1.一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法,其特征在于,具體步驟為:
(1)無(wú)菌外植體的獲得:
選取遺字138甘薯苗頂部1.5cm長(zhǎng)的莖尖,先用70%的酒精浸泡10-15s,再用0.1%的氯化汞消毒6-8min,然后將其用無(wú)菌水沖洗6-8次,在超凈工作臺(tái)上,采用解剖鏡觀察進(jìn)行莖尖的剝離,獲得0.3-0.4mm的莖尖分生組織;
(2)莖尖分生組織培養(yǎng)脫毒:
將剝離獲得的莖尖分生組織接種在莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,靜置于溫度為30℃、光照強(qiáng)度為3000lx的條件下,每天進(jìn)行18h光照培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為18-25天,將其轉(zhuǎn)入普通培養(yǎng)基上,每天進(jìn)行15h光照培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為55-60天,得到莖尖試管苗;
(3)脫毒鑒定:
首先采取目測(cè)法,淘汰弱苗和顯癥苗,然后再采用血清學(xué)法鑒定甘薯病毒,淘汰沒有脫毒的遺字138甘薯苗;
(4)脫毒甘薯苗快繁:
在無(wú)菌條件下,將經(jīng)過莖尖分生組織培養(yǎng)和脫毒鑒定后的優(yōu)質(zhì)遺字138甘薯苗莖尖,切成單節(jié)接種到普通培養(yǎng)基上,靜置于溫度為30℃,光照強(qiáng)度為3000lx的條件下,每天進(jìn)行15h光照培養(yǎng),培養(yǎng)時(shí)間為20-23天,按此程序不斷的轉(zhuǎn)接培養(yǎng),進(jìn)行脫毒遺字138甘薯苗的快繁。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法,其特征在于,所述莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的組成為MS+3%蔗糖+0.7%瓊脂+1mg/L6-BA。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法,其特征在于,所述普通培養(yǎng)基的組成為MS+3%蔗糖+0.7%瓊脂。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種遺字138甘薯的脫毒快繁方法,其特征在于,所述血清學(xué)法鑒定遺字138甘薯病毒的具體操作方法為:每試管苗取基部2-3片葉裝入塑料袋中,加入1mlTBS-DIECA提取緩沖液,輕輕碾壓,使樣品與組織液混勻,4℃下靜置70-80min,取上清液點(diǎn)樣在準(zhǔn)備好的硝酸纖維素樣膜上,進(jìn)行斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),然后沖洗、顯色,如果呈現(xiàn)藍(lán)紫色為沒有脫毒,無(wú)色為脫去病毒。