm,培養(yǎng)50天后，苗高3_5cm，根系長(zhǎng)l_5cm，生根率達(dá)100%。⑥瓶苗煉苗:將生根培養(yǎng)50天，苗高3_5cm，根系5-10根，長(zhǎng)度l_5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環(huán)境溫度20-30°C的條件下煉苗培養(yǎng)7-10d。 ⑦基質(zhì)處理:將體積比為1:1的蛭石+砂質(zhì)黃壤混合基質(zhì)提前7-10d用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理后裝入5cmX8cm的營(yíng)養(yǎng)袋中。 ⑧幼苗移栽及管理方法:將煉苗后的瓶苗取出，用水清洗干凈根系，置于有少量水分的磁盤中，將幼苗植入已消毒裝袋的基質(zhì)中，每袋I株，然后澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內(nèi)，每天噴霧2-3次，半月后噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對(duì)濕度在85%以上，溫度20-30°C，移栽成活率可達(dá)90%以`上。
權(quán)利要求
1.一種艾納香的快速繁殖方法，其特征在于包含以下步驟 (1)外植體抗褐化及消毒處理將從野外采集的艾納香帶葉柄的嫩葉或帶腋芽的幼嫩莖段外植體沖洗干凈后，用3000mg/L維生素C+2000 mg/L慶大霉素的蒸懼水溶液浸泡60min，然后用2000mg/L高錳酸鉀蒸餾水溶液浸泡30min，用蒸餾水沖洗3_5次，再用1000mg/L氯化汞水溶液常規(guī)消毒； (2)初誘導(dǎo)培養(yǎng)將消毒后的外植體接種在基本培養(yǎng)基+0.5mg/LTDZ+1. Omg/L6-BA+O. 5 mg/L IBA的初誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，且基本培養(yǎng)基為l/2MS+12g/L瓊脂+30g/L 蔗糖，pH 值 5.8 ; (3)繼代增殖培養(yǎng)將初誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基+0. 2mg/L TDZ +0. 8mg/L 6-BA+O. 2 mg/L IBA的繼代增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)； (4)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)將繼代增殖形成的叢生芽剪切成帶莖段完整葉片后接種于基本培養(yǎng)基 +1000mg/L 花寶 I 號(hào) + 1000mg/L 活性炭 +0. 3 mg/L 6-BA+1. O mg/L IBA 的生根培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。
2.一種艾納香的移栽方法，其特征在于包含以下步驟 (1)煉苗方法將權(quán)利要求I中生根誘導(dǎo)培養(yǎng)的艾納香，生根培養(yǎng)50天，苗高3-5cm，根系5-10根，長(zhǎng)度l-5cm的瓶苗帶瓶移入遮蔭率70%的大棚，在環(huán)境溫度20_30°C的條件下煉苗培養(yǎng)7-10天； (2)基質(zhì)處理將蛭石+砂質(zhì)黃壤按體積比1:1混合成混合基質(zhì)，然后用5000mg/L的多菌靈水溶液消毒處理后裝入5cmX8cm的營(yíng)養(yǎng)袋中； (3)幼苗移栽及管理方法將煉苗后的瓶苗取出，用水清洗干凈根系，置于有少量水分的磁盤中，將幼苗植入步驟(2)中已消毒裝袋的基質(zhì)中，每袋I株，然后澆透水，遮蔭70%，移栽初期半月內(nèi)，每天噴霧2-3次，半月后噴霧1-2次，保持苗床周圍空氣相對(duì)濕度在85%以上，溫度20-30°C。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種艾納香的種苗快速繁殖與移栽方法，包括外植體抗褐化、消毒、初代誘導(dǎo)、繼代增殖、生根誘導(dǎo)及瓶苗移栽等技術(shù)環(huán)節(jié)，是以艾納香帶葉柄的嫩葉或帶腋芽的幼嫩莖段為外植體誘導(dǎo)叢生芽，然后用叢生芽帶莖段的完整葉片為繼代增殖材料，或直接生根誘導(dǎo)材料，提供了整套艾納香種苗快速繁殖及瓶苗移栽方法。本方法能顯著降低外植體的褐化率和污染率，外植體初誘導(dǎo)接種成活率達(dá)90%以上，繼代增殖周期為35天，能直接用叢生芽帶莖段的完整葉片進(jìn)行生根誘導(dǎo)，生根率達(dá)100%，瓶苗移栽方法簡(jiǎn)便易行，成活率達(dá)90%以上，可為解決艾納香規(guī)?；N植種苗奇缺提供技術(shù)保障。
文檔編號(hào)A01G1/00GK103250645SQ201310194018
公開(kāi)日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2013年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月23日
發(fā)明者謝丙質(zhì), 王濟(jì)紅, 歐國(guó)騰, 劉燕 申請(qǐng)人:貴州一合生物技術(shù)有限公司