一種美國紅楓快速繁殖的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種美國紅楓快速繁殖的方法，所述的方法包括：1)外植體的選取，2)外植體消毒，3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng)，4)愈傷組織誘導(dǎo)，5)增殖培養(yǎng)，6)生根培養(yǎng)，7)煉苗和移栽。采用本方法繁育美國紅楓，可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
【專利說明】
一種美國紅楓快速繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及植物快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種美國紅楓快速繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]美國紅楓(學(xué)名:Acer rubrum L.):原產(chǎn)美國東海岸，主要來自于美國北部以及加拿大大部分地區(qū)，在2000年前引入中國。主要分布在遼寧、山東、安徽一帶，由于特殊的地理位置使美國紅楓在北方變色效果很好。它是落葉大喬木。生長較快，成年高樹12-18米，冠幅12米，能適應(yīng)多種范圍的土壤類型生長。春天開花，花紅色。因其秋季色彩奪目，樹冠整潔，被廣泛應(yīng)用于公園、小區(qū)、街道栽植，既可以園林造景又可以做行道樹，深受人們的喜愛，是近幾年引進的美化、綠化城市園林的理想珍稀樹種之一。也是唯一可以用做行道樹的彩葉樹種。
[0003]目前，美國紅楓多采用種子繁殖、嫁接繁殖和扦插繁殖三種繁殖方式進行生產(chǎn)栽培，這繁育技術(shù)提高品種的純度，保持了品種特性，但成活率較低及繁殖速度較慢，制約了美國紅楓產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。而組織培養(yǎng)育苗技術(shù)既可以保持種的純度和特性，也可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中尚無經(jīng)愈傷組織途徑獲得美國紅楓再生植株的報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種美國紅楓快速繁殖的方法，經(jīng)愈傷組織途徑獲得美國紅楓叢生芽，誘導(dǎo)生根，可實現(xiàn)美國紅楓組培苗的大量快速繁殖。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提出下列技術(shù)方案:
[0007]—種美國紅楓快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟:
[0008]I)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2-5mm的美國紅楓莖尖或帶腋芽的莖段為外植體，剪去葉片后將外植體剪成l-3cm長以備用；
[0009]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的20-25KHZ超聲波清洗機中保持溫度30-35°C處理30-45min，然后以自來水沖洗10-20min;隨后在超凈工作臺上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1%升汞溶液中處理5-8分鐘，然后以無菌水沖洗4-5遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用;
[0010]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體各剪去2-3mm，外植體按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期10_14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)4_6d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至新芽長出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成分為:WPM+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L；
[0011]4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度23 °C ± 2 °C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L；
[0012]5)增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-25d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP l_5mg/L;
[0013]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d后生根，培養(yǎng)條件為光強2500-35001^、光周期10-1411/(1，溫度251€±2°(:;所述生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L；
[0014]7)煉苗和移栽:將有生根的美國紅楓幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度70%-85%，適當(dāng)遮蔭即可；
[0015]所述的WPM培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸銨NH4N03400mg/L，硫酸鉀K2S04900mg/L，磷酸二氫鉀KH2P03170mg/L，硫酸鎂MgS04.7H20370mg/L ;鈣鹽:氯化鈣CaCl 2.2H2096mg/L;四水合硝酸鈣Ca(N03)2.4H20556mg/L;微量元素:硼酸H3B036.2mg/L，硫酸錳MnS04.4H2022.5mg/L，硫酸鋅ZnS04.7H208.6mg/L，鉬酸鈉Na2Mo04.2H200.25mg/L，硫酸銅CuS04.5H200.25mg/L;鐵鹽:乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA37.3mg/L，硫酸亞鐵FeS04.7H2027.8mg/L ；有機酸:肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素lmg/L，鹽酸卩比卩多醇0.5mg/L，煙酸0.5mg/L;
[0016]所述的MS培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸鉀KN031900mg/L，硝酸銨NH4N031650mg/L，磷酸二氫鉀KH2P03170mg/L，硫酸鎂MgS04.7H20370mg/L ;鈣鹽:氯化鈣CaCl 2.2H20440mg/L;微量元素:碘化鉀 K10.83mg/L，硼酸 H3B036.2mg/L，硫酸錳 MnS04.4H2022.3mg/L，硫酸鋅ZnS04.7H208.6mg/L，鉬酸鈉Na2Mo04.2H200.25mg/L，硫酸銅CuS04.5H200.025mg/L，氯化鈷CoC12.6H200.025mg/L;鐵鹽:乙二胺四乙酸二鈉Na2_EDTA37.25mg/L，硫酸亞鐵FeS04.7H2027.85mg/L；有機酸:肌醇lOOmg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素0.5mg/L，鹽酸吡哆醇0.5mg/L，煙酸0.5mg/L;蔗糖30g/L，瓊脂粉7g/L，pH為5.7;
[0017]所述的1/2MS培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸鉀KN03950mg/L，硝酸銨NH4N03825mg/L，磷酸二氫鉀KH2P0385mg/L，硫酸鎂MgS04.7H20185mg/L;余同上述MS培養(yǎng)基；
[0018]所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤；
[0019]所述的NAA為α-萘乙酸；
[0020]所述的IBA為吲哚-3-丁酸；
[0021]所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。
[0022]優(yōu)選的，步驟3)中初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/Lo
[0023]優(yōu)選的，步驟4)中愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BAl.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L。
[0024]優(yōu)選的，步驟5)中增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP3mg/L。
[0025]優(yōu)選的，步驟6)中生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/L。
[0026]采用本發(fā)明繁殖美國紅楓，可實現(xiàn)美國紅楓組培苗的大量快速繁殖，為美國紅楓生產(chǎn)栽培和品種改良奠定基礎(chǔ)。
[0027]為了更好的闡述技術(shù)方案，下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步的說明，但本發(fā)明所要求的保護范圍不限于下列實施例。
【具體實施方式】
[0028]實施例1
[0029]I)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2-5_的美國紅楓莖尖或帶腋芽的莖段為外植體，剪去葉片后將外植體剪成l-3cm長以備用；；
[0030]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的20KHz超聲波清洗機中保持溫度30°C處理30min，然后以自來水沖洗1min;隨后在超凈工作臺上以70%的酒精消毒25秒，
0.1%升汞溶液中處理5分鐘，然后以無菌水沖洗4遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0031 ] 3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體各剪去2-3_，外植體按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期10_14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)6d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)18d至新芽長出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成分為:WPM+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L+PVPlmg/L；
[0032]4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度23 °C ± 2 °C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L+PVPlmg/L；
[0033]5)增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)25d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-25001^、光周期10-1411/(1，溫度251€±2°(:;所述增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L+PVP lmg/L；
[0034]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d后生根，培養(yǎng)條件為光強2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0.lmg/L+PVPlmg/L；
[0035]7)煉苗和移栽:將有生根的美國紅楓幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗3d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度70%~85%,適當(dāng)遮蔭即可。
[0036]經(jīng)試驗，采用本實施例所育試管苗的苗床移栽成活率為87.3%。
[0037]實施例2
[0038]I)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2-5_的美國紅楓莖尖或帶腋芽的莖段為外植體，剪去葉片后將外植體剪成l-3cm長以備用；；
[0039]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的25KHz超聲波清洗機中保持溫度35°C處理45min，然后以自來水沖洗20min;隨后在超凈工作臺上以75%的酒精消毒35秒，
0.1%升汞溶液中處理8分鐘，然后以無菌水沖洗5遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0040]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體各剪去2-3_，外植體按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期10_14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)4d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12d至新芽長出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成分為:WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP5mg/L ；
[0041]4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15d，條件為暗培養(yǎng)，溫度23 °C ± 2 °C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP5mg/L；
[0042]5)增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-25001^、光周期10-1411/(1，溫度251€±2°(:;所述增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+PVP 5mg/L ；
[0043]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15d后生根，培養(yǎng)條件為光強2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0.5mg/L+PVP5mg/L；
[0044]7)煉苗和移栽:將有生根的美國紅楓幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度70%~85%,適當(dāng)遮蔭即可。
[0045]經(jīng)試驗，采用本實施例所育試管苗的苗床移栽成活率為90.1%。
[0046]實施例3
[0047]I)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2-5_的美國紅楓莖尖或帶腋芽的莖段為外植體，剪去葉片后將外植體剪成l-3cm長以備用；；
[0048]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的20KHz超聲波清洗機中保持溫度35°C處理35min，然后以自來水沖洗15min;隨后在超凈工作臺上以75%的酒精消毒30秒，
0.1%升汞溶液中處理7分鐘，然后以無菌水沖洗5遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用；
[0049]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體各剪去2-3_，外植體按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期10_14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)5d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)15d至新芽長出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成分為:WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/L ；
[0050]4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)16d，條件為暗培養(yǎng)，溫度23 °C ± 2 °C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA1.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L；
[0051]5)增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)22d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-25001^、光周期10-1411/(1，溫度251€±2°(:;所述增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP 3mg/L ；
[0052]6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)16d后生根，培養(yǎng)條件為光強2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/L；
[0053]7)煉苗和移栽:將有生根的美國紅楓幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度70%~85%,適當(dāng)遮蔭即可。
[0054]經(jīng)試驗，采用本實施例所育試管苗的苗床移栽成活率為93.8%。
【主權(quán)項】
1.一種美國紅楓快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟: 1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2-5mm的美國紅楓莖尖或帶腋芽的莖段為外植體，剪去葉片后將外植體剪成l-3cm長以備用； 2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來水的20-25KHZ超聲波清洗機中保持溫度30-35°C處理30-45min，然后以自來水沖洗10-20min;隨后在超凈工作臺上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1%升汞溶液中處理5-8分鐘，然后以無菌水沖洗4-5遍，置于無菌培養(yǎng)皿備用； 3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體各剪去2-3mm，外植體按末端向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強1800-2500LX、光周期10_14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)4_6d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至新芽長出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成分為:WPM+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L； 4)愈傷組織誘導(dǎo):取初始誘導(dǎo)培養(yǎng)中的芽，放入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d，條件為暗培養(yǎng)，溫度23 °C ± 2°C ;所述愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA1.0-2.0mg/L+NAA0.Ι-Ο.5mg/L+PVP1-5mg/L； 5)增殖培養(yǎng):將透明無色的愈傷組織塊放入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-25d，增殖產(chǎn)生大量叢生苗，培養(yǎng)條件為光強1800-25001^、光周期10-1411/(1，溫度251€±2°(:;所述增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為: 1/2MS+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP l_5mg/L； 6)生根培養(yǎng):將5)步驟中的叢生苗切割成單個，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20d后生根，培養(yǎng)條件為光強2500-3500LX、光周期10-14h/d，溫度25°C±2°C;所述生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVPl-5mg/L； 7)煉苗和移栽:將有生根的美國紅楓幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開，室溫下煉苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-250C，濕度70 %-85 %，適當(dāng)遮蔭即可； 所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤； 所述的NAA為α-萘乙酸； 所述的IBA為吲哚-3-丁酸； 所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種美國紅楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟3)中初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:WPM+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP2mg/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種美國紅楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟4)中愈傷組織培養(yǎng)基為:WPM+6-BA 1.6mg/L+NAA0.3mg/L+PVP3mg/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種美國紅楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟5)中增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:1/2MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+PVP 3mg/L。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種美國紅楓快速繁殖的方法，其特征在于所述步驟6)中生根用培養(yǎng)基為:1/2MS+IBA0.3mg/L+PVP2mg/Lo
【文檔編號】A01H4/00GK105918128SQ201610339561
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年5月20日
【發(fā)明人】戴勤, 王冬梅, 李慧珍
【申請人】蕪湖歐標(biāo)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司