本發(fā)明屬農(nóng)作物耐鹽性的鑒定
技術(shù)領(lǐng)域：
：，確切地說(shuō)是一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法。
背景技術(shù)：
：：菜用大豆(Vegetablesoybean)俗稱毛豆，是以鮮豆粒作為蔬菜的專用大豆類型，是我國(guó)南方地區(qū)居民喜食的傳統(tǒng)特色蔬菜。因其營(yíng)養(yǎng)豐富，口味鮮美，近十年來(lái)，已發(fā)展成為頗受國(guó)際市場(chǎng)青睞的出口加工大宗蔬菜，栽培面積迅速擴(kuò)大，僅江浙滬皖地區(qū)的年栽培面積就達(dá)500萬(wàn)畝。其中春播設(shè)施栽培菜用大豆因上市早、品質(zhì)優(yōu)，經(jīng)濟(jì)效益顯著，栽培面積占總面積近2/3。但是近十年來(lái)，由于我國(guó)設(shè)施蔬菜栽培面積迅速擴(kuò)大，且化肥使用不當(dāng)，導(dǎo)致土壤連作障礙尤其是土壤次生鹽漬化逐年加重；同時(shí)我國(guó)鹽漬土分布廣泛，鹽堿土面積比例過(guò)大，鹽堿土總面積超過(guò)9000萬(wàn)hm2(李彬等，2005)，對(duì)菜用大豆品種的耐鹽性提出了更高要求。我國(guó)作為大豆起源中心，在長(zhǎng)期栽培歷史過(guò)程中形成了4000多種大豆地方品種(蓋鈞鎰等2000)，因此菜用大豆地方品種資源也十分豐富，我國(guó)長(zhǎng)江中下游地區(qū)具有大量的地方品種，特別是上海市崇明島因其獨(dú)特的自然生態(tài)環(huán)境，馴化孕育出一批具有不同性狀的菜用大豆品種資源(江曼珍等，1994)。盡管大豆為中度耐鹽植物，鹽脅迫仍是嚴(yán)重限制大豆產(chǎn)量和品質(zhì)的非生物脅迫之一。耐鹽性強(qiáng)的植株具有可遺傳的耐鹽性狀(Wahdaetal.,1997)。因此，挖掘耐鹽大豆種質(zhì)，選育耐鹽菜用大豆新品種，不僅可以克服鹽堿土對(duì)菜用大豆生產(chǎn)的限制，還對(duì)穩(wěn)定國(guó)內(nèi)外菜用大豆的市場(chǎng)供應(yīng)、以及提高菜用大豆產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益意義重大。有關(guān)大豆或菜用大豆的耐鹽性鑒定方法的研究已經(jīng)很多報(bào)道，前人的方法多采用水培或無(wú)機(jī)基質(zhì)栽培，但由于大豆屬于陸生植物，與大豆的自然生長(zhǎng)環(huán)境或栽培條件有較大的差異，不能真實(shí)模擬大豆的生長(zhǎng)環(huán)境。技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法，該鑒定方法包括以下內(nèi)容：(1)發(fā)芽期耐鹽性的鑒定：利用200mMNaCl溶液進(jìn)行菜用大豆發(fā)芽試驗(yàn)，測(cè)定發(fā)芽率和胚根長(zhǎng)度，篩選獲得發(fā)芽期耐鹽性強(qiáng)或鹽敏感的品種資源；(2)幼苗期耐鹽性的鑒定：利用200mMNaCl溶液對(duì)基質(zhì)栽培的菜用大豆幼苗進(jìn)行鹽脅迫，鹽脅迫15d后，測(cè)定株高、葉面積和葉綠素含量，篩選獲得苗期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(3)結(jié)莢期耐鹽性的鑒定：采用基質(zhì)栽培，利用150mMNaCl溶液對(duì)開花結(jié)莢期的菜用大豆植株進(jìn)行鹽脅迫，鹽脅迫20d，于采收期測(cè)定株高、有效分枝數(shù)、單株莢數(shù)、產(chǎn)量和鮮籽粒百粒重等，篩選獲得結(jié)莢期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(4)綜合評(píng)價(jià)：根據(jù)各品種資源在發(fā)芽期、苗期和結(jié)莢期的耐鹽性表現(xiàn)，綜合篩選鑒定耐鹽或鹽敏感的品種資源。具體地說(shuō)，“一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法”是根據(jù)生產(chǎn)和市場(chǎng)需求，利用眾多大豆種質(zhì)資源對(duì)鹽脅迫耐受性的差異，創(chuàng)新建立了菜用大豆的全生育期綜合耐鹽性鑒定方法，從菜用大豆的發(fā)芽期、幼苗期和開花結(jié)莢期這三個(gè)生長(zhǎng)階段進(jìn)行耐鹽性鑒定，從而綜合評(píng)價(jià)篩選出一批耐鹽性強(qiáng)或鹽敏感的菜用大豆品種資源。本發(fā)明的一種菜用大豆全生育期耐鹽性的鑒定方法，具體包括以下步驟：(1)菜用大豆發(fā)芽期耐鹽性的鑒定方法：①種子處理：挑選種皮完整、健壯飽滿均勻的種子，用5％的NaClO毒8-10min，用蒸餾水清洗3次，再將種子放置于鋪有2層濾紙的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿放20粒種子，每個(gè)品種準(zhǔn)備10個(gè)培養(yǎng)皿，共200粒種子；②分別用200mMNaCl溶液(鹽脅迫)和蒸餾水(CK)即每個(gè)培養(yǎng)皿加NaCl溶液或蒸餾水30mL，在25℃恒溫箱進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，每天補(bǔ)充10mL，保持濕潤(rùn)；③每天統(tǒng)計(jì)發(fā)芽種子數(shù)，發(fā)芽6d后統(tǒng)計(jì)各品種的發(fā)芽率、發(fā)芽(鹽害率)、胚根長(zhǎng)度和胚根長(zhǎng)(鹽害率)；④發(fā)芽率＝發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù)×100％；發(fā)芽(鹽害率)＝[發(fā)芽率(CK)-發(fā)芽率(鹽脅迫)]/發(fā)芽率(CK)×100％；胚根(鹽害率)＝[胚根長(zhǎng)(CK)-胚根長(zhǎng)(鹽脅迫)]/胚根長(zhǎng)(CK)×100％。⑤根據(jù)發(fā)芽(鹽害率)及胚根長(zhǎng)(鹽害率)，鑒定篩選發(fā)芽期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(2)菜用大豆幼苗期耐鹽性的鑒定方法：①挑選種皮完整、飽滿均勻的種子播種于裝有普通育苗基質(zhì)(草炭：蛭石：珍珠巖＝3:1:1)的花盆(直徑12cm，高11cm)，每盆播12粒，每個(gè)品種播12盆；②待對(duì)生真葉露出后間苗，拔除長(zhǎng)勢(shì)弱的幼苗，每盆留苗5-6株；③待對(duì)生真葉展平時(shí)，澆灌200mMNaCl溶液進(jìn)行鹽脅迫，每個(gè)品種鹽脅迫6盆，用澆清水為對(duì)照，每品種6盆；④分別將鹽脅迫或?qū)φ仗幚淼幕ㄅ璺胖迷诘撞坎宦┧乃芰虾?長(zhǎng)×寬×高：50cm×36cm×10cm)中，每盆每次澆灌NaCl溶液或清水200mL，每隔1d澆一次，一共澆灌12次；⑤鹽脅迫20d后，測(cè)定各品種的存活率、株高、葉面積和葉綠素含量，并計(jì)算鹽害率，株高、葉面積或葉綠素含量(鹽害率)＝(CK-鹽脅迫)/CK×100％，葉綠素含量的測(cè)定參照李合生等(2000)的方法；⑥根據(jù)存活率、株高、葉面積或葉綠素含量的鹽害率，以測(cè)量第一片三出真葉的頂生葉大小(葉長(zhǎng)×葉寬)為葉面積，鑒定篩選幼苗期耐鹽及鹽敏感的品種資源；(3)菜用大豆結(jié)莢期耐鹽性的鑒定方法：①選取種皮完整、飽滿均勻的種子種于裝有普通栽培基質(zhì)(草炭：蛭石：珍珠巖＝3:1:1，每盆加15g顆粒緩釋肥)的花盆(口徑28cm，底徑23cm，高20cm)中，每個(gè)花盆種10粒，每個(gè)品種播種6盆；待幼苗第一片三出真葉展平時(shí)間苗，每盆留苗2株，正常肥水管理；③在開花結(jié)莢期用150mMNaCl處理進(jìn)行鹽脅迫，每次每盆澆灌2L，每隔1d澆一次鹽溶液，脅迫20d，以澆清水為對(duì)照，3次重復(fù)；④在鼓粒期至初熟期(R6-R7)各品種的有效分枝數(shù)、株高、單株莢數(shù)、產(chǎn)量及鮮籽粒百粒重，計(jì)算鹽害率。⑤根據(jù)上述指標(biāo)的鹽害率，鑒定篩選結(jié)莢期耐鹽或鹽敏感的品種資源；(4)菜用大豆全生育期綜合耐鹽性評(píng)價(jià)鑒定：根據(jù)上述發(fā)芽期、幼苗期和結(jié)莢期的耐鹽性鑒定結(jié)果，綜合評(píng)價(jià)不同品種的各個(gè)時(shí)期的耐鹽性，篩選出全生育期耐鹽性較強(qiáng)或鹽敏感的品種資源。本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)：1、本發(fā)明根據(jù)菜用大豆在發(fā)芽期、幼苗期和開花結(jié)莢期的耐鹽性表現(xiàn)，創(chuàng)新建立了菜用大豆的全生育期耐鹽性鑒定方法，該方法可以分別從菜用大豆不同生長(zhǎng)階段進(jìn)行耐鹽性評(píng)價(jià)，鑒定結(jié)果更加全面、準(zhǔn)確、可靠。2、本發(fā)明利用普通育苗有機(jī)基質(zhì)，采用盆栽法培育菜用大豆，通過(guò)澆灌NaCl溶液模擬鹽脅迫，不僅可以就地取材，操作方便，易于管理，還符合菜用大豆或大豆的實(shí)際生長(zhǎng)環(huán)境，比水培能更好的反應(yīng)菜用大豆在鹽堿地的生長(zhǎng)狀態(tài)，鑒定結(jié)果更具有說(shuō)服力。3、本發(fā)明對(duì)菜用大豆耐鹽性評(píng)價(jià)主要以幼苗期耐鹽性為基準(zhǔn)，輔以發(fā)芽期及結(jié)莢期的耐鹽性表現(xiàn)，一方面可以僅以幼苗期耐鹽性為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)耐鹽性差異，另一方面可以兼具發(fā)芽期、幼苗期和結(jié)莢期的綜合耐鹽表現(xiàn)，篩選全生育期耐鹽的品種資源?？傊?，本發(fā)明利用普通育苗基質(zhì)培育菜用大豆幼苗，在幼苗對(duì)生真葉展開時(shí)澆灌NaCl溶液模擬鹽脅迫，接近菜用大豆的實(shí)際生長(zhǎng)環(huán)境，不僅能更好地反映植株在鹽堿地的生長(zhǎng)狀態(tài)，而且可以就地取材，操作簡(jiǎn)便，易于管理。因此，本發(fā)明利用200mMNaCl在發(fā)芽期和苗期對(duì)菜用大豆耐鹽性進(jìn)行綜合鑒定，輔以結(jié)莢期耐鹽性評(píng)價(jià)，是一種菜用大豆全生育期耐鹽性狀的快速有效、可靠鑒定方法。具體實(shí)施方式以下結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)敘述本發(fā)明的具體實(shí)施內(nèi)容和方法，但本發(fā)明并不限于此。實(shí)施例1：(1)菜用大豆發(fā)芽期耐鹽或鹽敏感品種資源的鑒定篩選利用200mMNaCl溶液模擬鹽脅迫，對(duì)來(lái)自上海市崇明島的10份菜用大豆地方品種(青牛踏扁、黃牛踏扁、粗八月白、細(xì)八月白、烏大青、烏毛豆、骨粒青、綠皮豆、小安黃、五早豆)、4份自選育品種(青酥五號(hào)、VS11-5、VS13-2、Z-7-5)以及3個(gè)引進(jìn)品種(蘇鮮四號(hào)、浙鮮豆五號(hào)、八月白)，一共17個(gè)菜用大豆品種資源進(jìn)行發(fā)芽期耐鹽性鑒定。每個(gè)品種精選200粒種皮完整、飽滿均勻的種子，用5mMNaClO溶液消毒10min，再用蒸餾水清洗3次。每20粒種子放置在鋪有2層濾紙的培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿加蒸餾水或NaCl溶液30mL，置于25℃恒溫箱進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)，每天補(bǔ)充水或NaCl溶液10mL。發(fā)芽6d后，測(cè)定每個(gè)品種的發(fā)芽率和胚根長(zhǎng)度，計(jì)算鹽害率，檢測(cè)結(jié)果見表1。正常條件下不同品種之間的發(fā)芽率有較大的差異，鹽脅迫抑制了所有品種的發(fā)芽，抑制了胚根的伸長(zhǎng)。用200mMNaCl處理6d后，‘蘇鮮四號(hào)’、‘青酥五號(hào)’、‘早綠皮豆’和‘烏大青’發(fā)芽受到鹽害的程度分別高達(dá)57.32％、50.6％、47.78％和45.05％；而‘骨粒青’、‘VS13-2’、‘五早豆’和‘浙鮮豆五號(hào)’受到的鹽害程度較低，分別為5.26％、5.21％、6.25％和12.37％，相對(duì)發(fā)芽率較高。在正常條件下發(fā)芽6d后，不同品種之間的胚根長(zhǎng)度不同，其中‘VS13-2’、‘浙鮮豆五號(hào)’、‘細(xì)八月白’和‘八月白’的胚根長(zhǎng)度超過(guò)6cm，而‘黃牛踏扁’、‘青牛踏扁’、‘粗八月白’等胚根伸長(zhǎng)較慢，長(zhǎng)度短于2.5cm。用200mMNaCl處理6d后，僅‘粗八月白’和‘青牛踏扁’受鹽害程度較低，鹽害率為42.88％和46.74％，其余品種的鹽害率高達(dá)60％～80％，胚根伸長(zhǎng)受到了嚴(yán)重抑制。根據(jù)鹽脅迫對(duì)菜用大豆的發(fā)芽率和胚根長(zhǎng)度的影響，篩選獲得了發(fā)芽期耐鹽性較強(qiáng)的菜用大豆品種資源‘骨粒青’、‘VS13-2’、‘青牛踏扁’和‘細(xì)八月白’，鹽敏感的品種資源‘烏大青’、‘早綠皮豆’、‘蘇鮮四號(hào)’和‘VS11-5’等。表1鹽脅迫對(duì)菜用大豆發(fā)芽率和胚根長(zhǎng)度的影響(2)菜用大豆幼苗期耐鹽或鹽敏感品種資源的鑒定篩選采用普通有機(jī)基質(zhì)栽培，每個(gè)塑料花盆(直徑11cm，高12cm)中播種健壯飽滿的種子10-12粒，每個(gè)品種播種12盆。在對(duì)生真葉露出后間苗，每盆留壯苗5-6株，在對(duì)生真葉展開時(shí)澆灌200mMNaCl溶液，以澆清水做對(duì)照，每品種處理6盆。分別將鹽脅迫或?qū)φ仗幚淼幕ㄅ璺胖迷诘撞坎宦┧乃芰虾?長(zhǎng)×寬×高：50cm×36cm×10cm)中，每盆每次澆灌NaCl溶液或清水200mL，每隔1d澆一次，一共澆灌7次，鹽脅迫12d后測(cè)定各品種的存活率、株高、葉面積和葉綠素含量，以第一片三出真葉的頂生葉大小(葉長(zhǎng)×葉寬)作為葉面積，計(jì)算鹽害率，鑒定17個(gè)菜用大豆品種的幼苗期耐鹽性，結(jié)果見表2。由表2可知，與正常條件(CK)相比，17個(gè)品種的株高、葉面積和葉綠素含量在不同程度上均受到了鹽脅迫的抑制。用200mMNaCl處理12d后，‘烏毛豆’、‘蘇鮮四號(hào)’、‘VS11-5’和‘VS13-2’的株高受鹽害程度較高，鹽害率分別為35.62％、30.86％、27.62％和26.88％；而‘青牛踏扁’、‘小安黃’和‘青酥五號(hào)’受鹽害程度較低，鹽害率分別為13.53％、16.67％和18.14％。由表2可知鹽脅迫嚴(yán)重抑制了菜用大豆葉片的生長(zhǎng)，‘烏大青’、‘八月白’和‘黃牛踏扁’的鹽害率高達(dá)72.9％、68.09％和64.13％；而‘早綠皮豆’、‘Z-7-5’和‘VS13-2’的鹽害率較低，低于50％。用200mMNaCl處理12d后，‘青牛踏扁’、‘烏大青’、‘八月白’、‘粗八月白’和‘蘇鮮四號(hào)’的葉綠素含量顯著減少；而‘骨粒青’、‘浙鮮豆五號(hào)’、‘烏毛豆’和‘VS13-2’的鹽害率較低，葉綠素含量相對(duì)較高。因此，綜合考慮各品種在鹽脅迫12d后的株高、葉面積和葉綠素含量的變化，篩選鑒定到苗期耐鹽性品種‘浙鮮豆五號(hào)’、‘五早豆’、‘VS13-2’和‘骨粒青’，鹽敏感品種‘烏大青’、‘蘇鮮四號(hào)’、‘黃牛踏扁’和‘烏毛豆’。表2鹽脅迫對(duì)菜用大豆株高、葉面積和葉綠素含量的影響(3)菜用大豆結(jié)莢期耐鹽或鹽敏感品種資源的鑒定篩選根據(jù)上述發(fā)芽期和幼苗期的耐鹽性鑒定結(jié)果，選取了耐鹽性不同的10個(gè)品種用于結(jié)莢期耐鹽性鑒定。采用普通有機(jī)基質(zhì)栽培(草炭：蛭石：珍珠巖＝3:1:1，每盆加15g顆粒緩釋肥)，每個(gè)塑料花盆(口徑28cm，底徑23cm，高20cm)中播種健壯飽滿種子10粒，每個(gè)品種播6盆，第一片三出真葉展平時(shí)間苗，每盆留苗2株，正常肥水管理。在開花結(jié)莢期用150mMNaCl處理進(jìn)行鹽脅迫，每次每盆澆灌2L，每隔1d澆一次鹽溶液，脅迫20d，以澆清水為對(duì)照。在鼓粒盛期至初熟期(R6-R7)測(cè)定各品種的有效分枝數(shù)、株高、單株莢數(shù)、產(chǎn)量及鮮籽粒百粒重，計(jì)算鹽害率，對(duì)10個(gè)品種的耐鹽性進(jìn)行了篩選鑒定，結(jié)果見表3和表4。由表3可以看出，用150mMNaCl澆灌20d后，10個(gè)品種的有效分枝數(shù)和株高都有不同程度的減少，其中‘蘇鮮四號(hào)’、‘烏大青’和‘青牛踏扁’受鹽害程度最重，有效分枝減少了1個(gè)，株高受到的鹽害率接近20％；而‘骨粒青’、‘浙鮮豆五號(hào)’和‘VS13-2’受鹽害程度較輕，有效分枝數(shù)和株高減少不明顯。表3鹽脅迫對(duì)菜用大豆生長(zhǎng)的影響由表4可知，鹽脅迫20d后，各品種的單株莢數(shù)、產(chǎn)量和鮮籽粒百粒重均有不同程度的降低，其中，‘烏大青’、‘蘇鮮四號(hào)’的單株莢數(shù)和產(chǎn)量降低了約30％，‘細(xì)八月白’、‘VS13-2’、‘骨粒青’和‘浙鮮豆五號(hào)’的莢數(shù)和產(chǎn)量降低程度較?。弧逶缍埂?、‘烏大青’和‘蘇鮮四號(hào)’的百粒重降低了15％以上，而‘細(xì)八月白’的百粒鮮重僅降低了約7％，‘VS13-2’、‘骨粒青’和‘青酥五號(hào)’降低了約10％。因此，綜合考慮這10個(gè)品種在鹽脅迫下的生長(zhǎng)情況和產(chǎn)量指標(biāo)，篩選鑒定到結(jié)莢期耐鹽品種‘VS13-2’、‘骨粒青’、‘細(xì)八月白’、‘浙鮮豆五號(hào)’，以及鹽敏感品種‘烏大青’、‘蘇鮮四號(hào)、‘早綠皮豆’。表4鹽脅迫對(duì)菜用大豆產(chǎn)量的影響(4)菜用大豆全生育期綜合耐鹽性的鑒定評(píng)價(jià)根據(jù)上述17個(gè)菜用大豆的發(fā)芽期和幼苗期耐鹽表型，發(fā)現(xiàn)在發(fā)芽期表現(xiàn)耐鹽的品種，在幼苗期的耐鹽性也較強(qiáng)，且發(fā)芽期表現(xiàn)鹽敏感的品種在幼苗期的耐鹽性也比較弱。并根據(jù)結(jié)莢期的耐鹽表現(xiàn)，可以篩選鑒定出在發(fā)芽期、有效期和結(jié)莢期均表現(xiàn)耐鹽或鹽敏感的菜用大豆品種資源。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3