一種采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于瀕危野生植物中重要植物材料快速繁殖方法，特別是涉及一種采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]石仙Pholidota chinensis Lindl.)是蘭科(orchidaceae )石仙桃屬(pholidota)植物，別名石橄欖、石上仙桃和石蓮。多年生附生草本，肉質(zhì)肥厚呈瓶狀或卵形的根狀莖橫走，葉兩片，頂生于假鱗莖之上，紙質(zhì)而較柔嫩。石仙桃多糖具有較好的抗氧化作用。特別是抗超氧陰離子作用。石仙桃中多糖不僅含量較高，而且具有養(yǎng)陰，清肺，利濕，消瘀等功能，用于眩暈，頭痛，咳嗽，吐血，夢(mèng)遺，痢疾，白帶，疳積，同時(shí)還具有:麻醉，益胃，止咳，抗癌以及提高免疫作用。石仙桃屬植物全球約30種，分布于熱帶亞洲至澳大利亞和太平洋一些島嶼。在我國(guó)主要分布于云南、廣東、廣西、貴州、浙江、福建、江西等省，其中尤以云南西南地區(qū)多見(jiàn)。目前在市場(chǎng)上出現(xiàn)的石仙桃屬植物多數(shù)來(lái)自野生資源，而石仙桃種子在自然狀況下極難萌發(fā)，主要靠分株繁殖，速度慢。若無(wú)計(jì)劃、無(wú)目的、盲目過(guò)度采挖，必將嚴(yán)重破壞其自然資源，稀有種類(lèi)就會(huì)處于漸?；驖u臨滅絕的狀態(tài)。所以，必須采取措施保護(hù)其自然資源。目前誘導(dǎo)石仙桃鱗莖植株再生未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中種子在自然狀況下極難萌發(fā)、自然繁衍能力、傳播擴(kuò)散能力不強(qiáng)，自然更新困難、分株繁殖速度慢等問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法，為規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。
[0004]本發(fā)明的方法是以如下方式實(shí)現(xiàn)的:
本發(fā)明的一種采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法，具體步驟如下
1)材料選取與消毒:選取新鮮飽滿的石仙桃假鱗莖為外植體，去除葉2\3部分和假鱗莖周?chē)s質(zhì)，用洗滌劑漂洗干凈，置于流水中沖滴0.5-lh，然后進(jìn)行消毒處理，消毒完成后進(jìn)行接種；
2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)消毒處理的材料，經(jīng)濾紙吸干表面水分后接種于經(jīng)高溫、高壓滅菌的鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23±2°C，光照時(shí)間8h/d，光照強(qiáng)度500 ?100lx ；
3)增殖培養(yǎng):將經(jīng)上述誘導(dǎo)培養(yǎng)，所得到的生長(zhǎng)良好的直徑成長(zhǎng)為0.2-0.5 cm的假鱗莖，接種在增殖培養(yǎng)基中，光照時(shí)間8h/d，光照強(qiáng)度1000?15001x ；
4)誘導(dǎo)生根:將增殖培養(yǎng)出來(lái)的帶有小葉片的假鱗莖無(wú)根幼苗單株，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；光照時(shí)間10h/d，光照強(qiáng)度1500?1800Ix ;
5)移栽:當(dāng)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)試管苗生長(zhǎng)至根I?3條，新葉1-2片時(shí)，將試管苗放在自然光下煉苗5?7天，打開(kāi)瓶蓋煉苗1-2天；然后取出培養(yǎng)苗，洗去附著在根系上的培養(yǎng)基，移入水草和腐殖土質(zhì)量比為I: 2的混合基質(zhì)中，保濕遮陰，溫度控制在15?25°C，濕度應(yīng)保持在75 %?85 %，避免陽(yáng)光直射，獲得生長(zhǎng)健壯的完整再生植株。
[0005]上述所涉及的培養(yǎng)基:
(1)鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:VW+2.0 mg/L 6-BA +0.01 mg/L TDZ+0.3mg/LNAA+ 1.5g 噸―1 蛋白胨+25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5 g ?L ^0+30 g *L 1 香蕉+60 g *L 1 土顯，pH 值為 5.4-5.6 ;
(2)增殖培養(yǎng)基:Vff+3.0mg/L 6-BA+0.01 mg/L TDZ+ 0.5mg/LNAA + 2g.171 蛋白胨+30g.L 1 香蕉 +70 g.L 1 土顯 +25g/L Su+6.5g/L 1 Ag+1.5 g.L 1Ac, pH 值為 5.4-5.6 ；
(3)生根培養(yǎng)基:1/2VW+1.0 mg/L IBA+0.3 mg/L NAA+25g/L Su+6.5g/LAg+l.5g.I^1Ac，pH 值為 5.4-5.6 ；
以上涉及:1、Ag為(Agar培養(yǎng)基凝固劑和支持物瓊脂粉的縮寫(xiě))。
[0006]2、Su為(Sugar提供植物碳源和維持滲透壓蔗糖的縮寫(xiě))。
[0007]3、Ac為活性炭。
[0008]4、成熟度為80%香蕉(未經(jīng)各種催熟處理)。
[0009]5、土豆(為市售新鮮食用土豆，優(yōu)選淀粉含量少的品種)。
[0010]本發(fā)明揭示了一種石仙桃植株再生及快速繁殖技術(shù)，經(jīng)過(guò)25-35d誘導(dǎo)培養(yǎng)，60-70d增殖培養(yǎng)，30-40d誘導(dǎo)生根，保濕遮陰，避免陽(yáng)光直射，移栽成活率達(dá)95%以上。2周后植株適應(yīng)能力逐漸增強(qiáng)，獲得生長(zhǎng)健壯的完整再生植株。應(yīng)用生物技術(shù)方法得到石仙桃再生植株有助于解決資源匱乏、緩解野生資源遭受?chē)?yán)重破壞的壓力，以有效地保護(hù)有限野生資源，為規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。
[0011]本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn):
一:通過(guò)本發(fā)明方法可以最大限度地應(yīng)用現(xiàn)有資源，通過(guò)生物技術(shù)手段在短時(shí)間內(nèi)解決稀缺資源的應(yīng)用需求；
二:有助于解決資源匱乏、緩解野生資源遭受?chē)?yán)重破壞的壓力，有效地保護(hù)有限的野生資源，為規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化提供技術(shù)支持。
[0012]三:石仙桃鱗莖分株繁殖速度慢，有關(guān)石仙桃鱗莖高效繁殖方法未見(jiàn)報(bào)道。
[0013]四:石仙桃小鱗莖在鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)后逐漸變綠、長(zhǎng)大，增殖系數(shù)高、生根率高，植物生長(zhǎng)需求時(shí)間短，栽培后適應(yīng)性強(qiáng)，苗木健壯挺拔，長(zhǎng)勢(shì)良好，整齊一致，大大縮短了苗木培養(yǎng)過(guò)程，節(jié)約了大量成本。為石仙桃的保護(hù)，以及規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持。
[0014]五:總結(jié)出一套可供生產(chǎn)單位應(yīng)用石仙桃鱗莖高效微體繁殖技術(shù)，通過(guò)應(yīng)用該技術(shù)建立石仙桃生產(chǎn)基地。因此，石仙桃鱗莖繁育的廣泛應(yīng)用可直接提高珍稀品種人工林地產(chǎn)量、質(zhì)量和園林綠化水平，實(shí)現(xiàn)資源高效培育，具有十分廣闊的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展前景。本發(fā)明倉(cāng)撕性強(qiáng)，技術(shù)含量高，公益性強(qiáng)，對(duì)于促進(jìn)珍稀蘭花品種的研宄、利用，有著良好前景和及其重要意義，為開(kāi)發(fā)利用該種資源提供了理論依據(jù)和技術(shù)支持。
【具體實(shí)施方式】
[0015]實(shí)施例1
一種誘導(dǎo)石仙桃鱗莖植株再生及繁殖應(yīng)用技術(shù)，具體步驟如下
I)材料選取與消毒:1、選取飽滿石仙桃假鱗莖為外植體，采摘后用保鮮袋包裝，帶回實(shí)驗(yàn)室后去除葉2\3部分和假鱗莖周?chē)s質(zhì)，用洗滌劑漂洗干凈，置于流水中沖滴0.5h ;2、植株消毒處理:將沖洗后帶葉假鱗莖植株用雙蒸水沖蕩2次，置超凈工作臺(tái)內(nèi)用75%酒精消毒30s后倒去酒精，加入0.1%升汞(HgCl2)處理8min，將汞液倒入廢汞瓶，無(wú)菌水沖蕩3遍，即可接種；
2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將消毒處理材料，經(jīng)濾紙吸干表面水分后帶1\3葉部分和假鱗莖植株整個(gè)接種于經(jīng)高溫、高壓滅菌的鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23°C，光照時(shí)間8h/d，光照強(qiáng)度8001x，培養(yǎng)時(shí)間25d ;假鱗莖逐漸適應(yīng)專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)配制的培養(yǎng)基并在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)后逐漸變綠、長(zhǎng)大；
3)增殖培養(yǎng):將經(jīng)上述誘導(dǎo)培養(yǎng)，所得到生長(zhǎng)良好直徑成長(zhǎng)為0.4cm的假鱗莖，分別接種在增殖培養(yǎng)基中，光照時(shí)間8h/d，光照強(qiáng)度12001x，，增殖培養(yǎng)時(shí)間60d ；
4)誘導(dǎo)生根:將繼代誘導(dǎo)培養(yǎng)出來(lái)的帶有小葉片的假鱗莖無(wú)根幼苗單株分接，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；光照時(shí)間10h/d，光照強(qiáng)度16001x，誘導(dǎo)生根時(shí)間30d ；
5)試管苗培養(yǎng)完成:當(dāng)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)試管苗生長(zhǎng)至根I條，新葉I片時(shí)完成誘導(dǎo)石仙桃植株再生并可以進(jìn)行周期性繁殖培養(yǎng)；
6)移栽:將完成生根培養(yǎng)試管苗放在自然光下煉苗6天，打開(kāi)瓶蓋煉苗I天，增強(qiáng)試管苗對(duì)室外環(huán)境的適應(yīng)能力；然后用攝子從培養(yǎng)瓶中取出培養(yǎng)苗，洗去附著在根系上的培養(yǎng)基，移入水草和腐殖土(1:2)混合的基質(zhì)中，保濕遮陰(溫度控制在20°C)，濕度保持在80%,避免陽(yáng)光直射，成活率可達(dá)95%以上。I周后植株適應(yīng)能力逐漸增強(qiáng)，獲得生長(zhǎng)健壯的完整再生植株。
[0016]培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基厚度為1.5cm左右，pH值為5.5 ；
(1)鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基VW+2.0 mg/L 6-BA +0.01 mg/L TDZ+0.3mg/LNAA+ 1.5g.Γ1蛋白胨 +25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5 g.L ^0+30 g.L 1 香蕉 +60 g.L 1 土? ；
(2)增殖培養(yǎng)基Vff+3.0mg/L 6-BA+0.01 mg/L TDZ+ 0.5mg/LNAA + 2g.L—1蛋白胨+30 g.L-1 香蕉 +70 g.L-1 土豆 +25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5 g.L-1Ac ；
(3)生根培養(yǎng)基1/2VW+1.0 mg/L IBA+0.3 mg/L NAA+25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5g * [1Ac ；
以上涉及:1、Ag為(Agar培養(yǎng)基凝固劑和支持物瓊脂粉的縮寫(xiě))
2、Su為(Sugar提供植物碳源和維持滲透壓蔗糖的縮寫(xiě))
3、Ac為活性炭
4、成熟度為80%香蕉(未經(jīng)各種催熟處理)
5、土豆(為市售新鮮食用土豆)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: 1)材料選取與消毒:選取新鮮飽滿的石仙桃假鱗莖為外植體，去除葉2\3部分和假鱗莖周?chē)s質(zhì)，用洗滌劑漂洗干凈，置于流水中沖滴0.5-lh，然后進(jìn)行消毒處理，消毒完成后進(jìn)行接種； 2)誘導(dǎo)培養(yǎng):將經(jīng)消毒處理的材料，經(jīng)濾紙吸干表面水分后接種于經(jīng)高溫、高壓滅菌的鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；培養(yǎng)條件:培養(yǎng)室溫度為23±2°C，光照時(shí)間8h/d，光照強(qiáng)度500 ?100lx ； 3)增殖培養(yǎng):將經(jīng)上述誘導(dǎo)培養(yǎng)，所得到的生長(zhǎng)良好的直徑成長(zhǎng)為0.2-0.5 cm的假鱗莖，接種在增殖培養(yǎng)基中，光照時(shí)間8h/d，光照強(qiáng)度1000?15001x ； 4)誘導(dǎo)生根:將增殖培養(yǎng)出來(lái)的帶有小葉片的假鱗莖無(wú)根幼苗單株，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中；光照時(shí)間10h/d，光照強(qiáng)度1500?1800Ix ; 5)移栽:當(dāng)誘導(dǎo)生根培養(yǎng)試管苗生長(zhǎng)至根I?3條，新葉1-2片時(shí)，將試管苗放在自然光下煉苗5?7天，打開(kāi)瓶蓋煉苗1-2天；然后取出培養(yǎng)苗，洗去附著在根系上的培養(yǎng)基，移入水草和腐殖土質(zhì)量比為I: 2的混合基質(zhì)中，保濕遮陰，溫度控制在15?25°C，濕度應(yīng)保持在75 %?85 %，避免陽(yáng)光直射，獲得生長(zhǎng)健壯的完整再生植株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法，其特征在于:所述鱗莖芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:VW+2.0 mg/L 6-BA +0.01 mg/L TDZ+0.3mg/LNAA+ L 5g.Γ1蛋白胨+25g/L Su+6.5g/L Ag+1.5 g.L-1Ac+30 g.L4 香蕉+60 g.L4土豆，pH 值為5.4~5.60
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法，其特征在于:所述增殖培養(yǎng)基:Vff+3.0mg/L 6-BA+0.01 mg/L TDZ+ 0.5mg/LNAA + 2g.1/1 蛋白胨+30g.L 1 香蕉 +70 g.L 1 土顯 +25g/L Su+6.5g/L 1 Ag+1.5 g.L 1Ac, pH 值為 5.4-5.6。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法，其特征在于:所述生根培養(yǎng)基:1/2VW+1.0 mg/L ΙΒΑ+0.3 mg/L NAA+25g/L Su+6.5g/LAg+l.5g.L 1Ac, pH 值為 5.4-5.6。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于瀕危野生植物中重要植物材料快速繁殖方法，特別是涉及一種采用假鱗莖誘導(dǎo)石仙桃植株再生及繁殖的方法。該方法包括材料選取與消毒、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、誘導(dǎo)生根和移栽。本發(fā)明為了解決現(xiàn)有技術(shù)中種子在自然狀況下極難萌發(fā)、自然繁衍能力、傳播擴(kuò)散能力不強(qiáng)，自然更新困難、分株繁殖速度慢等問(wèn)題，為規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。本發(fā)明增殖系數(shù)高、生根率高，植物生長(zhǎng)需求時(shí)間短，栽培后適應(yīng)性強(qiáng)，苗木健壯挺拔，長(zhǎng)勢(shì)良好，整齊一致，大大縮短了苗木培養(yǎng)過(guò)程，節(jié)約了大量成本。為石仙桃的保護(hù)，以及規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)推廣應(yīng)用提供技術(shù)支持。
【IPC分類(lèi)】A01H4-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104813936
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510234195
【發(fā)明人】何碧珠, 林蔚, 何官榕
【申請(qǐng)人】福建農(nóng)林大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月5日
【申請(qǐng)日】2015年5月11日