本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)植物栽培領(lǐng)域的百合栽培方法，特別是一種利用龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育及生根的方法。

背景技術(shù)：
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百合是百合科百合屬（學(xué)名：Lilium）多年生草本球莖植物。龍牙百合是我國(guó)三大主栽食用百合品種之一，久負(fù)盛名，是食用、藥用、觀賞百合中的名特優(yōu)品種，也是營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最好的品種之一。其鱗莖呈球形，一般橫徑4～6厘米，鱗片披針形，白色，曝曬時(shí)呈黃白色或稍帶粉紅色。淀粉含量高，營(yíng)養(yǎng)豐富，味淡不苦，地上莖高約90～120厘米，葉散生，倒披針形?；ㄈ榘咨邢銡?，其鱗莖可食用兼藥用。據(jù)醫(yī)藥典籍《金匱要略》、《本草綱目》、《中國(guó)藥典》記載，百合有潤(rùn)肺止咳、寧心安神、理脾健胃、補(bǔ)中益氣、利大小便、解無(wú)名腫毒及止血等功效?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，百合含有的秋水仙堿、秋水仙胺等對(duì)人體細(xì)胞有絲分裂有明顯的抑制作用，抑制癌細(xì)胞及急性痛風(fēng)等，均有明顯療效。百合還可以提練葡萄糖和奎寧等藥品。其鱗莖個(gè)頭大、片長(zhǎng)、肉厚、心實(shí)、色澤白、味道美、營(yíng)養(yǎng)豐富、藥效明顯，經(jīng)檢測(cè)，每百克百合中含水份65%，碳水化含物23.8%，總膳食纖維5.9%，其中果膠4.8%、蛋白質(zhì)4%、脂肪0.1%、水分1.1%、鈣0.9%、鐵0.09%、熱量132千卡。因此，百合是集食品、藥品于一身的綠色保健食品。

龍牙百合被人們稱為“南方人參”、“食中珍品”。目前，有關(guān)龍牙百合小鱗莖快速膨大并生根培養(yǎng)優(yōu)化等方面的研究較少。同時(shí)近年國(guó)內(nèi)構(gòu)建百合雜交后代無(wú)性系群體的方法報(bào)道較多,但多數(shù)側(cè)重于切花百合的研究,鮮見(jiàn)食用百合相關(guān)研究。有關(guān)龍牙百合x蘭州百合雜交后代組培鱗莖快速膨大發(fā)育并生根的方法更是未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。

另一方面，食用百合雜交后代種球的培育周期較長(zhǎng)，選育一個(gè)品種至少需要6-7年時(shí)間，如此長(zhǎng)的育種周期嚴(yán)重制約著食用百合育種行業(yè)的規(guī)?；?、產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，難于滿足市場(chǎng)對(duì)自育百合新品種的需求。

因此，如何來(lái)加快百合品種的育種進(jìn)程，并對(duì)現(xiàn)有的百合育種技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，以縮短百合新品種的培育時(shí)間。建立起完善的龍牙百合雜交后代快繁技術(shù)方法,通過(guò)優(yōu)化雜交百合小鱗莖快速膨大并生根培養(yǎng)等影響因素進(jìn)行詳細(xì)研究,以適應(yīng)龍牙百合雜交后代試管苗規(guī)?；a(chǎn)，從而滿足市場(chǎng)對(duì)培育百合新品種的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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本發(fā)明提供一種龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育及生根的方法。通過(guò)優(yōu)化雜交百合小鱗莖快速膨大并生根培養(yǎng)等影響因素,從而為龍牙百合雜交后代試管苗規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)支持。并為食用龍牙百合雜交后代試管苗規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)保證；滿足市場(chǎng)對(duì)食用百合雜交新品種的需要；從而降低龍牙百合種植成本。

本發(fā)明公開一種龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育、生根的方法，以龍牙百合雜交后代蒴果為外植體原料，制龍牙百合雜交后代群體，包括如下方法步驟：1）龍牙百合雜交后代胚挽救，制幼苗；2）叢芽增殖，快速增殖幼苗數(shù)量，制叢芽苗；3）小鱗莖誘導(dǎo)，培育分化鱗莖；4）小鱗莖膨大、生根；培育較大的鱗莖并生根，作為生產(chǎn)用的繁殖原始材料直接移入大田種植；所述1）龍牙百合雜交后代胚挽救，是從蒴果中取出種子，擠出幼胚，接種到培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)條件為，培養(yǎng)溫度為20-25℃，先在黑暗條件培養(yǎng)至萌發(fā)后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)，控制條件是，光照強(qiáng)度為2000-5000Lx，光照時(shí)間12小時(shí)/天的條件，培養(yǎng)30-80天，得到幼苗。

本發(fā)明一種龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育及生根的方法，所述 2）叢芽增殖是將1）幼苗接種于相應(yīng)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)條件為：采用光培養(yǎng)，控制培養(yǎng)周期為25-40天,培養(yǎng)溫度為22-28℃,光照強(qiáng)度為2000-4000Lux,光周期為12光/12h暗 ,制成叢芽苗。

本發(fā)明一種龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育及生根的方法，優(yōu)選是所述3）小鱗莖誘導(dǎo)，是將2）叢芽增殖制的叢芽苗切去葉片,余下的芽體轉(zhuǎn)接于相應(yīng)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，進(jìn)行小鱗莖誘導(dǎo)形成及增殖，制分化鱗莖；采用光培養(yǎng)，控制光培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)周期為30-40天,培養(yǎng)溫度為20-30℃,培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000-4000Lux,光周期為12光/12h暗。

本發(fā)明一種龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育及生根的方法，優(yōu)選所述4）小鱗莖膨大、生根：是將3）所得的分化鱗莖切割,并切除葉片后,移植于鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基中培養(yǎng),進(jìn)行小鱗莖的膨大生長(zhǎng)并生根,控制鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基的組成組分為包含1-2倍的MS培養(yǎng)基、1.0-5.0g/L多效唑、0.2-0.8mg/L萘乙酸、60-120g/L蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和3.5-10.5g/L瓊脂，pH=5.6-6.2。

進(jìn)一步的，是所述制龍牙百合雜交后代群體，是采用龍牙百合雜交后代蒴果為外植體原料，進(jìn)行胚挽救，制雜種胚，經(jīng)不定芽擴(kuò)繁，再進(jìn)行結(jié)球培養(yǎng)為籽球，待籽球重量為2-3g時(shí)，進(jìn)行春化處理，即制成龍牙百合雜交后代群體。

優(yōu)選的，是所述龍牙百合雜交后代為龍牙百合和蘭州百合雜交后代。

優(yōu)選的，是控制1）幼苗接種于相應(yīng)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)1-2次。

進(jìn)一步的，是控制鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基中培養(yǎng)二次以上。

優(yōu)選的，是控制春化處理時(shí)間為40-60天。

本發(fā)明采用上述方法，經(jīng)反復(fù)進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)，即使用本發(fā)明的鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基，培養(yǎng)60天后,可以使龍牙百合x蘭州百合雜交后代組培鱗莖由55mg/個(gè)增加到300 mg/個(gè)，凈增重245mg/個(gè)；由102mg/個(gè)增加到432mg/個(gè)凈增重330mg/個(gè)，并且生根良好。

本發(fā)明通過(guò)改進(jìn)龍牙百合雜交后代組培快繁方法，使用相應(yīng)的培養(yǎng)試管苗，培養(yǎng)完成后獲得具有膨大的鱗莖，可作為生產(chǎn)用的繁殖原始材料直接移入大田種植，大幅度提高了繁殖系數(shù)，縮短了龍牙百合雜交后代的生長(zhǎng)周期。提高種植效益，能滿足龍牙百合產(chǎn)業(yè)化、規(guī)?；耘嗉坝梅N需求。有利于龍牙百合的廣泛種植和推廣，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

具體實(shí)施方式：

下面結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

本發(fā)明所述各物料均可通過(guò)市售獲得，或者通過(guò)現(xiàn)有技術(shù)方法制備得到。

本發(fā)明一種龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育生根的方法，以龍牙百合雜交后代蒴果為外植體原料，制龍牙百合雜交后代群體，包括如下方法步驟：1）龍牙百合雜交后代胚挽救，制幼苗；2）叢芽增殖，制叢芽苗；3）小鱗莖誘導(dǎo)，制分化鱗莖；4）小鱗莖的膨大生長(zhǎng)并生根。所述1）龍牙百合雜交后代胚挽救，是從蒴果中取出種子，擠出幼胚，接種到于培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)條件為，培養(yǎng)溫度為20-25℃，先黑暗培養(yǎng)至萌發(fā)后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)，控制條件是，光照強(qiáng)度為2000-5000Lx，光照時(shí)間8-12小時(shí)/天的條件下，培養(yǎng)30-80天，得到幼苗。

本發(fā)明方法所述龍牙百合雜交后代群體是采用龍牙百合雜交后代蒴果為外植體材料，對(duì)采集雜交果實(shí)進(jìn)行胚挽救，胚挽救獲得的雜種胚不定芽擴(kuò)繁，再進(jìn)行結(jié)球培養(yǎng)，當(dāng)籽球重量生長(zhǎng)到2-3g左右時(shí)，再經(jīng)溫度為3-5℃下，春化處理40-60天，即形成龍牙百合雜交后代群體。

本發(fā)明龍牙百合雜交后代鱗莖膨大發(fā)育生根的方法或者是叫龍牙百合雜交后代組培鱗莖膨大發(fā)育的方法,包括如下階段：

1）龍牙百合雜交后代胚挽救，制幼苗：從龍牙百合雜交后代的蒴果中取出種子，擠出幼胚，接種到適宜的相應(yīng)的培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)溫度為20-25℃，先黑暗培養(yǎng)，待其萌發(fā)后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)，控制光照強(qiáng)度為2000-5000Lx，光照時(shí)間8～12小時(shí)/天的條件下，培養(yǎng)30-80天，得到幼苗；

2）叢芽增殖，制叢芽苗，快速增殖幼苗數(shù)量；將上述1）得到幼苗，將幼苗接種到適宜的相應(yīng)的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)周期為30天,培養(yǎng)溫度為25℃,光照強(qiáng)度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗 ,該階段培養(yǎng)控制進(jìn)行2次，也可以2次以上，形成叢芽苗；

3）小鱗莖誘導(dǎo)，制分化鱗莖：將2）所得的叢芽苗切割除去葉片,將余下的芽體轉(zhuǎn)接到適宜的相應(yīng)的培養(yǎng)基，進(jìn)行鱗莖的誘導(dǎo)形成及增殖，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)周期為30-40天,培養(yǎng)溫度為25℃,培養(yǎng)光照強(qiáng)度為2000-4000Lux,光周期為12h光/12h暗；得分化鱗莖；

4）小鱗莖膨大生根；小鱗莖的膨大生長(zhǎng)并生根：將3）所得的分化鱗莖切割下來(lái),并切除葉片后，移植于鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基中培養(yǎng),進(jìn)行小鱗莖的膨大生長(zhǎng)并生根,控制培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)周期為60天,培養(yǎng)溫度為25℃,避光暗培養(yǎng),所述鱗莖膨大發(fā)育培養(yǎng)基其組分組成包含1倍MS培養(yǎng)基、1g/L多效唑、0.2mg/L萘乙酸、80g/L蔗糖、活性炭2g/L和6.5g/L瓊脂，pH=5.8；該階段培養(yǎng)進(jìn)行2次以上。

本發(fā)明通過(guò)改善龍牙百合雜交后代組培快繁技術(shù)方案，操作過(guò)程與培養(yǎng)試管苗類似，培養(yǎng)完成后獲得具有膨大的鱗莖，可作為生產(chǎn)用的繁殖原始材料直接移入大田種植，大幅度提高了繁殖系數(shù)，縮短了龍牙百合雜交后代的生長(zhǎng)周期，有利于龍牙百合雜交種的廣泛種植和推廣，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。

上述實(shí)施方案中使用的培養(yǎng)基除已公開的外，未說(shuō)明之處如上述使用的相應(yīng)的培養(yǎng)基均是使用現(xiàn)有技術(shù)市場(chǎng)上市售的應(yīng)用于本發(fā)明技術(shù)方面的培養(yǎng)基。