本發(fā)明涉及一種光控緩釋農(nóng)藥制劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

農(nóng)藥是重要的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料，長久以來，化學(xué)農(nóng)藥的發(fā)展及其應(yīng)用在及時有效地控制農(nóng)藥病蟲害、保障農(nóng)產(chǎn)品高產(chǎn)增產(chǎn)中發(fā)揮了不可替代的重要作用，極大的推動了農(nóng)業(yè)的發(fā)展。但農(nóng)藥在噴灑過程中容易隨著雨水沖刷而大量流失到環(huán)境中，導(dǎo)致農(nóng)藥持效期短、有效利用率低，在環(huán)境中的農(nóng)藥活性成分容易降解，影響到防治效果。為實現(xiàn)良好的防治效果，必須多次、大量的噴施農(nóng)藥，消耗了大量的人力、物力與財力，對生態(tài)環(huán)境也造成了危害。

因此運用現(xiàn)代科技前沿手段，發(fā)展先進的農(nóng)藥劑型加工技術(shù)，提高農(nóng)藥有效利用率，降低其在非靶標區(qū)域和環(huán)境中的投放量與殘留污染，對于緩解我國農(nóng)藥當(dāng)前的殘留和環(huán)境污染問題，保障糧食生產(chǎn)、食品與生態(tài)安全，促進農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要的意義。

近年來，納米科技的迅猛發(fā)展，為農(nóng)藥控釋技術(shù)的發(fā)展提供了新思路。利用納米材料和技術(shù)作為載體和支撐構(gòu)建納米載藥系統(tǒng)，制備新型的控緩釋納米農(nóng)藥制劑，是克服傳統(tǒng)藥物劑型缺陷的有效途徑。

控緩釋農(nóng)藥是目前農(nóng)藥劑型研究的熱點之一，但是，目前控緩釋農(nóng)藥仍然存在一些問題：

(1)目前大多數(shù)控緩釋農(nóng)藥，只具備緩釋能力，并不真正具備在特定情況下控制釋放的能力；

(2)目前控緩釋農(nóng)藥主要依靠藥物活性成分自由擴散，限制了控緩釋農(nóng)藥的使用范圍；

(3)部分控緩釋農(nóng)藥使用無機離子如納米級二氧化硅、二氧化鈦為載體，現(xiàn)以證明無機納米粒子具備一定的環(huán)境毒性，使用此類納米控緩釋農(nóng)藥，將增大農(nóng)藥的環(huán)境風(fēng)險。

光敏控釋體系是指利用對光線(一般是紫外線和紅外線)敏感的化學(xué)材料作為壁材制備而成的控緩釋體系，由于其具有定時定量釋放內(nèi)含活性成分的能力，引起了大量科研工作者的關(guān)注。目前光敏控釋體系主要應(yīng)用在醫(yī)藥上，農(nóng)藥上相關(guān)的研究相對滯后。光控緩釋農(nóng)藥主要有兩種形式，一種是以光敏材料包被藥物，在光照下光敏下材料分解，釋放出內(nèi)含的藥物；一種是以光敏性化學(xué)鍵將藥物偶聯(lián)到載體上，在光照下光敏化學(xué)鍵斷裂，釋放出負載的藥物。

海藻酸鈉是從海藻中提取的天然多糖類化合物，是一種綠色可再生的海洋資源。結(jié)構(gòu)式如下：

海藻酸鈉由α-l-古洛糖醛酸(g段)和β-d-甘露糖醛酸(m段)兩種結(jié)構(gòu)單元組成，分子內(nèi)兩種結(jié)構(gòu)單元以gg、gm、mg、mm四種形式按(1-4)糖苷鍵連接而成的無規(guī)則線性聚合物。海藻酸鈉與三價金屬離子，結(jié)合可以形成穩(wěn)定的凝膠，所形成的凝膠可以用于醫(yī)藥及農(nóng)藥的藥物載體。銪是一種金屬元素，銪原子在光照下會處于激發(fā)態(tài)，具備特殊的光學(xué)特性，其常見形式為氯化銪。根據(jù)materialsafetydata氯化銪對大鼠的經(jīng)口ld50＝3500mg/kg(氯化鈉大鼠經(jīng)口ld50＝3000mg/kg)，所以毒性并不大，與食鹽相當(dāng)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種光控緩釋納米噻唑鋅制劑，以海藻酸銪為包被材料，以被包埋的非水溶性農(nóng)藥為活性成分。本發(fā)明利用可光降解的海藻酸銪凝膠制備農(nóng)藥光敏控緩釋體系，實現(xiàn)農(nóng)藥的光控緩釋。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種光控緩釋農(nóng)藥制劑，以光敏載體海藻酸銪微球為載體，以包埋和/或鑲嵌于載體中的農(nóng)藥為活性成分。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的改進：所述制劑中，作為有效成分的農(nóng)藥的重量含量為5～95％。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的進一步改進：所述制劑為多孔納米顆粒形式，顆粒直徑為50～1000nm。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的進一步改進：所述農(nóng)藥(活性成分)為常規(guī)化學(xué)農(nóng)藥，或者為仿生農(nóng)藥、生物農(nóng)藥、昆蟲信息素。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的進一步改進：所述農(nóng)藥為以下任意一種：

為非水溶、有機溶劑也難溶的農(nóng)藥(例如噻唑鋅等)，為常規(guī)脂溶性農(nóng)藥(例如茚蟲威、氯蟲苯甲酰胺、嘧菌酯等)，為水溶性農(nóng)藥(例如井岡霉素、春雷霉素等)。

本發(fā)明還同時提供了上述光控緩釋農(nóng)藥制劑的制備方法，包括以下步驟：

將活性成分(即，原藥，農(nóng)藥)、表面活性劑和海藻酸鈉溶液混合并均勻分散(體系中或者還包括助溶劑)，然后加入銪鹽水溶液，使分散均勻并反應(yīng)后，進行固液分離，所得固體即為以海藻酸銪微球為載體的光控緩釋農(nóng)藥制劑。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的制備方法的改進，其包括以下步驟：

將活性成分(原藥)和海藻酸鈉加入超純水中，分散均勻，得原藥溶液；

將表面活性劑和有機溶劑混合，分散均勻；得分散體系；

把原藥溶液倒入分散體系中，進行剪切分散(使用高剪切乳化機剪切分散)，得到原藥的微乳體系，然后滴加銪鹽水溶液，剪切(快速剪切)；加入破乳劑破乳，離心，得到沉淀即為以海藻酸銪微球為載體的光控緩釋農(nóng)藥制劑。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的制備方法的進一步改進：

表面活性劑為十二烷基三甲基溴化銨(dtab)、十六烷基三甲基溴化銨(ctab)、十二烷基苯磺酸鈉、苯乙烯基苯酚甲醛樹脂、萘磺酸甲醛縮合物、聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段型聚醚、烷基苯酚聚氧乙烯醚、辛基酚聚氧乙烯醚、壬基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯、磺酸酷類、酞胺類、有機硅類中的至少一種(為一種或多種)；

所述銪鹽為氯化銪。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的制備方法的進一步改進：

有機溶劑為5～10個碳的烷烴或環(huán)烷烴；

助溶劑為1～9個碳的醇。

作為本發(fā)明的光控緩釋農(nóng)藥制劑的制備方法的進一步改進：所述有機溶劑為環(huán)己烷；

所述助溶劑為異丙醇、正丁醇。

在本發(fā)明中，

1)光敏凝膠海藻酸銪的制備

將海藻酸鈉溶于超純水中，攪拌均勻，配制成0.025m的海藻酸鈉溶液。將0.025m的海藻酸鈉溶液其滴加入0.01m的氯化銪水溶液中，海藻酸鈉溶液在氯化銪溶液中表面瞬間固化，會瞬時反應(yīng)生成直徑3-4mm之間、球狀內(nèi)外均勻的膠粒，室溫靜置8h后將膠粒過濾出置于超純水中浸泡24h，使膠粒內(nèi)外銪離子平衡。

2)光控緩釋農(nóng)藥(例如為光控緩釋納米噻唑鋅)制備：

將農(nóng)藥(例如為納米噻唑鋅)、海藻酸鈉加入超純水中，分散均勻。將表面活性劑和有機溶劑混合，分散均勻。將配置好的海藻酸鈉與農(nóng)藥(例如為納米噻唑鋅)的混合溶液加入到含有表面活性劑的有機溶劑體系中，使用高速剪切機剪切，得到穩(wěn)定的納米微乳液，在攪拌狀態(tài)下加入銪鹽溶液，加入95％乙醇破除乳化，進行固液分離，所得固體即為海藻酸銪包被農(nóng)藥(例如為納米噻唑鋅)納米微球。固液分離優(yōu)選采用高速離心機完成。優(yōu)選將固液分離所得的固體用異丙醇清洗數(shù)次，然后干燥。

優(yōu)選通過超聲波使溶液中各相分散均勻。

本發(fā)明的光控緩釋制劑是以海藻酸鈉、可溶性銪鹽、表面活性劑、助溶劑和有機溶劑為主要原料，通過反相微乳液的形成及其界面化學(xué)反應(yīng)，將農(nóng)藥(例如納米噻唑鋅)包埋在海藻酸銪中。

根據(jù)本發(fā)明的以海藻酸銪納米微球為載體的水溶性農(nóng)藥緩控釋制劑，可以有效地控制農(nóng)藥釋放速度，延長作用時間，減少施藥次數(shù)，降低了人力物力和財力成本，同時降低了環(huán)境污染；該還能避免農(nóng)藥的有效成分在使用過程中的降解，提高了有效利用率。

本發(fā)明的納米噻唑鋅光控緩釋制劑的制備方法具有反應(yīng)條件溫和、制備工藝簡單、快速、成本低、載藥量大、無有害添加劑、所合成的載體可降解、無次生污染等特點，是一種適合于產(chǎn)業(yè)應(yīng)用的制備方法。

海藻酸鈉結(jié)構(gòu)中含有大量的糖醛酸基團，而糖醛酸基團在強紫外線的照射下會發(fā)生很緩慢的脫羧反應(yīng)；銪原子具備特殊的光學(xué)特性，在激光材料及原子能工業(yè)中有重要的應(yīng)用。本發(fā)明在研究中發(fā)現(xiàn)海藻酸鈉與氯化銪可交聯(lián)形成海藻酸銪凝膠，所形成的凝膠在300w紫外線作用下會發(fā)生較快的脫羧脫羧反應(yīng)，釋放出二氧化碳和銪離子，造成凝膠結(jié)構(gòu)崩解，表現(xiàn)為凝膠體積逐漸減小，而海藻酸鈉與其他金屬離子結(jié)合形成的凝膠則沒有這種現(xiàn)象或這種現(xiàn)象不明顯。其可能原因是銪原子受光照激發(fā)，催化海藻酸鈉中的糖醛酸基團發(fā)生較快速的脫羧反應(yīng)，導(dǎo)致海藻酸鈉的基本結(jié)構(gòu)被破壞。海藻酸銪凝膠的這一特性和應(yīng)用尚未見報道，在發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象后，本發(fā)明利用海藻酸銪凝膠在紫外照照射下逐漸崩解的特性，創(chuàng)新性的將其應(yīng)用于控緩釋農(nóng)藥制劑的制備，所制備的控緩釋農(nóng)藥制劑，在紫外照射下，表面的海藻酸銪結(jié)構(gòu)逐漸崩解，釋放出內(nèi)含的農(nóng)藥活性成分，而在黑暗情況下，凝膠結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化能有效保護內(nèi)含的活性成分，從而實現(xiàn)農(nóng)藥控制釋放，達到延長農(nóng)藥持效期，減少農(nóng)藥施用次數(shù)的目的。

根據(jù)本發(fā)明制備的光控緩釋納米噻唑鋅粒徑大小、藥物裝載量均具有可控性，能適應(yīng)各種不同的噴施環(huán)境，在農(nóng)藥制劑領(lǐng)域特別是緩控釋制劑領(lǐng)域具有可觀的應(yīng)用前景。

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的弊端，采用安全、無毒、大小可控的光敏納米材料海藻酸銪作為農(nóng)藥載體來通過光照控制農(nóng)藥的釋放速度。所制備的光敏載體微球主要用于防治農(nóng)作物病蟲害，此類載藥系統(tǒng)安全可控，可以有效控制釋放速度，延長藥效，提高農(nóng)藥有效成分的穩(wěn)定性，減少施藥次數(shù)和農(nóng)藥用量，不易被環(huán)境破壞和流失，從而提高農(nóng)藥的生物利用度。

本發(fā)明提供的海藻酸銪光敏微球在農(nóng)藥控緩釋中的應(yīng)用，其中所述海藻酸銪微球為大小可控的透明凝膠狀材料。本發(fā)明中，所述農(nóng)藥可以是非水溶，有機溶劑也難溶的農(nóng)藥，例如噻唑鋅；可以是常規(guī)脂溶性農(nóng)藥，例如茚蟲威、氯蟲苯甲酰胺、嘧菌酯等；也可以是水溶性農(nóng)藥，例如井岡霉素，春雷霉素等；也可以是昆蟲信息素、bt蛋白、多肽類藥物等生物農(nóng)藥或微生物殺蟲劑。

在本發(fā)明中，室溫一般是指20～25℃。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細說明。

圖1為光敏凝膠經(jīng)紫外照射后形態(tài)變化；

a、光照之前，粒子直徑約4mm；b、光照4h之后，凝膠直徑約1mm；c、光照8h后，凝膠肉眼不可見；

圖2為不同海藻酸鈉濃度的光敏微球直徑隨光照時間變化情況；

圖3為藥物濃度隨光照時間的變化情況；

圖4為噻唑鋅光敏微球累計釋放率；

圖5為光控緩釋納米噻唑鋅的粒徑分布圖；

圖6為納米噻唑鋅包被光敏材料前后的掃描電鏡圖(sem)；

左圖為納米噻唑鋅原藥，右圖為光敏材料包被納米噻唑鋅后；

圖7光控緩釋納米嘧菌酯sem圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行進一步描述，但本發(fā)明的保護范圍并不僅限于此。

本發(fā)明中所使用的透射電鏡為ht-7700場發(fā)射透射電子顯微鏡(日本日立公司)；掃描電鏡為su8010掃描電子顯微鏡(日本日立公司)；液相色譜為島津lc-10at；粒度測定儀為nano-zs90激光粒度分析儀。

實施例1、光敏凝膠海藻酸銪的制備

將50mg海藻酸鈉(m＝398.31)溶于10ml超純水中，攪拌均勻，配制成0.5％wt的海藻酸鈉溶液。將0.5％wt的海藻酸鈉溶液滴加入30ml0.01m的氯化銪(m＝366.32)水溶液中，每滴下一滴，海藻酸鈉溶液在氯化銪溶液中表面瞬間固化，都會瞬時反應(yīng)生成直徑3-4mm之間、球狀內(nèi)外均勻的膠粒，約20min滴加完畢，滴加完畢后室溫(20-25℃)靜置8h后將膠粒過濾出置于超純水中浸泡24h，使膠粒內(nèi)外銪離子平衡。

海藻酸銪凝膠光敏特性觀察：

將制備所得的海藻酸銪微球，取出適量置于培養(yǎng)皿中，用于防止光照過程中微球內(nèi)含的水分蒸發(fā)對微球的影響，向培養(yǎng)皿中加入20ml水。使用300w紫外燈照射對海藻酸銪微球照射，光源距離25cm，每間隔一定時間向體系中補充適量的水，保持體系內(nèi)水的體積為20ml，然后測量水的ph值和膠粒的直徑。

實驗使用300w紫外燈對由0.5wt％海藻酸鈉制備的光敏凝膠微粒進行光照處理，考察了海藻酸銪光敏凝膠微球的光敏情況。結(jié)果如圖1所示，隨著光照時間延長，光敏凝膠微球的直徑逐漸減小，在光照8h后凝膠幾乎消失。

按照實施例1中方法，實驗使用不同濃度的海藻酸鈉溶液制備了不同的海藻酸銪凝膠微球，并考察了它們在300w紫外光照射下直徑的變化情況，結(jié)果如圖2所示，海藻酸鈉濃度越高，制備成的膠粒在紫外光照射下，直徑減小的速度越慢，即分解速度越慢。使用0.5％wt(50mg海藻酸鈉溶于10ml超純水中)海藻酸鈉水溶液制備的光敏微球分解速率最快，在光照8h后，微粒肉眼幾乎不可見。從圖2中曲線可以看出，隨著光照時間延長，微球分解的速率逐漸降低，可能原因是隨著微球直徑的逐漸減少，所受到的光照面積也逐漸減少，分解速率逐漸降低。

光敏凝膠體系ph值隨光照時間的變化：

對光敏凝膠受到光照后體系ph值的變化情況進行考察，將上述使用1％wt海藻酸鈉溶液(100mg海藻酸鈉溶于10ml超純水中)制備的海藻酸銪光敏微球1g置于培養(yǎng)皿中，加入20ml水，使用300w紫外照燈照射，照射1h之后使用ph計測量體系的ph值，未光照之前，體系ph值等于7.0，光照之后隨著脫羧反應(yīng)發(fā)生，釋放出的co2溶解在水中，體系ph值逐漸下降，當(dāng)光照3h之后ph達到最低值5.57，此時光敏凝膠僅少量剩余。4h后，隨著光照進行，溶解在水中的co2逐漸揮發(fā)，體系ph隨之升高，但是也不超過7.0。

隨著光照時間的延長，凝膠體系的ph在5.57-7之間波動，不會影響后續(xù)的農(nóng)藥包被。

實施例2：光敏噻唑鋅微球制備

1)納米噻唑鋅原藥合成

中間體噻二唑鈉鹽合成

稱取氫氧化鈉3g(75mmol)加入100ml水中，攪拌至完全溶解，加入噻二唑10g(75mmol)，攪拌均勻，體系呈白色渾濁狀，升溫回流至體系由白色渾濁變?yōu)榫萍t色透明，回流2h，自然冷卻至室溫，得噻二唑鈉鹽溶液。

室溫下將10.78g(37.5mmol)七水硫酸鋅溶于100ml水中，加入50mg的分散劑萘磺酸甲醛縮合物鈉鹽，攪拌，慢慢加入上述步驟所得的噻二唑鈉鹽溶液，室溫下攪拌20min，得到白色乳狀液。將該白色乳狀液，以10000r/min離心10～20min，使用去離子水洗滌沉淀兩次(每次用量約為50ml)，沉淀即為納米噻唑鋅，真空減壓干燥(-0.097mpa、60℃)至恒重，即得到白色納米級噻唑鋅粉末11.7g(收率95％)。所得納米噻唑鋅的含量96％(hplc)。

結(jié)構(gòu)表征：

使用馬爾文粒度測定儀測定噻唑鋅乳狀液粒度為4-5nm之間，平均粒徑為4.721nm，粒徑分布均勻。通過掃描電鏡(sem)和透射電鏡(tem)分析，固體納米噻唑鋅形態(tài)穩(wěn)定，粒徑范圍在50-100nm左右。最后做了xrd衍射分析，通過對比納米噻唑鋅與常規(guī)噻唑鋅原藥的譜圖，其中特征峰一一對應(yīng)，顯示合成的納米噻唑鋅與商品化噻唑鋅原藥一致，說明二者為同一物質(zhì)。

2)、光敏噻唑鋅微球

將50mg的納米噻唑鋅分散于10ml水中，超聲分散5min后，得到乳白色均勻分散體系，向其中加入100mg海藻酸鈉，室溫攪拌1h，至海藻酸鈉完全溶解，得到海藻酸鈉和噻唑鋅的均勻混合的溶液(乳白色均勻體系)。將2ml海藻酸鈉和噻唑鋅的混合溶液，滴加(20min分鐘滴加完成)到30ml0.01m氯化銪水溶液中，制備成為直徑在4mm的含藥微球，室溫下放置8h，使微球反應(yīng)充分，然后將微球浸泡于超純水中24h，中途更換超純水三次。得到約2.1g光敏噻唑鋅微球。

實施例3、光敏嘧菌酯微球制備：

將50mg的嘧菌酯原藥溶解于10ml丙酮中，使用磁力攪拌將得到的嘧菌酯丙酮溶液與1％wt海藻酸鈉水溶液10ml混合均勻，60℃水浴攪拌至丙酮完全揮發(fā)，得到乳白色的嘧菌酯、海藻酸鈉混合溶液。將得到的混合液取出2ml滴加(20min滴加完成)到30ml0.01m氯化銪水溶液中，制備成為直徑在4mm的含藥微球，室溫下放置8h，使微球反應(yīng)充分，然后將微球浸泡于超純水中24h，中途更換超純水三次，得到約2.1g光敏噻唑鋅微球。

實施例4、光敏氯蟲苯甲酰胺微球制備：

將50mg的氯蟲苯甲酰胺原藥溶解于5mldmf(n，n-二甲基甲酰胺)中。使用磁力攪拌將得到的氯蟲苯甲酰胺dmf溶液與10ml1％wt海藻酸鈉水溶液混合均勻，得到乳白色的氯蟲苯甲酰胺與海藻酸鈉混合液。將得到的混合液取出2ml滴加(20分鐘滴加完成)到30ml0.01m氯化銪水溶液中，制備成為直徑在4mm的含藥微球，室溫下放置8h，使微球反應(yīng)充分，然后將微球浸泡于超純水中24h，中途更換超純水三次，得到約2.1g光敏噻唑鋅微球。

實施例5、光敏茚蟲威微球制備

將50mg茚蟲威原藥溶解于10ml丙酮中。使用磁力攪拌將得到的茚蟲威丙酮溶液與1％wt海藻酸鈉溶液10ml混合均勻，60℃水浴攪拌至丙酮完全揮發(fā)，得到乳白色的茚蟲威與海藻酸鈉混合溶液。將得到的混合液取出2ml滴加(20分鐘滴加完成)到30ml0.01m氯化銪水溶液中，控制液滴大小，使液滴形成直徑4mm的含藥微球，室溫下放置8h，使微球反應(yīng)充分，然后將微球浸泡于超純水中24h，中途更換超純水三次，得到約2.1g光敏噻唑鋅微球。

實驗一、含藥微球在模擬日光下形態(tài)變化

以實施例3制備所得的光敏嘧菌酯微球以及實施例2制備所得的光敏噻唑鋅微球為例，使用300w模擬日光對，對上述使用1％wt海藻酸鈉水溶液制備的嘧菌酯和噻唑鋅光敏微球，進行光照，觀察在模擬日光照射下含藥微球外觀變化情況，結(jié)果表明在模擬日光照射下，含藥光敏微球的直徑緩慢降低，經(jīng)過四天光照后，光敏微球直徑顯著降低，直徑從4mm降低到2mm左右。

實驗二、含藥微球光照釋放情況探究

將50mg海藻酸鈉溶于5ml水中，配制同樣的五份，分別加入25mg噻唑鋅、25mg嘧菌酯、25mg氯蟲苯甲酰胺、25mg茚蟲威，按照上述實施例2～實施例5中的操作，將其制備成為含藥光敏微球，分別置于四個培養(yǎng)皿中，向每個培養(yǎng)皿中加入30ml水，使用玻璃棒輕輕攪拌，使光敏微球都在液面以下。使用300w模擬日光對樣品進行照射，光源距離25cm，每光照兩小時使用移液槍精確取出1ml留樣用于高效液相色譜分析藥物濃度變化，取樣前后保持體系內(nèi)水的體積為30ml，收集濃度變化數(shù)據(jù)。

1)、樣品處理方法：

光敏噻唑鋅微球樣品處理：向上述所取得的光敏噻唑鋅微球的樣品(1ml)中加入0.43ml乙腈：三氟乙酸＝150：1(v/v)溶液，超聲1min，使樣品中含有的噻唑鋅完全溶解，將樣品使用0.45μm濾膜過濾后，使用高效液相色譜分析含量。

氯蟲苯甲酰胺和嘧菌酯樣品處理方法：向上述所取得的光敏氯蟲苯甲酰胺或光敏嘧菌酯的樣品(1ml)中加入1ml甲醇，超聲促進樣品中含有的氯蟲苯甲酰胺/嘧菌酯溶解，將樣品使用0.45μm濾膜過濾后，使用高效液相色譜分析含量。

茚蟲威樣品處理方法：向上述所取得的光敏茚蟲威的樣品中(1ml)加入1ml乙腈，超聲促進樣品中含有的茚蟲威溶解，將樣品使用0.45μm濾膜過濾后，使用高效液相色譜分析含量。

2)、液相方法：

噻唑鋅液相方法

流動相：乙腈：水：三氟乙酸＝30：70：0.1(v/v)；

流動相流量：0.8ml/min；

柱溫：室溫；

紫外檢測波長：330nm；

進樣體積：5μl；

色譜柱：zorbaxods柱(250mmx4.6mm，5μm)；

檢測器靈敏度(afus)：2.0；

保留時間：7.347min；

嘧菌酯液相方法：

流動相：甲醇：水＝65：35(v/v)；

流動相流量：1.0ml/min；

柱溫：30℃(±0.5℃)；

紫外檢測波長：276nm；

進樣體積：20μl；

色譜柱：zorbaxods柱(250mmx4.6mm，5μm)；

檢測器靈敏度(afus)：2.0；

保留時間8.438min；

氯蟲苯甲酰胺液相方法

流動相：甲醇：水＝65：35(v/v)；

流動相流量：1.0ml/min；

柱溫：30℃(±0.5℃)；

紫外檢測波長：276nm；

進樣體積：20μl；

色譜柱：zorbaxods柱(250mmx4.6mm，5μm)；

檢測器靈敏度(afus)：2.0；

保留時間8.304min；

茚蟲威液相方法：

流動相：乙腈：甲醇：水＝37：41：22(v/v)；

流動相流量：1.0ml/min；

柱溫：30℃(±0.5℃)；

紫外檢測波長：276nm；

進樣體積：20μl；

色譜柱：zorbaxods柱(250mmx4.6mm，5μm)；

檢測器靈敏度(afus)：2.0；

保留時間9.622min。

3)、光敏凝膠光照后形態(tài)的變化：

按照上述操作，對原藥含量為25mg的四種光敏微球進行光照，收集濃度變化數(shù)據(jù)，結(jié)果如圖3所示，在模擬日光照射下，四種光敏微球中，噻唑鋅濃度升高較快，其他三種藥物濃度變化較慢?？赡茉蚴呛Ｔ逅嶂芯哂休^多的羥基在發(fā)生脫羧反應(yīng)之后，形成的海綿狀結(jié)構(gòu)與嘧菌酯、茚蟲威和氯蟲苯甲酰胺(康寬)分子中的羥基和氫形成氫鍵，使嘧菌酯、茚蟲威和苯甲酰胺被束縛在微球內(nèi)，不能游離出來；而噻唑鋅自身為穩(wěn)定納米級原藥，且分子中含有能形成氫鍵的基團較少，所以光敏噻唑鋅微球在300w模擬日光照射下，內(nèi)含噻唑鋅釋放較快。

實驗三、不同噻唑鋅含量的光敏微球光照后累積釋放率

按照上述實施例2中的操作，配制5份50ml1％wt的海藻酸鈉溶液，分別加入25mg、50mg、75mg、100mg、125mg納米噻唑鋅，并將其制備成為光敏微球，將制備的光敏微球在模擬日光下照射收集累計釋放率，結(jié)果如圖4所示，隨著噻唑鋅含量的提高，同樣光照時間下，噻唑鋅的濃度也相對提高，但是累計釋放速率相對降低。噻唑鋅含量越高，其累積釋放率越慢，可能原因是，藥物在微球中所占的比例高，影響了微球的光敏性。

實施例6、納米級海藻酸銪微球的制備和表征

在5ml1％wt的海藻酸鈉水溶液中，依次加入1.5ml異丙醇和1.8ml環(huán)己烷，使用超聲分散均勻后，加入0.8g十二烷基三甲基溴化銨(ctab)，超聲半小時使其混合均勻，做成微乳液。將10ml0.01m氯化銪水溶液慢慢滴加入上述微乳液中，攪拌均勻，超聲分散，反應(yīng)30min，即可得到均勻分散的海藻酸銪納米微球懸浮液。將該懸浮液置于高速離心機中，以50000r/min離心5min，小心倒出上清液，向離心沉淀物加入95％乙醇洗滌，重復(fù)三次，得到的沉淀置于真空冷凍干燥機中冷凍干燥，即得到海藻酸銪納米微球，約5.2g。

用掃描電鏡對所制備的海藻酸銪納米微球進行結(jié)構(gòu)表征，看出分散均勻，粒徑在200-500nm。

實施例7、納米級光控緩釋噻唑鋅微球的制備和結(jié)構(gòu)表征

將納米噻唑鋅50mg加入10ml超純水中，使用超聲分散均勻后，分別加入100mg海藻酸鈉，使用磁力攪拌器攪拌1h，得到均勻的海藻酸鈉和納米噻唑鋅混合溶液。在50ml環(huán)己烷中，加入12gctab，10g正丁醇，超聲半小時使其混合均勻。將配置好的海藻酸鈉與噻唑鋅的混合溶液分別加入環(huán)己烷體系中，使用高速剪切機3000r/min，剪切10min，得到穩(wěn)定的納米微乳液，使用磁力攪拌器以400r/min速度攪拌，加入30ml0.01m氯化銪水溶液，加入后將攪拌速度升至800r/min，攪拌2h，加入95％乙醇破除乳化，使用離心機以2000r/min離心10min，小心倒出上清液，加入95％乙醇洗滌，重復(fù)三次，得到的沉淀即為載藥量為海藻酸銪包合噻唑鋅，干燥后約150mg，載藥量約為27％。

載藥量lc(loadingcapacity)計算公式如下：

dt表示所制備的納米微球中實際含藥量；s表示納米微球的質(zhì)量。

分別用掃描電鏡和粒度分析儀進行表征，結(jié)果如圖6所示，所制備的光敏包被噻唑鋅，呈顆粒狀分布，粒度在500-1000nm之間，形態(tài)穩(wěn)定，分布均勻。由馬爾文粒度分析儀檢測，其平均粒徑為560.2nm，分布均勻。兩者相互吻合。

實施例8、40％載藥量的納米噻唑鋅-海藻酸銪控緩釋制劑的制備

重復(fù)實施例7的步驟，只是將納米噻唑鋅投藥量由50mg變?yōu)?00mg，最后得到40％載藥量的納米噻唑鋅一海藻酸銪納米光控緩釋制劑。

實施例9、50％載藥量的納米噻唑鋅-海藻酸銪控緩釋制劑的制備

重復(fù)實施例7的步驟，只是將納米噻唑鋅投藥量由50mg變?yōu)?00mg，最后得到50％載藥量的納米噻唑鋅一海藻酸銪納米光控緩釋制劑。

實施例10、納米噻唑鋅-海藻酸銪控緩釋制劑的緩釋性能測試

50mg實施例7所制備的納米噻唑鋅一海藻酸銪納米光控緩釋制劑分散于30ml水中，攪拌下光照，按預(yù)先設(shè)定的時間取樣。使用hplc檢測，計算納米噻唑鋅的釋放量，繪制納米噻唑鋅的緩釋性能圖，結(jié)果見表1和圖5。

表127％納米噻唑鋅-海藻酸銪控緩釋制劑的緩釋過程

納米噻唑鋅-海藻酸銪控緩釋制劑具備良好的光控緩釋能力。噻唑鋅濃度隨光照時間延長，濃度逐漸增加。

實施例11、脂溶性農(nóng)藥光控緩釋納米制劑的制備

1)光控緩釋納米嘧菌酯的制備：

將100mg嘧菌酯原藥溶解在丙酮中，分散在100ml含有分散劑萘磺酸甲醛縮合物的水中，取10ml加入100mg海藻酸鈉，攪拌充分后成混合體系1。

50ml環(huán)己烷，10gctab、12g正丁醇乳化。成混合體系2；

先將混合體系2超聲30min，然后將攪拌充分的海藻酸鈉和原藥的混合體系1加入，剪切20min。之后使用磁力攪拌慢速攪拌，加入20ml0.01m氯化銪溶液。加入完畢立即劇烈攪拌12h。反應(yīng)結(jié)束后，加入適量95％乙醇，離心使用95％乙醇洗滌三次。部分樣品干燥、部分留樣后續(xù)分析。得到嘧菌酯納米光控緩釋制劑，平均粒徑在400nm左右(馬爾文粒度測定儀測定)。掃描電鏡圖見圖7。

2)光控緩釋納米茚蟲威的制備：

方法同上，制備得到光控緩釋納米茚蟲威，平均粒徑在96nm左右(馬爾文粒度測定儀測定)。

3)光控緩釋納米氯蟲苯甲酰胺的制備：

方法同上，制備得到光控緩釋納米氯蟲苯甲酰胺，平均粒徑在150nm左右(馬爾文粒度測定儀測定)。

實施例12、水溶性農(nóng)藥光控緩釋納米制劑的制備

將春雷霉素原藥5mg加入10ml超純水中，分別加入10mg海藻酸鈉，使用磁力攪拌器攪拌1h，得到均勻的海藻酸鈉和春雷霉素混合溶液。在20ml環(huán)己烷中，加入1.2gctab，8g正丁醇，超聲半小時使其混合均勻。將配置好的海藻酸鈉與春雷霉素的混合溶液分別加入環(huán)己烷體系中，使用高速剪切機3000r/min，剪切10min，得到穩(wěn)定的納米微乳液，使用磁力攪拌器以400r/min速度攪拌，加入30ml0.01m氯化銪水溶液，加入后將攪拌速度升至800r/min，攪拌2h，加入95％乙醇破除乳化，使用離心機以2000r/min離心10min，小心倒出上清液，加入95％乙醇洗滌，重復(fù)三次，得到的沉淀即為海藻酸銪包被春雷霉素納米制劑。粒徑在200-500nm之間(馬爾文粒度測定儀測定)。

最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個具體實施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認為是本發(fā)明的保護范圍。