一種用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌psbhy-3及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌PSBHY?3，該菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏名稱為解淀粉芽孢桿菌PSBHY?3(Bacillus amyloliquefaciens PSBHY?3)，保藏單位：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏日期：2015年4月28日，保藏編號(hào)：CCTCC NO：M 2015260。本發(fā)明中的解淀粉芽孢桿菌菌株P(guān)SBHY?3具有較強(qiáng)的解有機(jī)磷能力；還公開(kāi)了上述用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌PSBHY?3在降解養(yǎng)殖池塘沉積物中的有機(jī)磷中的應(yīng)用。CCTCC NO： M 201526020150428
【專利說(shuō)明】
一種用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3及 其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽 孢桿菌PSBHY-3及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 磷是養(yǎng)殖池塘微藻生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)元素之一(Jana，2007)。在養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中，為 在養(yǎng)殖水體中營(yíng)造優(yōu)良的藻相和良好的生態(tài)環(huán)境，通常需施加磷肥以促進(jìn)浮游微藻的生長(zhǎng) (Hu et al.，2010)。然而，磷元素進(jìn)入池塘后，大多成為難溶性磷沉積在底泥中，其底泥沉 積量可占總輸出量的50%以上(齊振雄等，1998;常杰等，2006)，只有極小部分參與到池塘 生態(tài)系統(tǒng)的磷循環(huán)，導(dǎo)致水體活性磷含量低，磷利用效率低下，磷循環(huán)受阻，這樣既造成池 塘底質(zhì)污染，又導(dǎo)致水體營(yíng)養(yǎng)失衡(劉孝竹等，2009;Briggs，1994)。
[0003] 研究表明，微生物是控制和影響底泥釋磷的重要因素之一（Goedkoop and Pettersson，2000 ;Tomblom and Rydin，1998)，解磷菌具有將難溶性磷轉(zhuǎn)化為可利用磷的 功能(Maitra et al.，2015;P6rez et al.，2007)。近年來(lái)的研究證實(shí)在養(yǎng)殖池塘底泥中存 在可分解難溶性磷的菌株，但數(shù)量較少(Clavero，1999;胡曉娟，2010)。如11 &和?&丨61(1984) 對(duì)不同養(yǎng)殖模式魚(yú)池中解磷菌的數(shù)量調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，底泥中解磷菌數(shù)量少且受到投入的肥料 量及底泥中有機(jī)質(zhì)含量等的影響。正因?yàn)轲B(yǎng)殖池塘中解磷菌數(shù)量稀少，不足以轉(zhuǎn)化池底的 沉積磷，所以應(yīng)考慮分離篩選高效解磷菌株，通過(guò)外源施加，將沉積在底部的難溶性磷釋放 出來(lái)，加速池塘養(yǎng)殖系統(tǒng)中的磷循環(huán)，以解決養(yǎng)殖池塘底泥總磷含量高而水體有效磷含量 低的問(wèn)題。
[0004] 目前，對(duì)解磷菌的研究多集中于種植業(yè)，分離篩選高效解磷菌株，用以提高農(nóng)作物 或其他植物對(duì)磷肥的利用率（Amanullah and Adil，2015;Poonguzhali et al. ,2008)。 Anandham等（2007)從根際土壤中分離到的菌株Burkholderia sp.，其48h的解無(wú)機(jī)磷能力 高達(dá)363mg/L。李文紅和施積炎（2006)分離得到的兩株解有機(jī)磷菌具有較強(qiáng)的分解有機(jī)磷 的能力，培養(yǎng)3d后培養(yǎng)液中水溶性磷含量比對(duì)照增加38.53和64.53倍。Bakhshandeh等 (2015)通過(guò)在水稻種植過(guò)程中施用高效解磷菌，大幅減少了化肥的使用量(約67%)，提高 了肥料的利用效率。由此可見(jiàn)，分離篩選高效解磷菌，并在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用，可達(dá)到促進(jìn)磷 循環(huán)、提高磷利用率的目標(biāo)。
[0005] 解磷菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用尚少見(jiàn)報(bào)道(Jana et al. ,2007)。養(yǎng)殖池塘環(huán)境與種 植土壤環(huán)境存在巨大差異，環(huán)境營(yíng)養(yǎng)、人工技術(shù)措施等均不具可比性。因此，本發(fā)明擬進(jìn)行 用于水產(chǎn)養(yǎng)殖中的解磷菌方面的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3,該菌株具有高效降解有機(jī)磷的能力，并可在養(yǎng)殖池塘中應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的目的還在于提供上述用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌 PSBHY-3在降解養(yǎng)殖池塘沉積物中的有機(jī)磷的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分 解的菌株P(guān)SBHY-3,該菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)，保藏名稱為 解淀粉芽抱桿菌?313]^-3(1^(3；[11113&1]171〇119116€&(^6113?313]^-3)，保藏單位：中國(guó)典型培 養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏日期：2015年4月28日，保藏編號(hào):CCTCC NO:Μ 2015260。
[0009] 本發(fā)明中的解淀粉芽孢桿菌菌株P(guān)SBHY-3的篩選分離鑒定過(guò)程為:從對(duì)蝦養(yǎng)殖池 塘采集泥樣，通過(guò)涂布于有機(jī)磷固體平板(有機(jī)磷固體培養(yǎng)基），分離篩選溶磷圈較大的菌 落。再通過(guò)液體復(fù)篩，篩選出解磷效果最好的菌株。對(duì)菌株進(jìn)行菌種鑒定，明確在不同溫度、 鹽度和pH條件下菌株的解磷效果。
[0010] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：上述用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分 解的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3在降解養(yǎng)殖池塘沉積物中的有機(jī)磷中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明中的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3分離于對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘，并對(duì)養(yǎng)殖池塘沉積物 具有良好的解磷效果，可在養(yǎng)殖池塘環(huán)境中應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0013] (1)本發(fā)明中的解淀粉芽孢桿菌菌株P(guān)SBHY-3具有高效降解有機(jī)磷的能力；
[0014] (2)本發(fā)明中的解淀粉芽孢桿菌菌株P(guān)SBHY-3作用于養(yǎng)殖池塘沉積物取得良好效 果，能有效促進(jìn)池塘沉積磷分解為可溶性磷酸鹽。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 圖1是實(shí)施例5中水體活性磷酸鹽含量的變化；
[0016] 圖2是實(shí)施例5中實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組底泥總磷含量的比較。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0018] 實(shí)施例1用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌菌株P(guān)SBHY-3的篩選方法
[0019] -、材料準(zhǔn)備
[0020] 1、菌株來(lái)源
[0021 ]取自廣東茂名某對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘沉積物。
[0022] 2、培養(yǎng)基
[0023]有機(jī)磷固體培養(yǎng)基：葡萄糖 10.0g，（NH4)2S〇4 0.5g，NaCl 0.3g，KCl 0.3g，MgS〇4 · 7H20 0.3g，F(xiàn)eS〇4.7H20 0.03g，MnS〇4.4H20 0.03g，瓊脂20.0g，蒸餾水 1000mL，pH 7.0,滅 菌后冷卻到60 °C左右加入1 OmL蛋黃配制液(生理鹽水:蛋黃液=1:1)。
[0024]有機(jī)磷液體培養(yǎng)基：葡萄糖 10.0g，MgCl2 · 6H20 5.0g，MgS〇4 · 7H20 0.25g，KCl 0.2g，（NH4)2S〇4 O.lg，蒸餾水1000mL，pH 7.0,滅菌后冷卻到60°C左右加入lOmL的蛋黃配制 液。
[0025]二、菌株的分離與篩選 [0026] 1.解磷菌的初篩
[0027] 準(zhǔn)確稱取lOg對(duì)蝦養(yǎng)殖池塘底泥樣品，置于裝有90mL無(wú)菌水及適量玻珠的250mL三 角瓶中，搖床震蕩30min，十倍梯度稀釋，取合適的稀釋度涂布到有機(jī)磷固體平板，30°C培養(yǎng) 4d。選取有溶磷圈的菌落，劃線純化，獲得單個(gè)純菌落，劃線于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面保存。菌株 PSBHY-3在初篩中表現(xiàn)出較強(qiáng)的溶磷能力，其在有機(jī)磷固體平板上溶磷圈的直徑比可達(dá) 4.00以上。
[0028] 2.解磷菌的復(fù)篩
[0029]將菌株P(guān)SBHY-3的單菌落接種到裝有50mL營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液的三角瓶中，置于轉(zhuǎn)速 為150~200r/min，溫度30°C搖床培養(yǎng)24h。取lmL培養(yǎng)液接種至裝有100mL有機(jī)磷液體培養(yǎng) 基的三角瓶中，對(duì)照組接入等量無(wú)菌水，置于轉(zhuǎn)速為150~200r/min，溫度30°C搖床培養(yǎng)5d， 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取培養(yǎng)液測(cè)定活性磷含量以進(jìn)一步評(píng)價(jià)菌株的溶磷能力。結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)5d的 培養(yǎng)，菌株P(guān)SBHY-3的培養(yǎng)液中的活性磷含量分別為56.85mg/L，顯著高于對(duì)照組(4.06mg/ L)(P〈0.05)〇
[0030] 通過(guò)初篩和復(fù)篩，得到具有解有機(jī)磷能力的菌株P(guān)SBHY-3。
[0031] 實(shí)施例2用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌菌株P(guān)SBHY-3的鑒定 [0032]本發(fā)明對(duì)具有有機(jī)磷分解能力的菌株P(guān)SBHY-3進(jìn)行了16S rDNA分子生物學(xué)鑒定和 利用Biolog細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng)對(duì)菌株進(jìn)行鑒定，確定菌株的種屬。
[0033] 一、菌株P(guān)SBHY-3的16S rDNA分子生物學(xué)鑒定
[0034] 1.細(xì)菌基因組DNA的提?。?br>[0035] (1)將菌株P(guān)SBHY-3接種于LB培養(yǎng)液中，振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。
[0036] (2)取細(xì)菌培養(yǎng)液1 · 5mL，10000rpm( 11，500 X g)離心1分鐘，盡量吸凈上清。
[0037] (3)采用天根生化科技（北京）有限公司提供的細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 (TIANamp Bacteria DNA Kit)提取菌株P(guān)SBHY-3的總DNA。
[0038] (4)DNA濃度及純度檢測(cè):取5yL DNA樣品經(jīng)濃度為1.0% (w/v)的瓊脂糖凝膠檢測(cè)， 并取lyL樣品用NanoDrop 2000分光光度計(jì)（Thermo Scientific)測(cè)定DNA的濃度，-20°C保 存待用。
[0039] 2. 16S rDNA基因的PCR擴(kuò)增
[0040] 16S rDNA的擴(kuò)增所采用的細(xì)菌通用引物由上海生工生物工程有限公司合成，正向 引物（8〇為：5'-八6八61'1'丁6八1'(：(^66(：1'〇八6-3'；反向引物（1492『）為 ：5'-GGTTACCTTGTTACGACm'jOyL PCR反應(yīng)體系包括：10XPCR buffer 5yL，dNTPs(2.5mmol/ L)4yL，上下游引物各lyL，Taq酶0.25yL，DNA模板1~2yL，滅菌雙蒸水補(bǔ)足。PCR反應(yīng)條件:95 °C預(yù)變性4min;95°C變性lmin，48°C退火lmin，72°C延伸2min，共30個(gè)循環(huán)；最后72°C延伸 10min〇
[0041] 3. 16S rf)NA序列測(cè)定與比對(duì)
[0042] 擴(kuò)增結(jié)束后，PCR產(chǎn)物用1.0%(w/v)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，送上海美吉生物醫(yī)藥科 技有限公司測(cè)序。測(cè)得其序列為：
[0043]
[0045] 所測(cè)序列在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì)，得到的鑒定結(jié)果為菌株P(guān)SBHY-3屬 于芽孢桿菌屬(Bacillus sp.)，相似度為100%。
[0046] 二、菌株 PSBHY-3 的 Biolog 鑒定
[0047]通過(guò)16S rDNA分析可將菌株鑒定到屬的水平，根據(jù)以上結(jié)果，選用Biolog的GP2微 孔鑒定板，采用Biolog公司的細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng)，基于菌株對(duì)不同碳源利用的生理生化特 性將菌株鑒定到種的水平。
[0048]將菌株P(guān)SBHY-3的單菌落接種至鑒定專用的BUG平板上，30 °C培養(yǎng)16~24h。待平板 上長(zhǎng)出可見(jiàn)菌落后，通過(guò)干管分散技術(shù)將菌株制成菌懸液，利用Bio log的濁度計(jì)，調(diào)整菌懸 液濁度，再將菌液接種到鑒定板上，在30 °C下培養(yǎng)16~24h。在此期間通過(guò)將菌株P(guān)SBHY-3對(duì) 95種碳源的利用情況與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)，得出鑒定結(jié)果(表1)。經(jīng)鑒定菌株P(guān)SBHY-3為解淀粉芽 抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)，可能性為98% 〇 [0049] 表1菌株P(guān)SBHY-3的生理生化特性-碳源利用(反應(yīng)24h)
[0050]
[0051]
[0052] 注："+"表示陽(yáng)性反應(yīng)，表示陰性反應(yīng)，"B"表示邊界反應(yīng)。
[0053] 三、菌株P(guān)SBHY-3的菌種保藏
[0054]根據(jù)16S rDNA分子生物學(xué)鑒定和Biolog鑒定結(jié)果，菌株P(guān)SBHY-3鑒定為解淀粉芽 抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens) 〇
[0055]解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3為新的菌株，已于2015年4月28日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物 保藏中心(簡(jiǎn)稱CCTCC)，保藏編號(hào):CCTCC Ν0:Μ 2015260,保藏地址：中國(guó)武漢武漢大學(xué)。 [0056]實(shí)施例3不同溫度、鹽度和pH條件下解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3的解磷效果 [0057]將實(shí)施例1獲得的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3接種到有機(jī)磷液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng) 120h，研究在不同的溫度條件下(5 °C、10 °C、15 °C、20 °C、25 °C、30 °C、35 °C )解淀粉芽孢桿菌 PSBHY-3的解磷效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，5~20 °C時(shí)解磷效果不明顯，培養(yǎng)液中活性磷含量一直保持 在5mg/L以下;在25~35°C條件下，解磷量變化趨勢(shì)較一致，其中以35°C時(shí)菌株P(guān)SBHY-3的解 磷效果最好，在120h，解磷量可達(dá)46.25mg/L，其次是30°C和25°C時(shí)，解磷量分別達(dá)到 41.65mg/L和37.51mg/L。該研究結(jié)果表明，菌株P(guān)SBHY-3在25~35°C條件下，具有較好的解 磷效果。
[0058]將實(shí)施例1獲得的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3接種到有機(jī)磷液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng) 120h，研究在不同的鹽度條件下（0、10、20、30、40)解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3的解磷效果。結(jié) 果發(fā)現(xiàn)，鹽度為〇的條件下，解磷量較低，培養(yǎng)120h解磷量為17.28mg/L;在鹽度為10~40的 條件下表現(xiàn)出較好的解磷效果，其中，鹽度為10的條件下，24h后解磷量呈線性增長(zhǎng)，每24h 解磷量增加值均超過(guò)9mg/L，在鹽度為20~40的條件下，24~96h解磷量呈現(xiàn)較快的增長(zhǎng)，此 后增長(zhǎng)趨勢(shì)變緩，120h時(shí)培養(yǎng)液中活性磷含量均高于50mg/L。解磷效果最好的為高鹽度條 件(鹽度40)，在120h時(shí)，解磷量為56.94mg/L。該研究結(jié)果表明，菌株P(guān)SBHY-3在鹽度10~40 條件下，具有較好的解磷效果。
[0059] 將實(shí)施例1獲得的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3接種到有機(jī)磷液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng) 120h，研究在不同的初始pH條件下(pH 6、7、8、9、10)解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3的解磷效果。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在初始pH為6~8的條件下，菌株P(guān)SBHY-3表現(xiàn)出較好的解磷效果，其中初始pH為7 時(shí)效果最好，在120h，解磷量可達(dá)64 · 53mg/L，初始pH為6和8時(shí)，120h解磷量分別為50 · 27mg/ L和49.23mg/L。初始pH為9和10的條件下，菌株P(guān)SBHY-3解磷效果不明顯，解磷量一直低于 6mg/L。該研究結(jié)果表明，菌株P(guān)SBHY-3在初始pH 6~8的條件下，具有較好的解磷效果。
[0060] 上述結(jié)果表明，解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3在25~35°C，pH 6~8,鹽度10~40的條件 下具有較好的解磷效果。該菌株具有較廣泛的適應(yīng)范圍，可適用于海水養(yǎng)殖池塘。
[0061] 實(shí)施例4解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3的最高解磷量
[0062] 將實(shí)施例1獲得的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3接種到有機(jī)磷液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng) 15d，測(cè)定其生長(zhǎng)情況及解磷效果。結(jié)果發(fā)明，菌株P(guān)SBHY-3在3d后進(jìn)入穩(wěn)定期，細(xì)菌數(shù)量一 直維持在5.80 X 108~6.73 X 109cfu/mL之間，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)(第15d)細(xì)菌數(shù)量并未呈現(xiàn)明顯 下降趨勢(shì)。菌株P(guān)SBHY-3的解磷量呈現(xiàn)先升高后降低的變化趨勢(shì)，在第9d時(shí)達(dá)到最高，為 118.92mg/L〇
[0063] 上述結(jié)果表明，解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3具有高效降解有機(jī)磷的能力。
[0064]實(shí)施例5解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3的應(yīng)用
[0065]將實(shí)施例1獲得的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3配制成不同濃度的（103Cfu/mL、104cfu/ mL和106cfu/mL)的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3施用于養(yǎng)殖池塘泥水環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)10d，檢測(cè)水 體活性磷酸鹽的變化規(guī)律及實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)底泥的總磷含量，評(píng)價(jià)解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3對(duì) 養(yǎng)殖池塘沉積物的解磷效果。結(jié)果表明，各實(shí)驗(yàn)組水體活性磷酸鹽的變化呈現(xiàn)先升高后降 低的變化趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)第4d，J-3組(初始菌量為10 3cfu/mL)、J-4組(初始菌量為104cfu/mL)及 】-6組（初始菌量為10 6(^11/11^)的水體活性磷含量分別較對(duì)照組提高了 1069.77%、 1116.28 %和697.67 % (圖1)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，J-3組、J-4組和J-6組底泥總磷的含量較對(duì)照分 別降低了73.33mg/kg、95mg/kg和136.67mg/kg(圖2)。
[0066]上述結(jié)果表明，本發(fā)明中的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3對(duì)養(yǎng)殖池塘沉積物具有良好 的解磷效果。
[0067]本發(fā)明不局限于上述【具體實(shí)施方式】，根據(jù)上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí) 和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，本發(fā)明還可以做出其它多種形式 的等效修改、替換或變更，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3，其特征是:該菌株為解淀 粉芽孢桿菌（Baci I Ius amylol iquef aciens)，保藏名稱為解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3 (Bacillus amyloliquefaciens PSBHY-3)，保藏單位：中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中 國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏日期：2015年4月28日，保藏編號(hào):CCTCC N0:M 2015260。2. 權(quán)利要求1所述的用于養(yǎng)殖池塘有機(jī)磷分解的解淀粉芽孢桿菌PSBHY-3在降解養(yǎng)殖 池塘沉積物中的有機(jī)磷中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C02F3/34GK105907664SQ201610248842
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月20日
【發(fā)明人】胡曉娟, 曹煜成, 李卓佳, 文國(guó)樑, 楊鏗, 徐創(chuàng)文, 胡百文
【申請(qǐng)人】中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所