一種井岡霉素和滅菌唑的殺菌組合物及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種井岡霉素和滅菌唑殺菌組合物，主要成分為井岡霉素與滅菌唑，其重量比為1∶24～20∶1；本發(fā)明的殺菌組合物在防治麥類赤霉病、麥類白粉病、麥類銹病、麥類紋枯病、麥類葉枯病、稻瘟病、稻曲病、水稻紋枯病上具有明顯的增效作用，尤其在防治麥類赤霉病上增效作用更加明顯，能顯著降低谷物DON毒素的污染水平。與傳統(tǒng)藥劑相比，本發(fā)明提供的殺菌組合物具有以下優(yōu)點：兩種主要成分具有相容性，增效作用顯著，提高了殺菌活性，減少了單一殺菌劑的用藥，節(jié)省了農(nóng)藥成本；高效、低毒、低殘留、速效性好、持效期長、對環(huán)境友好；降低病原菌對化學(xué)藥劑的抗藥性風(fēng)險水平，有利于病原菌敏感度的保持，同時能延緩病菌對配方中單劑出現(xiàn)抗藥性；殺菌效果顯著，殺菌譜廣，減少了病害對農(nóng)作物生產(chǎn)造成的危害，提高了農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量和品質(zhì)。
【專利說明】
一種井岡霉素和滅菌唑的殺菌組合物及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物及其應(yīng)用，屬于農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域具 有增效減量作用的農(nóng)藥組合物，其主要成分為井閃霉素和滅菌唑。 【背景技術(shù)】
[0002]井岡霉素，又稱有效霉素，英文通用名：Validamycin或jinggangmycin，其化學(xué)結(jié) 構(gòu)式為
[0003]
[0004] 井閃霉素是一種放線菌的次生代謝物，含有六3、(：、0』、？六種類似氨基葡聚糖苷 類衍生物。國內(nèi)外大量研究表明，A組分是井閃霉素的主要活性組分。因此，在本發(fā)明中涉及 的井閃霉素主要成分為井閃霉素 A。井閃霉素在離體條件下表現(xiàn)專一性干擾擔(dān)子菌中的絲 核菌屬真菌(Rhizoctonia spp.)頂端菌絲發(fā)育。因此，井閃霉素自20世紀(jì)70年代被發(fā)現(xiàn)以 來，一直作為農(nóng)用抗生素專一性地防治絲核菌引起的植物病害，或與防治其他植物有害生 物的農(nóng)藥加工成復(fù)配劑兼治絲核菌(Rhizoctonia spp.)病害。這些絲核菌病害主要包括水 稻紋枯病、小麥紋枯病和其他作物紋枯病或立枯病。近年，井閃霉素又被發(fā)現(xiàn)還可以用于防 治一種難以培養(yǎng)的半知菌(Ustilaginoidea virens)引起的稻曲病。
[0005] 滅菌唑，英文通用名稱:Triticonazole，分子式A7H2qCIN 3O,化學(xué)名稱：（E)-5-(4-氯亞芐基)-2,2_二甲基-1-(1H-1，2,4-三唑-1-基甲基)環(huán)戊醇，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0006]
[0007]滅菌唑是一種三唑類麥角甾醇生物合成中C-14脫甲基化酶抑制劑，主要用于防治 禾谷類作物、豆科作物、果樹病害，尤其對種傳病害有特效。該藥劑不僅具有較好的內(nèi)吸活 性，而且具有優(yōu)異的保護、治療和鏟除活性?？捎糜诜N子處理和莖葉噴霧，持效期長達4-6 周，在推薦劑量下，對作物生長安全、無藥害。
[0008]在農(nóng)作物生長過程中，不可避免地會出現(xiàn)一些病害，如不及時進行防治則會對作 物產(chǎn)量造成嚴(yán)重損失，但是頻繁使用同一種藥劑防治這些病害，常導(dǎo)致這些病菌產(chǎn)生抗藥 性，為了解決這些問題，將不同作用機理的農(nóng)藥進行配比組合，既能有效延緩病原群體抗藥 性的產(chǎn)生，也對植物病害的防治具有增效減量作用。井閃霉素或有效霉素在離體下只表現(xiàn) 對絲核菌具有?；钥咕钚?，對引起赤霉病的鐮孢菌沒有抗菌活性，因此，幾十年來人們 一直以絲核菌為對象，研究井閃霉素的選擇性機制，發(fā)現(xiàn)有效霉素/井閃霉素干擾絲核菌肌 醇和海藻糖代謝，從而破壞細胞壁的構(gòu)造，阻止絲核菌侵染植物，具有良好的保護作用。本 發(fā)明人在研究鐮孢菌DON毒素生物合成途徑及調(diào)控機制的基礎(chǔ)上，開展了抑制DON毒素生物 合成的大量化合物篩選。在篩選過程中，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)井閃霉素在一定處理劑量下，能夠 強烈抑制小麥赤霉病菌DON毒素生物合成早期途徑中的生物化學(xué)反應(yīng)。因此，井閃霉素單劑 雖不能有效防控麥類赤霉病，但對鐮孢菌的次生代謝產(chǎn)物-DON毒素具有一定的抑制作用， 本發(fā)明人在國際上首次研究了井閃霉素/有效霉素如何抑制鐮孢菌致病因子DON合成，及其 與其他各種殺菌劑的混合物在田間防治麥類赤霉病的增效配方篩選。滅菌唑是三唑類殺菌 劑，與其他三唑類藥劑相比，其殺菌活性更高，且持效期更長，對在揚花期侵染的小麥赤霉 病具有獨特的防效。因此，發(fā)明人在基礎(chǔ)理論及應(yīng)用實踐研究基礎(chǔ)之上，創(chuàng)造性地發(fā)現(xiàn)井岡 霉素與滅菌唑組合物防治麥類作物赤霉病具有顯著增效、降低DON毒素污染和大幅度減少 農(nóng)藥用量的有益效果。發(fā)明人通過試驗還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明在稻瘟病、稻曲病、水稻紋枯病等水稻 病害的防治上也具有顯著的增效作用，可有效減緩抗藥性的產(chǎn)生，減少農(nóng)藥的使用量和使 用次數(shù)，降低防治成本。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供一種具有協(xié)同增效作用、含井閃霉素和滅菌唑 的殺菌組合物。本發(fā)明的另一目的在于提供上述殺菌組合物在防治麥類真菌病害、稻瘟病、 稻曲病及水稻紋枯病上的應(yīng)用。
[0010] 技術(shù)方案:為達到上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組 合物，其中所述主要成分井閃霉素和滅菌唑的重量比為1:24~20:1。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，上述井閃霉素和滅菌唑的重量比為1:12~10: 1〇
[0012] 根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，上述井閃霉素和滅菌唑的重量比為1:6~5: 1〇
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，上述井閃霉素和滅菌唑的重量比為1:3~2: 1〇
[0014] 本發(fā)明提供的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，所述主要成分井閃霉素和滅 菌唑的重量百分含量為所述殺菌組合物總含量的2~80%，余量為在農(nóng)藥中可接受的載體 和/或助劑。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實施方式，所述的殺菌組合物劑型為可濕性粉劑、懸浮劑、 微乳劑或水分散粒劑。
[0016] 根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，所述的載體為水、高嶺土、膨潤土、白炭黑、硅 藻土、凹凸棒土或輕質(zhì)碳酸鈣中的一種或幾種。
[0017] 根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，所述的助劑為乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、 NN0-1、NN0-7、黃原膠、聚乙二醇、甘油、拉開粉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、硫酸 銨、尿素、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯膠、甲基纖維素、烷基酚聚氧乙烯醚、月桂醇聚氧乙烯醚、 苯乙基酚甲醛樹酯聚氧乙基醚、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、脂肪酸聚氧乙烯酯、磺酸聚甲 醛縮合物、N-甲基吡咯烷酮、烷基苯磺酸鹽、丁基萘磺酸鈉、苯甲酸、木質(zhì)素磺酸鈉、羧甲基 纖維素、硅酮類化合物、硅酸鎂鋁、山梨酸鈉或聚乙烯醇中的一種或幾種。
[0018] 根據(jù)本發(fā)明的另一種優(yōu)選實施方式，所述的殺菌組合物在防治麥類赤霉病、麥類 紋枯病、麥類白粉病、麥類銹病、麥類葉枯病、稻瘟病、稻曲病、水稻紋枯病上的應(yīng)用。
[0019] 有益效果:發(fā)明人通過對植物病害的發(fā)生、防治藥劑使用技術(shù)、作用機制和抗藥性 的研究，為本發(fā)明提供了理論和技術(shù)基礎(chǔ)。本發(fā)明通過利用井閃霉素與滅菌唑進行復(fù)配篩 選，其目的是獲得增效配方、減少農(nóng)藥用量和使用次數(shù)，降低生產(chǎn)成本、提高防效、治理抗藥 性。
[0020] 本發(fā)明經(jīng)室內(nèi)和田間藥效試驗，其結(jié)果表明，井閃霉素與滅菌唑理化性質(zhì)互容，使 用安全，藥效顯著。與其他農(nóng)藥相比具有如下優(yōu)點：
[0021] 1.本發(fā)明的殺菌組合物殺菌譜廣，通過對井閃霉素與滅菌唑的組合擴大了應(yīng)用靶 標(biāo)。既能有效防治麥類赤霉病、白粉病、銹病、紋枯病和葉枯病，也能防治稻瘟病、稻曲病和 水稻紋枯病，減少了病害對農(nóng)作物生產(chǎn)造成的危害，提高了農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量和品質(zhì)。
[0022] 2.本發(fā)明的殺菌組合物防治效果顯著，在防治麥類赤霉病、白粉病、銹病、紋枯病、 葉枯病和稻瘟病、稻曲病、水稻紋枯病上具有顯著的增效作用，降低了農(nóng)藥使用量，節(jié)省了 農(nóng)藥使用成本，增加了社會、經(jīng)濟和生態(tài)效益。
[0023] 3.本發(fā)明的殺菌組合物中井閃霉素和滅菌唑分別為不同作用機理的殺菌劑，與過 去防治麥類赤霉病的主流藥劑多菌靈無交互抗藥性;更為重要的是，該殺菌組合物能降低 谷物DON毒素污染，降低了毒素污染給人類糧食和食品安全帶來的風(fēng)險。
[0024] 4.本發(fā)明的殺菌組合物屬于復(fù)配農(nóng)藥，具有相容性、高效、低毒、低殘留、速效性 好、持效期長、對環(huán)境友好等優(yōu)點。
[0025] 5.該殺菌組合物是生物與化學(xué)農(nóng)藥復(fù)配組合，能降低病原菌對化學(xué)藥劑的抗藥性 風(fēng)險水平，有利于病原菌敏感度的保持，同時能延緩病菌對配方中單劑出現(xiàn)抗藥性。
【具體實施方式】
[0026] 下面通過具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不受以下實施例所限 定，各組分的加入按重量份數(shù)計量。
[0027] 實施例1:
[0028] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為可濕性粉劑，各組分具體配比如下： 井岡霉素16%、滅菌唑4%、木質(zhì)素磺酸鈉5%、NN0-1 2%、十二烷基苯磺酸鈉3%、皂角粉 3%、其余為高嶺土補充至100%。
[0029] 制備方法:將上述組分充分混合，在混合缸中混合均勻，經(jīng)氣流粉碎機粉碎后再混 合均勻，即可得到20%井閃霉素·滅菌唑可濕性粉劑。
[0030] 實施例2:
[0031] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為可濕性粉劑，各組分具體配比如下： 井岡霉素16%、滅菌唑32%、木質(zhì)素磺酸鈉5%、NN0-1 2%、十二烷基苯磺酸鈉3%、皂角粉 3%、其余為高嶺土補充至100%。
[0032] 制備方法:將上述組分充分混合，在混合缸中混合均勻，經(jīng)氣流粉碎機粉碎后再混 合均勻，即可得到48%井閃霉素·滅菌唑可濕性粉劑。
[0033] 實施例3:
[0034] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為懸浮劑，各組分具體配比如下:井岡 霉素24%、滅菌唑12%、ΝΝ0-1 1%、ΝΝ0-7 2%、十二烷基硫酸鈉2%、乙二醇4%、丙二醇 2%、黃原膠0.5%、聚乙二醇0.5%，其余為水補充至100%。
[0035] 制備方法:將上述組分充分混勻，經(jīng)砂磨機粉碎至90 %的藥劑顆粒直徑<5μπι，即 可得到36%井閃霉素?滅菌唑懸浮劑。
[0036] 實施例4:
[0037] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為懸浮劑，各組分具體配比如下:井岡 霉素8%、滅菌唑40%、順0-11%、順0-7 2%、十二烷基硫酸鈉2%、乙二醇4%、丙二醇2%、 黃原膠0.5%、聚乙二醇0.5%，其余為水補充至100%。
[0038] 制備方法:將上述組分充分混勻，經(jīng)砂磨機粉碎至90 %的藥劑顆粒直徑<5μπι，即 可得到48%井閃霉素?滅菌唑懸浮劑。
[0039] 實施例5:
[0040] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為微乳劑，各組分具體配比如下:井岡 霉素8%、滅菌唑8%、Ν-甲基吡咯烷酮2%、烷基苯磺酸鈣2%、苯乙基酚甲醛樹酯聚氧乙基 醚2%、乙二醇1.5%、硅酮類化合物0.8%、黃原膠0.5 %、硅酸鎂鋁1 %，其余為水補充至 100%〇
[0041 ]制備方法:將上述比例的井岡霉素、滅菌唑、溶劑N-甲基吡咯烷酮、乳化劑烷基苯 磺酸鈣和苯乙基酚甲醛樹酯聚氧乙基醚加在一起，溶解成均勻油相；將水、抗凍劑乙二醇、 增稠劑黃原膠、消泡劑硅酮類化合物混合在一起，成均一水相。在高速攪拌下，將水相加入 油相，即可制得16%井岡霉素?滅菌唑微乳劑。
[0042] 實施例6:
[0043] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為微乳劑，各組分具體配比如下:井岡 霉素12%、滅菌唑24%、Ν-甲基吡咯烷酮2%、烷基苯磺酸鈣2%、苯乙基酚甲醛樹酯聚氧乙 基醚2%、乙二醇1.5%、硅酮類化合物0.8%、黃原膠0.5%、硅酸鎂鋁1 %，其余為水補充至 100%〇
[0044] 制備方法:將上述比例的井岡霉素、滅菌唑、溶劑N-甲基吡咯烷酮、乳化劑烷基苯 磺酸鈣和苯乙基酚甲醛樹酯聚氧乙基醚加在一起，溶解成均勻油相；將水、抗凍劑乙二醇、 增稠劑黃原膠、消泡劑硅酮類化合物混合在一起，成均一水相。在高速攪拌下，將水相加入 油相，即可制得36%井閃霉素?滅菌唑微乳劑。
[0045] 實施例7:
[0046] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為水分散粒劑，各組分具體配比如下： 井岡霉素12%、滅菌唑8%、烷基酚聚氧乙烯醚3.5%、脂肪酸聚氧乙烯酯3.5%、硫酸銨8%、 十二烷基苯磺酸鈉3%、甲基纖維素1 %，其余為輕質(zhì)碳酸鈣補充至100%。
[0047] 制備方法:將上述組分充分混勻，經(jīng)過粉碎制備母粉，將母粉與適量水溶液混合均 勻，高速剪切并砂磨機研磨，然后進行流化床造粒，干燥、過篩，即可制得20%井閃霉素?滅 菌唑水分散粒劑。
[0048] 實施例8:
[0049] -種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，劑型為水分散粒劑，各組分具體配比如下： 井岡霉素40%、滅菌唑24%、烷基酚聚氧乙烯醚3.5%、脂肪酸聚氧乙烯酯3.5%、硫酸銨 8%、十二烷基苯磺酸鈉3%、甲基纖維素1 %，其余為輕質(zhì)碳酸鈣補充至100%。
[0050] 制備方法:將上述組分充分混勻，經(jīng)過粉碎制備母粉，將母粉與適量水溶液混合均 勻，高速剪切并砂磨機研磨，然后進行流化床造粒，干燥、過篩，即可制得64%井閃霉素?滅 菌唑水分散粒劑。
[0051 ]實驗例1:井閃霉素在離體條件下對滅菌唑抑制鐮孢菌菌絲生長的影響
[0052] 本發(fā)明采用殺菌劑生物測定的常規(guī)方法，將井閃霉素和滅菌唑分別用滅菌水及甲 醇配制成2mg/mL母液，對照藥劑多菌靈原藥溶于0.1M/L鹽酸溶液、氰烯菌酯溶于甲醇，制成 2mg/mL母液。在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)冷卻至溫度約45°C時，分別加入井閃霉素和 滅菌唑至設(shè)計濃度(見表1)，然后倒入培養(yǎng)皿制成不同藥劑處理的平板，每處理3皿重復(fù)，接 種引起麥類赤霉病的常見禾谷鐮孢菌(Fusarium graminearum)和亞洲鐮孢菌(Fusarium asiaticum)野生敏感菌株（簡稱敏感菌株)及多菌靈和氰烯菌酯抗性菌株(簡稱抗藥性菌 株)的菌絲塊，在溫度25°C下培養(yǎng)4天，十字交叉法量取菌落直徑，計算不同處理抑制病菌生 長50 %的有效中劑量(EC5q )，并比較抗菌活性。
[0053] 試驗結(jié)果表明，井閃霉素在離體下無論是單劑還是與滅菌唑混用對引起赤霉病的 這兩種鐮孢菌敏感菌株和抗藥性菌株的生長基本沒有抑制活性，只有井閃霉素高達50yg/ mL濃度時，對兩種鐮孢菌生長才有6.5%~7.8%的抑制作用。但滅菌唑?qū)煞N鐮孢菌的敏 感菌株的菌絲生長具有相似的強烈抑制作用，0.1yg/mL滅菌唑處理對菌絲生長的抑制作用 即可超過50%。井閃霉素在離體條件下對滅菌唑抑制菌絲生長沒有增效作用(表1)。
[0054]根據(jù)亞洲鐮孢菌和禾谷鐮孢菌野生敏感菌株及多菌靈和氰烯菌酯抗性菌株在滅 菌唑不同劑量處理下的生長抑制率，計算滅菌唑?qū)Σ煌幟粜跃晟L抑制的有效中劑量 (EC5q)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)敏感菌株、多菌靈抗性菌株、氰烯菌酯抗性菌株對滅菌唑的敏感性相似， EC50為0.094~0· 108yg/mL，試驗結(jié)果列于表2中。
[0055]以藥劑EC5q為參數(shù)，比較不同殺菌劑抑制鐮孢菌生長的活性，發(fā)現(xiàn)滅菌唑的活性約 是多菌靈對敏感菌株活性(對兩種鐮孢菌EC5q均為0.45yg/mL)的4.5倍，是氰烯菌酯對敏感 菌株活性(對兩種鐮孢菌EC 5q均為0.165yg/mL)的1.5倍。該結(jié)果說明滅菌唑具有強烈抑制野 生敏感菌株和多菌靈及氰烯菌酯抗性鐮孢菌生長的活性，利于降低侵染谷物的DON毒素污 染水平和防治抗藥性病害。
[0056]表1:井閃霉素和滅菌唑離體條件下對兩種鐮孢菌敏感菌株生長的影響
[0058] *F.g和F.a分別是Fusarium graminearum和Fusarium asiaticum的縮寫，下同。
[0059] 表2:滅菌唑?qū)煞N鐮孢菌敏感及多菌靈和氰烯菌酯抗性菌株的生長抑制活性
[0061] 實驗例2:井閃霉素對鐮孢菌毒素生物合成能力的抑制活性
[0062] 由于禾谷鐮孢菌與亞洲鐮孢菌對井閃霉素和滅菌唑的藥敏性相同，發(fā)明人選用毒 素合成能力（單位菌量合成DON重量，ygDON/g干重菌絲）較強的亞洲鐮孢菌Fusarium asiaticum作為進一步研究毒素合成的材料。將引起麥類赤霉病的多菌靈抗性亞洲鐮孢菌 接種于滅菌的3%綠豆湯中，在溫度25°C和12/24小時散射光下?lián)u培3d，離心收集分生孢子。 將分生孢子按最終為IO 2AiL接種于含井岡霉素不同劑量的GYEP培養(yǎng)液中在溫度25°C和避 光下?lián)u培，在7d和14d后，過濾培養(yǎng)物，分別檢測培養(yǎng)液中的毒素含量和測量菌絲干重，分析 毒素合成能力(單位重菌絲產(chǎn)生的毒素量）。
[0063]毒素測定方法:培養(yǎng)濾液分別與乙酸乙酯等體積萃取2次，合并萃取液后減壓蒸餾 干燥，用ImL乙腈溶解轉(zhuǎn)移到新離心管，再蒸餾干燥，-20°C保存待測。檢測時加入IOOyLTMS 衍生化試劑(TMSI :TMCS = 100:1)，混勻IOmin后加入ImL超純水，震蕩分層后吸取上清液加 到GC進樣瓶，用裝有電子捕獲監(jiān)測器的氣相色譜(GC-ECD)進行毒素含量檢測。以Sigma的 DON試劑為標(biāo)樣，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算培養(yǎng)液中的DON含量，包括DON、3A-D0N和15A-D0N。同時 將濾出菌絲在80°C下烘至恒重，稱量菌絲干重。此外，在搖培3d時取菌絲檢測毒素合成關(guān)鍵 基因 Tri5的表達水平。
[0064]從實驗結(jié)果(表3)中發(fā)現(xiàn)赤霉病菌的菌絲生長量隨著培養(yǎng)時間延長而增加，但在 含有不同劑量井閃霉素處理的培養(yǎng)基中搖培，菌絲生長量與空白對照沒有顯著變化。說明 井岡霉素對液體培養(yǎng)的赤霉病菌的生長沒有抑制作用，與在TOA平板上的線性生長速率測 定結(jié)果一致。但是，首次發(fā)現(xiàn)單位菌絲重量合成DON毒素的量(yg DON/g干重菌絲）則隨井岡 霉素處理劑量增加而顯著減少。而且井閃霉素對DON合成的抑制作用隨培養(yǎng)時間延長而下 降，尤其是低濃度處理下降幅度更大。說明井閃霉素隨著試驗時間的延長可能發(fā)生降解，從 而降低了對毒素生物合成的抑制作用。
[0065]根據(jù)處理3d時的毒素合成基因表達水平分析，創(chuàng)造性地發(fā)現(xiàn)井閃霉素在離體條件 下雖然對鐮孢菌的生長及菌絲形態(tài)沒有不良影響，但在很低處理劑量下能夠強烈抑制DON 毒素合成關(guān)鍵基因 tri5表達，降低菌體毒素生物合成能力，減少DON生物合成，其試驗結(jié)果 列于表4中。
[0066]表3:井岡霉素抑制鐮孢菌DON毒素合成能力的作用
L 〇〇71 J 買驗例3:火菌唑?qū)﹂_M霉索抑制鐮孢菌DON毐索生物合成能力的增效作用
[0072] 滅菌唑處理能夠破壞赤霉病菌的細胞膜透性，抑制菌絲生長。滅菌唑與井閃霉素 組合物處理時，能夠增加病菌對井閃霉素的吸收利用。在實驗例2中測定井閃霉素抑制鐮孢 菌DON毒素生物合成的同時，測定了井岡霉素在存在0. lyg/mL滅菌唑的情況下，培養(yǎng)7d和 14d時對(Fusarium asiaticum)的DON毒素生物合成能力的抑制作用，分析滅菌唑?qū)畬?素抑制DON毒素生物合成的增效作用。DON檢測方法與實驗例2相同。
[0073] 從實驗例1和實驗例2中已知0.1μg/ml滅菌唑單獨處理，對赤霉病菌的菌絲生長具 有高于50 %的抑制率。從表5結(jié)果可以看出，0. lμg/ml滅菌唑處理7d和14d時對鐮孢菌毒素 的生物合成能力與空白對照的毒素合成能力相比沒有顯著的抑制作用，說明滅菌唑只有菌 絲生長抑制活性，沒有毒素合成能力的抑制作用。但在井閃霉素各處理濃度下存在0.1 yg/ ml滅菌唑時，對DON毒素生物合成能力的抑制作用大幅度提高。而且隨著培養(yǎng)時間延長，井 岡霉素對毒素合成能力的抑制作用下降速度顯著低于沒有滅菌唑的對照處理，尤其對低濃 度井閃霉素處理的增效及延長作用時間更加明顯。基于同時實驗的表3結(jié)果，計算存在滅菌 唑O.lOyg/mL劑量情況下，對井岡霉素處理7d和Hd時抑制鐮孢菌毒素生物合成的增效作 用，結(jié)果列于表5中。這些結(jié)果說明：（1)井閃霉素具有強烈降低鐮孢菌DON毒素生物合成能 力的作用，滅菌唑則沒有這種作用；（2)滅菌唑?qū)W霉素抑制鐮孢菌毒素生物合成具有明 顯的增效作用，并隨井閃霉素處理劑量降低，增效作用增強；（3)滅菌唑能夠延長井閃霉素 對鐮孢菌毒素合成的抑制作用時間，增效作用隨處理時間延長而增強。
[0074]表5:0. lyg/mL滅菌唑?qū)W霉素抑制小麥赤霉病菌DON毒素合成的增效作用
[0076] *增效系數(shù)計算方法:存在O.Uig/ml滅菌唑時，井岡霉素對毒素合成的抑制率除以 井岡霉素單獨處理相應(yīng)劑量的毒素合成抑制率(表3)，乘以100。
[0077] 應(yīng)用實施例1:井閃霉素與滅菌唑組合物防治小麥赤霉病的增效作用及降低毒素 作用
[0078] 將實施例1~8的殺菌組合物制劑進行小麥赤霉病的田間防控藥效試驗。試驗地安 排在小麥赤霉病菌對多菌靈已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性的江蘇淮安白馬湖農(nóng)場。小麥品種分別為淮麥 22號。2012年11月落谷播種，田間管理按常規(guī)進行，未使用其他農(nóng)藥。2013年5月2日即小麥 揚花初期采用農(nóng)稼樂16L背負式電動噴霧器進行第一次施藥，根據(jù)天氣預(yù)報5月9日（灌漿初 期）進行第二次施藥。各小區(qū)面積為50平方米，4個重復(fù)，用水量為50kg/畝，空白對照不施 藥。同時設(shè)50%多菌靈可濕性粉劑每畝用80克處理作為對照藥劑。2013年5月26日進行病情 調(diào)查，防治效果見表6。40%井閃霉素可濕性粉劑為浙江省桐廬匯豐生物科技有限公司提 供，40 %滅菌唑可濕性粉劑為本實驗室加工制成。按照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的殺菌劑田間藥效試驗 準(zhǔn)則行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的相應(yīng)方法，在乳熟期調(diào)查小麥赤霉病發(fā)生情況，根據(jù)各處理防治赤霉 病的實際效果，計算組合物的增效作用。按照Abbott(Abbott，1925)方法計算組合物的理論 防效〔E = X+(100-X)Y/100,其中E為理論防效，X為井岡霉素單劑防效，Y為滅菌唑單劑防效） 及增效系數(shù)(組合物應(yīng)用的實際防效除以理論防效X 100)。
[0079]毒素測定方法:在蠟熟期各處理5點取樣200麥穗，室內(nèi)脫粒，烘干后隨機取樣30克 麥粒粉碎。按Goswami和Kistler方法，取5克面粉置于離心管中，加入20mL的乙腈：水(84: 16)提取液，禍旋機混勾后搖床上震蕩24小時，5000rpm離心10min，取上清2mL于Eppendorf 離心管中氮氣吹干-20 °C保藏。檢測時加入IOOyLTMS衍生化試劑(TMSI :TMCS= 100:1)，混勻 IOmin后加入ImL超純水，震蕩分層后吸取上清液加到GC進樣瓶，用裝有電子捕獲監(jiān)測器的 氣相色譜(GC-ECD)進行毒素含量檢測，結(jié)果見表6。
[0080]表6:井岡霉素與滅菌唑組合物防治小麥赤霉病的增效作用及減少DON毒素污染的 作用
[0082]本發(fā)明防治小麥赤霉病的殺菌組合物增效作用田間篩選及試驗結(jié)果表明，井岡霉 素與滅菌唑組合物在小麥揚花初期至灌漿期噴施，在實施例1~8的不同制劑在一定的劑量 下均對小麥赤霉病的防治具有顯著增效作用（增效系數(shù)大于100)。而且井閃霉素與滅菌唑 組合物應(yīng)用后，對降低谷物的DON污染水平具有顯著增效作用，可以減少DON含量91 %以上， 將毒素污染水平控制在Img DON/kg谷物以下的安全水平。
[0083]應(yīng)用實施例2:井閃霉素與滅菌唑組合物防治小麥其他病害的試驗效果
[0084]將實施例1~8的殺菌組合物制劑進行小麥病害的田間防控藥效試驗。試驗地安排 在江蘇鹽城新洋農(nóng)場進行。小麥品種分別為淮麥33號，在小麥揚花初期采用農(nóng)稼樂16L背負 式電動噴霧器進行第一次施藥，間隔5d進行第二次施藥，用水量為50kg/畝，每小區(qū)面積50 平方米，各處理重復(fù)3次，空白對照不施藥。同時設(shè)50 %多菌靈可濕性粉劑每畝用80克處理 作為對照藥劑。按照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的殺菌劑田間藥效試驗準(zhǔn)則行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的相應(yīng)方法，在 乳熟期調(diào)查小麥白粉病、銹病、紋枯病和葉枯病發(fā)生情況，計算病情指數(shù)和防治效果，結(jié)果 見表7。
[0085]表7:井岡霉素與滅菌唑組合物防治小麥病害的田間藥效試驗
[0087] 實施例1~8田間應(yīng)用結(jié)果表明，井閃霉素與滅菌唑組合殺菌劑在有效防治小麥赤 霉病的同時，對小麥葉枯病、白粉病、銹病和紋枯病也具有較好的防治效果，遠好于常用的 多菌靈(經(jīng)檢測試驗地病原菌群體中對多菌靈表現(xiàn)抗藥性的病菌占37.7%)，而且對包括抗 藥性赤霉病菌引起的赤霉病具有極其顯著的增效防治作用，其結(jié)果與同年在白馬湖農(nóng)場的 田間試驗結(jié)果類似。因此，本發(fā)明的殺菌組合物具有用藥量少，成本低，利于環(huán)境保護，社會 效益明顯等諸多優(yōu)點。
[0088] 應(yīng)用實施例3:井閃霉素與滅菌唑組合物防治大麥病害的防治效果及對減少毒素 污染的效果
[0089] 將實施例1~8的殺菌組合物制劑進行大麥病害的田間防控藥效試驗，其中設(shè)計井 岡霉素和滅菌唑不同劑量的單劑處理。2014年在大麥揚花初期進行第一次施藥，間隔5d進 行第二次施藥，用水量為50kg/畝，每小區(qū)面積50平方米，各處理重復(fù)3次，空白對照不施藥。 用常規(guī)藥劑多酮可濕性粉劑作為對照藥劑。按照農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的殺菌劑田間藥效試驗準(zhǔn)則行 業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的相應(yīng)方法，在乳熟期調(diào)查大麥赤霉病、白粉病、銹病和葉枯病發(fā)生情況，計算 病情指數(shù)和防治效果，結(jié)果見表8。蠟熟期每處理5點隨機取麥穗各150穗，帶回室內(nèi)脫粒，按 應(yīng)用實施例1的方法檢測并計算麥粒毒素含量。藥劑處理劑量、防效及對毒素含量的影響見 表8 〇
[0090] 表8:井閃霉素與滅菌唑組合物防治大麥病害的效果
[0092] 組合物田間應(yīng)用表明，滅菌唑單劑處理對大麥赤霉病、葉枯病、白粉病和銹病均有 較好防效，而井閃霉素單劑除了對赤霉病有較低防效以外，對其他病害基本沒有效果。從表 中可以看出，本發(fā)明實施例1~8中殺菌組合物制劑，對赤霉病、葉枯病、白粉病和銹病的防 效大幅度提高，防治效果達到82%以上，好于對照常用藥劑多酮及單劑的效果，增效作用顯 著。因此，本發(fā)明的生物-化學(xué)殺菌組合物，可大幅度降低化學(xué)殺菌劑滅菌唑的用量，減輕農(nóng) 藥的環(huán)境壓力，降低麥粒的毒素污染。
[0093] 應(yīng)用實施例4:井閃霉素與滅菌唑組合物防治水稻病害的試驗效果
[0094] 將實施例1~8的殺菌組合物制劑進行水稻病害的田間防控藥效試驗。試驗地安排 在江蘇省南京市江寧區(qū)淳化街道土橋鎮(zhèn)。水稻品種為鎮(zhèn)稻18,每個小區(qū)面積50平方米，各處 理重復(fù)3次，空白對照不施藥。水稻紋枯病在水稻分蘗末期(上3葉未出）第一次施藥，孕穗期 第二次施藥，齊穗期第三次施藥，用浙江省桐廬匯豐生物科技有限公司生產(chǎn)的40%井岡霉 素可濕性粉劑單劑作為對照藥劑。稻曲病在破口前5~7天第一次施藥，齊穗期第二次施藥， 用拜耳作物科學(xué)公司生產(chǎn)的430g/L戊唑醇懸浮劑單劑作為對照藥劑。稻瘟病在水稻破口期 第一次施藥，齊穗期第二次施藥，用江蘇豐登作物保護股份有限公司生產(chǎn)的75%三環(huán)唑可 濕性粉劑單劑作為對照藥劑。病情穩(wěn)定后調(diào)查發(fā)病情況，計算病情及防效。
[0095] 表9:井閃霉素與滅菌唑組合物防治水稻病害的田間試驗效果
[0097] 田間試驗結(jié)果表明，井閃霉素和滅菌唑組合殺菌劑在防治稻瘟病、稻曲病和水稻 紋枯病方面都具有優(yōu)異的防治效果，與目前常用的主流殺菌劑相比，均具有較顯著的防治 效果。本發(fā)明所提供的井閃霉素和滅菌唑殺菌組合物能同時防治稻瘟病、稻曲病和水稻紋 枯病，不僅提高了防效，而且大大降低了用藥量和用藥次數(shù)，節(jié)省了大量的經(jīng)濟投入，對增 加社會、經(jīng)濟和生態(tài)效益將具有重要的現(xiàn)實意義。
[0098] 應(yīng)當(dāng)指出，以上【具體實施方式】僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在 閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán) 利要求所限定的范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述主要成分井閃霉素和滅菌唑 的重量比為1:24~20:1。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述主要 成分井岡霉素和滅菌唑的重量比為1:12~10:1。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述主要 成分井閃霉素和滅菌唑的重量比為1:6~5:1。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述主要 成分井閃霉素和滅菌唑的重量比為1:3~2:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述主 要成分井閃霉素和滅菌唑的重量百分含量為所述殺菌組合物總含量的2~80%，余量為在 農(nóng)藥中可接受的載體和/或助劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述的殺 菌組合物劑型為可濕性粉劑、懸浮劑、微乳劑或水分散粒劑。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述的載 體為水、高嶺土、膨潤土、白炭黑、娃藻土、凹凸棒土或輕質(zhì)碳酸鈣中的一種或幾種。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種井閃霉素和滅菌唑的殺菌組合物，其特征在于所述的助 劑為乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、NNO-1、NN0-7、黃原膠、聚乙二醇、甘油、拉開粉、十二烷基 硫酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、硫酸銨、尿素、聚乙烯吡咯烷酮、阿拉伯膠、甲基纖維素、烷基酚 聚氧乙烯醚、月桂醇聚氧乙烯醚、苯乙基酚甲醛樹酯聚氧乙基醚、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸 酯、脂肪酸聚氧乙烯酯、磺酸聚甲醛縮合物、N-甲基吡咯烷酮、烷基苯磺酸鹽、丁基萘磺酸 鈉、苯甲酸、木質(zhì)素磺酸鈉、羧甲基纖維素、硅酮類化合物、硅酸鎂鋁、山梨酸鈉或聚乙烯醇 中的一種或幾種。9. 權(quán)利要求1所述的殺菌組合物在防治麥類赤霉病、麥類紋枯病、麥類白粉病、麥類銹 病、麥類葉枯病、稻痕病、稻曲病、水稻紋枯病上的應(yīng)用。
【文檔編號】A01P3/00GK105961402SQ201610589617
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年7月22日
【發(fā)明人】周明國, 段亞冰, 王建新, 楊瑩, 武健
【申請人】南京農(nóng)業(yè)大學(xué)