本發(fā)明屬于中藥材種植技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種白及種苗的繁殖方法。

背景技術(shù)：

白及[bletillastriata(thunb.exa.murray)rchb.f.]為蘭科白及屬多年生草本植物，植株高18-60cm；假鱗莖扁球形，上面具荸薺似的環(huán)帶，富粘性；莖粗壯，勁直；葉4-6枚，狹長圓形或披針形，長8-29cm，寬1.5-4cm，先端漸尖，基部收狹成鞘并抱莖；花序具3-10朵花，常不分枝或極罕分枝；花序軸或多或少呈“之”字狀曲折；花苞片長圓狀披針形，長2-2.5cm，開花時常凋落；花大，紫紅色或粉紅色；萼片和花瓣近等長，狹長圓形，長25-30mm，寬6-8mm，先端急尖；花瓣較萼片稍寬；唇瓣較萼片和花瓣稍短，倒卵狀橢圓形，長23-28mm，白色帶紫紅色，具紫色脈；唇盤上面具5條縱褶片，從基部伸至中裂片近頂部，僅在中裂片上面為波狀；蕊柱長18—20mm，柱狀，具狹翅，稍弓曲；花期4-5月。

白及常野生于丘陵、低山溪邊以及陰蔽草叢或者林下濕地，分布于我國秦嶺以南省區(qū)以及日本等地；以塊莖入藥，具有補肺止血、消腫生肌等功效，同時也廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、美容、涂料和印染等行業(yè)；近年來，由于需求量大，人工野生白及受到嚴重的私挖濫采，資源量急劇減少，已經(jīng)列入世界瀕危植物保護物種，且已被《中國植物紅皮書—稀有瀕危植物》第1冊收錄，同時也被寫入了《瀕危野生動植物國際貿(mào)易公約》（cites）保護種類。

實際生產(chǎn)中，人工白及栽培長期處于“就地采收—就地留種—就地再栽培”的原始循環(huán)狀態(tài)，白及品質(zhì)逐年退化。近年來，由于白及產(chǎn)業(yè)發(fā)展需求，白及種苗組培技術(shù)開始興起并逐步成為白及種苗供應(yīng)的重要來源，但是白及組培苗死亡率較高、無效苗現(xiàn)象存在、以及生產(chǎn)周期較長等對利用組培苗緩解白及大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化種植產(chǎn)生了一定制約，優(yōu)化白及組培技術(shù)，促進優(yōu)質(zhì)種苗供應(yīng)，將對白及產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的十分重要。

cn201410666249.6公開了“一種白芨的規(guī)?；弋a(chǎn)栽培方法”，主要包括種苗的繁殖、煉苗、大田移栽、生長期管理、次年生長期的管理及采收。同時，將微生物技術(shù)與生態(tài)種植技術(shù)相結(jié)合，使用em原露能分泌與合成大量的有機酸、氨基酸、酶、活性激素、抗氧化酵素扥，快速的促進植物的生長、分解了藥物的殘留，加快植物的光合作用和新陳代謝，縮短了種植的周期和提高了白芨的產(chǎn)量。

cn20151067431.7公開了“一種無公害白芨的高產(chǎn)栽培方法”，主要利用蘭科根瘤菌或者蘭科菌根菌經(jīng)過人工培養(yǎng)后的有益共生菌營養(yǎng)液與腐殖土進行繁殖發(fā)酵后制得營養(yǎng)土，營養(yǎng)土與種植溝內(nèi)的土壤混合后，進行組培苗的田地移栽，進而有效的促進了白芨新根的產(chǎn)生和塊莖的肥大，同時使用em防蟲液完全避免了病蟲害的發(fā)生。

cn201410364717.4公開了一種“白芨組培育苗方法”，主要由環(huán)境消毒、外植體準備、培養(yǎng)基準備、播種、培養(yǎng)室培養(yǎng)、大棚煉苗、林下煉苗、移植大田和收獲九個步驟組成。其主要特征為培養(yǎng)土分為底層培養(yǎng)土和上層培養(yǎng)土，底層植料的制?。和谌∷蓸淞掷锏母惩粒砑愚r(nóng)家肥及磷酸家和磷肥，使得農(nóng)家肥及磷酸鉀和磷肥混合漚制一個月形成發(fā)酵肥即為底層培養(yǎng)土，培養(yǎng)盤裝好3公分底層培養(yǎng)土后將椰殼粉鋪在底層培養(yǎng)土上面厚3公分即為培養(yǎng)土。

cn201510733897.3公開了“一種白芨組培育苗的方法”，主要包括外植體的準備、外植體放入培養(yǎng)基中的培養(yǎng)和移栽三個步驟，其培養(yǎng)基中瓊脂5g/l、白糖205g/l、6-芐氨基嘌呤為1.5mg/l，萘乙酸為0.1mg/l；培養(yǎng)條件為光照強度1600-2000lux，光照時間為15h/d，培養(yǎng)溫度為24-28℃。

cn201610436028.9公開了“一種白芨組培快繁方法及運用”，主要由外植體的滅菌方法、白及種子無菌萌發(fā)、種胚形態(tài)及種胚突破種皮過程觀察、白芨的組培快繁和用ttc法測定種子活力。在以ms為基本培養(yǎng)基中添加活性炭0.2g/l，瓊脂7.0g/l，ph5.8，碳源添加量為（30g/l、60g/l），運用此方法出芽快、增殖率高，同時提高了移栽成活率。

cn201611244428.6公開了“一種白芨組培苗移栽馴化技術(shù)”，主要是通過將沙土用大鍋炒熱至80℃以上來殺死寄生蟲卵，并將冷卻后的沙土撒入成長至5cm左右高的白芨組培苗瓶中，然后再組培室培養(yǎng)15-30d即完成馴化，這種方式可以不用清洗組培苗，保護了幼苗根部，也節(jié)省了人工。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就在于提供一種白及優(yōu)質(zhì)種苗的繁殖方法，有效提高白及種苗存活率；本方法具有簡單實用、成本低和管理方便的優(yōu)點，適用于大規(guī)模推廣，是一種生產(chǎn)周期短、繁殖率高和成活率高的白及種苗繁殖方法。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案，具體包括以下步驟。

白及種苗的繁殖方法采用組培繁殖的培育方式；

①種子的采集

a、種源地選擇，b、果莢的選擇，c、采摘，d、保存；

②培養(yǎng)基選定

a、種子萌發(fā)誘導培養(yǎng)基，b、白及分化培養(yǎng)基與原球莖誘導培養(yǎng)基，c、生根壯苗培養(yǎng)基；

③育苗

采用種子萌發(fā)誘導→誘導芽分化→誘導生根→大棚煉苗的組織培養(yǎng)程序；

a、種子萌發(fā)誘導，b、分化增殖培養(yǎng)，c、生根壯苗培養(yǎng)，d、大棚煉苗；

④瓶苗出苗

⑤瓶苗脫瓶及處理

a、煉苗，b、取苗，c、洗苗與分苗，d、消毒，e、晾苗；

⑥馴化苗栽培措施

a、馴化溫棚建設(shè)，b、苗床整理，c、土壤配置，d、蓋遮蔭網(wǎng)，e、栽苗,f、水分控制，g、蟲害防治，h、除草；

⑦馴化苗出苗

馴化苗的出苗標準。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點和積極效果：

①提供了一套白及種苗繁殖方法（組培育苗），避免了塊莖繁殖耗種量大的缺點，同時將白及種子萌發(fā)誘導、分化增殖以及生根壯苗的培養(yǎng)條件進行了分別完善，提高了白及組培苗的成活率；

②提供了一套白及馴化苗栽培措施，并提出了馴化苗的馴化棚建設(shè)、土壤配置、栽苗處理、水分控制及病蟲害處理等一整套完善的種植方法，提高了馴化苗的成活率；

③規(guī)范了白及培養(yǎng)基配方比、瓶苗以及馴化苗出苗標準，有效解決了規(guī)?；a(chǎn)中技術(shù)及標準缺乏的問題。

附圖說明

圖1.1是瓶苗出苗（瓶內(nèi)），

圖1.2是瓶苗出苗（瓶外）；

圖2.1是馴化溫棚建設(shè)圖片之一，

圖2.2是馴化溫棚建設(shè)圖片之二，

圖2.3是馴化溫棚建設(shè)圖片之三；

圖3是馴化溫棚苗床整理；

圖4.1是馴化溫棚土壤配置（袋內(nèi)），

圖4.2是馴化溫棚土壤配置（袋外）；

圖5.1：馴化苗出苗（盆內(nèi)），

圖5.2：馴化苗出苗（盆外）。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和實施例詳細說明：

種苗的繁殖采用組培繁殖的培育方式；

①種子的采集

a、種源地選擇：選擇三年或三年以上種植期的地塊，開花期選擇生長鍵壯、塊莖生長較快的植株，剔除病弱和開雜色花的植株花朵，保留采種植株花朵；

b、果莢的選擇：選擇果實飽滿、成熟度高的果莢，成熟度以表面顏色微黃褐色為宜，淺綠色則成熟度不夠，深褐色則過成熟，裂開的果莢不能使用；

c、采摘：用剪刀輕輕剪下果莢，用水洗凈，自然涼干；

d、保存：將涼干后的果莢用玻璃瓶或塑料瓶包裝，避免擠壓破裂，-20℃低溫保存；

②培養(yǎng)基選定

a、種子萌發(fā)誘導培養(yǎng)基

單位：mg/l；

大量元素：nh4no3(1650)，kno3(1900)，cacl2?2h2o(440），mgso4?7h2o(370)，kh2po4(170)；

微量元素：ki(0.83)，h3bo3(6.2)，mnso4?4h2o(22.3)，znso4?7h2o(8.6)，na2moo4?2h2o(0.25)，cuso4?5h2o(0.025)，cocl2?6h2o(0.025)；

鐵鹽：feso4?7h2o(27.8)，na2-edta?2h2o(37.3)；

有機物：肌醇(100)，煙酸(0.5)，鹽酸吡哆醇(0.5)，鹽酸硫胺素(0.1)，甘氨酸(2.0)；

添加物：蔗糖(5%)，ph值(5.5-5.8)，瓊脂粉（0.4%），蛋白胨（0.1%peptone）；

b、分化培養(yǎng)基與原球莖誘導培養(yǎng)基

單位：mg/l；

大量元素：nh4no3(1650)，kno3(1900)，cacl2?2h2o(440），mgso4?7h2o(370)，kh2po4(170)；

微量元素：ki(0.83)，h3bo3(6.2)，mnso4?4h2o(22.3)，znso4?7h2o(8.6)，na2moo4?2h2o(0.25)，cuso4?5h2o(0.025)，cocl2?6h2o(0.025)；

鐵鹽：feso4?7h2o(27.8)，na2-edta?2h2o(37.3)；

有機物：肌醇(100)，煙酸(0.5)，鹽酸吡哆醇（維生素b6）(0.5)，鹽酸硫胺素（維生素b1）(0.1)，甘氨酸(2.0)；

激素：6-ba(0.5)，naa(0.5)；

添加物：蔗糖(5%)，ph值(5.5-5.8)，碳粉(0.05%)，瓊脂粉（0.6%）；

c：生根壯苗培養(yǎng)基

單位：mg/l；

大量元素：h4no3(1650)，kno3(1900)，cacl2?2h2o(440)，mgso4?7h2o(370)，kh2po4(170)；

微量元素：ki(0.83)，h3bo3(6.2)，mnso4?4h2o(22.3)，znso4?7h2o(8.6)，na2moo4?2h2o(0.25)，cuso4?5h2o(0.025)，cocl2?6h2o(0.025)；

鐵鹽：feso4?7h2o(27.8)，na2-edta?2h2o(37.3)；

有機物：肌醇(100)，煙酸(0.5)，鹽酸吡哆醇（維生素b6）(0.5)，鹽酸硫胺素(0.1)，甘氨酸(2.0)；

添加物：蔗糖(3%)，ph值(5.5-5.8)，碳粉(0.05%)，瓊脂粉（0.6%），（30-40g/l土豆汁）；

③育苗

采用種子萌發(fā)誘導→誘導芽分化→誘導生根→大棚煉苗的組織培養(yǎng)程序；

a、種子萌發(fā)誘導

將采集到的成熟白及蒴果在新潔爾滅溶液中刷洗去灰土，置超凈工作臺上用0.1%升汞消毒10min，再用無菌水沖洗3-5次，將其用滅菌的濾紙吸干水分后，用手術(shù)刀切去果實頂部，再從果實中部縱向剖開，將種子均勻撒播到配制好的培養(yǎng)基上，注意稀播，太密不利于后期培養(yǎng)；然后置于室溫28℃，光照強度1500-2000lux，每天光照時間12h的條件下進行培養(yǎng)；

b、分化增殖培養(yǎng)

將誘導培養(yǎng)40d的白及小苗及時轉(zhuǎn)移到分化壯苗培養(yǎng)基上，在室溫30℃，光照強度1500-2000lux，每天光照時間12h條件下，培養(yǎng)60d，作為生根培養(yǎng)的材料；

c、生根壯苗培養(yǎng)

將分化幼苗轉(zhuǎn)移到生根壯苗培養(yǎng)基上，在室溫30-35℃，光照強度1500-2000lux，每天光照時間15h條件下繼續(xù)培養(yǎng)，一個星期后，小苗迅速生長，假鱗莖也隨之增大，60d后假鱗莖成熟，苗高3-5cm，葉片3-4片；

d、大棚煉苗

將生根培養(yǎng)好的白及小苗帶瓶放置在大棚里，在室溫下適應(yīng)15-20d，大棚覆蓋75%遮光率的遮蔭網(wǎng)，然后打開瓶蓋繼續(xù)煉苗3-5d；

④瓶苗出苗（見圖1.1-1.2）

瓶苗的出瓶標準：老葉與黃葉比率5%-20%，株高5-10cm，植株鮮重不低于0.2g，葉片數(shù)≥3，葉長2cm-5cm，葉寬0.5cm，假鱗莖直徑≥0.3cm；根數(shù)≥2。

⑤瓶苗脫瓶及處理

a、煉苗：瓶苗到達栽培基地后先放入大棚，連瓶直接放在土表，大棚覆蓋一層75%的遮陰網(wǎng)，移栽前先打開瓶蓋煉苗3d，有助于瓶苗適應(yīng)外界環(huán)境；

b、取苗：從瓶中取苗時要仔細，可用鑷子或鐵絲制的小鉤輕輕取出，不要傷到根莖苗（注：若破瓶取苗，苗上易貼細碎的玻璃渣不易洗凈，栽苗時易劃傷手）；苗取出后用清水洗凈根部殘留的培養(yǎng)基，注意苗在清水中不得超過20min，洗苗時以涮為主，盡量避免傷著小苗；

c、洗苗與分苗：一邊洗苗一邊分苗，分苗時要注意：由于組培瓶內(nèi)高水分的培養(yǎng)環(huán)境和有限的生長空間導致組培苗根脆嫩易斷且纏繞在一起，為避免傷及幼苗，分苗時較難分開的不應(yīng)強行分開，幾株同栽即可，馴化2—3個月后，苗會自然分開，起苗后，馴化苗根部松軟，極易分開；

d、消毒：洗好的苗馬上浸入800倍的百菌清或多菌靈藥液中消毒，注意只需根部浸入消毒液中，且浸在消毒液中的時間不得超過15秒鐘。

e、晾苗：消毒后的苗擺在硬紙板或報紙上放在陰涼處擺放，擺放30min左右水分略干即可移栽；

⑥馴化苗栽培措施

a、馴化溫棚建設(shè)：馴化溫棚選用gp-c825型裝配式鍍鋅鋼管大棚，大棚寬為8m，長度40m，可根據(jù)具體地形適當調(diào)整；大棚采用“一縱四卡”結(jié)構(gòu)搭建，即一根縱向拉桿加四根卡槽；大棚的整體布局首先考慮南北走向，再考慮沿等高線布局；具體見圖2.1-圖2.3；

b、苗床整理：馴化溫棚內(nèi)整理5個寬度為1.2m，厚10cm的畦，6個深度為20cm，寬度為30cm的地溝；具體見圖3；

c、土壤配置：土質(zhì)為沙壤土，將土地深耕幾次，打碎地中的大顆粒，大塊直徑不超過3cm；將50%的細土、40%的鋸末、10%的刨花均勻混合，最終形成厚10cm左右的苗床；具體見圖4.1-圖4.2；

d、蓋遮蔭網(wǎng)：白及瓶苗或馴化苗剛移栽到大田后的3-5個月內(nèi)不能強光照射，因此瓶苗移栽前要準備好遮陰網(wǎng)；移栽前3個月內(nèi)一定要遮蓋一層75%的遮陰網(wǎng)，3個月后可視情況去掉遮陰網(wǎng)；

e、栽苗：栽苗前在墑面上按每畝7袋、每袋500克顆粒劑的量撒辛硫磷，瓶苗密植馴化，株行距均為8-10cm，一畝地約栽16-18萬株；瓶苗定植時宜淺不宜深，將根埋沒，假鱗莖深入土中約0.5-1cm，輕輕用土圍上即可，不宜指壓；可在苗床上掏-5cm深的溝，將苗排放入溝內(nèi)，再一次性蓋土，既提高栽種效率，也不易傷到根；

f、水分控制：移栽后不超過1h即澆定植水，定植水不要一次澆透，可分2-3次澆透；然后用一層75%的遮陰網(wǎng)即時遮蓋，以免太陽強光傷苗，隔2d左右視情況再澆水；接下來注意觀察表土保持濕潤即可，此時種苗周圍土壤環(huán)境要以濕潤為主；移栽后20d左右再澆水一次，這時成活下來的苗就基本穩(wěn)定，20d后要適當控水，以促進生新根，發(fā)新芽，且適當干旱有利于新根深入土層吸取營養(yǎng)；30d后不用澆水，保持土壤表層濕潤即可；如雨季來臨，要注意觀察葉片及根部的病害情況，如發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)及時處理；

g、蟲害防治：瓶苗移栽后，由于環(huán)境濕潤，蝸牛、蛞蝓易發(fā)生，要提前撒“蝸凈”或“螺螄?！保ㄓ行С煞轂樗木垡胰┑臍⑾x劑即可）；蟲害較難防治的是地老虎和螻蛄，每畝用90%的晶體敵百蟲200g拌炒香的米糠或麥麩10kg，撒在田間誘殺；

h、除草：白及瓶苗馴化期間一定要注意草害，因白及植株還小，壓不住雜草，故雨季來臨要注意拔草，避免草荒；

苗移栽后3-5個月即馴化成功，即可移栽定植；

注意：瓶苗移栽后一個月內(nèi)不能施肥，因為苗還弱，容易產(chǎn)生鹽析現(xiàn)象（俗稱燒苗），兩個月后可以適當噴施葉面肥，或者水溶肥，最好是含微量元素的水溶肥；施肥時先試驗再大面積施，以免燒苗。

⑦馴化苗出苗（具體見圖5.1-5.2）

馴化苗出瓶標準：株高≥18cm，植株鮮重不低于2.0g，葉片數(shù)≥3，葉長≥14cm，葉寬≥1.5cm，假鱗莖直徑≥0.5cm；根數(shù)≥7。