本發(fā)明涉及一種盆栽非洲菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，屬于農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)又名扶郎花、大丁草，為菊科大丁草屬，多年生草本植物，其花朵碩大、花色豐富、易于栽培管理，在溫暖地區(qū)可常年供應(yīng)，近幾年已成為世界鮮花市場中最暢銷的花卉之一。我國切花非洲菊的栽培比較普遍，在鮮切花市場占有很大份額。而盆栽非洲菊是近年國際上新育成的盆花品種，目前市場上非洲菊的品種幾乎都是組培繁殖的切花品種，而專門用于盆花栽培的品種很少。盆花非洲菊或盆栽型非洲菊相對切花非洲菊而言,不同之處主要在于株型上植株較矮，花莖粗壯，葉片較短，花徑略小。盆花非洲菊喜光照充足，光線充足能使葉片生長健壯、花梗挺拔粗壯、花色鮮艷，對日照長度無明顯反應(yīng)，溫度適宜時(shí)可周年開花。目前，市場上的盆栽非洲品種均為雜種F1代，采用種子繁殖，每粒種子約2元造成成本較高，因此，采用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行快速繁殖可為園藝市場提供大量優(yōu)質(zhì)種苗，對于促進(jìn)國內(nèi)盆栽非洲菊產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出了一種盆栽非洲菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)中采用種子繁殖盆栽非洲菊成本較高的問題，通過剝?nèi)〕墒旖训姆侵蘧漳钢昊ɡ伲凑胀庵搀w的選擇與消毒步驟、初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽步驟、繼代培養(yǎng)步驟以及生根培養(yǎng)和移栽馴化步驟進(jìn)行盆栽非洲菊的培育得到大量植株。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

本發(fā)明涉及一種盆栽非洲菊組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括外植體的選擇與消毒、初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和移栽馴化，所述外植體的選擇與消毒是在天氣晴朗時(shí) 選取成活的盆栽非洲菊母株并置于通風(fēng)處一周，然后取健壯完整的花蕾，用洗潔精輕輕擦洗后置于流動(dòng)的自來水下沖洗一小時(shí)，然后取該花蕾放置于超凈臺下，花托部分剪成邊長約0.5公分的小塊作為外植體，先用70％酒精清洗10秒后用無菌水沖洗3次且每次15秒左右，再移入0.1％升汞中加一滴吐溫20，振蕩5-8分鐘，最后用無菌水漂洗8-12次，所述初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽是將所述外植體的選擇與消毒得到的外植體接種到含0.8mg/L 6-BA，0.2mg/L NAA的MS培養(yǎng)基中，先暗培養(yǎng)一周，然后置于光合有效輻射(PAR)為40μmolm^-2s^-1的組培架上，保持光照時(shí)間12小時(shí)，當(dāng)培養(yǎng)18天后出現(xiàn)外植體增厚、邊緣出現(xiàn)大量不定芽且芽粗壯密集，繼續(xù)培養(yǎng)至第6周直至芽發(fā)育為完整的植株，所述繼代培養(yǎng)是將所述初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽得到的幼株在超凈工作臺中無菌條件下取出，并將幼株的葉片剝下并切成邊長是0.5公分寬的小塊，重新接種含有0.8mg/L 6-BA，0.01mg/L NAA的MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3周后出現(xiàn)不定芽，繼續(xù)培養(yǎng)3周至不定芽全部成苗，并及時(shí)進(jìn)行分株轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上，繼續(xù)培養(yǎng)3周，所述生根培養(yǎng)將所述繼代培養(yǎng)中獲得的健壯植株轉(zhuǎn)接于含有0.5g/L的IBA、32g/L蔗糖和6.5g/L瓊脂，pH值為5.8的MS生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25-30天可得到根長約2cm,植株長至3-4cm高生根的完整植株，所述移栽馴化是將所述生根培養(yǎng)獲得的生根苗從培養(yǎng)瓶內(nèi)挑出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽于預(yù)先裝滿基質(zhì)的72孔穴盤中，每穴一株，然后放置于苗床上，噴灑殺菌劑后，苗床立即覆蓋小拱棚，小拱棚內(nèi)配備噴霧裝置，定期噴霧保濕，移栽后溫室遮陽，小拱棚內(nèi)最大光強(qiáng)不高于160μmolm^-2s^-1的光合有效輻射，溫室內(nèi)的最高溫度控制在28℃以下，且最低夜溫維持在18℃以上，移栽后逐步降低空氣相對濕度進(jìn)行馴化栽培6周后，將穴盤苗進(jìn)一步移栽于花盆。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述移栽馴化步驟中的移栽基質(zhì)的配比為草炭、珍珠巖按照體積比7:3配制，基質(zhì)pH調(diào)整到6.5。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述移栽馴化步驟中的殺菌劑為0.2％的甲基托布津溶液。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述移栽馴化步驟中的逐步降低馴化拱棚內(nèi)的空氣相對濕度的具體特征為：第一周小拱棚內(nèi)空氣相對濕度通過噴霧和拱棚密閉保持95％以上，拱棚薄膜全封閉。一周后，新根長出后逐步揭開薄膜，繼續(xù)維持空氣相對濕度在85％以上一周，然后再加大通風(fēng)面積，空氣濕度逐步降到75％，直至全部揭開拱棚薄膜。

本發(fā)明所達(dá)到的有益效果是：本發(fā)明的方法簡單、操作簡便，解決了現(xiàn)有技術(shù)中采用種子繁殖盆栽非洲菊成本較高的問題，通過剝?nèi)〕墒旖训姆侵蘧漳钢昊ɡ?，并按照外植體的選擇與消毒步驟、初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽步驟、繼代培養(yǎng)步驟以及生根培養(yǎng)和移栽馴化步驟進(jìn) 行盆栽非洲菊的培育得到大量植株，具有繁殖系數(shù)高，移栽成活率高的優(yōu)點(diǎn)，可在短期內(nèi)提供大量盆栽非洲菊的優(yōu)質(zhì)種苗，對盆栽非洲菊規(guī)模化推廣具有重要作用。

附圖說明

附圖用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實(shí)施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：

圖1是不同培養(yǎng)基初代培養(yǎng)不定芽誘導(dǎo)效果比較；

圖2不同激素水平組合對盆栽非洲菊繼代培養(yǎng)增殖的影響；

圖3培養(yǎng)基不同激素水平和蔗糖含量對盆栽非洲菊瓶內(nèi)生根的影響；

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合研發(fā)實(shí)施過程對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

實(shí)施例1

一種盆栽非洲菊的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：(1)外植體的選擇和消毒：在引種成活生長健壯的盆栽非洲菊母株在天氣晴朗時(shí)，置于通風(fēng)處一周后，取健壯完整的花蕾(花柄長2-3cm)，用洗潔精輕輕擦洗后置于流動(dòng)的自來水下沖洗1小時(shí)。取該花蕾放置于超凈臺下，先用70％酒精清洗10s后用無菌水沖洗3次(每次15s左右)，再移入0.1％升汞中加一滴吐溫20，振蕩5-8分鐘，最后用無菌水漂洗7-10次。將花托部分剪成邊長約0.5cm的小塊作為外植體，(2)初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽：將步驟(1)得到的外植體接種到1種不含生長素和3種添加不同生長素的MS培養(yǎng)基中，即培養(yǎng)基處理含0.5mg/L的6-BA，0.1mg/L的NAA、IBA、或IAA，6g/L的瓊脂，30g/L蔗糖，pH5.8。每瓶接種5個(gè)外植體。培養(yǎng)室溫度為25℃士2℃，先暗培養(yǎng)一周后，而后置于光合有效輻射(PAR)為40μmolm^-2s^-1的組培架上，光照時(shí)間12h。僅添加0.5mg/L的培養(yǎng)基處理培養(yǎng)26天后外植體增厚，但未見明顯的愈傷組織，邊緣出現(xiàn)不定芽，芽粗壯，但每個(gè)外植體只有14個(gè)芽。添加0.5mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的MS培養(yǎng)基在培養(yǎng)19天后即出現(xiàn)不定芽，每個(gè)外植體共產(chǎn)生21個(gè)不定芽，芽體比較均勻。添加0.1mg/L的IBA、IAA的兩個(gè)培養(yǎng)基每個(gè)外植體產(chǎn)生的不定芽數(shù)分別為16個(gè)和18個(gè)，介于兩者之間。繼續(xù)培養(yǎng)至第6周，芽發(fā)育為完整但未生根的植株，(3)繼代培養(yǎng)：將步驟(2)中得到的幼株在超凈工作臺中無菌條件下取出，將幼株重新接種到繼代培養(yǎng)基中。繼代培養(yǎng)基共設(shè)置不同激素水平組合的10個(gè)處理，以不加任何激素的MS培養(yǎng)基為對照(圖2)。每瓶接種5個(gè)幼株。培養(yǎng)室溫度為25℃士2℃，光合有效輻射(PAR)為40μ molm^-2s^-1，光照時(shí)間12h。通過數(shù)據(jù)分析可以看出，6-BA濃度對不定芽產(chǎn)生數(shù)量有顯著影響(P＝0.005，而NAA濃度對其沒有顯著影響(P＝0.247兩種激素的交互作用也有顯著影響。每個(gè)外植體產(chǎn)生的不定芽數(shù)量總體隨6-BA濃度的升高而增加，但6-BA濃度過高，芽密集且小，而且芽體玻璃化現(xiàn)象嚴(yán)重。綜合增殖系數(shù)和苗體質(zhì)量，含有0.5mg/L的6-BA，0.01mg/L的NAA，6g/L的瓊脂，30g/L蔗糖，pH5.8的MS培養(yǎng)基為最佳，培養(yǎng)3周后外植體3周出現(xiàn)不定芽，繼續(xù)培養(yǎng)3周不定芽全部成苗，及時(shí)進(jìn)行分株轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上，每瓶轉(zhuǎn)接20株，繼續(xù)培養(yǎng)3周，(4)生根培養(yǎng)：將步驟(3)中獲得的健壯植株轉(zhuǎn)接于MS生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)室溫度為25℃士2℃，光合有效輻射(PAR)為40μmolm^-2s^-1，光照時(shí)間12h，培養(yǎng)25-30天可得到生根的完整植株。蔗糖濃度對瓶苗株高和根數(shù)有顯著影響，而IBA濃度對瓶苗葉片數(shù)、根數(shù)、根長、株高都有顯著影響。兩種蔗糖濃度下，0.5mg/L IBA時(shí)根數(shù)均最多，根長也最長，植株也最高。但高濃度IBA處理瓶苗的根細(xì)長不均勻，苗體較弱；而MS生根培養(yǎng)基含有0.3g/L的IBA、30g/L蔗糖和5.5g/L瓊脂時(shí)，瓶苗較為健壯，根均勻粗壯，易于移栽，在根長約15mm,植株長至1.5-2cm高時(shí)即可用于移栽，(5)移栽馴化：將步驟(4)獲得的生根苗從培養(yǎng)瓶內(nèi)挑出，洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽于裝滿基質(zhì)的72孔穴盤中，每穴一株，放置于苗床上，噴施0.2％的甲托溶液，苗床覆蓋小拱棚，小拱棚內(nèi)配備噴霧裝置，定期噴霧保濕。移栽基質(zhì)的配比為草炭：珍珠巖＝7:3，基質(zhì)pH為6.5，裝滿穴盤后澆透水。移栽后溫室遮陽，小拱棚內(nèi)最大光強(qiáng)不高于160μmolm^-2s^-1的光合有效輻射。馴化第一周小拱棚內(nèi)空氣相對濕度通過噴霧和拱棚密閉保持95％以上，拱棚薄膜全封閉。一周后，新根長出后逐步揭開薄膜，繼續(xù)維持空氣相對濕度在85％以上一周，然后再加大通風(fēng)面積，空氣濕度逐步降到75％。溫室內(nèi)的最高溫度控制在30℃以下，最低夜溫維持在15℃以上。移栽馴化栽培6周后，可將穴盤苗進(jìn)一步移栽于花盆。移栽成活率達(dá)到96％以上。

進(jìn)一步，移栽馴化5步驟中的移栽基質(zhì)的配比為草炭、珍珠巖按照體積比7:3配制，基質(zhì)pH調(diào)整到6.5。

移栽馴化5步驟中的殺菌劑為0.2％的甲基托布津溶液。

本發(fā)明的方法簡單、操作簡便，解決了現(xiàn)有技術(shù)中采用種子繁殖盆栽非洲菊成本較高的問題，通過剝?nèi)〕墒旖训姆侵蘧漳钢昊ɡ?，并按照外植體的選擇與消毒1步驟、初代培養(yǎng)誘導(dǎo)不定芽2步驟、繼代培養(yǎng)3步驟以及生根培養(yǎng)和移栽馴化4步驟進(jìn)行盆栽非洲菊的培育得到大量植株，具有繁殖系數(shù)高，移栽成活率高的優(yōu)點(diǎn)，可在短期內(nèi)提供大量盆栽非洲菊的優(yōu)質(zhì)種苗，對盆栽非洲菊規(guī)?；茝V具有重要作用。

最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管 參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。