本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)育苗技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種巖筍組織培養(yǎng)育苗方法。

背景技術(shù)：

巖筍，為蘭科植物筍蘭Thunia alba (Lindl.) Rchb.f.的全草，又稱通蘭、巖角、石竹子、巖竹。多年生附生草本，高約30～50厘米·須根多數(shù)，肉質(zhì)狀，灰白色或淺褐色。巖筍味甘、性平，據(jù)《云南中草藥》、《貴州藥植目錄》和《云南思茅中草藥選》記載，其具有止咳平喘、活血祛瘀等作用，用于治療肺炎、氣管及支氣管炎、胃及十二指腸潰瘍、骨折與跌打勞傷等。巖筍具有很高的藥用價(jià)值，有著巨大的市場(chǎng)前景。因巖筍種子具有種子細(xì)小量大、無胚乳，自然條件下需要與適宜的菌根真菌才能萌發(fā)，自然環(huán)境破壞和人為過度采挖，在加上種子萌發(fā)條件苛刻，致使野生資源在原始生境恢復(fù)異常困難。

目前，還沒有一種關(guān)于巖筍組織培養(yǎng)育苗的方法，并無人工種植及人工育苗的出現(xiàn)，在一定程度上制約了巖筍的規(guī)?；绾头N植。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提供一種巖筍組織培養(yǎng)育苗方法，提高巖筍組培苗栽培的成活率，節(jié)約成本，為巖筍規(guī)?；缟a(chǎn)提供關(guān)鍵技術(shù)。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種巖筍組織培養(yǎng)育苗方法，包括以下步驟：

（1）培養(yǎng)基制備：培養(yǎng)基包括誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；其中，誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基為MS+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L+花寶1號(hào)0.7g/L+香蕉泥30g/L+土豆泥20g/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L+PH5.9；增殖培養(yǎng)基為MS+IBA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L+PH5.9；生根培養(yǎng)基為2/3MS+NAA0.8mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+活性碳0.5g/L+瓊脂5g/L+ph5.9；將配制好的誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基以每瓶60ml，生根培養(yǎng)基每瓶120ml裝入培養(yǎng)瓶中，采用121℃、0.5Mpa進(jìn)行滅菌25min后冷卻凝固后備用；

（2）外植體制備：秋季在成熟植株上采摘飽滿的碩果作為外植體，并進(jìn)行清洗、消毒；

（3）接種培養(yǎng)：接種器具進(jìn)行滅菌，雙手消毒后，將步驟（2）中制備得到的外植體在超凈工作臺(tái)內(nèi)，按無菌操作要求把碩果切開，將其中的種子均勻的撒入誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋后放置于消毒后的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)，出苗后接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)2~3個(gè)月；

（4）馴化：將生根培養(yǎng)得到幼苗取出，用1000倍多菌靈浸泡10min后流水沖洗后種植于泥炭土、珍珠巖、鋸木屑混合基質(zhì)中，馴化初期用3針遮陰網(wǎng)遮陰10天，馴化60天即可移栽大田。

優(yōu)選的，步驟（2）中外植體清洗、消毒的步驟是：用肥皂水侵泡30分鐘后沖洗干凈表面污跡，然后流水沖洗至少30min，用小刀將碩果上的疤痕去除，待表面水分蒸發(fā)后，在超凈工作臺(tái)上用75%的乙醇侵泡5~10min，中途不斷搖晃碩果，然后用無菌水沖洗3~5遍后用無菌鑷子取出放置在濃度為0.1~0.2%升汞中侵泡10~15min，中途不斷搖晃碩果，再用無菌水沖洗5~8遍后用無菌鑷子取出放置在墊有無菌吸水紙的接種盤上，即可。

優(yōu)選的，步驟（3）中，在培養(yǎng)室中進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的具體操作為：在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)包括暗培養(yǎng)和光培養(yǎng)，暗培養(yǎng)時(shí)溫度控制在18~22℃、濕度40-50%，暗培養(yǎng)7~10天之后轉(zhuǎn)入光培養(yǎng)，光培養(yǎng)光照3500LUX每天8小時(shí)；待誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)苗高2~3cm，莖稈直徑大于0.3cm的苗在超凈工作臺(tái)內(nèi)按無菌要求轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)溫度為25℃，光照3500LUX每天8小時(shí)；其他幼苗可轉(zhuǎn)至增殖培養(yǎng)基中擴(kuò)大繁殖。

優(yōu)選的，步驟（4）中，泥炭土、珍珠巖、鋸木屑三者的體積比為4：1：1，所混合得到的種植基質(zhì)PH6.5~6.8。

本發(fā)明的有益效果：運(yùn)用本發(fā)明進(jìn)行巖筍組織培養(yǎng)育苗，萌發(fā)率達(dá)到90%以上，繁殖系數(shù)達(dá)到3~5，具有繁殖系數(shù)高、繁殖速度快的特點(diǎn)，而且繁育出來的種苗具有與母體相同的植物特征，抗性好。大大解決了巖筍繁殖困難的問題，有利于巖筍進(jìn)行規(guī)?；?、工廠化生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步介紹：

一種巖筍組織培養(yǎng)育苗方法，包括以下步驟：

（1）培養(yǎng)基制備：培養(yǎng)基包括誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基；其中，誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基為MS+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L+花寶1號(hào)0.7g/L+香蕉泥30g/L+土豆泥20g/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L+PH5.9；增殖培養(yǎng)基為MS+IBA0.5mg/L+6-BA0.5mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂5g/L+PH5.9；生根培養(yǎng)基為2/3MS+NAA0.8mg/L+IAA0.5mg/L+蔗糖30g/L+活性碳0.5g/L+瓊脂5g/L+ph5.9；將配制好的誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基以每瓶60ml，生根培養(yǎng)基每瓶120ml裝入培養(yǎng)瓶中，采用121℃、0.5Mpa進(jìn)行滅菌25min后冷卻凝固后備用。

（2）外植體制備：秋季在成熟植株上采摘飽滿的碩果作為外植體，并進(jìn)行清洗、消毒，步驟是：用肥皂水侵泡30分鐘后沖洗干凈表面污跡，然后流水沖洗至少30min，用小刀將碩果上的疤痕去除，待表面水分蒸發(fā)后，在超凈工作臺(tái)上用75%的乙醇侵泡5~10min，中途不斷搖晃碩果，然后用無菌水沖洗3~5遍后用無菌鑷子取出放置在濃度為0.1~0.2%升汞中侵泡10~15min，中途不斷搖晃碩果，再用無菌水沖洗5~8遍后用無菌鑷子取出放置在墊有無菌吸水紙的接種盤上，即可。

（3）接種培養(yǎng)：接種器具進(jìn)行滅菌，雙手消毒后，將步驟（2）中制備得到的外植體在超凈工作臺(tái)內(nèi)，按無菌操作要求把碩果切開，將其中的種子均勻的撒入誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)基中，蓋好瓶蓋后放置于消毒后的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)、生根培養(yǎng)，具體操作如下：在培養(yǎng)室中進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)、生根培養(yǎng)的具體操作為：在培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)包括暗培養(yǎng)和光培養(yǎng)，暗培養(yǎng)時(shí)溫度控制在18~22℃、濕度40-50%，暗培養(yǎng)7~10天之后轉(zhuǎn)入光培養(yǎng)，光培養(yǎng)光照3500LUX每天8小時(shí)；待誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)苗高2~3cm，莖稈直徑大于0.3cm的苗在超凈工作臺(tái)內(nèi)按無菌要求轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)溫度為25℃，光照3500LUX每天8小時(shí)；其他幼苗可轉(zhuǎn)至增殖培養(yǎng)基中擴(kuò)大繁殖。

（4）馴化：將生根培養(yǎng)得到幼苗取出，用1000倍多菌靈浸泡10min后流水沖洗后種植于泥炭土、珍珠巖、鋸木屑混合基質(zhì)中，泥炭土、珍珠巖、鋸木屑三者的體積比為4：1：1，所混合得到的種植基質(zhì)PH6.5~6.8，馴化初期用3針遮陰網(wǎng)遮陰10天，馴化60天即可移栽大田。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。