專利名稱：一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法及其專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)及繁殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法及其專用培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
mmetilla siriaia (Thunb. )Reichb. f)，屬蘭科，多年生草本。原產(chǎn)中國，廣布我國西南、東南及華北大部分地區(qū)，生于海拔110m-3200m的林下、溝谷巖石縫中，耐陰性強。塊莖入藥、性微寒，味苦、甘、濯，具有收斂止血，消腫生肌之功效，是我國藥典品種“白及顆?！钡闹匾?。我國白及原料年需求量在4500-5000噸左右，由于白及的自然繁殖、生長較慢，采挖后幾乎不可再生，而對白及的開發(fā)利用范圍逐步擴大，原料需求劇增，白及的自然產(chǎn)出與利用之間的矛盾凸現(xiàn)，價格連年攀升，由2000 2002年的13 14元/kg上升到2007年的75-80元/kg、2011年200元/kg，而且價格還在繼續(xù)上走。人工種植白及是緩解資源矛盾，培植新型生物產(chǎn)業(yè)的有效途徑。目前，報道的白及人工種植方法多為塊莖繁育?，F(xiàn)有技術(shù)在培養(yǎng)器皿內(nèi)通過白及種子或側(cè)芽已能成功制備出白及組培苗，但白及組培苗細弱、煉苗時易于死亡，成活率低。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)，白及原球莖與白及假鱗莖存在較大差別，白及假鱗莖為白及組培叢生苗誘導(dǎo)出的綠色圓球狀假鱗莖，該圓球側(cè)邊有多個芽點，能在基質(zhì)中萌發(fā)生成幼苗，所生成的幼苗健壯，成活率高，或誘導(dǎo)出新的假鱗莖。而白及原球莖是種子在培養(yǎng)器皿內(nèi)自然萌發(fā)生成的愈傷組織，叢狀，能萌發(fā)叢狀細弱的組培苗。 如果能培養(yǎng)出白及假鱗莖，則可克服白及種子或側(cè)芽直接培育出的白及組培苗細弱、煉苗時易于死亡，成活率低等劣勢。據(jù)查，現(xiàn)有技術(shù)中沒有在培養(yǎng)器皿內(nèi)通過白及種子、莖尖或側(cè)芽培育出白及假鱗莖的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)培育出的白及組培苗細弱導(dǎo)致煉苗時成活率低以及還不能培育出白及假鱗莖的技術(shù)缺陷和不足，其目的是提供一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法及其專用培養(yǎng)基。由于現(xiàn)有技術(shù)直接培育的白及組培苗細弱在移栽時成活率低，本發(fā)明從植物生理學角度研究入手，經(jīng)過大量實驗研究，以白及種子、白及莖尖或白及側(cè)芽為外植體，成功地研究出在培養(yǎng)器皿內(nèi)能制備出白及假鱗莖的適宜條件及其專用培養(yǎng)基，本發(fā)明技術(shù)方案能達到大量培育優(yōu)質(zhì)的白及假鱗莖的技術(shù)效果，所培育出的白及假鱗莖較直接培育的白及組培苗能適應(yīng)外部環(huán)境，其假鱗莖在基質(zhì)中能長芽、生根，萌發(fā)生成健壯的白及種苗，使白及種苗的成活率高，克服了現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，可以形成大規(guī)?；a(chǎn)白及的種苗繁殖關(guān)鍵技術(shù)。本發(fā)明的技術(shù)方案是
1、一種以白及種子為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，所述的專用培養(yǎng)基是由種子萌發(fā)培養(yǎng)基，假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，假鱗莖增殖培養(yǎng)基和假鱗莖生根培養(yǎng)基組成，其中
所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA1. 0 3. Omg/L, NAA1. O 2. O mg/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:1/2MS,6-BA0. 5 6. 5mg/L, NAA0. 5 2. 5mg/L, 香蕉泥 70 80g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 5 4. O mg/L，NAA0. 2 1. O mg/L, 香蕉泥 60 80g/L,瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 1 0. 5 mg/L，NAA0. 5 4. 5 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5.8。2、所述的一種以白及種子為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基優(yōu)選的是
所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方為:1/2MS,6-BA1. 8 2. 4mg/L, NAA1. 4 1. 8 mg/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為d/^MSj-BAZ. 8 5. lmg/L, NAA1. 3 1. 9mg/L, 香蕉泥 74 78g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA1.9 2.8 mg/L，NAA0. 4 0. 7 mg/L, 香蕉泥 68 72g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 2 0.4 mg/L，NAA1. 9 3. 1 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5.8。3、所述的一種以白及種子為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基最佳的是
所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方為IAMSj-BAZ. lmg/L, NAA1. 5 mg/L，瓊脂7g/L， pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA3. 8mg/L, NAA1. 5mg/L，香蕉泥75/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為IAMSj-BAZ. 2 mg/L,NAA0. 5mg/L，香蕉泥70g/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為IAMSj-BAO. 3 mg/L, NAA2. 6 mg/L，瓊脂7g/L， pH 5. 8。4、一種以白及莖尖和或白及側(cè)芽為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，所述的專用培養(yǎng)基是由莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，叢芽增殖培養(yǎng)基，假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，假鱗莖增殖培養(yǎng)基和假鱗莖生根培養(yǎng)基組成，其中
所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA1.0 3.0 mg/L，NAA0. 5 2. O mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的叢芽增殖培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA1. O 5. O mg/L,NAA0. 5 2. O mg/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為d/^MSj-BAO. 5 6. 5mg/L, NAA0. 5 2. 5mg/L, 香蕉泥 70 80g/L,瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 5 4. 0 mg/L, ΝΜ0. 2 1. 0 mg/L, 香蕉泥 60 80g/L,瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 1 0. 5 mg/L，ΝΑΑ0. 5 4. 5 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5.8。5、所述的一種以白及莖尖和或側(cè)芽為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基優(yōu)選的是
所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA1. 6 2. 2 mg/L, NAA1. 1 1. 6 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的叢芽增殖培養(yǎng)基的配方為:MS,6-BA2. 3 3. 8 mg/L, ΝΑΑ0. 9 1. 5mg/L,瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:1/2MS,6-BA2. 8 5. lmg/L, NAA1. 3 1. 9mg/L, 香蕉泥 74 78g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA1.9 2. 8 mg/L，ΝΑΑ0. 4 0. 7 mg/L, 香蕉泥 68 72g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為IAMSj-BAO. 2 0. 4 mg/L, NMl. 9 3. 1 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5.8。6、所述的一種以白及莖尖和或側(cè)芽為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基最佳的是
所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS，6-BA1.9 mg/L, NAA1. 3 mg/L，瓊脂7g/L，pH
5. 8 ；
所述的叢芽增殖培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA3.0 mg/L，NAA1. ang/L，瓊脂7g/L，pH
5. 8 ；
所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA3. 8mg/L, NAA1. 5mg/L，香蕉泥75/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為=IAMSj-BAZ. 2 mg/L,NAA0. 5mg/L，香蕉泥70g/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；
所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為=IAMSj-BAOJ mg/L, NAA2. 6 mg/L，瓊脂7g/L， pH 5. 8。7、一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，按以下步驟進行
(1)以白及種子作為外植體進行消毒滅菌將白及種子用質(zhì)量分數(shù)為75%酒精消毒 40 50s，用質(zhì)量分數(shù)為1% HgCl2溶液對白及種子進行表面消毒8 12min，用無菌水沖洗3 4次，在無菌工作條件下取出種子并用紗布包好種子后，用無菌水潤洗3 5次，用 0. lmol/L KOH溶液預(yù)處理8 lOmin，用無菌水沖洗2 3次，在飽和漂白粉上清液中消毒 10 20min，用無菌水沖洗3 5次；
(2)在無菌工作條件下，將步驟(1)消毒滅菌的白及種子接種到上述技術(shù)方案1中所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中暗箱培養(yǎng)；
(3)當步驟(2)的種子萌發(fā)長出芽和幼根時，將其接種到上述技術(shù)方案1中所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)假鱗莖；
(4)將步驟(3)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到上述技術(shù)方案1中所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)假鱗莖；
(5)將步驟(4)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到上述技術(shù)方案1中所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，假鱗莖長出根后移出培養(yǎng)器皿進行煉苗；
上述步驟(3) (5)的培養(yǎng)條件為溫度25士2°C，光照強度1800 25001x，光照12 15h/d08、技術(shù)方案7所述的一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，最佳的是步驟(2) 所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案3中所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基；步驟(3)所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案3中所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基；步驟(4)所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案3中所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基；步驟(5)所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案3中所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基。9、一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，按以下步驟進行
(1)以白及莖尖或白及側(cè)芽為外植體，用流水沖洗白及莖尖、白及側(cè)芽，用質(zhì)量分數(shù)為 75%的酒精消毒40 60s后，轉(zhuǎn)入質(zhì)量分數(shù)為1%的HgCl2溶液對白及莖尖、白及側(cè)芽進行表面消毒8 12min，用無菌水沖洗3 4次；
(2)在無菌工作條件下，將步驟(1)消毒滅菌后的白及莖尖、白及側(cè)芽接種到上述技術(shù)方案4所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)出再生芽；
(3)將步驟(2)培養(yǎng)的再生芽轉(zhuǎn)接到上述技術(shù)方案4所述的叢芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)出叢生芽；
(4)將步驟(3)培養(yǎng)的叢生芽轉(zhuǎn)接到上述技術(shù)方案4所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)假鱗莖；
(5)將步驟(4)培養(yǎng)的假鱗莖轉(zhuǎn)接到上述技術(shù)方案4所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基中增殖
培養(yǎng)；
(6)步驟(5)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到上述技術(shù)方案4所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，假鱗莖長出根后移出培養(yǎng)器皿進行煉苗；
上述步驟(2) (6)的培養(yǎng)條件為溫度25士2°C，光照強度1800 25001x，光照12 15h/d010、技術(shù)方案9所述的一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，最佳的是步驟
(2)所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案6中所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基；步驟
(3)所述的叢芽增殖培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案6中所述的叢芽增殖培養(yǎng)基；步驟(4)所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案6中所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基；步驟(5)所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案6中所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基；步驟(6)所述的所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基是上述技術(shù)方案6中所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基。所述的培養(yǎng)器皿是廣義地指試管，培養(yǎng)瓶，三角瓶等培養(yǎng)器皿，以使所述的制備白及假鱗莖是在封閉的環(huán)境中進行。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是
1、本發(fā)明方法用白及種子，白及莖尖或白及側(cè)芽均能成功培育出白及假鱗莖，克服了現(xiàn)有技術(shù)用這些外植體只能直接培育出白及組培苗的技術(shù)難題，解決了用這些外植體直接培育的白及組培苗細弱、煉苗時易于死亡，成活率低等技術(shù)缺陷和不足。
2、本發(fā)明方法所培育的白及假鱗莖質(zhì)量好，增殖率高，用白及假鱗莖直接煉苗出苗的成活率高，由于白及假鱗莖又直接是營養(yǎng)體，生長出的白及種苗健壯，克服了白及組培苗細弱的缺陷。以白及種子為外植體，所產(chǎn)生的白及假鱗莖大小直徑可達到0.45 0. 80cm,最高可達到0. 80cm,白及假鱗莖的增殖率達到260 300%，白及假鱗莖直接煉苗出苗的成活率高達到82 95% ；以白及莖尖或白及側(cè)芽為外植體，所產(chǎn)生的白及假鱗莖大小直徑可達到0. 51 0. 78cm,白及假鱗莖的增殖率達到255% 290%，白及假鱗莖直接煉苗出苗的成活率高達到83 93%。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作更詳細的說明，以便進一步理解本發(fā)明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。以下實施例中所用的試劑均為市售產(chǎn)品，MS培養(yǎng)基及各培養(yǎng)基的配制方法均按植物組織培養(yǎng)的常規(guī)方法配置。實施例1以白及種子為外植體在培養(yǎng)瓶內(nèi)制備白及假鱗莖的方法及其專用培養(yǎng)
基
本實施例作5個處理，各處理的專用培養(yǎng)基的配方見表1，5個處理在培養(yǎng)瓶內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，除所用的專用培養(yǎng)基(見表1)不同外，其余方法均與如下處理1的方法相同
(1)在資源圃內(nèi)培育白及開花，當果皮略顯黃色時摘取種子，以該白及種子作為外植體進行如下消毒滅菌將白及種子用質(zhì)量分數(shù)為75%酒精消毒50s，用質(zhì)量分數(shù)為1% HgCl2溶液對白及種子進行表面消毒lOmin，用無菌水沖洗4次，在無菌工作條件下取出種子并用紗布包好種子后，用無菌水潤洗5次，用0. lmol/L KOH溶液預(yù)處理lOmin，用無菌水沖洗3次， 在飽和漂白粉(漂白粉是次氯酸鈣和氯化鈣的混合物，其有效成分是次氯酸鈣)上清液中消毒15min，用無菌水沖洗5次；
(2)在無菌工作條件下將步驟(1)消毒滅菌的白及種子接種到實施例1處理1專用培養(yǎng)基中的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中暗箱培養(yǎng)；
(3)當步驟(2)的種子萌發(fā)長出芽和幼根時，將其接種到實施例1處理1專用培養(yǎng)基中的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)假鱗莖；
(4)將步驟(3)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到實施例1處理1專用培養(yǎng)基中的假鱗莖增殖培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)假鱗莖；
(5)將步驟(4)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到實施例1處理1專用培養(yǎng)基中的假鱗莖生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，假鱗莖長出根后移出培養(yǎng)瓶進行煉苗；
上述步驟(3) (5)的培養(yǎng)條件為溫度25士2°C，光照強度20001x，光照12h/d。表1以白及種子為外植體在培養(yǎng)瓶內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基的配方
權(quán)利要求
1.一種以白及種子為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述的專用培養(yǎng)基是由種子萌發(fā)培養(yǎng)基，假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，假鱗莖增殖培養(yǎng)基和假鱗莖生根培養(yǎng)基組成，其中所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA1. 0 3. Omg/L, NAA1. 0 2. 0 mg/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 5 6. 5mg/L, ΝΑΑ0. 5 2. 5mg/L,香蕉泥 70 80g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 5 4. 0 mg/L，ΝΑΑ0. 2 1. 0 mg/L, 香蕉泥 60 80g/L,瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 1 0. 5 mg/L，ΝΑΑ0. 5 4. 5 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種以白及種子為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方為1/2MS, 6-BA1. 8 2. 4mg/L, NAA1. 4 1. 8 mg/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA2. 8 5. lmg/L, NAA1. 3 1. 9mg/L,香蕉泥 74 78g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA1. 9 2. 8 mg/L, ΝΑΑ0. 4 0. 7 mg/L, 香蕉泥 68 72g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 2 0. 4 mg/L，NAA1. 9 3. 1 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種以白及種子為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA2. lmg/L，NAA1.5 mg/L，瓊脂7g/L，pH5. 8 ；所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA3. 8mg/L, NAA1. 5mg/L，香蕉泥75/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為=IAMSj-BAZ. 2 mg/L,NAA0. 5mg/L，香蕉泥70g/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0.3 mg/L, NAA2. 6 mg/L，瓊脂7g/L， pH 5. 8。
4.一種以白及莖尖和或白及側(cè)芽為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述的專用培養(yǎng)基是由莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，叢芽增殖培養(yǎng)基，假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，假鱗莖增殖培養(yǎng)基和假鱗莖生根培養(yǎng)基組成，其中所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA1.0 3. 0 mg/L，ΝΑΑ0. 5 2. 0 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的叢芽增殖培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA1. 0 5. 0 mg/L,NAA0. 5 2. 0 mg/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 5 6. 5mg/L, ΝΑΑ0. 5 2. 5mg/L,香蕉泥 70 80g/L,瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 5 4. 0 mg/L，ΝΑΑ0. 2 1. 0 mg/ L,香蕉泥 60 80g/L,瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 1 0. 5 mg/L，ΝΑΑ0. 5 4. 5 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5.8。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種以白及莖尖和或側(cè)芽為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA1. 6 2. 2 mg/L，NAA1. 1 1. 6 mg/L, 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的叢芽增殖培養(yǎng)基的配方為:MS,6-BA2. 3 3. 8 mg/L, ΝΑΑ0. 9 1. 5mg/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA2. 8 5. lmg/L, NAA1. 3 1. 9mg/L,香蕉泥 74 78g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA1.9 2. 8 mg/L，ΝΑΑ0. 4 0. 7 mg/L, 香蕉泥 68 72g/L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0. 2 0. 4 mg/L, NAA1. 9 3. 1 mg/ L，瓊脂 7g/L，pH 5. 8。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種以白及莖尖和或側(cè)芽為外植體在培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的專用培養(yǎng)基，其特征在于所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS，6-BA1.9 mg/L, NAA1. 3 mg/L，瓊脂7g/L，pH5. 8 ；所述的叢芽增殖培養(yǎng)基的配方為MS，6-BA3.0 mg/L，NAA1. ang/L，瓊脂7g/L，pH5. 8 ；所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA3. 8mg/L, NAA1. 5mg/L，香蕉泥75/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基的配方為=IAMSj-BAZ. 2 mg/L,NAA0. 5mg/L，香蕉泥70g/L， 瓊脂 7g/L，pH 5. 8 ；所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS，6-BA0.3 mg/L, NAA2. 6 mg/L，瓊脂7g/L， pH 5. 8。
7.一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，其特征在于，按以下步驟進行(1)以白及種子作為外植體進行消毒滅菌將白及種子用質(zhì)量分數(shù)為75%酒精消毒 40 50s，用質(zhì)量分數(shù)為1% HgCl2溶液對白及種子進行表面消毒8 12min，用無菌水沖洗3 4次，在無菌工作條件下取出種子并用紗布包好種子后，用無菌水潤洗3 5次，用 0. lmol/L KOH溶液預(yù)處理8 lOmin，用無菌水沖洗2 3次，在飽和漂白粉上清液中消毒 10 20min，用無菌水沖洗3 5次；(2)在無菌工作條件下，將步驟(1)消毒滅菌的白及種子接種到權(quán)利要求1所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中暗箱培養(yǎng)；(3)當步驟(2)的種子萌發(fā)長出芽和幼根時，將其接種到權(quán)利要求1所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)假鱗莖；(4)將步驟(3)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到權(quán)利要求1所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)假鱗莖；(5)將步驟(4)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到權(quán)利要求1所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，假鱗莖長出根后移出培養(yǎng)器皿進行煉苗；上述步驟(3) (5)的培養(yǎng)條件為溫度25士2°C，光照強度1800 25001x，光照12 15h/d0
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，其特征在于步驟 (2)所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基是權(quán)利要求3所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基；步驟(3)所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基是權(quán)利要求3所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基；步驟(4)所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基是權(quán)利要求3所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基；步驟(5)所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基是權(quán)利要求3所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基。
9.一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，其特征在于，按以下步驟進行(1)以白及莖尖或白及側(cè)芽為外植體，用流水沖洗白及莖尖、白及側(cè)芽，用質(zhì)量分數(shù)為 75%的酒精消毒40 60s后，轉(zhuǎn)入質(zhì)量分數(shù)為1%的HgCl2溶液對白及莖尖、白及側(cè)芽進行表面消毒8 12min，用無菌水沖洗3 4次；(2)在無菌工作條件下，將步驟(1)消毒滅菌后的白及莖尖、白及側(cè)芽接種到權(quán)利要求 4所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)出再生芽；(3)將步驟(2)培養(yǎng)的再生芽轉(zhuǎn)接到權(quán)利要求4所述的叢芽增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)出叢生芽；(4)將步驟(3)培養(yǎng)的叢生芽轉(zhuǎn)接到權(quán)利要求4所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)假鱗莖；(5)將步驟(4)培養(yǎng)的假鱗莖轉(zhuǎn)接到權(quán)利要求4所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基中增殖培養(yǎng)；(6)步驟(5)獲得的假鱗莖轉(zhuǎn)接到權(quán)利要求4所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，假鱗莖長出根后移出培養(yǎng)器皿進行煉苗；上述步驟(2) (6)的培養(yǎng)條件為溫度25士2°C，光照強度1800 25001x，光照12 15h/d0
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法，其特征在于步驟 (2)所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是權(quán)利要求6所述的莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基；步驟(3)所述的叢芽增殖培養(yǎng)基是權(quán)利要求6所述的叢芽增殖培養(yǎng)基；步驟(4)所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基是權(quán)利要求6所述的假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基；步驟(5)所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基是權(quán)利要求6所述的假鱗莖增殖培養(yǎng)基；步驟(6)所述的所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基是權(quán)利要求6所述的假鱗莖生根培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明是一種培養(yǎng)器皿內(nèi)制備白及假鱗莖的方法及其專用培養(yǎng)基，屬植物的組織培養(yǎng)及繁殖技術(shù)領(lǐng)域。以白及種子為外植體的專用培養(yǎng)基由種子萌發(fā)培養(yǎng)基，假鱗莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基，假鱗莖增殖培養(yǎng)基和假鱗莖生根培養(yǎng)基組成。以白及莖尖和或白及側(cè)芽為外植體的專用培養(yǎng)基中除去種子萌發(fā)培養(yǎng)基外，其假鱗莖誘導(dǎo)至假鱗莖生根的培養(yǎng)基與上述相同，另有莖尖、側(cè)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和叢芽增殖培養(yǎng)基。本發(fā)明成功培育出白及假鱗莖，克服了現(xiàn)有技術(shù)只能直接培育出白及組培苗的技術(shù)難題，解決了直接培育的白及組培苗細弱、煉苗時成活率低的缺陷。所培育的白及假鱗莖直徑達0.45～0.80cm，增殖率達255～300%，其假鱗莖煉苗出苗的成活率達82～95%。
文檔編號A01H4/00GK102246695SQ20111011931
公開日2011年11月23日 申請日期2011年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月10日
發(fā)明者周敏, 李惠敏, 李明靜, 李枝林, 王友國, 黃春球 申請人:云南植物藥業(yè)有限公司