少量瓊脂的再生苗植株，在緩慢流水中用軟刷仔細清洗根部沾有的瓊脂塊，將清洗干凈的再生苗植株移栽至添加蛭石的消毒土中，在培養(yǎng)容器上罩以聚乙烯塑料薄膜以保持培養(yǎng)容器的濕度，培養(yǎng)容器置于陰涼地，5天即可揭開塑料蒲膜，于陰涼處培養(yǎng)7d后移至大田。經(jīng)統(tǒng)計，組培再生苗移栽的成活率為98.3%。
[0013]實施例2
本實施例與實施例1的區(qū)別在于第一MS基本培養(yǎng)基添加的組分不同，以此試驗不同培養(yǎng)基對叢生芽誘導(dǎo)率的影響:
添加了 6-BA+NAA的第一 MS基本培養(yǎng)基的叢生芽誘導(dǎo)率為14.5%_48.6%，平均不定芽數(shù)為1.3-2.8個，最佳的組合為6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,其叢生芽誘導(dǎo)率為48.4%，平均不定芽數(shù)為2.8個。
[0014]添加了 6-BA+IAA的第一 MS基本培養(yǎng)基的叢生芽誘導(dǎo)率為15.6%_50.4%，平均不定芽數(shù)為1.4-3.3個，最佳的組合為6-BA 2.0 mg/L+IAA 1.5 mg/L，其叢生芽誘導(dǎo)率為50.4%，平均不定芽數(shù)為3.3 ；
添加了 6-BA+TDZ的第一MS基本培養(yǎng)基的叢生芽誘導(dǎo)率為45.7%_83.2%，平均不定芽數(shù)為2.5-5.4，最佳的組合為6-BA 2.0 mg/L+TDZ 1.0 mg/L，其叢生芽誘導(dǎo)率為83.2%，平均不定芽數(shù)為5.4個；
添加了 ZT+NAA的第一MS基本培養(yǎng)基的叢生芽誘導(dǎo)率為37.4%_74.2%，平均不定芽數(shù)為
2.3-4.8個，最佳的組合為ZT 0.5 mg/L +NAA 0.5 mg/L，其叢生芽誘導(dǎo)率為74.2%，平均不定芽數(shù)為4.8個；
添加了 ZT +IAA的第一 MS基本培養(yǎng)基的叢生芽誘導(dǎo)率為36.5%_74.5%，平均不定芽數(shù)為2.4-4.7個，最佳的組合為ZT 0.5 mg/L +NAA 0.5 mg/L,其叢生芽誘導(dǎo)率為74.5%，平均不定芽數(shù)為4.7個；
添加了 TDZ+NAA的第一 MS基本培養(yǎng)基的叢生芽誘導(dǎo)率為17.4%_58.3%，平均不定芽數(shù)為2.1-3.6個，最佳的組合為TDZ 1.0mg/L +NAA 0.5 mg/L,其叢生芽誘導(dǎo)率為58.3，平均不定芽數(shù)為3.6 ；
表明細胞分裂素在促進叢生芽誘導(dǎo)中起了決定性作用，而生長素(NAA、IAA)主要起到了促進芽伸長的作用。
[0015]實施例3
本實施例與實施例1的區(qū)別在于第二MS基本培養(yǎng)基添加的組分不同，以此試驗不同培養(yǎng)基對不定芽增殖的影響:
添加了 6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IAA 1.5 mg/L的第二MS基本培養(yǎng)基，不定芽增值率達到5.8。
[0016]添加了6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L 的第二 MS 基本培養(yǎng)基，不定芽增值率達到5.95。
[0017]實施例4
本實施例與實施例1的區(qū)別在于1/4強度的MS基本培養(yǎng)基添加的組分不同，以此試驗不同培養(yǎng)基對生根率的影響:
添加了 NAA 0.3 mg/L的1/4強度的MS基本培養(yǎng)基，生根率為92.8%。
[0018]添加了 IAA 1.0 mg/L的1/4強度的MS培養(yǎng)基，生根率為92.5%。
[0019]對比上述實施例可發(fā)現(xiàn)，實施例1最終可獲得最多的再生苗植株，為最佳的實施例。
[0020]文中所涉及縮略詞的含義:
6-BA 6-芐基腺嘌呤
NAA α-萘乙酸 IAA 吲哚-3-乙酸 IBA 吲哚丁酸 TDZ 噻苯隆 ZT玉米素
MS培養(yǎng)基Murashige和Skoog (1962)報道的培養(yǎng)基 d 天 h 小時 min 分鐘。
【主權(quán)項】
1.一種白接骨的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟: ①叢生芽的誘導(dǎo):3月取材的外植體在添加了6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.15 mg/L的MS基本培養(yǎng)基培養(yǎng)到芽長3 cm時取出，沿著莖切將兩側(cè)腋芽分開，然后轉(zhuǎn)移接種于第一 MS基本培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為(25±1) °C，光照時間為14 h光/10h 暗，光照強度 30.1-40 ymol/(m2.s)； 所述的第一 MS基本培養(yǎng)基添加了:6-BA 0.1-3.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L,6-BA 0.1-3.0 mg/L+1AA 0.1-3.0 mg/L、6-BA 0.1-3.0 mg/L +TDZ 0.1-2.0 mg/L、6-BA 0.1-3.0 mg/L +ZT 0.1-2.0 mg/L、ZT 0.1-2.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L,ZT 0.1-2.0 mg/L+IAA 0.1-3.0 mg/L 或TDZ 0.1-2.0 mg/L+NAA 0.1-1.0 mg/L ； ②不定芽的增殖生長:將上步誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽切成2-3個一組，轉(zhuǎn)接于第二MS基本培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)室光照培養(yǎng)； 所述的第二 MS基本培養(yǎng)基添加了:6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+NAA 0.1-1.0mg/L、6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IBA 0.1-1.0 mg/L 或6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IAA0.1-3.0 mg/L ； ③不定芽的生根培養(yǎng):將上步增殖培養(yǎng)獲得的不定芽叢切成單個不定芽，轉(zhuǎn)接到添加了 NAA 0.1-1.0 mg/L,IAA 0.1-3.0 mg/L 或 IBA 0.1-1.0 mg/L 的 1/4 強度的 MS 基本培養(yǎng)基中； ④再生苗的煉苗和移栽:將上步完成生根培養(yǎng)的不定芽的培養(yǎng)瓶打開一條縫，讓其與外部空氣相通，6 h后半開瓶蓋，加入少量無菌水以保持培養(yǎng)基的濕潤，過Id后完全打開瓶蓋，讓它完全接受培養(yǎng)室的日光燈管的直接光照2d后將培養(yǎng)基搗碎，小心取出帶少量瓊脂的再生苗植株，在緩慢流水中用軟刷仔細清洗根部沾有的瓊脂塊，將清洗干凈的再生苗植株移栽至添加蛭石的消毒土中，在培養(yǎng)容器上罩以聚乙烯塑料薄膜以保持培養(yǎng)容器的濕度，培養(yǎng)容器置于陰涼地，5天即可揭開塑料蒲膜，于陰涼處培養(yǎng)7d后移至大田。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白接骨的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述的第一 MS 基本培養(yǎng)基添加了 6-BA 0-3.0 mg/L +ZT 0-2.0 mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種白接骨的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:所述的第二 MS 基本培養(yǎng)基添加了:6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L,6-BA 2.0 mg/L+ZT 0.5 mg/L+IAA 1.5 mg/L 或 6-BA 2.0 mg/L +ZT 0.5 mg/L+IBA 0.3 mg/L。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種白接骨的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：①叢生芽的誘導(dǎo)：3月取材的外植體在添加了6-BA+NAA的MS基本培養(yǎng)基培養(yǎng)到芽長3cm時取出，沿著莖切將兩側(cè)腋芽分開，然后轉(zhuǎn)移接種于添加了6-BA+ZT的第一MS基本培養(yǎng)基，②不定芽的增殖生長：將上步誘導(dǎo)產(chǎn)生的叢生芽切成2-3個一組，轉(zhuǎn)接于添加了6-BA +ZT+NAA的第二MS基本培養(yǎng)基；③不定芽的生根培養(yǎng)：將上步增殖培養(yǎng)獲得的不定芽叢切成單個不定芽，轉(zhuǎn)接到添加了NAA的1/4強度的MS基本培養(yǎng)基中；④再生苗的煉苗和移栽。采用本發(fā)明的方法，能夠快速地獲得白接骨再生苗植株，利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104813940
【申請?zhí)枴緾N201510251937
【發(fā)明人】孫駿威, 朱誠, 王飛娟, 丁艷菲, 江瓊, 蔡沖
【申請人】中國計量學院
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月18日