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一種促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法

文檔序號(hào):10518650閱讀:637來(lái)源:國(guó)知局
一種促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法,步驟包括:A、選用適合的蝴蝶蘭品種花梗作為作種的蝴蝶蘭品種;B、對(duì)所述作種的蝴蝶蘭品種母株的花梗作為外植體材料;C、在制種前一周停澆水、肥、藥,保持花梗干凈;D、花梗腋芽的誘導(dǎo),在誘導(dǎo)腋芽形成的培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo);E、類原球體的誘導(dǎo);F、類原球體的增殖;G、芽體的分化、壯苗及生根;本發(fā)明通過(guò)在蝴蝶蘭類原球莖體的誘導(dǎo)和增殖中關(guān)鍵階段運(yùn)用適當(dāng)?shù)牟僮鞴に?,從而達(dá)到快速誘導(dǎo)、增殖和分化成芽的目的,該發(fā)明的運(yùn)用有效地建立了的蝴蝶蘭品種的類原球莖體,通過(guò)類原球莖體的快速增殖從而達(dá)到蝴蝶蘭試管苗工廠化生產(chǎn)的開展。
【專利說(shuō)明】
-種促使蝴蝶蘭類原球莖體快速増殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及植物栽培及育苗技術(shù)領(lǐng)域,尤其設(shè)及一種促使蝴蝶蘭類原球莖體快速 增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蝴蝶蘭(Phalaenopsis)屬蘭科多年生植物,是世界上栽培最廣泛、最普及的洋蘭 品種之一,由于其花大、色艷,開花期長(zhǎng)達(dá)2~3個(gè)月,而素有"洋蘭皇后"的美稱。隨著近年來(lái) 蝴蝶蘭價(jià)格的降低,蝴蝶蘭更是成為普通市民年宵花優(yōu)選的盆花之一,銷量逐年增加。隨著 蝴蝶蘭品種的普及,市場(chǎng)對(duì)花色、品質(zhì)的要求越來(lái)越高,后代分離嚴(yán)重的播種苗已開始退出 市場(chǎng),代之的是高品質(zhì)的、花色統(tǒng)一的無(wú)性苗。近幾年來(lái)流行和楊銷的品種有"大辣椒"、"紅 太陽(yáng)"、"內(nèi)山姑娘"、"火鳥"、"紅龍"、"超群9號(hào)"等,而運(yùn)些品種無(wú)一不是通過(guò)花梗誘導(dǎo)而成 的組培苗栽培形成的。
[0003] 通過(guò)花梗誘導(dǎo)側(cè)芽萌發(fā),再通過(guò)側(cè)芽繁殖組培苗的方法有兩種途徑。一是通過(guò)側(cè) 芽誘導(dǎo)叢生芽生產(chǎn),再通過(guò)芽生芽的方式進(jìn)行增殖,從而達(dá)到快繁的目的;二是通過(guò)花梗側(cè) 芽或葉片誘導(dǎo)類原球莖體(Protocorm-like bodies,簡(jiǎn)稱化B)發(fā)生,再經(jīng)類原球莖體的增 殖、分化成苗,從而達(dá)到快繁的目的。通過(guò)芽生芽的方式繁殖速度較慢,且基部產(chǎn)生的褐化 物質(zhì)較多,制約著蝴蝶蘭無(wú)性繁殖速度;W無(wú)菌苗葉片作為外植體材料誘導(dǎo)類原球莖體的 途徑,在生產(chǎn)實(shí)際中也存在著一些技術(shù)難題,一是不同品種誘導(dǎo)類原球莖體的難易程度不 同,某些品種的葉片較易誘導(dǎo)類原球莖體,而某些品種很難誘導(dǎo);二是類原球莖體在生長(zhǎng)過(guò) 程中極易形成單個(gè)芽體從而影響增殖速度;Ξ是產(chǎn)生褐化組織較多,抑制培養(yǎng)體的生產(chǎn)速 度甚至使之死亡。由于運(yùn)些問(wèn)題的存在,極大地制約了蝴蝶蘭組培苗無(wú)性繁殖速度,從而影 響種苗工廠化生產(chǎn)的進(jìn)程。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在提供一種操作簡(jiǎn)單,產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)價(jià)值高的紫香蘭組培快繁方法。
[0005] 本發(fā)明目的通過(guò)W下技術(shù)方案來(lái)予W實(shí)現(xiàn): 一種促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法,步驟包括: A、 選用適合的蝴蝶蘭品種花梗作為作種的蝴蝶蘭品種,包括:"大辣椒"、"紅太陽(yáng)"、"內(nèi) 山姑娘"、"富樂(lè)夕陽(yáng)"、"沙拉黃金"、"小白兔"等品種; B、 對(duì)所述作種的蝴蝶蘭品種母株的花梗作為外植體材料; C、 在制種前一周停誘水、肥、藥,保持花梗干凈; D、 花梗蔽芽的誘導(dǎo),在誘導(dǎo)蔽芽形成的培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo); E、 類原球體的誘導(dǎo); F、 類原球體的增殖; G、 芽體的分化、壯苗及生根; 所述步驟D具體包括; (1) 采回的所述花梗,在自來(lái)水下沖洗干凈,并用濕脫脂棉花薩按重量計(jì)的0.5%的洗衣 粉水輕擦表面,再在自來(lái)水下沖洗5~10分鐘;在潔凈工作臺(tái)上,用刀片小屯、去除所述花梗節(jié) 位上蔽芽的外巷片,并用75%的酒精輕擦表面,然后將所述花梗切割成l-2cm長(zhǎng)度的莖段,每 一段包含一個(gè)節(jié)位;將所述花梗節(jié)段放入0.10%升隸溶液中進(jìn)行浸泡消毒8~10分鐘,并不斷 搖動(dòng);然后將所述花梗節(jié)段取出,在無(wú)菌水中漂洗4~5次,每次2~3分鐘;后浸入無(wú)菌水中備 用; (2) 將消毒好的所述花梗節(jié)段切除兩頭受升隸侵害的部分,并將所述莖段的極性基部 插入誘導(dǎo)蔽芽形成的培養(yǎng)基中,使節(jié)位上的芽點(diǎn)保留在培養(yǎng)基的表面上;每瓶1個(gè)莖段; (3) 培養(yǎng)條件:前7~14 d黑暗培養(yǎng),溫度24~26°C; 10 d后,光強(qiáng)提到12.5~18.75皿〇1· nf2.s-i,繼續(xù)培養(yǎng)20~30 d; 所述步驟G具體為:當(dāng)所述類原球莖體在增殖培養(yǎng)基上增殖達(dá)到一定的庫(kù)存數(shù)量時(shí),將 類原球莖體轉(zhuǎn)移到芽體分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基為1/2MS +香蕉泥5~10% +馬鈴馨泥3~ 5%+白糖2.5~3%;抑值為5.4~5.6;每30~40 d繼代培養(yǎng)一次;所述類原球莖體的莖尖發(fā)芽并 長(zhǎng)出芽體,將所述芽體切下繼續(xù)在所述分化培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng);當(dāng)芽體生長(zhǎng)出兩片葉, 并且每片葉大小在IcmW上時(shí),從基部將植株切下,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中;不達(dá)標(biāo)的植株在 分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng);培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度31.25~37.5皿〇1 ·πΓ2 · S-1,光照時(shí)間12 h · d -1,溫度為24~28°C;生根苗培養(yǎng)周期50~60 d,當(dāng)所述植株長(zhǎng)出^2條根系,并且生長(zhǎng)較為健 壯時(shí),可W出瓶種植。
[0006] 所述步驟E具體為:當(dāng)作為外植體的所述花梗莖段節(jié)位上的芽點(diǎn)萌發(fā)形成高至 1.0-1.5 cm芽體時(shí),將所述芽體的頂端去掉,切割部位位于所述芽體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)W下0~ 0.2cm的位置,目的是破壞所述芽體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體從所 述幼嫩組織周邊產(chǎn)生;去除所述花?;亢只牟糠?,將連著所述花梗的帶有新鮮切面的 所述芽體轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培養(yǎng)條件為:前7~14天黑暗培養(yǎng);待新鮮切面開始膨大時(shí),將 光照強(qiáng)度調(diào)到5~12.5皿〇1 ·πΓ2 · S-1,光照時(shí)間12 h· cfi,溫度為24~26°C ;培養(yǎng)周期20~25天; 所述芽體塊在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)約10~15天左右,褐化物質(zhì)開始形成,并將培養(yǎng)基表面染 黑,此時(shí)將所述芽體轉(zhuǎn)移到同個(gè)培養(yǎng)瓶中的不同培養(yǎng)基表面上,每5~10 d變換一個(gè)區(qū)域,W 減少所述褐化物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料的浸害;如此重復(fù),直到整個(gè)培養(yǎng)基表面都有較多褐化物質(zhì) 時(shí),將所述芽體轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基中,約30~40左右所述芽體切面上長(zhǎng)出數(shù)個(gè)幼嫩的類原球 莖體。
[0007] 所述步驟F具體為:當(dāng)所述類原球莖體長(zhǎng)到高度達(dá)0.3~0.8 cm時(shí),將帶有數(shù)個(gè)所述 類原球莖體的組織塊切下,去除周邊褐化組織及老的組織塊,并在所述類原球莖體中屯、生 長(zhǎng)點(diǎn)部位約±0.2cm的位置切去頂部,目的是破壞所述類原球莖體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴 露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。將帶有新鮮切面的所述類原球莖體 放入一級(jí)增殖培養(yǎng)基中,所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,并在每分鐘60~120次轉(zhuǎn)速的 搖床上旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)5~10 d,使所述類原球體的表面充分吸收到營(yíng)養(yǎng)并且減少后期培養(yǎng)中褐化 組織的產(chǎn)生。之后將所述類原球莖體轉(zhuǎn)入二級(jí)增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)20~25 d,此時(shí)可見所 述類原球莖體在幼嫩切面上及周圍長(zhǎng)出數(shù)個(gè)大小不等的新的類原球莖體。當(dāng)所述新的類原 球莖體直徑長(zhǎng)到0.4~0.5cm大小時(shí),將所述新的類原球莖體頂端去掉,切割深度達(dá)到生長(zhǎng)點(diǎn) 部位約±0.2cm位置,并且連同所述的類原球莖體一起轉(zhuǎn)入所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基中,進(jìn)行液 體旋轉(zhuǎn)培養(yǎng),之后轉(zhuǎn)入所述二級(jí)增殖培養(yǎng)基中,液體和固體培養(yǎng)基反復(fù)培養(yǎng),繼代周期30~ 35 d。如此反復(fù),直到獲得足夠的類原球莖體;培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度18.75~25 μπιο? ·πΓ2· s-i,光照時(shí)間12 h · d-i,溫度為24~28°C。
[000引所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基為:1/2MS+BA^5 mg/L+KT 0.5~3 mg/L +NAA0.1 ~0.5 mg/L +挪子水50~150ml/L+白糖25g/L。
[0009] 所述二級(jí)增殖培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基,成分為:1/2MS+BA1~5mg/L +KT 0.5~3 mg/L +NAA0.^0.5 mg/L + 挪子水50~150ml/L+白糖25g/L+瓊脂5.5g/L。
[0010] 本發(fā)明的有益效果:在花梗芽誘導(dǎo)形成后或在類原球體形成后,切割位置位于生 長(zhǎng)點(diǎn)部位,目的是破壞具有頂端優(yōu)勢(shì)的生長(zhǎng)點(diǎn)組織,促使生長(zhǎng)點(diǎn)周圍幼嫩組織細(xì)胞增殖,從 而誘導(dǎo)新的或更多的類原球莖體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。蝴蝶蘭叢生芽或類原球莖體在 誘導(dǎo)階段和增殖階段均易于產(chǎn)生褐化組織,通過(guò)前期暗培養(yǎng)和快速變換芽體或類原球莖體 位置的方法,有利于減少褐化物質(zhì)的產(chǎn)生,避免芽體或類原球莖體受到褐化物質(zhì)的浸害。
[0011] 本發(fā)明通過(guò)在蝴蝶蘭類原球莖體的誘導(dǎo)和增殖中關(guān)鍵階段運(yùn)用適當(dāng)?shù)牟僮鞴に嚕?從而達(dá)到快速誘導(dǎo)、增殖和分化成芽的目的,該發(fā)明的運(yùn)用有效地建立了的蝴蝶蘭品種的 類原球莖體,通過(guò)類原球莖體的快速增殖從而達(dá)到蝴蝶蘭試管苗工廠化生產(chǎn)的開展。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
[oou]實(shí)施例一 A、 選用適合的蝴蝶蘭品種花梗作為作種的蝴蝶蘭品種,包括:"大辣椒"、"紅太陽(yáng)"、"內(nèi) 山姑娘"、"富樂(lè)夕陽(yáng)"、"沙拉黃金"、"小白兔"等品種; B、 對(duì)所述作種的蝴蝶蘭品種母株的花梗作為外植體材料; C、 在制種前一周停誘水、肥、藥,保持花梗干凈; D、 花梗蔽芽的誘導(dǎo): (1) 采回的所述花梗,在自來(lái)水下沖洗干凈,并用濕脫脂棉花薩按重量計(jì)的0.5%的洗衣 粉水輕擦表面,再在自來(lái)水下沖洗5~10分鐘。在潔凈工作臺(tái)上,用刀片小屯、去除所述花梗節(jié) 位上蔽芽的外巷片,并用75%的酒精輕擦表面,然后將所述花梗切割成l-2cm長(zhǎng)度的莖段,每 一段包含一個(gè)節(jié)位。將所述花梗節(jié)段放入0.10%升隸溶液中進(jìn)行浸泡消毒8~10分鐘,并不斷 搖動(dòng)。然后將所述花梗節(jié)段取出,在無(wú)菌水中漂洗4~5次,每次2~3分鐘。后浸入無(wú)菌水中備 用; (2) 將消毒好的所述花梗節(jié)段切除兩頭受升隸侵害的部分,并將所述莖段的極性基部 插入誘導(dǎo)蔽芽形成的培養(yǎng)基中,使節(jié)位上的芽點(diǎn)保留在培養(yǎng)基的表面上。每瓶1個(gè)莖段。(3) 培養(yǎng)條件:前7 d黑暗培養(yǎng),溫度24~26°C;10 d后,光強(qiáng)提到12.5~18.75μπιο1·πΓ2·3-ι^0? 續(xù)培養(yǎng)20~30 d; E、 類原球體的誘導(dǎo): 當(dāng)作為外植體的所述花梗莖段節(jié)位上的芽點(diǎn)萌發(fā)形成高至1.0-1.5 cm芽體時(shí),將所述 芽體的頂端去掉,切割部位位于所述芽體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)或W下0cm的位置,目的是破壞所述芽 體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。去除所述 花?;亢只牟糠?,將連著所述花梗的帶有新鮮切面的所述芽體轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培 養(yǎng)條件為:前7 d黑暗培養(yǎng)。待新鮮切面開始膨大時(shí),將光照強(qiáng)度調(diào)到扣πιο1·πΓ2·3-ι,光照 時(shí)間12 h · cfi,溫度為24~26°C。培養(yǎng)周期20~25 d。所述芽體塊在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)約10~ 15 d左右,褐化物質(zhì)開始形成,并將培養(yǎng)基表面染黑,此時(shí)將所述芽體轉(zhuǎn)移到同個(gè)培養(yǎng)瓶中 的不同培養(yǎng)基表面上,每5 d變換一個(gè)區(qū)域,W減少所述褐化物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料的浸害。如此 重復(fù),直到整個(gè)培養(yǎng)基表面都有較多褐化物質(zhì)時(shí),將所述芽體轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基中,約30~ 40 d左右所述芽體切面上長(zhǎng)出數(shù)個(gè)幼嫩的類原球莖體。
[0014] F:原球體的增殖: 當(dāng)所述類原球莖體長(zhǎng)到高度達(dá)0.3~0.8 cm時(shí),將帶有數(shù)個(gè)所述類原球莖體的組織塊切 下,去除周邊褐化組織及老的組織塊,并在所述類原球莖體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)部位約±0.2cm的位 置切去頂部,目的是破壞所述類原球莖體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖 體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。將帶有新鮮切面的所述類原球莖體放入一級(jí)增殖培養(yǎng)基中, 一級(jí)增殖培養(yǎng)基為:1/2MS+BA1 ~5 mg/L+KT 0.5~3 mg/L +NAA0.1 ~0.5 mg/L + 挪子水50~ 150ml/L+白糖25g/L。所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,并在每分鐘60~120次轉(zhuǎn)速的搖床 上旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)5~10 d,使所述類原球體的表面充分吸收到營(yíng)養(yǎng)并且減少后期培養(yǎng)中褐化組織 的產(chǎn)生。之后將所述類原球莖體轉(zhuǎn)入二級(jí)增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)20~25 d,二級(jí)增殖培養(yǎng)基 為固體培養(yǎng)基,成分為:1/2MS+BA1~5mg/L +KT0.5~3mg/L +NAA0.1~0.5 mg/L +挪子水50~ 150ml/L+白糖25g/L+瓊脂5.5g/L。此時(shí)可見所述類原球莖體在幼嫩切面上及周圍長(zhǎng)出數(shù)個(gè) 大小不等的新的類原球莖體。當(dāng)所述新的類原球莖體直徑長(zhǎng)到0.4~0.5cm大小時(shí),將所述新 的類原球莖體頂端去掉,切割深度達(dá)到生長(zhǎng)點(diǎn)部位約± 0.2cm位置,并且連同所述的類原球 莖體一起轉(zhuǎn)入所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基中,進(jìn)行液體旋轉(zhuǎn)培養(yǎng),之后轉(zhuǎn)入所述二級(jí)增殖培養(yǎng)基 中,液體和固體培養(yǎng)基反復(fù)培養(yǎng),繼代周期30~35 d。如此反復(fù),直到獲得足夠的類原球莖 體;培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度18.75~25皿〇1-111-2*3-1,光照時(shí)間12}1'(1-1,溫度為24~28°(:。
[0015] G、芽體的分化、壯苗及生根: 當(dāng)所述類原球莖體在增殖培養(yǎng)基上增殖達(dá)到一定的庫(kù)存數(shù)量時(shí),將類原球莖體轉(zhuǎn)移到 芽體分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基為1/2MS +香蕉泥5~10%+馬鈴馨泥3~5%+白糖2.5~3%。抑值 為5.4~5.6。每30~40 d繼代培養(yǎng)一次。所述類原球莖體的莖尖發(fā)芽并長(zhǎng)出芽體,將所述芽體 切下繼續(xù)在所述分化培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。當(dāng)芽體生長(zhǎng)出兩片葉,并且每片葉大小在1cm W上時(shí),從基部將植株切下,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中。不達(dá)標(biāo)的植株在分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培 養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度31.25~37.5 4111〇1-111-2*3-1,光照時(shí)間12}1'(1-1,溫度為24~28°(:。 生根苗培養(yǎng)周期50~60 d,當(dāng)所述植株長(zhǎng)出1~2條根系,并且生長(zhǎng)較為健壯時(shí),可W出瓶種 植。
[0016] 實(shí)施例二 A、 選用適合的蝴蝶蘭品種花梗作為作種的蝴蝶蘭品種,包括:"大辣椒"、"紅太陽(yáng)"、"內(nèi) 山姑娘"、"富樂(lè)夕陽(yáng)"、"沙拉黃金"、"小白兔"等品種; B、 對(duì)所述作種的蝴蝶蘭品種母株的花梗作為外植體材料; C、 在制種前一周停誘水、肥、藥,保持花梗干凈; D、 花梗蔽芽的誘導(dǎo): (1)采回的所述花梗,在自來(lái)水下沖洗干凈,并用濕脫脂棉花薩按重量計(jì)的0.5%的洗衣 粉水輕擦表面,再在自來(lái)水下沖洗5~10分鐘。在潔凈工作臺(tái)上,用刀片小屯、去除所述花梗節(jié) 位上蔽芽的外巷片,并用75%的酒精輕擦表面,然后將所述花梗切割成l-2cm長(zhǎng)度的莖段,每 一段包含一個(gè)節(jié)位。將所述花梗節(jié)段放入0.10%升隸溶液中進(jìn)行浸泡消毒8~10分鐘,并不斷 搖動(dòng)。然后將所述花梗節(jié)段取出,在無(wú)菌水中漂洗4~5次,每次2~3分鐘。后浸入無(wú)菌水中備 用; (2)將消毒好的所述花梗節(jié)段切除兩頭受升隸侵害的部分,并將所述莖段的極性基部 插入誘導(dǎo)蔽芽形成的培養(yǎng)基中,使節(jié)位上的芽點(diǎn)保留在培養(yǎng)基的表面上。每瓶1個(gè)莖段。(3) 培養(yǎng)條件:前10 d黑暗培養(yǎng),溫度24~26°C;10 d后,光強(qiáng)提到12.5~18.75皿〇1-111^,3^, 繼續(xù)培養(yǎng)20~30 d; E.類原球體的誘導(dǎo): 當(dāng)作為外植體的所述花梗莖段節(jié)位上的芽點(diǎn)萌發(fā)形成高至1.0-1.5 cm芽體時(shí),將所述 芽體的頂端去掉,切割部位位于所述芽體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)W下0.1cm的位置,目的是破壞所述芽 體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。去除所述 花?;亢只牟糠?,將連著所述花梗的帶有新鮮切面的所述芽體轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培 養(yǎng)條件為:前10 d黑暗培養(yǎng)。待新鮮切面開始膨大時(shí),將光照強(qiáng)度調(diào)到10 μπιο1·πΓ2·3-ι,光 照時(shí)間12 h · cfi,溫度為24~26°C。培養(yǎng)周期20~25 d。所述芽體塊在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)約10 ~15 d左右,褐化物質(zhì)開始形成,并將培養(yǎng)基表面染黑,此時(shí)將所述芽體轉(zhuǎn)移到同個(gè)培養(yǎng)瓶 中的不同培養(yǎng)基表面上,每7 d變換一個(gè)區(qū)域,W減少所述褐化物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料的浸害。如 此重復(fù),直到整個(gè)培養(yǎng)基表面都有較多褐化物質(zhì)時(shí),將所述芽體轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基中,約30 ~40 d左右所述芽體切面上長(zhǎng)出數(shù)個(gè)幼嫩的類原球莖體。
[0017] F、類原球體的增殖: 當(dāng)所述類原球莖體長(zhǎng)到高度達(dá)0.3~0.8 cm時(shí),將帶有數(shù)個(gè)所述類原球莖體的組織塊切 下,去除周邊褐化組織及老的組織塊,并在所述類原球莖體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)部位約±0.2cm的位 置切去頂部,目的是破壞所述類原球莖體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖 體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。將帶有新鮮切面的所述類原球莖體放入一級(jí)增殖培養(yǎng)基中, 一級(jí)增殖培養(yǎng)基為:1/2MS+BA1 ~5 mg/L+KT 0.5~3 mg/L +NAA0.1 ~0.5 mg/L + 挪子水50~ 150ml/L+白糖25g/L。所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,并在每分鐘60~120次轉(zhuǎn)速的搖床 上旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)5~10 d,使所述類原球體的表面充分吸收到營(yíng)養(yǎng)并且減少后期培養(yǎng)中褐化組織 的產(chǎn)生。之后將所述類原球莖體轉(zhuǎn)入二級(jí)增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)20~25 d,二級(jí)增殖培養(yǎng)基 為固體培養(yǎng)基,成分為:1/2MS+BA1~5mg/L+KT0.5~3mg/L +NAA0.1~0.5 mg/L +挪子水50~ 150ml/L+白糖25g/L+瓊脂5.5g/L。此時(shí)可見所述類原球莖體在幼嫩切面上及周圍長(zhǎng)出數(shù)個(gè) 大小不等的新的類原球莖體。當(dāng)所述新的類原球莖體直徑長(zhǎng)到0.4~0.5cm大小時(shí),將所述新 的類原球莖體頂端去掉,切割深度達(dá)到生長(zhǎng)點(diǎn)部位約± 0.2cm位置,并且連同所述的類原球 莖體一起轉(zhuǎn)入所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基中,進(jìn)行液體旋轉(zhuǎn)培養(yǎng),之后轉(zhuǎn)入所述二級(jí)增殖培養(yǎng)基 中,液體和固體培養(yǎng)基反復(fù)培養(yǎng),繼代周期30~35 d。如此反復(fù),直到獲得足夠的類原球莖 體;培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度18.75~25皿〇1-111-2*3-1,光照時(shí)間12}1'(1-1,溫度為24~28°(:。
[0018] G、芽體的分化、壯苗及生根: 當(dāng)所述類原球莖體在增殖培養(yǎng)基上增殖達(dá)到一定的庫(kù)存數(shù)量時(shí),將類原球莖體轉(zhuǎn)移到 芽體分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基為1/2MS +香蕉泥5~10%+馬鈴馨泥3~5%+白糖2.5~3%。抑值 為5.4~5.6。每30~40 d繼代培養(yǎng)一次。所述類原球莖體的莖尖發(fā)芽并長(zhǎng)出芽體,將所述芽體 切下繼續(xù)在所述分化培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。當(dāng)芽體生長(zhǎng)出兩片葉,并且每片葉大小在1cm W上時(shí),從基部將植株切下,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中。不達(dá)標(biāo)的植株在分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培 養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度31.25~37.5 4111〇1-111-2*3-1,光照時(shí)間12}1'(1-1,溫度為24~28°(:。 生根苗培養(yǎng)周期50~60 d,當(dāng)所述植株長(zhǎng)出1~2條根系,并且生長(zhǎng)較為健壯時(shí),可W出瓶種 植。
[0019] 實(shí)施案例立 A、 選用適合的蝴蝶蘭品種花梗作為作種的蝴蝶蘭品種,包括:"大辣椒"、"紅太陽(yáng)"、"內(nèi) 山姑娘"、"富樂(lè)夕陽(yáng)"、"沙拉黃金"、"小白兔"等品種; B、 對(duì)所述作種的蝴蝶蘭品種母株的花梗作為外植體材料; C、 在制種前一周停誘水、肥、藥,保持花梗干凈; D、 花梗蔽芽的誘導(dǎo): (1) 采回的所述花梗,在自來(lái)水下沖洗干凈,并用濕脫脂棉花薩按重量計(jì)的0.5%的洗衣 粉水輕擦表面,再在自來(lái)水下沖洗5~10分鐘。在潔凈工作臺(tái)上,用刀片小屯、去除所述花梗節(jié) 位上蔽芽的外巷片,并用75%的酒精輕擦表面,然后將所述花梗切割成l-2cm長(zhǎng)度的莖段,每 一段包含一個(gè)節(jié)位。將所述花梗節(jié)段放入0.10%升隸溶液中進(jìn)行浸泡消毒8~10分鐘,并不斷 搖動(dòng)。然后將所述花梗節(jié)段取出,在無(wú)菌水中漂洗4~5次,每次2~3分鐘。后浸入無(wú)菌水中備 用; (2) 將消毒好的所述花梗節(jié)段切除兩頭受升隸侵害的部分,并將所述莖段的極性基部 插入誘導(dǎo)蔽芽形成的培養(yǎng)基中,使節(jié)位上的芽點(diǎn)保留在培養(yǎng)基的表面上。每瓶1個(gè)莖段。
[0020] (3)培養(yǎng)條件:前14 d黑暗培養(yǎng),溫度24~26°C; 10 d后,光強(qiáng)提到12.5~18.75μ mol · πΓ2 · S-1,繼續(xù)培養(yǎng)20~30 d; E、 類原球體的誘導(dǎo): 當(dāng)作為外植體的所述花梗莖段節(jié)位上的芽點(diǎn)萌發(fā)形成高至1.0-1.5 cm芽體時(shí),將所述 芽體的頂端去掉,切割部位位于所述芽體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)W下0.2cm的位置,目的是破壞所述芽 體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。去除所述 花?;亢只牟糠郑瑢⑦B著所述花梗的帶有新鮮切面的所述芽體轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培 養(yǎng)條件為:前14 d黑暗培養(yǎng)。待新鮮切面開始膨大時(shí),將光照強(qiáng)度調(diào)到12.5皿ο1·πΓ2·3^ι, 光照時(shí)間12 h-cfi,溫度為24~26Γ。培養(yǎng)周期20~25 d。所述芽體塊在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)約 10~15 d左右,褐化物質(zhì)開始形成,并將培養(yǎng)基表面染黑,此時(shí)將所述芽體轉(zhuǎn)移到同個(gè)培養(yǎng) 瓶中的不同培養(yǎng)基表面上,每10 d變換一個(gè)區(qū)域,W減少所述褐化物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料的浸害。 如此重復(fù),直到整個(gè)培養(yǎng)基表面都有較多褐化物質(zhì)時(shí),將所述芽體轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基中,約 30~40 d左右所述芽體切面上長(zhǎng)出數(shù)個(gè)幼嫩的類原球莖體。
[0021] F、類原球體的增殖: 當(dāng)所述類原球莖體長(zhǎng)到高度達(dá)0.3~0.8 cm時(shí),將帶有數(shù)個(gè)所述類原球莖體的組織塊切 下,去除周邊褐化組織及老的組織塊,并在所述類原球莖體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)部位約±0.2cm的位 置切去頂部,目的是破壞所述類原球莖體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖 體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。將帶有新鮮切面的所述類原球莖體放入一級(jí)增殖培養(yǎng)基中, 一級(jí)增殖培養(yǎng)基為:1/2MS+BA1 ~5 mg/L+KT 0.5~3 mg/L +NAA0.1 ~0.5 mg/L + 挪子水50~ 150ml/L+白糖25g/L。所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,并在每分鐘60~120次轉(zhuǎn)速的搖床 上旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)5~10 d,使所述類原球體的表面充分吸收到營(yíng)養(yǎng)并且減少后期培養(yǎng)中褐化組織 的產(chǎn)生。之后將所述類原球莖體轉(zhuǎn)入二級(jí)增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)20~25 d,二級(jí)增殖培養(yǎng)基 為固體培養(yǎng)基,成分為:1/2MS+BA1~5mg/L +KT0.5~3mg/L +NAA0.1~0.5 mg/L +挪子水50~ 150ml/L+白糖25g/L+瓊脂5.5g/L。此時(shí)可見所述類原球莖體在幼嫩切面上及周圍長(zhǎng)出數(shù)個(gè) 大小不等的新的類原球莖體。當(dāng)所述新的類原球莖體直徑長(zhǎng)到0.4~0.5cm大小時(shí),將所述新 的類原球莖體頂端去掉,切割深度達(dá)到生長(zhǎng)點(diǎn)部位約± 0.2cm位置,并且連同所述的類原球 莖體一起轉(zhuǎn)入所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基中,進(jìn)行液體旋轉(zhuǎn)培養(yǎng),之后轉(zhuǎn)入所述二級(jí)增殖培養(yǎng)基 中,液體和固體培養(yǎng)基反復(fù)培養(yǎng),繼代周期30~35 d。如此反復(fù),直到獲得足夠的類原球莖 體;培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度18.75~25皿〇1-111-2*3-1,光照時(shí)間12}1'(1-1,溫度為24~28°(:。
[0022] G、芽體的分化、壯苗及生根: 當(dāng)所述類原球莖體在增殖培養(yǎng)基上增殖達(dá)到一定的庫(kù)存數(shù)量時(shí),將類原球莖體轉(zhuǎn)移到 芽體分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基為1/2MS +香蕉泥5~10%+馬鈴馨泥3~5%+白糖2.5~3%。抑值 為5.4~5.6。每30~40 d繼代培養(yǎng)一次。所述類原球莖體的莖尖發(fā)芽并長(zhǎng)出芽體,將所述芽體 切下繼續(xù)在所述分化培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。當(dāng)芽體生長(zhǎng)出兩片葉,并且每片葉大小在1cm W上時(shí),從基部將植株切下,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中。不達(dá)標(biāo)的植株在分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培 養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度31.25~37.5 4111〇1-111-2*3-1,光照時(shí)間12}1'(1-1,溫度為24~28°(:。 生根苗培養(yǎng)周期50~60 d,當(dāng)所述植株長(zhǎng)出1~2條根系,并且生長(zhǎng)較為健壯時(shí),可W出瓶種 植。
[0023] 對(duì)比例1 A、 選用適合的蝴蝶蘭品種花梗作為作種的蝴蝶蘭品種,包括:"大辣椒"、"紅太陽(yáng)"、"內(nèi) 山姑娘"、"富樂(lè)夕陽(yáng)"、"沙拉黃金"、"小白兔"等品種; B、 對(duì)所述作種的蝴蝶蘭品種母株的花梗作為外植體材料; C、 在制種前一周停誘水、肥、藥,保持花梗干凈; D、 花梗蔽芽的誘導(dǎo): (1) 采回的所述花梗,在自來(lái)水下沖洗干凈,并用濕脫脂棉花薩按重量計(jì)的0.5%的洗衣 粉水輕擦表面,再在自來(lái)水下沖洗5~10分鐘。在潔凈工作臺(tái)上,用刀片小屯、去除所述花梗節(jié) 位上蔽芽的外巷片,并用75%的酒精輕擦表面,然后將所述花梗切割成l-2cm長(zhǎng)度的莖段,每 一段包含一個(gè)節(jié)位。將所述花梗節(jié)段放入0.10%升隸溶液中進(jìn)行浸泡消毒8~10分鐘,并不斷 搖動(dòng)。然后將所述花梗節(jié)段取出,在無(wú)菌水中漂洗4~5次,每次2~3分鐘。后浸入無(wú)菌水中備 用; (2) 將消毒好的所述花梗節(jié)段切除兩頭受升隸侵害的部分,并將所述莖段的極性基部 插入誘導(dǎo)蔽芽形成的培養(yǎng)基中,使節(jié)位上的芽點(diǎn)保留在培養(yǎng)基的表面上。每瓶1個(gè)莖段。(3) 培養(yǎng)條件,自然光照,溫度24~26°(:;10(1后,光強(qiáng)改為12.5~18.75皿〇1-111-2*3-1,繼續(xù)培 養(yǎng)20~30 d; E、 類原球體的誘導(dǎo): 當(dāng)作為外植體的所述花梗莖段節(jié)位上的芽點(diǎn)萌發(fā)形成高至1.0-1.5 cm芽體時(shí),將所述 芽體的頂端去掉,切割部位位于所述芽體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)W下3cm的位置,目的是破壞所述芽體 的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。去除所述花 ?;亢只牟糠郑瑢⑦B著所述花梗的帶有新鮮切面的所述芽體轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培養(yǎng) 條件為:自然光照培養(yǎng)。待新鮮切面開始膨大時(shí),將光照強(qiáng)度調(diào)到25μπιο1 ·πΓ2 · s^i,光照時(shí) 間12 h · cfi,溫度為24~26°C。培養(yǎng)周期20~25 d。所述芽體塊在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)約10~15 d左右,褐化物質(zhì)開始形成,并將培養(yǎng)基表面染黑,此時(shí)將所述芽體轉(zhuǎn)移到同個(gè)培養(yǎng)瓶中的 不同培養(yǎng)基表面上,每5 d變換一個(gè)區(qū)域,W減少所述褐化物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料的浸害。如此重 復(fù),直到整個(gè)培養(yǎng)基表面都有較多褐化物質(zhì)時(shí),將所述芽體轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基中,約30~40 d左右所述芽體切面上長(zhǎng)出數(shù)個(gè)幼嫩的類原球莖體。
[0024] F:原球體的增殖: 當(dāng)所述類原球莖體長(zhǎng)到高度達(dá)0.3~0.8 cm時(shí),將帶有數(shù)個(gè)所述類原球莖體的組織塊切 下,去除周邊褐化組織及老的組織塊,并在所述類原球莖體中屯、生長(zhǎng)點(diǎn)部位W下0cm的位置 切去頂部,目的是破壞所述類原球莖體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體 從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生。當(dāng)所述增殖培養(yǎng)基表面變色時(shí),將所述類原球莖體轉(zhuǎn)移到同個(gè) 培養(yǎng)瓶中的不同培養(yǎng)基表面上,每5~7 d變換一個(gè)區(qū)域,W減少所述褐化物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料的 浸害。培養(yǎng)周期30~35 d,如此反復(fù),直到獲得足夠的類原球莖體。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度 18.75~25皿〇1.111-2.3-1,光照時(shí)間12}1.(1-1,溫度為24~28°(:。
[00巧]G、芽體的分化、壯苗及生根: 當(dāng)所述類原球莖體在增殖培養(yǎng)基上增殖達(dá)到一定的庫(kù)存數(shù)量時(shí),將類原球莖體轉(zhuǎn)移到 芽體分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基為1/2MS +香蕉泥5~10%+馬鈴馨泥3~5%+白糖2.5~3%。抑值 為5.4~5.6。每30~40 d繼代培養(yǎng)一次。所述類原球莖體的莖尖發(fā)芽并長(zhǎng)出芽體,將所述芽體 切下繼續(xù)在所述分化培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng)。當(dāng)芽體生長(zhǎng)出兩片葉,并且每片葉大小在1cm W上時(shí),從基部將植株切下,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中。不達(dá)標(biāo)的植株在分化培養(yǎng)基中繼續(xù)培 養(yǎng)。培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度31.25~37.5 4111〇1-111-2*3-1,光照時(shí)間12}1'(1-1,溫度為24~28°(:。 生根苗培養(yǎng)周期50~60 d,當(dāng)所述植株長(zhǎng)出1~2條根系,并且生長(zhǎng)較為健壯時(shí),可W出瓶種 植。
[0026]將W上實(shí)施例培養(yǎng)的瓶苗1周后移至花盆栽培,通過(guò)W下表格對(duì)實(shí)施例中的結(jié)果 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和對(duì)比如下:
由實(shí)施例數(shù)據(jù)看w看出,經(jīng)過(guò)本發(fā)明培養(yǎng)的蝴蝶蘭新苗較為健壯,煉苗后成活率高,與 對(duì)比例相比,實(shí)施例1-3與對(duì)比例相比有更多的類原球莖體從所述幼嫩組織周邊產(chǎn)生,并且 苗成活率較高,所W本發(fā)明具有極高的推廣價(jià)值。
[0027] W上所述并非對(duì)本新型的技術(shù)范圍作任何限制,凡依據(jù)本發(fā)明技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)W上的 實(shí)施例所作的任何修改、等同變化與修飾,均仍屬于本發(fā)明的技術(shù)方案的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法,其特征在于,步驟包括: A、 選用適合的蝴蝶蘭品種花梗作為作種的蝴蝶蘭品種; B、 對(duì)所述作種的蝴蝶蘭品種母株的花梗作為外植體材料; C、 在制種前一周停澆水、肥、藥,保持花梗干凈; D、 花梗腋芽的誘導(dǎo),在誘導(dǎo)腋芽形成的培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo); E、 類原球體的誘導(dǎo); F、 類原球體的增殖; G、 芽體的分化、壯苗及生根; 所述步驟D具體包括; (1) 采回的所述花梗,在自來(lái)水下沖洗干凈,并用濕脫脂棉花蘸按重量計(jì)的0.5%的洗衣 粉水輕擦表面,再在自來(lái)水下沖洗5~10分鐘;用刀片去除所述花梗節(jié)位上腋芽的外苞片,并 用75%的酒精輕擦表面,然后將所述花梗切割成l-2cm長(zhǎng)度的莖段,每一段包含一個(gè)節(jié)位;將 所述花梗節(jié)段放入0.10%升汞溶液中進(jìn)行浸泡消毒8~10分鐘,并不斷搖動(dòng);然后將所述花梗 節(jié)段取出,在無(wú)菌水中漂洗4~5次,每次2~3分鐘;后浸入無(wú)菌水中備用; (2) 將消毒好的所述花梗節(jié)段切除兩頭受升汞侵害的部分,并將所述莖段的極性基部 插入誘導(dǎo)腋芽形成的培養(yǎng)基中,使節(jié)位上的芽點(diǎn)保留在培養(yǎng)基的表面上;每瓶1個(gè)莖段; (3) 培養(yǎng)條件:前7~14 d黑暗培養(yǎng),溫度24~26°C;10 d后,光強(qiáng)提到12.5~18.75μπιο1·πι 一2.s-S繼續(xù)培養(yǎng)20~30 d; 所述步驟G具體為:當(dāng)所述類原球莖體在增殖培養(yǎng)基上增殖達(dá)到一定的庫(kù)存數(shù)量時(shí),將 類原球莖體轉(zhuǎn)移到芽體分化培養(yǎng)基上,分化培養(yǎng)基為1/2MS +香蕉泥5~10% +馬鈴薯泥3~ 5%+白糖2.5~3%; pH值為5.4~5.6;每30~40 d繼代培養(yǎng)一次;所述類原球莖體的莖尖發(fā)芽并 長(zhǎng)出芽體,將所述芽體切下繼續(xù)在所述分化培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng);當(dāng)芽體生長(zhǎng)出兩片葉, 并且每片葉大小在Icm以上時(shí),從基部將植株切下,轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中;培養(yǎng)條件為:光照 強(qiáng)度31 · 25~37 · 5μπιο1 .m-2. s-1,光照時(shí)間12 h. d-1,溫度為24~28°C ;生根苗培養(yǎng)周期50~60 d,當(dāng)所述植株長(zhǎng)出1~2條根系,并且生長(zhǎng)較為健壯時(shí),可以出瓶種植。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法,其特征 在于:所述步驟E具體為:當(dāng)作為外植體的所述花梗莖段節(jié)位上的芽點(diǎn)萌發(fā)形成高至1.0-?. 5 cm 芽體時(shí) ,將所述芽體的頂端去掉 ,切割部位位于所述芽體中 心生長(zhǎng)點(diǎn)以下0~0. 2cm 的 位置,目的是破壞所述芽體的生長(zhǎng)點(diǎn)使幼嫩組織暴露,誘導(dǎo)更多的類原球莖體從所述幼嫩 組織周邊產(chǎn)生;去除所述花?;亢只牟糠?,將連著所述花梗的帶有新鮮切面的所述芽 體轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培養(yǎng)條件為:前7~14天黑暗培養(yǎng);待新鮮切面開始膨大時(shí),將光照強(qiáng) 度調(diào)到1~12.5μπιο1.m- 2. s-1,光照時(shí)間12 h. d-1,溫度為24~26°C ;培養(yǎng)周期20~25天;所述芽 體塊在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)約10~15天左右,褐化物質(zhì)開始形成,并將培養(yǎng)基表面染黑,此時(shí) 將所述芽體轉(zhuǎn)移到同個(gè)培養(yǎng)瓶中的不同培養(yǎng)基表面上,每5~10 d變換一個(gè)區(qū)域,以減少所 述褐化物質(zhì)對(duì)培養(yǎng)材料的浸害;如此重復(fù),直到整個(gè)培養(yǎng)基表面都有較多褐化物質(zhì)時(shí),將所 述芽體轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基中,約30~40左右所述芽體切面上長(zhǎng)出數(shù)個(gè)幼嫩的類原球莖體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法,其特征 在于:所述步驟F具體為:當(dāng)所述類原球莖體長(zhǎng)到高度達(dá)0.3~0.8 cm時(shí),將帶有數(shù)個(gè)所述類 原球莖體的組織塊切下,去除周邊褐化組織及老的組織塊,并在所述類原球莖體中心生長(zhǎng) 點(diǎn)部位約±0.2cm的位置切去頂部,將帶有新鮮切面的所述類原球莖體放入一級(jí)增殖培養(yǎng) 基中,所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基,并在每分鐘60~120次轉(zhuǎn)速的搖床上旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)5~ 10 d,之后將所述類原球莖體轉(zhuǎn)入二級(jí)增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)20~25 d,此時(shí)可見所述類原 球莖體在幼嫩切面上及周圍長(zhǎng)出數(shù)個(gè)大小不等的新的類原球莖體; 當(dāng)所述新的類原球莖體直徑長(zhǎng)到〇. 4~0.5cm大小時(shí),將所述新的類原球莖體頂端去掉, 切割深度達(dá)到生長(zhǎng)點(diǎn)部位約±0.2cm位置,并且連同所述的類原球莖體一起轉(zhuǎn)入所述一級(jí) 增殖培養(yǎng)基中,進(jìn)行液體旋轉(zhuǎn)培養(yǎng),之后轉(zhuǎn)入所述二級(jí)增殖培養(yǎng)基中,液體和固體培養(yǎng)基反 復(fù)培養(yǎng),繼代周期30~35 d; 如此反復(fù),直到獲得足夠的類原球莖體;培養(yǎng)條件為:光照強(qiáng)度18.75~25 μπιο? · Hf2 · s-1,光照時(shí)間12 h · d-1,溫度為24~28°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法,其特征 在于:所述一級(jí)增殖培養(yǎng)基為:1/2MS+BA1~5 mg/L+KTO.5~3mg/L +NAA0.1~0.5 mg/L +椰子 水 50~150ml/L+白糖 25g/L。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的促使蝴蝶蘭類原球莖體快速增殖培養(yǎng)蝴蝶蘭的方法,其特征 在于:所述二級(jí)增殖培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基,成分為:1/2MS+BA1~5mg/L+KT 0.5~3 mg/L + NAA0.1~0.5 mg/L + 椰子水50~150ml/L+白糖25g/L+瓊脂5.5g/L。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105875414SQ201610412905
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年6月13日
【發(fā)明人】陳春滿, 張善信
【申請(qǐng)人】陳春滿, 張善信
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