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一種利用鹽芥與擬南芥的嫁接體系研究植物耐逆分子機(jī)理的方法與流程

文檔序號:12657257閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種利用鹽芥與擬南芥的嫁接體系研究植物耐逆分子機(jī)理的方法,其特征在于,步驟如下:

(1)將鹽芥種子經(jīng)消毒處理后,播種于含有瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基上,層積后轉(zhuǎn)入長日照光照條件下培養(yǎng);待鹽芥萌發(fā)時,將擬南芥種子進(jìn)行消毒處理,并播種于含有瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基上,層積或直接置于長日照光照條件下培養(yǎng);

(2)在無菌條件下進(jìn)行擬南芥/鹽芥的嫁接、擬南芥/擬南芥的自嫁接、鹽芥/鹽芥的自嫁接和鹽芥/擬南芥的嫁接;

(3)將嫁接好的擬南芥/鹽芥、擬南芥/擬南芥、鹽芥/鹽芥和鹽芥/擬南芥復(fù)合體置于短日照條件下培養(yǎng),得嫁接苗;

(4)將嫁接苗移栽至水培營養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng),然后用NaCl進(jìn)行處理,對嫁接苗鹽處理前后離子組含量進(jìn)行檢測,并提取RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組表達(dá)譜檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(1)中,鹽芥種子和擬南芥種子消毒處理的方法為:用濃度為0.5%的NaClO消毒6-8分鐘,然后用無菌水清洗4-6次。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(1)中,所述1/2MS培養(yǎng)基中瓊脂的質(zhì)量百分含量為1-1.5%;優(yōu)選為1.2%。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(1)中,所述長日照培養(yǎng)的條件為:16h光照/8h黑暗,光照條件下的溫度為21-23℃,黑暗條件下的溫度為18-20℃,光強(qiáng)為8000lux,相對濕度大于70%。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中,擬南芥/鹽芥的嫁接方法為:將萌發(fā)后7-10天的鹽芥的真葉及生長點(diǎn)切去,只保留兩片子葉作為砧木;將萌發(fā)后3-5天的擬南芥下胚軸距上端1/4處切下作為接穗,嫁接到鹽芥砧木上。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中,鹽芥/擬南芥、鹽芥/鹽芥、擬南芥/擬南芥的嫁接方法為:將作為砧木擬南芥或鹽芥移至另一含有瓊脂粉的1/2MS培養(yǎng)基中,并套上長3-6mm,內(nèi)徑/外徑為0.3mm/1.5mm的無菌塑料管,在解剖鏡下將接穗的下胚軸與砧木在套管內(nèi)對接形成嫁接體,最后將培養(yǎng)皿迅速封口。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(3)中,嫁接好的擬南芥/鹽芥、擬南芥/擬南芥、鹽芥/鹽芥和鹽芥/擬南芥復(fù)合體在短日照條件下的培養(yǎng)時間分別為:6-8天、6-8天、10-12天和10-12天。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(3)中,短日照培養(yǎng)的條件為:8h光照/16h黑暗,光照條件下的溫度為21-23℃,黑暗條件下的溫度為18-20℃,光強(qiáng)為8000lux,相對濕度大于70%。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無菌嫁接方法,其特征在于,步驟(4)中,所述水培營養(yǎng)液為1/2Hogland營養(yǎng)液。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的無菌嫁接方法,其特征在于,所述的種子消毒、播種和嫁接過程均是在無菌超凈臺中操作。

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