本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領域，具體涉及一種紅火炬郁金優(yōu)質種苗快速繁殖方法。

背景技術：
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紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)是華南植物園近年來從國外引進、馴化并通過廣東省審定農作物新品種。它的花序長、苞片數多，花色艷麗、花期長、觀賞性好，可做盆栽或切花觀賞，也可應用于園林綠化，一經推出，供不應求。紅火炬郁金常用的繁殖方法為分球繁殖，但繁殖數量有限且易被病菌感染。目前，國內外還沒有紅火炬郁金組織培養(yǎng)種苗繁殖的報道。

技術實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明的目的是提供一種簡單實惠、切實可行、應用價值高的紅火炬郁金優(yōu)質種苗快速繁殖方法。

一種紅火炬郁金優(yōu)質種苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)外植體的獲得和不定芽誘導：在生長季節(jié)，選取生長旺盛、無病蟲害危害的紅火炬郁金，11月底挖取地下球莖，將球莖洗凈、消毒、晾干后進行貯藏，取貯藏2～3個月的紅火炬郁金球莖埋栽于50％多菌靈可濕性粉劑600～800倍液澆灌的細沙中，放入人工氣候箱中進行休眠芽的誘導，培養(yǎng)溫度25～30℃，暗培養(yǎng)，當球莖上長出的小芽芽高1～2厘米時，將小芽作為外植體進行消毒處理，然后接種到不定芽誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度24～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照時間12～16小時/天，直至外植體基部長出不定芽；所述的不定芽誘導培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤3.0～5.0毫克、激動素2.0～4.0毫克、萘乙酸0.1～0.3毫克、蔗糖20～30克、瓊脂6～7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8-6.0；

2)繼代增殖：將誘導出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進行繼代增殖，培養(yǎng)溫度24～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照時間12～16小時/天，繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖；所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤1.0～2.0毫克、激動素1.0～3.0毫克、萘乙酸0.1～0.3毫克、蔗糖20～30克、瓊脂6～7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8-6.0；

3)生根培養(yǎng)：當繼代增殖的不定芽芽高2～3厘米時，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26～30℃，光照度1800～2500勒克斯，光照時間12～16小時/天；所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸1.0～3.0毫克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖15～20克、瓊脂6～7克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH5.8～6.0；

4)試管苗移栽：當生根培養(yǎng)得到的試管苗長至4～5厘米高時，在自然光照下煉苗7～10天，然后取出試管苗并洗凈根部的培養(yǎng)基，移栽到泥炭土和珍珠巖按質量比2～4:1混合的基質中，由此得到紅火炬郁金的種苗。

步驟1)所述的消毒處理具體為：將小芽用體積分數75％酒精浸泡10～30秒后，用質量分數0.1％升汞溶液消毒5～10分鐘，無菌水沖洗4～5次。

本發(fā)明的方法是將紅火炬郁金球莖經休眠芽誘導得到的小芽作為外植體，經不定芽誘導、繼代增殖、生根培養(yǎng)和試管苗移栽各階段，選擇各階段合適的培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)條件，實現(xiàn)紅火炬郁金種苗的快速繁殖，繁育出優(yōu)質的紅火炬郁金種苗以滿足市場的需要。本發(fā)明的方法簡單實惠、切實可行、應用價值高，實施該發(fā)明只需有簡單的植物組織培養(yǎng)設備即可進行。

具體實施方式：

以下實施例是對本發(fā)明的進一步說明，而不是對本發(fā)明的限制。

實施例1：

1.外植體的獲得和不定芽的誘導：在生長季節(jié)，選取生長旺盛、無病蟲害危害的紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)優(yōu)良株系進行標記，11月底挖取地下球莖，用自來水洗干凈后用50％多菌靈可濕性粉劑600倍液浸泡20分鐘，晾干后放入10℃的冷庫中貯藏2個月，然后將球莖埋栽于先用自來水洗凈再用50％多菌靈可濕性粉劑600倍液澆灌的細沙中，放入人工氣候箱中進行休眠芽的誘導，培養(yǎng)溫度25℃，暗培養(yǎng)。紅火炬郁金球莖在培養(yǎng)20天會長出1厘米的小芽，以此小芽為外植體進行組織培養(yǎng)。小芽先在體積分數75％酒精中浸泡10秒，再用質量分數0.1％升汞溶液消毒5分鐘，無菌水沖洗4次，接種到不定芽誘導培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度24℃，光照度1500勒克斯(lx)，光照時間12小時/天，培養(yǎng)40天時外植體基部有不定芽長出，消毒成功率75％。所述的不定芽誘導培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)3.0毫克、激動素(KT)2.0毫克、萘乙酸(NAA)0.1毫克、蔗糖20克、瓊脂6克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8；其配制方法是將3.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、2.0毫克激動素(KT)、0.1毫克萘乙酸(NAA)、20克蔗糖和6克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

2.不定芽誘導和繼代增殖：將誘導出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進行繼代增殖，培養(yǎng)溫度24℃，光照度1500勒克斯(lx)，光照時間12小時/天，一般30天為1個繼代增殖周期，每1個繼代增殖周期后的增殖倍數為3倍。繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖。所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)1.0毫克、激動素(KT)1.0毫克、萘乙酸(NAA)0.1毫克、蔗糖20克、瓊脂6克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.8；其配制方法是將1.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、1.0毫克激動素(KT)、0.1毫克萘乙酸(NAA)、20克蔗糖和6克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

3.生根培養(yǎng)：將繼代增殖的不定芽芽高2厘米時，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度26℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照時間12小時/天，能正常生根，培養(yǎng)30天時生根率可達100％，每株苗有根數4條。所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸(IBA)1.0毫克、活性炭(AC)1.0克、蔗糖15克、瓊脂6克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH5.8；其配制方法是將1.0毫克吲哚丁酸(IBA)、1.0克活性炭(AC)、15克蔗糖和6克瓊脂，加到少量1/2MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用1/2MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

4.試管苗移栽：當生根培養(yǎng)得到的試管苗長至4厘米高時，在自然光照下煉苗10天。然后打開瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入泥炭土和珍珠巖按質量比2:1混合的基質中，注意澆水、遮蔭、保溫和保濕，由此得到紅火炬郁金的種苗，成活率可達90％。

實施例2：

1.外植體的獲得和不定芽的誘導：在生長季節(jié)，選取生長旺盛、無病蟲害危害的紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)優(yōu)良株系進行標記，11月底挖取地下球莖，用自來水洗干凈后用50％多菌靈可濕性粉劑700倍液浸泡25分鐘，晾干后放入12℃的冷庫中貯藏2.5個月，然后將球莖埋栽于先用自來水洗凈再用50％多菌靈可濕性粉劑700倍液澆灌的細沙中，放入人工氣候箱中進行休眠芽的誘導，培養(yǎng)溫度28℃，暗培養(yǎng)。紅火炬郁金球莖在培養(yǎng)18天會長出1.5厘米的小芽，以此小芽為外植體進行組織培養(yǎng)。小芽先在體積分數75％酒精中浸泡20秒，再用質量分數0.1％升汞溶液消毒8分鐘，無菌水沖洗5次，接種到不定芽誘導培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度28℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照時間14小時/天，培養(yǎng)35天時外植體基部有不定芽長出，消毒成功率80％。所述的不定芽誘導培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)4.0毫克、激動素(KT)3.0毫克、萘乙酸(NAA)0.2毫克、蔗糖25克、瓊脂6.5克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.9；其配制方法是將4.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、3.0毫克激動素(KT)、0.2毫克萘乙酸(NAA)、25克蔗糖和6.5克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

2.不定芽誘導和繼代增殖：將誘導出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進行繼代增殖，培養(yǎng)溫度28℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照時間14小時/天，一般30天為1個繼代增殖周期，每1個繼代增殖周期后的增殖倍數為3.5倍。繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖。所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)1.5毫克、激動素(KT)2.0毫克、萘乙酸(NAA)0.2毫克、蔗糖25克、瓊脂6.5克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 5.9；其配制方法是將1.5毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、2.0毫克激動素(KT)、0.2毫克萘乙酸(NAA)、25克蔗糖和6.5克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

3.生根培養(yǎng)：將繼代增殖的不定芽芽高2.5厘米時，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照時間14小時/天，能正常生根，培養(yǎng)30天時生根率可達100％，每株苗有根數5條。所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸(IBA)2.0毫克、活性炭(AC)1.5克、蔗糖18克、瓊脂6.5克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH5.9；其配制方法是將2.0毫克吲哚丁酸(IBA)、1.5克活性炭(AC)、18克蔗糖和6.5克瓊脂，加到少量1/2MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用1/2MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

4.試管苗移栽：當生根培養(yǎng)得到的試管苗長至4.5厘米高時，在自然光照下煉苗8天。然后打開瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入泥炭土和珍珠巖按質量比3:1混合的基質中，注意澆水、遮蔭、保溫和保濕，由此得到紅火炬郁金的種苗，成活率可達95％。

實施例3：

1.外植體的獲得和不定芽的誘導：在生長季節(jié)，選取生長旺盛、無病蟲害危害的紅火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)優(yōu)良株系進行標記，11月底挖取地下球莖，用自來水洗干凈后用50％多菌靈可濕性粉劑800倍液浸泡30分鐘，晾干后放入15℃的冷庫中貯藏3個月，然后將球莖埋栽于先用自來水洗凈再用50％多菌靈可濕性粉劑800倍液澆灌的細沙中，放入人工氣候箱中進行休眠芽的誘導，培養(yǎng)溫度30℃，暗培養(yǎng)。紅火炬郁金球莖在培養(yǎng)15天會長出2厘米的小芽，以此小芽為外植體進行組織培養(yǎng)。小芽先在體積分數75％酒精中浸泡30秒，再用質量分數0.1％升汞溶液消毒10分鐘，無菌水沖洗5次，接種到不定芽誘導培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度30℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照時間16小時/天，培養(yǎng)30天時外植體基部有不定芽長出，消毒成功率85％。所述的不定芽誘導培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)5.0毫克、激動素(KT)4.0毫克、萘乙酸(NAA)0.3毫克、蔗糖30克、瓊脂7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 6.0；其配制方法是將5.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、4.0毫克激動素(KT)、0.3毫克萘乙酸(NAA)、30克蔗糖和7克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

2.不定芽誘導和繼代增殖：將誘導出的不定芽切割后接種至繼代培養(yǎng)基上進行繼代增殖，培養(yǎng)溫度30℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照時間16小時/天，一般30天為1個繼代增殖周期，每1個繼代增殖周期后的增殖倍數為4倍。繼代增殖得到的不定芽能用于生根培養(yǎng)或繼續(xù)繼代增殖。所述的繼代培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有6-芐基嘌呤(6-BA)2.0毫克、激動素(KT)3.0毫克、萘乙酸(NAA)0.3毫克、蔗糖30克、瓊脂7克，其余為MS培養(yǎng)基，pH 6.0；其配制方法是將2.0毫克6-芐基嘌呤(6-BA)、3.0毫克激動素(KT)、0.3毫克萘乙酸(NAA)、30克蔗糖和7克瓊脂，加到少量MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

3.生根培養(yǎng)：將繼代增殖的不定芽芽高3厘米時，切下接種到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30℃，光照度2500勒克斯(lx)，光照時間16小時/天，能正常生根，培養(yǎng)30天時生根率可達100％，每株苗有根數6條。所述的生根培養(yǎng)基為：每升培養(yǎng)基含有吲哚丁酸(IBA)3.0毫克、活性炭(AC)2.0克、蔗糖20克、瓊脂7克，其余為1/2MS培養(yǎng)基，pH 6.0；其配制方法是將3.0毫克吲哚丁酸(IBA)、2.0克活性炭(AC)、20克蔗糖和7克瓊脂，加到少量1/2MS培養(yǎng)基(液體)中，然后用1/2MS培養(yǎng)基(液體)補齊至1L，混合均勻，滅菌備用。

4.試管苗移栽：當生根培養(yǎng)得到的試管苗長至5厘米高時，在自然光照下煉苗7天。然后打開瓶塞，用鑷子把試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入泥炭土和珍珠巖按質量比4:1混合的基質中，注意澆水、遮蔭、保溫和保濕，由此得到紅火炬郁金的種苗，成活率可達100％。