一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用，該菌株被命名為解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）HH?1，保藏編號(hào)為CCTCC M2015640。本發(fā)明提供了一種解淀粉芽孢桿菌的菌劑及其制備方法，該解淀粉芽孢桿菌菌劑對(duì)水稻稻瘟病、立枯病有穩(wěn)定、高效的防治效果。該解淀粉芽孢桿菌具有廣譜抑菌活性，能在真菌性病原菌絲體表面繁衍定殖，有效抑制病菌生長(zhǎng)，控制病害發(fā)生。CCTCC M201564020151026
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種解淀粉芽孢桿菌及其應(yīng)用
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域:本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640及其在水稻立枯病、稻瘟病防治方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] 水稻是我國(guó)主要糧食作物之一，我國(guó)大部分地區(qū)均有水稻種植，水稻種植農(nóng)戶超 過(guò)1億戶，以水稻作為主食的人口占60%以上，大約有19個(gè)?。ㄊ校┮运咀鳛橹饕氖称?。 水稻生產(chǎn)在我國(guó)糧食生產(chǎn)上具有重要的地位。但是農(nóng)業(yè)用地隨著世界人口的增加而減少， 環(huán)境也因經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展而遭到破壞，導(dǎo)致糧食安全問(wèn)題日益嚴(yán)重。因此，提高水稻的產(chǎn)量 是保證國(guó)家糧食生產(chǎn)的重要措施之一。
[0003] 世界性水稻病害一稻痕病[Magnaporthe grisea(Hebert)Barr.]是由子囊菌引起 的植物真菌病害，根據(jù)發(fā)病時(shí)期和發(fā)病部位的不同可分為苗瘟、葉瘟、節(jié)瘟、穗頸瘟、枝梗 瘟、谷粒瘟等，其中以葉瘟、穗頸瘟最為常見(jiàn)，危害較大。由于它分布廣泛，凡種植地區(qū)都有 發(fā)生的情況，嚴(yán)重時(shí)可造成絕產(chǎn)，它已成為影響我國(guó)水稻生產(chǎn)的最主要病害之一，因而對(duì)稻 瘟病進(jìn)行防治具有十分重要的意義。
[0004] 水稻立枯病是水稻旱育秧最主要的病害之一，從出苗到插秧的整個(gè)育秧階段均可 發(fā)生，但離乳期發(fā)病最重。病苗葉無(wú)露珠，新葉或上葉片打綹，根少暗黃無(wú)新根，莖基部逐漸 黃枯，軟化至腐爛，苗提取時(shí)與種子分離。一旦發(fā)病很難防治，近幾年，東北寒地稻區(qū)旱育苗 發(fā)生較重，輕者成撮成片發(fā)生，重者幼苗全部死亡。
[0005] 目前，化學(xué)防治作為水稻病害最主要的防治措施之一，具有見(jiàn)效快、成本低、使用 方便、多病兼治等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)在于長(zhǎng)期以來(lái)對(duì)其大量、不合理的使用，會(huì)導(dǎo)致防效降低，其高 毒、高殘留的特性不僅對(duì)人、畜的健康造成危害，而且對(duì)土壤、水、大氣造成嚴(yán)重污染，破壞 生態(tài)平衡。
[0006] 隨著國(guó)家和社會(huì)對(duì)國(guó)民健康、食品安全、環(huán)境污染的日益關(guān)注，有機(jī)磷農(nóng)藥的使用 在各國(guó)都受到了不同程度的限制，高效、低毒、低殘留的生物農(nóng)藥成為農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)的主要發(fā)展 方向。與化學(xué)農(nóng)藥相比，生物農(nóng)藥具有安全、高效、不殺害天敵、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，其不僅可 以替代傳統(tǒng)化肥，為植物提供養(yǎng)分，而且具有促生、提高植物抵御不良環(huán)境、拮抗病原微生 物從而減少化肥農(nóng)藥使用量等作用，其不可估量的應(yīng)用價(jià)值體現(xiàn)在促進(jìn)作物增產(chǎn)、預(yù)防作 物生物災(zāi)害、控制生態(tài)可持續(xù)、生產(chǎn)無(wú)污染無(wú)公害的綠色食品及減輕農(nóng)民負(fù)擔(dān)等方面。生物 農(nóng)藥有著難以替代的優(yōu)勢(shì)，擁有巨大的發(fā)展空間，是綠色和有機(jī)食品生產(chǎn)不可或缺的生產(chǎn) 資料，對(duì)促進(jìn)農(nóng)業(yè)增效和農(nóng)民增收發(fā)揮著不可替代的作用。因此，發(fā)展生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)對(duì)保障 我國(guó)糧食和食品安全、提升我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力具有重要意義。
[0007] 目前，防治水稻稻瘟病、立枯病的有益微生物類(lèi)群主要有放線菌、真菌、細(xì)菌等，目 前用于生物防治的細(xì)菌主要有芽孢桿菌和假單胞菌，芽孢桿菌是近年來(lái)科研工作者研究的 熱點(diǎn)。
[0008] 芽孢桿菌中用于防治水稻稻瘟病、青枯病的種類(lèi)已經(jīng)報(bào)道的主要有枯草芽孢桿菌 (Baci 1 lus subtilis)、短小芽抱桿菌（Bacillus pumi 1 is)和錯(cuò)狀芽抱桿菌（Baci 1 lus cereus)等。彭化賢等利用水稻根際分離獲得的蠟樣芽孢桿菌Ma-32和枯草芽孢桿菌Xi-55， 進(jìn)行田間防效試驗(yàn)，連續(xù)兩年防效均為50%以上。穆常青等研究發(fā)現(xiàn)，芽孢桿菌濃度在IX 108cfu/mL時(shí)，對(duì)穗頸瘟的防效達(dá)57.2 %，增產(chǎn)率達(dá)9.6 %。高學(xué)文等研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿 菌B2菌株產(chǎn)生的胞外物質(zhì)，對(duì)小麥紋枯病菌和稻瘟病菌菌絲生長(zhǎng)均具有抑制作用。朱桂梅， 陳宏州等，利用短小芽孢桿菌TW-2菌株對(duì)水稻穗頸瘟進(jìn)行防治，結(jié)果表明：TW-2不僅對(duì)稻瘟 病菌具有強(qiáng)烈的抑制作用，對(duì)穗頸瘟的防效也達(dá)到80%以上。
[0009] 目前，國(guó)內(nèi)利用解淀粉芽孢桿菌防治稻瘟病、立枯病的研究較少。陳成等研究發(fā) 現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌HN-06的代謝產(chǎn)物經(jīng)分離純化后，對(duì)稻瘟病菌具有顯著的抑菌作用。在 已報(bào)道的解淀粉芽孢桿菌防治稻瘟病的研究中，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室抑菌效果的研究較多，但對(duì)于 田間防治效果、實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用的研究較少。所以，出于本領(lǐng)域中還仍舊存在對(duì)水稻稻瘟病、 立枯病具有廣譜且高效的防效、能夠有效增產(chǎn)的新的解淀粉芽孢桿菌菌株的需要。需要改 進(jìn)篩選方式，獲得大量有益菌，并對(duì)菌株的田間防治效果進(jìn)行充分驗(yàn)證，對(duì)其實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用 潛力進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估與大力開(kāi)發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0010] 本發(fā)明在于克服【背景技術(shù)】中存在的問(wèn)題，而提供一種解淀粉芽孢桿菌。該解淀粉 芽孢桿菌，能在真菌性病原菌絲體表面繁衍定殖，有效抑制病菌生長(zhǎng)，控制病害發(fā)生。本發(fā) 明還提供一種解淀粉芽孢桿菌在防治水稻病害中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明解決其問(wèn)題可通過(guò)如下技術(shù)方案來(lái)達(dá)到：一種解淀粉芽孢桿菌，命名為解 淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)HH_l，保藏編號(hào)為CCTCC M2015640。
[0012] 一種包含解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)HH_l的菌劑，其活性成 分為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌體及其代謝產(chǎn)物。
[0013] -種解淀粉芽孢桿菌的菌劑的制備方法，包括如下步驟：
[0014] (1)菌種的分離:采集水稻根際土壤，從中篩分出一種解淀粉芽孢桿菌HH-1;
[0015] (2)種子液的制備：用接菌環(huán)挑取HH-1菌株接入裝有LB液體培養(yǎng)基中，37 °C、180r/ min搖床培養(yǎng)36h至培養(yǎng)液中有效活菌數(shù)1-2億/ml。
[0016] (3)固體發(fā)酵培養(yǎng)基制備:配制好的固體發(fā)酵基與水混合均勻，配制成固體發(fā)酵培 養(yǎng)基，將其分裝于耐高溫的塑料方盒中，121°C滅菌30min，冷卻備用。
[0 017 ] (4)固體菌劑培養(yǎng):按10 %接種量接入預(yù)先培養(yǎng)好的HH -1種子液至固體發(fā)酵培養(yǎng) 基中，混合均勻后置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天。
[0018] (5)干燥、粉碎及包裝:將上述發(fā)酵完的固體培養(yǎng)物置于55°C烘箱中烘至含水率低 于10%，粉碎過(guò)篩后，制備成固體粉末狀菌劑。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種解淀粉芽孢桿菌在防治水稻病害中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)HH_l，保藏在中國(guó) 典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M2015640，保藏日期為2015年10月26日。保藏地址 在中國(guó)武漢，武漢大學(xué)。
[0021] 本發(fā)明解淀粉芽孢桿菌株HH-1形態(tài)特征是:菌落淡黃色、形狀為規(guī)則圓形、表面隆 起、干燥;細(xì)胞為桿狀、產(chǎn)芽孢。
[0022] 本發(fā)明解淀粉芽孢桿（Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640生化特性 是:可利用葡萄糖，蔗糖、L-阿拉伯膠、D-木糖、淀粉、乳糖、檸檬酸三鈉;不能利用甘油。
[0023] 本發(fā)明解淀粉芽孢桿（Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640生長(zhǎng)特性 是:在LB平板上劃線接種，分別在37°C至45°C下培養(yǎng)均生長(zhǎng)良好，在50°C下能夠生長(zhǎng)。
[0024] 本發(fā)明菌株是直接依據(jù)實(shí)驗(yàn)室離體葉片防效測(cè)定結(jié)果篩選獲得，并經(jīng)過(guò)連續(xù)2年 不同地點(diǎn)不同水稻品種的田間防效驗(yàn)證，其田間防效穩(wěn)定，具有較高的實(shí)際應(yīng)用潛力。
[0025] 本發(fā)明與上述【背景技術(shù)】相比較可具有如下有益效果：該解淀粉芽孢桿菌，其菌株 是從水稻根際土壤篩選獲得，為革蘭氏陽(yáng)性菌，具有廣譜抑菌活性，能在真菌性病原菌絲體 表面繁衍定殖，有效抑制病菌生長(zhǎng)，控制病害發(fā)生。本發(fā)明的解淀粉芽孢桿菌菌劑對(duì)水稻稻 瘟病、立枯病具有更高效的防治作用，且持效期較長(zhǎng)，增產(chǎn)效果明顯。
【具體實(shí)施方式】：
[0026] 下面結(jié)合具體的實(shí)施例將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明：
[0027] 實(shí)施例1:解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640菌株 的分離
[0028] 解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640菌株的分離：從 哈爾濱市方正林業(yè)局采集水稻農(nóng)田土壤樣品，稱(chēng)取土壤5g放入裝有200mL無(wú)菌水的三角燒 瓶中，加入玻璃珠，置于30°C搖床中250rpm震蕩搖晃30min，使土樣與水充分混合。靜置待上 層澄清后，取10mL上清液，進(jìn)行10、100、1000倍稀釋?zhuān)∽詈笕翗酉♂屢?，置?0°C水浴 5-7min后，滅活營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，保留芽孢。然后取稀釋液O.lmL涂布于LB固體培養(yǎng)基平板上，每個(gè) 梯度濃度涂布3個(gè)平板，在37°C培養(yǎng)2d后，依據(jù)解淀粉芽孢桿菌的主要生物學(xué)特征挑取菌落 進(jìn)行個(gè)別單獨(dú)純化培養(yǎng)。最終獲得一株對(duì)稻瘟病菌、立枯絲核菌拮抗能力較好的菌株，即解 淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens) 〇
[0029] 該菌株于2015年10月26日保藏于中國(guó)典型微生物菌種保藏中心，其保藏編號(hào)為 CCTCC M2015640。
[0030]上述LB固體培養(yǎng)基的配方為，每升蒸餾水含有：10g蛋白胨，5g酵母粉，lOgNaCl，固 體LB培養(yǎng)基在上述配方的基礎(chǔ)上加入質(zhì)量體積比為2%的瓊脂粉，121°C條件下滅菌20分 鐘。
[0031] 實(shí)施例2:解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640菌株 的鑒定
[0032] 上述解淀粉芽抱桿菌（Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640菌株 16S rDNA基因的提取。
[0033] 培養(yǎng)5ml的細(xì)菌培養(yǎng)物至飽和狀態(tài)，取1.5ml培養(yǎng)物，6000轉(zhuǎn)/每分鐘離心2分鐘;沉 淀物加入565μ1的TE緩沖液，TE緩沖液配方如下：10mmol/l的三羥甲基氨基甲烷（Tris)、 lmmol/1的乙二胺四乙酸(EDTA)、用鹽酸調(diào)整pH為8.0，用吸管反復(fù)吹打使之重懸，加入30μ1 質(zhì)量體積比為10 %的十二烷基磺酸鈉（SDS)和5μ1 20mg/mL的蛋白酶Κ，混勻，于37 °C溫育1 小時(shí)；加入1〇〇μ1，5mo 1/1 NaCl，充分混勻，再加入80μ1的CTAB/NaCl溶液，所述CTAB/NaCl溶 液配方如下：質(zhì)量體積比為10 %的十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)溶解于0.7mo 1 /1的NaC 1 中，混勻，于65°C溫育10分鐘；加入等體積的氯仿/異戊醇，混勻，12000轉(zhuǎn)/每分鐘離心5分 鐘，將上清液轉(zhuǎn)入一個(gè)新管中；加入等體積的酚/氯仿/異戊醇，混勻，12000轉(zhuǎn)/每分鐘離心5 分鐘，將上清轉(zhuǎn)入一支新管中；加入0.6倍體積異丙醇，輕輕混勻直到DNA沉淀下來(lái)，用一個(gè) 封口的離心管將沉淀轉(zhuǎn)移至lml的70 %乙醇中洗滌；12000轉(zhuǎn)/每分鐘離心5分鐘，棄上清，用 凍干機(jī)稍加干燥，重溶于50μ1的TE緩沖液。以提取的基因組DNA為模板，利用購(gòu)自上海博尚 生物技術(shù)有限公司的真細(xì)菌引物27f和1492r，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，在50μ1反應(yīng)體系依次混勻下列 試劑：35μ1 Η20,5μ1 10倍濃度的PCR反應(yīng)緩沖液，10倍濃度的PCR反應(yīng)緩沖液配方如下： 500mmol/L 的 KCl、30mmol/L 的二硫蘇糖醇(DTT)、100mmol/L 的用鹽酸調(diào)整pH為8.8 的Tris 緩 沖液、lmg/ml的牛血清白蛋白、15mmol/L的MgCl2,4yl 25mmol/l MgCl2，lyl 4種dNTP的混合 物，0.5μ1上游引物，0.5μ1下游引物，0.5μ1模板DNA即上述紅平紅球菌（Rhodococcus erythropolis)CCTCC M205068的基因組DNA，0.5yl Taq DNA聚合酶，混勻后離心5秒鐘。加 入50μ1礦物油再離心5秒鐘;將混合物在94°C加熱5分鐘。94°C變性1分鐘，50°C退火1分鐘， 72°C延伸2分鐘，總共30個(gè)循環(huán)。最后一個(gè)循環(huán)后，于72°C下保溫10分鐘，使反應(yīng)混合物擴(kuò)增 充分，得到解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640的 16S rDNA的 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，將產(chǎn)物測(cè)序，將測(cè)得的菌的基因序列提交到GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中，用Blsat進(jìn)行 相關(guān)序列搜索，與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中現(xiàn)有的近緣菌株的ITS序列進(jìn)行對(duì)比，并從數(shù)據(jù)庫(kù)中獲 得相關(guān)序列。
[0034] 測(cè)序結(jié)果：解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)CCTCC M2015640 16S rDNA基因序列長(zhǎng)度為1441bp。
[0035] 解淀粉芽孢桿菌株的生理生化實(shí)驗(yàn)測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。根據(jù)16S rDNA序列分析結(jié)果 和生理生化實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果，可判斷CCTCC M2015640菌為解淀粉芽孢桿菌。
[0036]表1解淀粉芽孢桿菌株HH-1的生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0038]該菌株已于2015年10月26日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC M2015640，分類(lèi)命名為解淀粉芽抱桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
[0039] 實(shí)施例3:解淀粉芽孢桿菌株固態(tài)菌劑的制備方法
[0040] 按如下步驟進(jìn)行：
[00411 (1)菌種活化：用接種環(huán)挑取CCTCC M2015640菌種，將其接種到LB斜面培養(yǎng)基上， 置于37 °C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0042] (2)種子液的制備:挑取活化后的CCTCC M2015640菌株接入裝有100mL的LB液體培 養(yǎng)基中，37°C、180r/min搖床培養(yǎng)24h備用.
[0043] (3)固體發(fā)酵培養(yǎng)基制備：固體發(fā)酵基（玉米粉20 %、麩皮20 %，米糠40 %，菜籽柏 20%，按料:水= 1:1混合均勻，配制成固體發(fā)酵培養(yǎng)基，將其分裝于耐高溫的塑料方盒中， 120°C滅菌30min，冷卻備用。
[0044] (4)固態(tài)菌劑培養(yǎng):按10%接種量接入預(yù)先培養(yǎng)好的CCTCC M2015640種子液至固 體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混合均勾后置于37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天，每隔12h攪拌一次。
[0045] (5)干燥、粉碎及包裝:將上述發(fā)酵完的固體培養(yǎng)物置于55°C烘箱中烘至含水率低 于10%，用粉碎機(jī)將其粉碎。過(guò)篩后，制備成固體粉末狀菌劑并裝入密封的塑料袋中，放置 于干燥、陰涼處保藏。
[0046] (6)采用稀釋平板測(cè)數(shù)法檢測(cè)樣品中芽孢桿菌的活菌數(shù)的濃度在2.0 X108cfu/ mL，符合農(nóng)用微生物菌劑的要求。
[0047]實(shí)施例4:解淀粉芽孢桿菌株M2015640菌劑促進(jìn)植物生長(zhǎng)抗病田間效果試驗(yàn) [0048] 1.試驗(yàn)地點(diǎn):試驗(yàn)在黑龍江省大慶市進(jìn)行，選擇地勢(shì)平坦，肥力一致的田塊。
[0049] 2 ·供試作物:水稻(墾稻12)
[0050] 3 .供試肥料:本發(fā)明實(shí)施例3中制備的微生物菌劑，含有效活菌數(shù)2.0 X 108cfu/ mL〇
[0051 ] 4.試驗(yàn)設(shè)計(jì)：試驗(yàn)設(shè)兩組處理，每組設(shè)有1個(gè)對(duì)照組（1組加入CCTCC M2015640菌 劑，用M2015640表示;第2組加入相同量的未接菌株的培養(yǎng)基，用CK表示），每個(gè)處理三次重 復(fù)。小區(qū)隨機(jī)排列，小區(qū)面積24m2(4mX6m)，行株距25cmX 15cm，每畝1.8萬(wàn)穴，每穴4株，基 本苗7.2萬(wàn)苗，小區(qū)四周打埂，埂寬50cm，上覆薄膜，防止竄水竄肥，區(qū)組間挖溝，溝寬lm，試 驗(yàn)四周設(shè)保護(hù)行。各處理組設(shè)計(jì)如下：
[0052]處理一:在育苗期間水稻1葉1心時(shí)撒施本菌劑，并接種立枯病菌;CK組只接種立枯 病菌。藥后7d、15d、25d采用5點(diǎn)取樣法調(diào)查各小區(qū)的病株數(shù)，每小區(qū)調(diào)查500株，計(jì)算病株率 及防病效果。
[0053]處理二：用常規(guī)的栽培方式進(jìn)行肥水管理，水稻劍葉抽出前7天接種稻瘟病菌，隨 后立即進(jìn)行第一次撒施本菌劑。到水稻劍葉抽出裂口期是進(jìn)行第二次撒施。CK組只接種稻 瘟病菌。一次施藥前調(diào)查，一次施藥后二次施藥前調(diào)查，二次施藥后調(diào)查，田間測(cè)產(chǎn)及室內(nèi) 考種。調(diào)查方法為每小區(qū)取5點(diǎn)，每點(diǎn)定1穴，做好標(biāo)記，防治葉瘟，施藥前調(diào)查發(fā)病基數(shù)，二 次施藥前和二次施藥后10天調(diào)查防效;二次施藥后10天及田間測(cè)產(chǎn)調(diào)查穗頸瘟發(fā)病指數(shù)。 [0054]試驗(yàn)結(jié)果表明，施撒本菌劑對(duì)水稻立枯病有較好的防效，且持效期較長(zhǎng)。試驗(yàn)結(jié)果 參見(jiàn)表2。
[0055] 表2M2015640菌劑對(duì)水稻立枯病防效效果 [0056]
[0057] 經(jīng)藥后定期觀察，各處理藥劑對(duì)旱育秧無(wú)藥害出現(xiàn)。
[0058]試驗(yàn)結(jié)果表明，施撒本菌劑對(duì)水稻稻瘟病有較好的防效，每畝施用10g該產(chǎn)品，對(duì) 水稻葉瘟防治效果一般，對(duì)水稻穗頸瘟防效達(dá)94.9%，較對(duì)照空白增產(chǎn)69%，其產(chǎn)量指標(biāo)穗 實(shí)粒數(shù)、千粒數(shù)和結(jié)實(shí)率明顯高于空白，表現(xiàn)為防效好、增產(chǎn)效果明顯。試驗(yàn)結(jié)果參見(jiàn)表3、 表4。
[0059]表3本發(fā)明菌劑對(duì)水稻稻瘟病防效效果
[0061 ] 表4測(cè)產(chǎn)考種表
[0062]
[0063]該藥劑對(duì)作物無(wú)明顯藥害癥狀，對(duì)水稻生長(zhǎng)安全。在水稻劍葉抽出前7天和劍葉抽 出裂口期進(jìn)行莖葉噴霧，可有效預(yù)防水稻穗頸瘟，可作為預(yù)防類(lèi)藥劑大面積推廣。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種解淀粉芽孢桿菌，其特征在于：命名為解淀粉芽孢桿菌 即e/acieas)HH-l，保藏編號(hào)為CCTCC M2015640。2. -種包含如權(quán)利要求1中所述的解淀粉芽孢桿菌的菌劑，其特征在于:其活性成分為 解淀粉芽孢桿菌(ifeciDus a野ciaos)菌體及其代謝產(chǎn)物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的解淀粉芽孢桿菌的菌劑，其特征在于：所述的菌劑為固態(tài)菌 劑。4. 一種如權(quán)利要求2或3所述的解淀粉芽孢桿菌的菌劑的制備方法，其特征在于:包括 如下步驟： (1) 菌種的分離:采集水稻根際土壤，從中篩分出一種解淀粉芽孢桿菌HH-1; (2) 種子液的制備：用接菌環(huán)挑取HH-1菌株接入裝有LB液體培養(yǎng)基中，37°C、180r/min 搖床培養(yǎng)36h至培養(yǎng)液中有效活菌數(shù)1-2億/ml; (3) 固體發(fā)酵培養(yǎng)基制備：配制好的固體發(fā)酵基與水混合均勻，配制成固體發(fā)酵培養(yǎng) 基，將其分裝于耐高溫的塑料方盒中，121°C滅菌30min，冷卻備用； (4 )固體菌劑培養(yǎng):按10%接種量接入預(yù)先培養(yǎng)好的HH-1種子液至固體發(fā)酵培養(yǎng)基中， 混合均勻后置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天； (5)干燥、粉碎及包裝：將上述發(fā)酵完的固體培養(yǎng)物置于55°C烘箱中烘至含水率低于 10%，粉碎過(guò)篩后，制備成固體粉末狀菌劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述解淀粉芽孢桿菌的菌劑的制備方法，其特征在于:所述的固體發(fā) 酵基為玉米粉20%、麩皮20%，米糠40%，菜籽柏20%。6. -種如權(quán)利要求1所述解淀粉芽孢桿菌在防治水稻病害中的應(yīng)用。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述解淀粉芽孢桿菌在防治水稻病害中的應(yīng)用，其特征在于:所述的 水稻病害包括水稻立枯病、稻痕病。
【文檔編號(hào)】A01N63/00GK105936880SQ201610333633
【公開(kāi)日】2016年9月14日
【申請(qǐng)日】2016年5月19日
【發(fā)明人】胡翌
【申請(qǐng)人】哈爾濱億之隆生物科技開(kāi)發(fā)有限公司