剝開，取出花藥，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)。所述的高溫預(yù)培養(yǎng)包括：把接種后的花藥分別 放入35°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2d。
[0033] 對(duì)比試驗(yàn)
[0034] 1. 1材料
[0035] 試驗(yàn)材料有3個(gè)。HJ001為本課題組自配雜交種，果實(shí)淺白色，瓢白色，果實(shí)發(fā)育 期60天；大果黑美人和西農(nóng)8號(hào)均為商品種，大果黑美人由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研宄 所二倍體西瓜課題組提供；西農(nóng)8號(hào)由楊凌農(nóng)業(yè)高科技發(fā)展股份有限公司提供。
[0036] 試驗(yàn)于2010-2011年在河南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。試驗(yàn)材料采用分期播種的方式進(jìn) 行。于 2010. 03. 05、2010. 04. KK2010. 07. 15、2011. 03. KK2011. 04. 15、2011. 07. 17分別進(jìn) 行催芽播種，其中2010. 03. 05、2010. 07. 15、2011. 03. KK2011. 07. 17是大棚種植，其余為 露地種植。材料種植在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院鄭州果樹研宄所實(shí)驗(yàn)基地內(nèi)。
[0037] 1. 2方法
[0038] 1. 2. 1取材時(shí)間及時(shí)期
[0039]于早上 6:00-7:00、7:00-8:00、8:00-9:00、9:00-10:00 采集不同大小的花蕾進(jìn)行 花粉活力和小孢子發(fā)育時(shí)期的觀察?；ǚ刍盍托℃咦影l(fā)育時(shí)期均采用FDA法進(jìn)行觀察。
[0040] 1. 2. 2低溫處理
[0041] 取小孢子處于單核期的花蕾，用自來水沖洗3次，再用濕紗布包裹好，置于4°C下 分別處理ld、2d、3d，以不處理的為對(duì)照，然后，在無菌操作臺(tái)上，將預(yù)處理后的花蕾投到 75%的酒精中消毒30s，再用0. 1%的取(：12消毒8分鐘，最后用無菌水沖洗3-5次。消毒 完成后，把無菌的花蕾用無菌的刀子鑷子剝開，取出花藥，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每個(gè) 處理接種5瓶，每瓶接20枚花藥，設(shè)3次重復(fù)，統(tǒng)計(jì)有效愈傷組織（白色且質(zhì)地堅(jiān)硬緊密） 誘導(dǎo)率和無效愈傷組織（黃色、透明、質(zhì)地疏松和白色的、疏松的、棉絮狀）誘導(dǎo)率。
[0042] 有效愈傷組織誘導(dǎo)率（％ )=誘導(dǎo)出有效愈傷組織的花藥個(gè)數(shù)/接種的花藥個(gè) 數(shù) X100%
[0043] 無效愈傷組織誘導(dǎo)率（％ )=誘導(dǎo)出無效愈傷組織的花藥個(gè)數(shù)/接種的花藥個(gè) 數(shù) X100%
[0044] 1. 2. 3高溫預(yù)培養(yǎng)
[0045] 把接種后的花藥分別放入35°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)ld、2d、3d，以不經(jīng)高溫處理的 為對(duì)照，每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接20枚花藥，設(shè)3次重復(fù)，統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。
[0046] 1. 2. 4植物生長調(diào)節(jié)劑
[0047] 在MS+6-BA2. Omg?P+KTL Omg?I71培養(yǎng)基上，添加2,4-D和NAA，分別設(shè)置三個(gè) 濃度水平，〇. 2、0. 5和1. Omg ? I71，其余培養(yǎng)條件相同。每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接20枚花 藥，設(shè)3次重復(fù)。統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。
[0048] 1.2. 5培養(yǎng)基附加物
[0049] 在MS+NAA1. Omg ?P+e-BA〗.Omg .I^+KTl. Omg .I71 培養(yǎng)基上，添加谷氨酰胺（Gin)。 每個(gè)處理接種5瓶，每瓶接20枚花藥，設(shè)3次重復(fù)。統(tǒng)計(jì)愈傷組織誘導(dǎo)率。詳見表2所示。
[0050] 表1不同附加物處理
[0051] Tablel The treatment of different Organics type
[0054] 注為未添加任何物質(zhì)，下同。
[0055] Note:-for not adding any material, the same below
[0056]1. 2. 6生長環(huán)境
[0057] 在培養(yǎng)條件相同的前提下，比較兩種環(huán)境條件（露地和大棚栽培）愈傷組織誘導(dǎo) 率的差異，每個(gè)處理重復(fù)3次。
[0058] 2結(jié)果與分析
[0059] 取材時(shí)期和時(shí)間對(duì)西瓜花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響
[0060] 在晴天早上6:00-8:00(此時(shí)小孢子活力較高，如圖1所示），以"耵001"為例，取 花蕾縱徑2-4mm，橫徑3-4mm，萼片緊貼花瓣，花瓣閉合，呈深綠色，花藥顏色呈淡黃色至黃 綠色，鏡檢表明，此時(shí)花粉多為小孢子單核靠邊期，如圖2所示，有效愈傷組織誘導(dǎo)率較高。 不同材料稍有差異。
[0061] 低溫處理對(duì)西瓜花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響
[0062] 同一材料，4°C低溫預(yù)處理時(shí)間不同，愈傷組織誘導(dǎo)率不同。由圖3看出， "HJ001" 4°C低溫處理2d和3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率顯著高于處理Id和對(duì)照，4°C低溫處 理Id的有效愈傷組織誘導(dǎo)率顯著高于對(duì)照，處理2d和3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率之間無顯 著差異，且在4°C低溫處理2d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率最高達(dá)到18. 33 %，未經(jīng)過處理的有效 愈傷組織誘導(dǎo)率僅有2. 0%;西農(nóng)8號(hào)4°C低溫處理2d和3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率顯著高 于處理Id和對(duì)照，處理2d和3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率之間無顯著差異，處理Id和對(duì)照的 有效愈傷組織誘導(dǎo)率之間也無顯著差異；大果黑美人處理3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率顯著 高于對(duì)照，而和低溫處理Id和2d的差異不顯著，在處理3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到最 高為8. 56%。由此可見，4°C低溫處理利于有效愈傷組織的誘導(dǎo)，一般4°C低溫處理2d-3d， 有效愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到最高。
[0063] 由圖4看出，"HJ001"4°C低溫處理3d的無效愈傷組織誘導(dǎo)率，顯著高于處理處理 2(1、1(1、0(1，達(dá)到30.67%，處理1(1和對(duì)照的無效愈傷組織誘導(dǎo)率之間無顯著性差異；西農(nóng)8 號(hào)處理2d的無效愈傷組織誘導(dǎo)率顯著高于對(duì)照，而其余3個(gè)處理間均無顯著性差異；大果 黑美人的表現(xiàn)同西農(nóng)8號(hào)。由此可見，4°C低溫處理同樣也有利于無效愈傷組織的誘導(dǎo)。
[0064] 高溫處理對(duì)西瓜花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響
[0065] 由圖5看出，"HJ001"經(jīng)35°C高溫處理ld、2d、3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率均顯著高 于對(duì)照，經(jīng)35°C高溫處理ld、2d、3d的有效愈傷組織誘導(dǎo)率之間無顯著性差異；西農(nóng)8號(hào)和 大果黑美人經(jīng)35°C高溫處理和對(duì)照間無顯著性差異。
[0066] 圖6顯示，"HJ001"經(jīng)35°C高溫處理2d的無效愈傷組織誘導(dǎo)率均顯著高于處理 3d，經(jīng)35°C高溫處理3d的無效愈傷組織誘導(dǎo)率又顯著高于對(duì)照，經(jīng)35°C高溫處理ld、3d和 對(duì)照無效愈傷組織誘導(dǎo)率間無顯著性差異；西農(nóng)8號(hào)經(jīng)35°C高溫處理2d的無效愈傷組織 誘導(dǎo)率顯著高于經(jīng)35°C高溫處理Id和對(duì)照，而和處理3d的差異不顯著；大果黑美人，35°C 高溫處理3d的無效愈傷組織誘導(dǎo)率，顯著處理2d、Id和對(duì)照，達(dá)到14. 33 %，處理Id和對(duì)照 無效愈傷組織誘導(dǎo)率之間無顯著性差異；由此可見，35°C高溫處理，也可以顯著提高無效愈 傷組織誘導(dǎo)率。
[0067] 綜上所述，35°C高溫處理利于西瓜花藥有效愈傷組織的誘導(dǎo)，在35°C高溫處理2d 時(shí)有效愈傷組織誘導(dǎo)率較高。
[0068] 2,4-D和NAA對(duì)西瓜花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響
[0069] 表2顯示，2,4-D濃度為0? 2mg?L_\NAA濃度為1.Omg?L-1時(shí)，"HJ001 "的愈傷組 織誘導(dǎo)率分別達(dá)到56. 67%和59. 67%，且兩者之間無顯著差異。2,4-D濃度為0. 5mg噸' NAA濃度為1.Omg噸4時(shí)，西農(nóng)8號(hào)的愈傷組織誘導(dǎo)率分別達(dá)到60. 33%和61. 33%，且兩者 之間顯著差異不顯著。2,4-D濃度分別為0. 2、0. 5、1.Omg七1時(shí)，"HJ001"愈傷組織誘導(dǎo)率 隨著2,4-D濃度增加而降低，表現(xiàn)為低濃度的2,4-D促進(jìn)愈傷組織的形成，高濃度的2,4-D 抑制愈傷組織的誘導(dǎo)，而NAA的表現(xiàn)則與之相反。西農(nóng)8號(hào)在添加NAA的培養(yǎng)基上表現(xiàn)同 "HJ001"，而在添加2,4-D時(shí)，濃度為0. 5mg?I71時(shí)愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)到最高為60. 33%，與 其余兩個(gè)濃度水平達(dá)到顯著差異。
[0070] 雖然2,4-D和NAA在合適濃度時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)率之間無顯著差異，但愈傷組織形 態(tài)特征差異很大，添加2,4-D的培養(yǎng)基，愈傷組織多表現(xiàn)為松散型（無效愈傷組織），松散型 又可分為兩種，一種為黃色、透明、質(zhì)地疏松的愈傷組織（圖7)，另一種為白色的、疏松的、 棉絮狀愈傷組織（圖8)。添加NAA的培養(yǎng)基，愈傷組織多表現(xiàn)為白色（全暗培養(yǎng)）且質(zhì)地 堅(jiān)硬緊密（圖9,10)(有效愈傷組織）。
[0071] 表2 2,4-D和NAA對(duì)花藥愈傷組織誘導(dǎo)的影響
[0072] Tab