本發(fā)明屬于農(nóng)藥領(lǐng)域，具體涉及一種含從水稻根際土壤分離的解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）和嘧菌酯的組合物及其在防治水稻稻瘟病方面的應用。
背景技術(shù)：
稻瘟病是我國水稻的重要病害，是影響水稻高產(chǎn)最嚴重的威脅之一，可引起大幅度減產(chǎn)，嚴重時減產(chǎn)40~50%，甚至顆粒無收。目前稻瘟病防治主要通過栽培抗病品種和噴灑化學農(nóng)藥，但因抗病品種的單一化、化學農(nóng)藥的危害以及病原菌抗藥性的產(chǎn)生，使水稻稻瘟病的防治受到一定的限制。因此生物防治越來越受到人們的關(guān)注。
解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）屬革蘭陽性芽孢桿菌，是一種與枯草芽孢桿菌親緣性很高的細菌，在自然界中分布廣泛。解淀粉芽孢桿菌生長過程中可以產(chǎn)生一系列具有廣泛地抑制真菌和細菌的活性的代謝產(chǎn)物，在生物防治方面具有廣闊的應用前景，已逐步成為具有生物農(nóng)藥開發(fā)潛力的微生物。目前已有報道利用解淀粉芽胞桿菌防治水稻紋枯
病、水稻稻瘟病、水稻細菌性條斑病、水稻惡苗病的研究，但目前解淀粉芽孢桿菌在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)應用過程中，還存在一些問題，篩選出的高生物活性菌株較少，農(nóng)藥品種制劑單一，用藥量大，防治效果不高，見效慢，有效期內(nèi)活性物質(zhì)如活菌數(shù)降低、芽孢活性減弱、菌株效能不穩(wěn)定等。因此，篩選高生物活性的生防菌、進一步開發(fā)高效、穩(wěn)定生物農(nóng)藥品種并在生產(chǎn)中推廣應用，前景廣闊，意義深遠。
解淀粉芽孢桿菌wh1g，從水稻根際土壤分離得到，抑菌譜較廣，對多種病原真菌和病原細菌均有很強的抑制作用，尤其是對水稻稻瘟病菌抑制作用較強；該菌株生長速度快，適應環(huán)境能力強，易于在植物表面定殖，并形成優(yōu)勢種群；誘導寄主產(chǎn)生抗病性；分泌多種抗菌物質(zhì)；對水稻稻瘟病的防治效果較好。該菌株對嘧菌脂有天然抗性，在嘧菌脂含量為10000ppm的na培養(yǎng)基中能正常生長，該菌株與2015年04月15日保藏于在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為cgmccno.10722。該菌株命名為whig，分類命名：解淀粉芽孢桿菌（bacillusamyloliquefaciens）。
嘧菌酯（azoxystrobin）,中文別名(e)-[2-[6-(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基]-3-甲氧基丙烯酸甲酯;阿米西達;(e)-2-{2-[6(2-氰基苯氧基)嘧啶-4-基氧]苯基}-3-甲氧基丙烯酸甲酯，是一種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，高效、廣譜，具有保護、鏟除、滲透、內(nèi)吸活性，對14-脫甲基化酶抑制劑、苯甲酰胺類、二羧酰胺類和苯并咪唑類產(chǎn)生抗性的菌株有效。嘧菌脂可用于莖葉噴霧、種子處理,也可進行士壤處理。它對幾乎所有真菌綱(子囊菌綱、擔子菌綱、卵菌綱和半知菌類)病害,如白粉病、銹病、穎枯瘸、網(wǎng)斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性,且與目前已有殺菌劑無交互抗性。用于谷物、水稻、葡萄、馬鈴薯、蔬菜、果樹及其它作物,對這些作物安全。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于：針對目前生產(chǎn)上大量使用化學農(nóng)藥防治水稻稻瘟病，造成環(huán)境污染嚴重、農(nóng)藥殘留超標、稻米品質(zhì)下降、抗藥性增強，導致防效下降，甚至防治失敗的一系列問題，提供一種可提高藥效、延長藥劑使用時間、降低成本、協(xié)同增效作用顯著，對水稻稻瘟病有較好防治作用的、且環(huán)境友好，安全的復配殺菌組合物。該組合物以解淀粉芽孢桿菌和嘧菌酯為主要活性物質(zhì)，不僅極大的減少了化學殺菌劑的使用量，降低了現(xiàn)有病原菌對嘧菌酯的潛在抗藥性的風險，還能發(fā)揮解淀粉芽孢桿菌whig有效控制稻瘟病菌的作用，彌補了解淀粉芽孢桿菌抑菌效果慢的缺點，綜合了生防菌和化學殺菌劑的優(yōu)點。本研究結(jié)果表明解淀粉芽孢桿菌whig與嘧菌脂的組合具有明顯的增效作用。
本發(fā)明所述的殺菌組合物可以用已知的方法加工成適合農(nóng)業(yè)使用的劑型，包括可濕性粉劑、懸浮劑等，本發(fā)明提供了所述殺菌劑的可濕性粉劑及水懸浮劑的制備方法。
本發(fā)明所述組合物中的助劑包括濕潤劑、分散劑、滲透劑、防凍劑、增稠劑、增效劑、消泡劑等各類助劑中的一種或幾種，具體成分和用量根據(jù)配方要求通過簡單試驗確定。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施達到:
一種含解淀粉芽孢桿菌whig與嘧菌脂的組合物，該組合物以解淀粉芽孢桿菌whig和嘧菌脂為活性成分，其質(zhì)量比為1000:1~1：1000；解淀粉芽孢桿菌whig和嘧菌脂的質(zhì)量比優(yōu)選為500:1~1：500，進一步優(yōu)化為100：1~1:100，更優(yōu)選為50:1~1:50，最優(yōu)選為5:1~1：5。本發(fā)明所采用的解淀粉芽孢桿菌活孢子數(shù)為0.1億/克~1000億/克，優(yōu)選為0.5億/克~500億/克，進一步優(yōu)選為1億/克~250億/克，最優(yōu)選為10億/克~100億/克。
本發(fā)明所述殺菌組合物中的解淀粉芽孢桿菌要先制成母粉，方法如下：首先將wh1g接入na培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)(180r/min,28℃)48h，80℃水浴處理15min，8000r/min離心15min，去上清液獲得細菌沉淀，加入10ml過濾除菌的mgso4溶液(0.lmol/l)和1ml無菌甘油，振蕩混勻后再加入lml濃度為1.5%(w/v)海藻酸鈉溶液，然后將上述混合液與50g滑石粉及4gca-lignosulphate充分混合，無菌條件下室溫保存。
所述組合物中解淀粉芽胞桿菌母粉的生存能力測定每隔30d,分別測定可濕性粉劑中生防菌的生存能力，方法是每次測定時，分別稱取0.5克可濕性粉劑，置于10ml無菌水中，制備懸浮液，經(jīng)倍比稀釋后，分別涂布于na平板上，28℃培養(yǎng)24h，計數(shù)生長菌落，計算出單位重量可濕性粉劑中細菌的菌落形成單位。結(jié)果表明，生防菌劑中細菌的生存能力較強，室溫條件下保存120d細菌的存活數(shù)量仍能達到1010cfu/g，150d能達到108cfu/g，隨著時間延長，細菌數(shù)量不斷下降，至180d僅能達到107cfu/g。
所述的殺菌組合物向活性成分解淀粉芽孢桿菌和嘧菌脂中加入農(nóng)藥助劑和填料后即可配得可濕性粉劑和懸浮劑，其中有效成分占殺菌組合物總重量的20%~60%，助劑占殺菌組合物總重量的10%~30%,其余為填料。嘧菌酯可以采用原藥，解淀粉芽孢桿菌采用原粉，助劑可以選用濕潤劑、分散劑、滲透劑、防凍劑、增稠劑、增效劑等各類助劑中的一種或幾種。
當所述殺菌組合物的劑型為可濕性粉劑時，由下述質(zhì)量百分含量的組分組成
解淀粉芽胞桿菌母粉（100億活孢子/克）10%~50%,
嘧菌酯10%~40%,
載體30%~65%，
分散劑3%~8%,
潤濕劑2%~5%，
滲透劑3%~5%
其特征是所述載體優(yōu)選為白炭黑、高嶺土，所述分散劑優(yōu)選為木質(zhì)素磺酸鈉，所述潤濕劑優(yōu)選為十二烷基苯磺酸，所述滲透劑優(yōu)選為jfc。
當所述殺菌組合物的劑型為水懸浮劑時，由下述質(zhì)量百分含量的組分組成：
解淀粉芽胞桿菌母粉（100億活孢子/克）5%~50%,
嘧菌酯5%~45%,
分散劑2%~8%，
潤濕劑2%~4%，
增稠劑0.2%~2%
增效劑2%~5%
防凍劑2%~4%
消泡劑1%~3%
余量加水至100%，
其特征是所述分散劑優(yōu)選為木質(zhì)素磺酸鈣，潤濕劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉，增稠劑優(yōu)選為黃原膠，所選防凍劑優(yōu)選為乙二醇；消泡劑優(yōu)選為有機硅消泡劑，水優(yōu)選為自來水或蒸餾水的一種。
本發(fā)明的殺菌組合物用于防治水稻稻瘟病，在水稻破口期和齊穗期，以噴霧法施藥為宜。
本發(fā)明的組合物降低了水稻稻瘟病菌對嘧菌酯和解淀粉芽孢桿菌的潛在抗藥性風險，將解淀粉芽孢桿菌與嘧菌酯組合后，二者之間具有明顯的增效作用，可以顯著提高對稻瘟病的防治效果，同時減少了化學農(nóng)藥使用量，從而使該組合物可以有效的應用于水稻稻瘟病的防治。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例進一步闡釋本發(fā)明，但本發(fā)明的實質(zhì)并不限于下述實施例。
實施例1：30%可濕性粉劑的制備（各組分為質(zhì)量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）15
嘧菌脂15
十二烷基硫酸鈉2
木質(zhì)素磺酸鈉4
滲透劑jfc4
白炭黑補足至100（調(diào)ph值5~7）
實施例2：40%可濕性粉劑制備（各組分為質(zhì)量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）30
嘧菌脂10
十二烷基硫酸鈉2
木質(zhì)素磺酸鈉4.5
滲透劑jfc4.5
白炭黑30
高嶺土補足至100（調(diào)ph值5~7）
實施例3：50%可濕性粉劑制備（各組分為質(zhì)量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）10
嘧菌脂40
十二烷基硫酸鈉3
木質(zhì)素磺酸鈉5
滲透劑jfc5
白炭黑20
高嶺土補足至100（調(diào)ph值5~7）
實施例4：60%可濕性粉劑制備（各組分為質(zhì)量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）50
嘧菌脂10
十二烷基硫酸鈉3
木質(zhì)素磺酸鈉5
滲透劑jfc5
白炭黑20
高嶺土補足至100（調(diào)ph值5~7）
按照實施例1、2、3、4的配方，將有效成分、助劑、填料加在一起，經(jīng)氣流粉碎后，在錐形混合機內(nèi)攪拌30分鐘，即可制得解淀粉芽孢桿菌與嘧菌酯的殺菌可濕性粉劑。
實施例5:20%懸浮劑的制備（各組分為質(zhì)量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）5
嘧菌脂15
木質(zhì)素磺酸鈣5
十二烷基硫酸鈉2
有機硅2
黃原膠0.3
乙二醇2
自來水補足至100
實施例6:42%懸浮劑的制備（各組分為質(zhì)量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）7
嘧菌脂35
木質(zhì)素磺酸鈣6
十二烷基硫酸鈉3
有機硅2
黃原膠0.3
乙二醇3
自來水補足至100
實施例7:50%懸浮劑的制備（各組分為質(zhì)量份）
解淀粉芽孢桿菌wh1g（100億活孢子/克）40
嘧菌脂10
木質(zhì)素磺酸鈣7
十二烷基硫酸鈉4
有機硅2
黃原膠0.2
乙二醇3.5
自來水補足至100
按照實施例5、6、7的配方，將有效成分、分散劑、潤濕劑等各組分裝入帶高剪切攪拌的反應釜中，粉碎混合，直到混合體均勻后將攪拌粉碎的物料通入砂磨機中，通冷卻循環(huán)水進行砂磨超微粉碎，終點粒徑小于3微米。即可制得解淀粉芽孢桿菌與嘧菌酯的殺菌水懸浮劑。
實施例8用實施例1-實施例7所配置的解淀粉芽孢桿菌與嘧菌酯的殺菌組合物防治水稻稻瘟病的田間效果。
本發(fā)明試驗作物為水稻，品種為：皖稻153；共設(shè)置實施例1-實施例7所配置的解淀粉芽孢桿菌與嘧菌酯的殺菌組合物、100億cfu/g解淀粉芽孢桿菌母粉、25%嘧菌酯懸浮劑和空白對照共10個處理，每個處理3次重復，小區(qū)面積100㎡，于水稻破口期和齊穗期各噴藥一次，每畝兌水50公斤均勻噴霧，第二次藥后15天調(diào)查各處理稻瘟病病情指數(shù)，并以對照區(qū)的病情指數(shù)計算相對防治效果，調(diào)查結(jié)果如表1。
表1解淀粉芽孢桿菌﹒嘧菌酯對水稻稻瘟病田間小區(qū)試驗的防效（%）
注：a:理論防效%=（實施例中芽孢桿菌單劑防效×所占比例＋嘧菌酯防效×所占比例）×100
b:增效效果%=（實施例防治效果—理論防效）/理論防效×100
從表1可以看出在破口期和齊穗期兩個關(guān)鍵時期噴藥后，本發(fā)明組合物的7個制劑實施例對水稻稻瘟病的防效均在90%左右，明顯高于對照藥劑，特別是實施例3-實施例7，防效均在90%以上，實施例6防效高達93.46%，防效顯著；本發(fā)明組合物和單劑相比，增效效果均在20%以上，特別是實施例4和實施例7增效效果分別高達29.30%和30.60%，增效作用明顯，可顯著提高防治效果；本發(fā)明組合物對水稻生長安全，田間未發(fā)現(xiàn)任何不良反應，所以該組合物可以廣泛的用于水稻稻瘟病的防治。