本發(fā)明涉及甘薯脫毒領域，尤其涉及一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法。

背景技術：

遺字138甘薯食味好，含糖量高，粘軟度好，是城鄉(xiāng)人民喜歡食用的品種之一。它適宜作為春、夏薯栽培，耐肥、耐漬性較好，塊數(shù)較多，薯塊大小較均勻適中。遺字138甘薯以薯塊和莖蔓等營養(yǎng)器官進行無性繁殖，在引種、繁殖和生產(chǎn)過程中易造成甘薯病毒病的積累和蔓延，從而導致產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降、種性退化等問題。因此利用健康種苗進行快繁就成為了必然選擇，但是一般的脫毒方法脫毒效果并不是很明顯，不僅耗費原料，還影響收益。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術的不足，而提供一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，采用以下技術方案：

一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法，具體步驟為：

(1)無菌外植體的獲得：

選取遺字138甘薯苗頂部1.5cm長的莖尖，先用70％的酒精浸泡10-15s，再用0.1％的氯化汞消毒6-8min，然后將其用無菌水沖洗6-8次，在超凈工作臺上，采用解剖鏡觀察進行莖尖的剝離，獲得0.3-0.4mm的莖尖分生組織；

(2)莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒：

將剝離獲得的莖尖分生組織接種在莖尖誘導培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃、光照強度為3000lx的條件下，每天進行18h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為18-25天，將其轉(zhuǎn)入普通培養(yǎng)基上，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為55-60天，得到莖尖試管苗；

(3)脫毒鑒定：

首先采取目測法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后再采用血清學法鑒定甘薯病毒，淘汰沒有脫毒的遺字138甘薯苗；

(4)脫毒甘薯苗快繁：

在無菌條件下，將經(jīng)過莖尖分生組織培養(yǎng)和脫毒鑒定后的優(yōu)質(zhì)遺字138甘薯苗莖尖，切成單節(jié)接種到普通培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃，光照強度為3000lx的條件下，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20-23天，按此程序不斷的轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，進行脫毒遺字138甘薯苗的快繁。

所述莖尖誘導培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂+1mg/L6-BA。

所述普通培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂。

所述血清學法鑒定遺字138甘薯病毒的具體操作方法為：每試管苗取基部2-3片葉裝入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取緩沖液，輕輕碾壓，使樣品與組織液混勻，4℃下靜置70-80min，取上清液點樣在準備好的硝酸纖維素樣膜上，進行斑點酶聯(lián)免疫吸附實驗，然后沖洗、顯色，如果呈現(xiàn)藍紫色為沒有脫毒，無色為脫去病毒。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了一種簡單易行的遺字138甘薯脫毒快繁的方法，能夠達到很好的脫毒效果，提供了大量的優(yōu)質(zhì)種苗，利用這種優(yōu)質(zhì)健康種苗進行快繁，能夠提高種植收益，惠及廣大種植戶和開發(fā)企業(yè)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明：

實施例1：

一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法，具體步驟為：

(1)無菌外植體的獲得：

選取遺字138甘薯苗頂部1.5cm長的莖尖，先用70％的酒精浸泡10s，再用0.1％的氯化汞消毒8min，然后將其用無菌水沖洗8次，在超凈工作臺上，采用解剖鏡觀察進行莖尖的剝離，獲得0.3mm的莖尖分生組織；

(2)莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒：

將剝離獲得的莖尖分生組織接種在莖尖誘導培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃、光照強度為3000lx的條件下，每天進行18h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為18天，將其轉(zhuǎn)入普通培養(yǎng)基上，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為60天，得到莖尖試管苗；

(3)脫毒鑒定：

首先采取目測法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后再采用血清學法鑒定甘薯病毒，淘汰沒有脫毒的遺字138甘薯苗；

(4)脫毒甘薯苗快繁：

在無菌條件下，將經(jīng)過莖尖分生組織培養(yǎng)和脫毒鑒定后的優(yōu)質(zhì)遺字138甘薯苗莖尖，切成單節(jié)接種到普通培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃，光照強度為3000lx的條件下，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為23天，按此程序不斷的轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，進行脫毒遺字138甘薯苗的快繁。

所述莖尖誘導培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂+1mg/L6-BA。

所述普通培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂。

所述血清學法鑒定遺字138甘薯病毒的具體操作方法為：每試管苗取基部2片葉裝入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取緩沖液，輕輕碾壓，使樣品與組織液混勻，4℃下靜置70min，取上清液點樣在準備好的硝酸纖維素樣膜上，進行斑點酶聯(lián)免疫吸附實驗，然后沖洗、顯色，如果呈現(xiàn)藍紫色為沒有脫毒，無色為脫去病毒。

本發(fā)明提供了一種簡單易行的遺字138甘薯脫毒快繁的方法，能夠達到很好的脫毒效果，提供了大量的優(yōu)質(zhì)種苗，利用這種優(yōu)質(zhì)健康種苗進行快繁，能夠提高種植收益，惠及廣大種植戶和開發(fā)企業(yè)。

實施例2：

一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法，具體步驟為：

(1)無菌外植體的獲得：

選取遺字138甘薯苗頂部1.5cm長的莖尖，先用70％的酒精浸泡15s，再用0.1％的氯化汞消毒6min，然后將其用無菌水沖洗6次，在超凈工作臺上，采用解剖鏡觀察進行莖尖的剝離，獲得0.4mm的莖尖分生組織；

(2)莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒：

將剝離獲得的莖尖分生組織接種在莖尖誘導培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃、光照強度為3000lx的條件下，每天進行18h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為25天，將其轉(zhuǎn)入普通培養(yǎng)基上，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為55天，得到莖尖試管苗；

(3)脫毒鑒定：

首先采取目測法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后再采用血清學法鑒定甘薯病毒，淘汰沒有脫毒的遺字138甘薯苗；

(4)脫毒甘薯苗快繁：

在無菌條件下，將經(jīng)過莖尖分生組織培養(yǎng)和脫毒鑒定后的優(yōu)質(zhì)遺字138甘薯苗莖尖，切成單節(jié)接種到普通培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃，光照強度為3000lx的條件下，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為20天，按此程序不斷的轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，進行脫毒遺字138甘薯苗的快繁。

所述莖尖誘導培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂+1mg/L6-BA。

所述普通培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂。

所述血清學法鑒定遺字138甘薯病毒的具體操作方法為：每試管苗取基部3片葉裝入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取緩沖液，輕輕碾壓，使樣品與組織液混勻，4℃下靜置80min，取上清液點樣在準備好的硝酸纖維素樣膜上，進行斑點酶聯(lián)免疫吸附實驗，然后沖洗、顯色，如果呈現(xiàn)藍紫色為沒有脫毒，無色為脫去病毒。

本發(fā)明提供了一種簡單易行的遺字138甘薯脫毒快繁的方法，能夠達到很好的脫毒效果，提供了大量的優(yōu)質(zhì)種苗，利用這種優(yōu)質(zhì)健康種苗進行快繁，能夠提高種植收益，惠及廣大種植戶和開發(fā)企業(yè)。

實施例3：

一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法，具體步驟為：

(1)無菌外植體的獲得：

選取遺字138甘薯苗頂部1.5cm長的莖尖，先用70％的酒精浸泡13s，再用0.1％的氯化汞消毒7min，然后將其用無菌水沖洗7次，在超凈工作臺上，采用解剖鏡觀察進行莖尖的剝離，獲得0.3mm的莖尖分生組織；

(2)莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒：

將剝離獲得的莖尖分生組織接種在莖尖誘導培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃、光照強度為3000lx的條件下，每天進行18h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為22天，將其轉(zhuǎn)入普通培養(yǎng)基上，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為57天，得到莖尖試管苗；

(3)脫毒鑒定：

首先采取目測法，淘汰弱苗和顯癥苗，然后再采用血清學法鑒定甘薯病毒，淘汰沒有脫毒的遺字138甘薯苗；

(4)脫毒甘薯苗快繁：

在無菌條件下，將經(jīng)過莖尖分生組織培養(yǎng)和脫毒鑒定后的優(yōu)質(zhì)遺字138甘薯苗莖尖，切成單節(jié)接種到普通培養(yǎng)基上，靜置于溫度為30℃，光照強度為3000lx的條件下，每天進行15h光照培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為21天，按此程序不斷的轉(zhuǎn)接培養(yǎng)，進行脫毒遺字138甘薯苗的快繁。

所述莖尖誘導培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂+1mg/L6-BA。

所述普通培養(yǎng)基的組成為MS+3％蔗糖+0.7％瓊脂。

所述血清學法鑒定遺字138甘薯病毒的具體操作方法為：每試管苗取基部3片葉裝入塑料袋中，加入1mlTBS-DIECA提取緩沖液，輕輕碾壓，使樣品與組織液混勻，4℃下靜置75min，取上清液點樣在準備好的硝酸纖維素樣膜上，進行斑點酶聯(lián)免疫吸附實驗，然后沖洗、顯色，如果呈現(xiàn)藍紫色為沒有脫毒，無色為脫去病毒。

本發(fā)明提供了一種簡單易行的遺字138甘薯脫毒快繁的方法，能夠達到很好的脫毒效果，提供了大量的優(yōu)質(zhì)種苗，利用這種優(yōu)質(zhì)健康種苗進行快繁，能夠提高種植收益，惠及廣大種植戶和開發(fā)企業(yè)。

上面對本發(fā)明進行了示例性描述，顯然本發(fā)明具體實現(xiàn)并不受上述方式的限制，只要采用了本發(fā)明的方法構(gòu)思和技術方案進行的各種改進，或未經(jīng)改進直接應用于其它場合的，均在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。