本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有更強(qiáng)適應(yīng)性和凈化空氣能力的氧生樹的培育方法。

背景技術(shù)：

眾所周知，植物都具備光合作用和呼吸作用，白天光合作用吸收二氧化碳釋放氧氣，夜間呼吸作用吸收氧氣放出二氧化碳。而紅豆杉屬CAM(景天科酸代謝途徑)類植物。全天24小時(shí)吸入二氧化碳，釋放出氧氣，最適合在室內(nèi)擺放，起到增氧效果。同時(shí)紅豆杉可以吸收一氧化碳、尼古丁、二氧化硫等有毒物質(zhì)，還能吸收甲醛、苯、甲苯、二甲苯等致癌物質(zhì)，凈化空氣，起到防癌、抗癌作用。

公開號為CN106135002A的中國專利文獻(xiàn)公開了一種紅豆杉的組織培育方法，包括以下步驟：(1)選取東北紅豆杉新生枝條的中層細(xì)胞，處理成2cm的組織切片，經(jīng)過消毒在B5培養(yǎng)基中培養(yǎng)15-20天，形成10-12cm的組織，選取中間5-6cm進(jìn)行下一步培養(yǎng)；(2)將上述愈傷組織移植到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，并且前3天保持黑暗環(huán)境，3天之后，保持光照時(shí)間12-14h/d，直到長出3cm的主根。

公開號為CN103444393A的中國專利文獻(xiàn)公開了一種紅豆杉種子培育的方法，包括育苗地的選擇和苗床的整理、種子的收集與處理、種子的播種前處理與播種、田間管理與移栽、幼林撫育種植培育步驟，通過對育苗地的選擇與苗床整理來克服了傳統(tǒng)紅豆杉種子種植方法的選地苛刻性，再通過種子的收集與處理過程來縮短了種子的休眠期，使播種前的預(yù)破殼處理難度更加容易，進(jìn)一步的縮短了紅豆杉種子培育周期，再通過播種前處理與播種后的田間管理與幼林撫育過程，提高了紅豆杉的成活率與出圃率，為紅豆杉的大面積規(guī)?；纳a(chǎn)提供了基本條件，使紅豆杉的藥用、材用和觀賞價(jià)值得到充分的發(fā)揮。

紅豆杉的種植區(qū)域具有一定的道地性，在引種馴化上存在一定的難度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種具有更強(qiáng)適應(yīng)性和凈化空氣能力的氧生樹的培育方法，采用本發(fā)明培育方法所培育的氧生樹具有良好的適應(yīng)性及凈化空氣的效果。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種具有更強(qiáng)適應(yīng)性和凈化空氣能力的氧生樹的培育方法，該方法包括以下步驟：將云南紅豆杉種子和東北紅豆杉種子分別進(jìn)行組織培養(yǎng)并誘導(dǎo)出云南紅豆杉愈傷組織和東北紅豆杉愈傷組織；將所得云南紅豆杉愈傷組織和東北紅豆杉愈傷組織分別進(jìn)行分離，得到云南紅豆杉原生質(zhì)體和東北紅豆杉原生質(zhì)體；將所得云南紅豆杉原生質(zhì)體和東北紅豆杉原生質(zhì)體進(jìn)行誘導(dǎo)融合，得到融合子；將所得融合子進(jìn)行再生培養(yǎng)，得到正常細(xì)胞；將所得正常細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到氧生樹。

可選的，所述組織培養(yǎng)采用b5培養(yǎng)基。

可選的，所述組織培養(yǎng)的條件包括：培養(yǎng)溫度為24-27℃，光照度為1000-1500勒克斯，光照時(shí)間為10-18小時(shí)/天，濕度為70～80％。

可選的，所述誘導(dǎo)融合的方法為PEG法。

可選的，所述PEG法的步驟包括：將原生質(zhì)體以1：(2-5)的體積比分散在Hanks液中，然后滴入原生質(zhì)體一半體積的50體積％PEG溶液，進(jìn)行靜置。

可選的，所述再生培養(yǎng)的條件包括：采用b5培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為24-27℃，光照度為1000-1500勒克斯，光照時(shí)間為10-18小時(shí)/天，濕度為70～80％。

可選的，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件包括：采用b5培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為24-27℃，光照度為1000-1500勒克斯，光照時(shí)間為10-18小時(shí)/天，濕度為70～80％。

本發(fā)明方法具有如下優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明培育方法培育的氧生樹具有較強(qiáng)的適應(yīng)性和抗逆性，在原本不適合進(jìn)行種植的區(qū)域也可以健康生長，在室內(nèi)進(jìn)行種植，可以有效的凈化空氣，在凈化霧霾方面也具備非常明顯的效果。

具體實(shí)施方式

以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。

需要說明的是，本發(fā)明中的氧生樹是指多倍體紅豆杉。

本發(fā)明提供一種具有更強(qiáng)適應(yīng)性和凈化空氣能力的氧生樹的培育方法，該方法包括以下步驟：將云南紅豆杉種子和東北紅豆杉種子分別進(jìn)行組織培養(yǎng)并誘導(dǎo)出云南紅豆杉愈傷組織和東北紅豆杉愈傷組織；將所得云南紅豆杉愈傷組織和東北紅豆杉愈傷組織分別進(jìn)行分離，得到云南紅豆杉原生質(zhì)體和東北紅豆杉原生質(zhì)體；將所得云南紅豆杉原生質(zhì)體和東北紅豆杉原生質(zhì)體進(jìn)行誘導(dǎo)融合，得到融合子；將所得融合子進(jìn)行再生培養(yǎng)，得到正常細(xì)胞；將所得正常細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到氧生樹。

氧生樹的特點(diǎn)有：1、產(chǎn)量提高；2、藥用成分含量提高；3、適應(yīng)性、抗逆性增強(qiáng)。本發(fā)明收集不同地區(qū)的紅豆杉的種子，通過原生質(zhì)體融合技術(shù)誘導(dǎo)多倍體植株，使新得到的植株適應(yīng)性增強(qiáng)，可以供全國大范圍區(qū)域進(jìn)行室內(nèi)種植，并增強(qiáng)其在凈化空氣方面的效果。

本發(fā)明中紅豆杉種子是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，例如，所述紅豆杉種子為東北紅豆杉種子和云南紅豆杉種子。

組織培養(yǎng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，植物組織培養(yǎng)又叫離體培養(yǎng)，指從植物體分離出符合需要的組織、器官、細(xì)胞或原生質(zhì)體等，通過無菌操作，在人工控制條件下進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株或生產(chǎn)具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的其他產(chǎn)品。例如，所述組織培養(yǎng)的條件包括：采用b5培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為24-27℃，光照度為1000-1500勒克斯，光照時(shí)間為10-18小時(shí)/天，濕度為70～80％。

誘導(dǎo)融合是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，是在自發(fā)或人工誘導(dǎo)下，兩個(gè)不同基因型的細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)雜種細(xì)胞，例如，所述誘導(dǎo)融合的方法為PEG法，具體地，所述PEG法的步驟可以包括：將原生質(zhì)體以1：(2-5)的體積比分散在Hanks液中，然后滴入原生質(zhì)體一半體積的50體積％PEG溶液，進(jìn)行靜置。

再生培養(yǎng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，是從外植體上通過各種途徑直接或間接誘導(dǎo)出再生植株的培養(yǎng)方法，所述再生培養(yǎng)的條件可以包括：采用b5培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為24-27℃，光照度為1000-1500勒克斯，光照時(shí)間為10-18小時(shí)/天，濕度為70～80％。

誘導(dǎo)培養(yǎng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，用不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)出想要得到的目標(biāo)生物，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件可以包括：采用b5培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度為24-27℃，光照度為1000-1500勒克斯，光照時(shí)間為10-18小時(shí)/天，濕度為70～80％。

下面將通過實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是本發(fā)明并不因此而受到任何限制。

實(shí)施例

1、云南紅豆杉種子和東北紅豆杉種子用流水沖洗20分鐘，然后用洗潔精清洗，放入潔凈臺，用無菌水漂洗，置入75﹪的酒精殺毒30s，無菌水漂洗一次，置于濃度為0.1％的氯化汞中，浸泡滅菌10分鐘，無菌水漂洗6次，接種于含有NAA 3.0mg/L、6-BA 0.1mg/L的B5培養(yǎng)基中，其中蔗糖30g/L，瓊脂粉7.5g/L，pH5.8，誘導(dǎo)愈傷組織。

2、培養(yǎng)30天后，將云南紅豆杉種子愈傷組織和東北紅豆杉種子愈傷組織再次轉(zhuǎn)入含有NAA 3.0mg/L、6-BA 0.1mg/L的B5培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

3、繼代培養(yǎng)10天后，進(jìn)行原生質(zhì)體的分離，取繼代培養(yǎng)后的愈傷組織，用10mL 0.6mol/Lde甘露醇+1％MES+25g/L纖維素酶組成的酶液處理10小時(shí)，然后用界面離心法進(jìn)行原生質(zhì)體純化，將酶解后的懸浮液低速離心幾分鐘，棄去上清液，然后用25﹪蔗糖-13﹪甘露醇進(jìn)行界面離心，優(yōu)質(zhì)原生質(zhì)體懸浮于界面上。

4、取大約0.6mL的PEG融合液以滴的形式添加到試管中的原生質(zhì)體中，蓋好試管后，室溫培養(yǎng)40min，偶爾旋轉(zhuǎn)試管原生質(zhì)體接觸，在每間隔10min后向試管中添加0.5mL的原生質(zhì)體培養(yǎng)基來稀釋PEG。離心出去融合液，將原生質(zhì)體沉淀懸浮在培養(yǎng)液中。

5、將獲得的融合子進(jìn)行再生培養(yǎng)，將融合子接種于1/2MS+2,4-D2.5mg/L+KT0.5mg/L的再生培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天，得到再生細(xì)胞。

6、將再生細(xì)胞接入10mL/L萌發(fā)菌發(fā)酵液+MS培養(yǎng)基，誘導(dǎo)再生植株。

7、對獲得的再生植株進(jìn)行室外煉苗及種植，得到氧生樹，即多倍體紅豆杉。

將培育得到的氧生樹在人工模擬室內(nèi)采用實(shí)時(shí)在線監(jiān)測儀進(jìn)行精準(zhǔn)定量研究，對PM2.5、硫化物、氮化物等三種有害氣體的消減作用進(jìn)行測試，發(fā)現(xiàn)其吸霾效率高達(dá)8％，且在北京能正常生長。

雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施例對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。