本發(fā)明涉及植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種刺葡萄種苗的繁殖方法及培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
刺葡萄(Vitis davidii Foex)是葡萄科葡萄屬東亞種群的一種野生種質(zhì)資源，原產(chǎn)于我國的湖南、云南、廣東、江西、浙江等省，是多年生落葉藤本植物。
刺葡萄的果實(shí)不僅味美可口，而且營養(yǎng)價(jià)值很高。成熟的漿果中含有15％～25％葡萄糖、維生素、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)鉀、磷、鐵等，此外它還含有多種具有生理功能的物質(zhì)。經(jīng)科學(xué)證明，刺葡萄能比阿斯匹林更好地阻止血栓形成，并且能降低人體血清膽固醇水平，降低血小板的凝聚力，對預(yù)防心腦血管病有一定作用，刺葡萄中含有一種抗癌微量元素(白藜蘆醇)，可以防止健康細(xì)胞癌變，阻止癌細(xì)胞擴(kuò)散，刺葡萄汁可以幫助器官植手術(shù)患者減少排異反應(yīng)，促進(jìn)早日康復(fù)。除此之外，其對黑痘病、白腐病、炭疽病等具有很強(qiáng)的抗性，因此，刺葡萄已成為耐濕熱、抗病育種的寶貴資源。
刺葡萄作為野生葡萄品種，因其耐高溫、高濕、低光照和高抗病性，在南方已有多年的品種選育和栽培歷史，成為南方葡萄栽培的優(yōu)良品種。目前，刺葡萄的繁育大都采用傳統(tǒng)的扦插方法，其種苗的成苗率較低，大都在10％左右；而且，由于種苗的根系欠發(fā)達(dá)，移栽后生長緩慢但刺葡萄枝條扦插生根率極差，育苗技術(shù)滯后，使該行業(yè)的發(fā)展受到限制。
有鑒于此，特提出本發(fā)明。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的第一目的在于提供一種刺葡萄種苗培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基非常適合刺葡萄外植體的培養(yǎng)，可大幅提高刺葡萄繁殖的成苗率。
本發(fā)明的第二目的在于提供一種能夠繁殖出根系發(fā)達(dá)、移栽后生長較快、且種苗成苗率高，適合刺葡萄繁殖的方法。
為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
一種刺葡萄種苗培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的主要成分為干燥的幼嫩葡萄枝葉、綠茶及三七的提取液；
可選的，按重量份計(jì)，所述提取液由干燥的幼嫩葡萄枝葉8～12份、綠茶15～25份以及三七0.05～0.15份經(jīng)混合、粉碎、過篩、熱水浸提后制得。
三種成分可為刺葡萄種苗提供充足的有機(jī)質(zhì)。干燥的幼嫩葡萄枝葉中理論上含有刺葡萄生長的全部養(yǎng)分，可以起到“落葉歸根”的施肥效果。而綠茶具有抗氧化功能，在外植體的培養(yǎng)過程中，酚類化合物易發(fā)生氧化而造成褐變，影響外植體的成苗率；而綠茶可以降低多酚氧化酶的活性，從而減輕褐變。三七為我國常用的一味中草藥，含人參皂甙Rb1、黃酮甙、槲皮素、β-谷甾醇等活性成分。三七中的有效成分可以刺激外植體細(xì)胞的生長與分化，從而更好的促進(jìn)種苗成活。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基含有40g/L～60g/L的魔芋精粉。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗培養(yǎng)基，所述提取液的制備方法為：
按重量份計(jì)，將干燥的幼嫩葡萄枝葉8～12份、綠茶15～25份以及三七0.05～0.15份混合、粉碎、過篩得到混合料，將所述混合料熱水浸提后過濾即得。
一種刺葡萄種苗的繁殖方法，包括如下步驟：
將刺葡萄外植體接種于如上所述的刺葡萄種苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)至苗高5cm～10cm后經(jīng)煉苗即得種苗。
本方法利用刺葡萄種苗培養(yǎng)基，采用腋芽離體育苗，繁殖系數(shù)高，繁殖速度快，變異性小。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，所述外植體取自6～7月齡刺葡萄的飽滿腋芽；所述腋芽保留有一段原枝條的韌皮部，所述韌皮部的長×寬×厚為(8mm～12mm)×(2mm～4mm)×(0.3mm～0.7mm)。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，將刺葡萄外殖體接種于如上所述的刺葡萄種苗培養(yǎng)基中時(shí)，每株刺葡萄外殖體占地面積為≥0.8cm2。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，所述培養(yǎng)的條件為：
于3℃～8℃、空氣相對濕度60％～70％、黑暗條件下培養(yǎng)25～35天；
隨后于18℃～24℃、空氣相對濕度60％～70％、光照強(qiáng)度500lx～1500lx、光照時(shí)間14～18小時(shí)的條件下培養(yǎng)30～60天。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，煉苗期每株苗占地面積為≥40cm2。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，所述煉苗為漂浮煉苗。
可選的，如上所述的刺葡萄的繁殖方法，所述漂浮煉苗所用的培養(yǎng)基質(zhì)為腐葉土、葡萄葉、珍珠巖經(jīng)粉碎過10～30目篩得到的混合物；
可選的，按質(zhì)量份計(jì)，所述培養(yǎng)基質(zhì)包括腐葉土0.7～1.3份、葡萄葉0.4～0.6份、珍珠巖0.2～0.4份。
可選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，煉苗期的培養(yǎng)條件為：
基質(zhì)含水量為60％～70％，光照強(qiáng)度在800lx～1200lx，日平均溫度16℃～20℃，每日光照時(shí)間8h～12h，煉苗時(shí)間25～35天。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
本發(fā)明采用腋芽離體育苗，配合刺葡萄種苗培養(yǎng)基，可以培養(yǎng)得到根系發(fā)達(dá)、整齊度高、抗逆性強(qiáng)、栽后成活率高、返苗快、不帶病菌的刺葡萄壯苗；
本方法繁殖系數(shù)高，繁殖速度快，變異性小，是一種值得推廣的、適合規(guī)?；瘧?yīng)用的刺葡萄繁殖方法。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
本發(fā)明提供的刺葡萄種苗培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的主要成分為干燥的幼嫩葡萄枝葉、綠茶及三七的提取液；
優(yōu)選的，按重量份計(jì)，所述提取液由干燥的幼嫩葡萄枝葉8～12份、綠茶15～25份以及三七0.05～0.15份經(jīng)混合、粉碎、過篩、熱水浸提后制得。
進(jìn)一步優(yōu)選的，所述熱水浸提具體為：加入所述混合料質(zhì)量25～35倍的水，85℃～95℃提取2小時(shí)。
三種成分可為刺葡萄種苗提供充足的有機(jī)質(zhì)。干燥的幼嫩葡萄枝葉中理論上含有刺葡萄生長的全部養(yǎng)分，可以起到“落葉歸根”的施肥效果。而綠茶具有抗氧化功能，在外植體的培養(yǎng)過程中，酚類化合物易發(fā)生氧化而造成褐變，影響外植體的成活率；而綠茶可以降低多酚氧化酶的活性，從而減輕褐變。三七為我國常用的一味中草藥，含人參皂甙Rb1、黃酮甙、槲皮素、β-谷甾醇等活性成分。三七中的有效成分可以刺激外植體細(xì)胞的生長與分化，從而更好的促進(jìn)種苗成活。
優(yōu)選的，如上所述的刺葡萄種苗培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基含有40g/L～60g/L的魔芋精粉。
魔芋精粉是魔芋經(jīng)加工后制成的精粉，主要含葡甘聚糖，其特點(diǎn)是具有很強(qiáng)的吸水性，吸水膨脹80～100倍。膨脹后的葡甘聚糖，在加熱的堿液中則轉(zhuǎn)化為不可逆的凝膠。利用這一特性，代替瓊脂制備培養(yǎng)基，可降低生產(chǎn)成本。
一種刺葡萄種苗的繁殖方法，包括如下步驟：
將刺葡萄外植體接種于如上所述的刺葡萄種苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)至苗高5cm～10cm后經(jīng)煉苗即得種苗。
本方法利用刺葡萄種苗培養(yǎng)基，采用腋芽離體育苗，繁殖系數(shù)高，繁殖速度快，變異性小。
優(yōu)選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，所述外植體取自6～7月齡刺葡萄的飽滿腋芽；所述腋芽保留有一段原枝條的韌皮部，所述韌皮部的長×寬×厚為(8mm～12mm)×(2mm～4mm)×(0.3mm～0.7mm)。
優(yōu)選的，所述外植體的取材時(shí)間在每年的6～7月進(jìn)行。
刺葡萄是合軸分枝，它的卷須屬于莖卷須，由頂芽形成，頂芽形成卷須后縱向生長由腋芽代替，所以其腋芽較多，用其繁殖比較方便快速。
韌皮部是維管植物的運(yùn)輸組織，腋芽帶著生枝條的韌皮部可保證外植體的營養(yǎng)吸收順暢。
優(yōu)選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，將刺葡萄外殖體接種于如上所述的刺葡萄種苗培養(yǎng)基中時(shí)，每株刺葡萄外殖體占地面積為≥0.8cm2；更優(yōu)選的，每株刺葡萄外殖體占地面積為≥1cm2；更優(yōu)選的，每株刺葡萄外殖體占地面積為1cm2。
保留合理的間距可保證每一株外植體都能接受都足夠的光照和營養(yǎng)，且若種的過于密集也有可能導(dǎo)致濕度不易調(diào)節(jié)或局部溫度過高。
優(yōu)選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，所述培養(yǎng)的條件為：
于3℃～8℃、空氣相對濕度60％～70％、黑暗條件下培養(yǎng)25～35天；
隨后于18℃～24℃、空氣相對濕度60％～70％、光照強(qiáng)度500lx～1500lx、光照時(shí)間14～18小時(shí)的條件下培養(yǎng)30～60天。
先進(jìn)行暗培養(yǎng)，在暗環(huán)境下可以促進(jìn)培養(yǎng)基中光敏性生長素的積累，有利于刺葡萄生根；而長日照則能促進(jìn)刺葡萄的其他器官的分化。
優(yōu)選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，煉苗期每株苗占地面積為≥40cm2；更優(yōu)選的，煉苗期每株苗占地面積為≥50cm2；更優(yōu)選的，煉苗期每株苗占地面積為50cm2。
由于外植體的培養(yǎng)一直處在水分充足，營養(yǎng)豐富的環(huán)境當(dāng)中，這種優(yōu)越的環(huán)境和大田相比差異巨大。因此當(dāng)幼苗生長達(dá)到一定的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，必須采取煉苗措施來調(diào)整幼苗的生長機(jī)理，增強(qiáng)幼苗的抗逆能力，使其能夠適應(yīng)大田生長的環(huán)境要求。煉苗是在保護(hù)幼苗的情況下，采取放風(fēng)、降溫、適當(dāng)控水等措施對幼苗強(qiáng)行鍛煉的過程，使其定植后能夠迅速適應(yīng)陸地的不良環(huán)境條件，縮短緩苗時(shí)間，增強(qiáng)對低溫、大風(fēng)等的抵抗能力。
優(yōu)選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，所述煉苗為漂浮煉苗。
漂浮煉苗具有集約化程度高、省時(shí)省工、技術(shù)操作簡單等優(yōu)點(diǎn)。
優(yōu)選的，如上海所述的刺葡萄的繁殖方法，所述漂浮煉苗所用的培養(yǎng)基質(zhì)為腐葉土、葡萄葉、珍珠巖經(jīng)粉碎過10～30目篩得到的混合物；
腐葉土又稱腐殖土，是植物枝葉在土壤中經(jīng)過微生物分解發(fā)酵后形成的營養(yǎng)土。腐葉土和葡萄葉可以為刺葡萄種苗提供生長所需的有機(jī)質(zhì)和養(yǎng)分，而珍珠巖的透氣性較好，既能作為填料，又能為種苗補(bǔ)充一些礦質(zhì)元素。
進(jìn)一步優(yōu)選的，按質(zhì)量份計(jì)，所述培養(yǎng)基質(zhì)包括腐葉土0.7～1.3份、葡萄葉0.4～0.6份、珍珠巖0.2～0.4份。
優(yōu)選的，如上所述的刺葡萄種苗的繁殖方法，煉苗期的培養(yǎng)條件為：
基質(zhì)含水量為60％～70％，光照強(qiáng)度在800lx～1200lx，日平均溫度16℃～20℃，每日光照時(shí)間8h～12h，煉苗時(shí)間25～35天。
優(yōu)選的，所述煉苗的方法為剪葉煉苗、剪根煉苗、控水煉苗、揭膜煉苗中的一種或多種的組合。
實(shí)施例1
本實(shí)施例提供了一種刺葡萄種苗的繁殖方法及該方法所用的培養(yǎng)基。
1、培養(yǎng)基制備：將干燥的幼嫩葡萄枝葉：綠茶：三七按質(zhì)量比為8：25：0.05的比例混合、粉碎、過20目篩，用30倍的水，在90℃提取2小時(shí)，過濾，在濾液中加入40g/L的魔芋精粉，混勻，裝入長×寬×高為20×20×15的透光聚四氟培養(yǎng)盒，培養(yǎng)基高度2cm，于121℃滅菌30分鐘，置于立體培養(yǎng)架冷卻備用。
2、外殖體準(zhǔn)備：6月取材。取飽滿腋芽，腋芽帶著生枝條的韌皮部，韌皮部長×寬×厚為8mm×4mm×0.7mm，70％酒精水溶液消毒15秒，無菌水清洗3次備用。
3、接種：于無菌環(huán)境下，將2中所述外殖體接種1中所述培養(yǎng)基表面，株×行距為0.8cm×0.8cm。
4、培養(yǎng)條件：于溫度3℃～8℃、空氣相對濕度60％、黑暗條件下培養(yǎng)35天；隨后于溫度18℃、空氣相對濕度70％、光照強(qiáng)度500lx、光照時(shí)間14小時(shí)的條件下培養(yǎng)60天，培養(yǎng)至苗高5～10cm。
5、煉苗：采用聚苯乙烯泡沫穴盤基質(zhì)漂浮煉苗，基質(zhì)為腐葉土、葡萄葉、珍珠巖經(jīng)粉碎過10目篩的比例混合物，其質(zhì)量比為0.7：0.4：0.2，穴盤孔數(shù)為250穴/m2，每穴栽種1苗，基質(zhì)含水量為60％，光照強(qiáng)度在800lx，日平均溫度20℃，每日光照時(shí)間12h，煉苗時(shí)間35天。
實(shí)施例2
本實(shí)施例提供了一種刺葡萄種苗的繁殖方法及該方法所用的培養(yǎng)基。
1、培養(yǎng)基制備：將干燥的幼嫩葡萄枝葉：綠茶：三七按質(zhì)量比為12：15：0.15的比例混合、粉碎、過40目篩，用30倍的水，在90℃提取2小時(shí)，過濾，在濾液中加入60g/L的魔芋精粉，混勻，裝入長×寬×高為20×20×15的透光聚四氟培養(yǎng)盒，培養(yǎng)基高度2cm，于121℃滅菌30分鐘，置于立體培養(yǎng)架冷卻備用。
2、外殖體準(zhǔn)備：7月取材。取飽滿腋芽，腋芽帶著生枝條的韌皮部，韌皮部長×寬×厚為12mm×2mm×0.3mm，70％酒精水溶液消毒20秒，無菌水清洗3次備用。
3、接種：于無菌環(huán)境下，將2中所述外殖體接種1中所述培養(yǎng)基表面，株×行距為1.2cm×1.2cm。
4、培養(yǎng)條件：于溫度3℃～8℃、空氣相對濕度70％、黑暗條件下培養(yǎng)25天；隨后于溫度24℃、空氣相對濕度60％、光照強(qiáng)度1500lx、光照時(shí)間18小時(shí)的條件下培養(yǎng)30天，培養(yǎng)至苗高5～10cm。
5、煉苗：采用聚苯乙烯泡沫穴盤基質(zhì)漂浮煉苗，基質(zhì)為腐葉土、葡萄葉、珍珠巖經(jīng)粉碎過30目篩的比例混合物，其質(zhì)量比為1.3：0.6：0.4，穴盤孔數(shù)為150穴/m2，每穴栽種1苗，基質(zhì)含水量為70％，光照強(qiáng)度在1200lx，日平均溫度16℃，每日光照時(shí)間8h，煉苗時(shí)間25天。
實(shí)施例3
本實(shí)施例提供了一種刺葡萄種苗的繁殖方法及該方法所用的培養(yǎng)基。
1、培養(yǎng)基制備：將干燥的幼嫩葡萄枝葉：綠茶：三七按質(zhì)量比為10：20：0.1的比例混合、粉碎、過30目篩，用30倍的水，在90℃提取2小時(shí)，過濾，在濾液中加入50g/L的魔芋精粉，混勻，裝入長×寬×高為20×20×15的透光聚四氟培養(yǎng)盒，培養(yǎng)基高度2cm，于121℃滅菌30分鐘，置于立體培養(yǎng)架冷卻備用。
2、外殖體準(zhǔn)備：7月取材。取飽滿腋芽，腋芽帶著生枝條的韌皮部，韌皮部長×寬×厚為10mm×3mm×0.5mm，70％酒精水溶液消毒15秒，無菌水清洗3次備用。
3、接種：于無菌環(huán)境下，將2中所述外殖體接種1中所述培養(yǎng)基表面，株×行距為1cm×1cm。
4、培養(yǎng)條件：于溫度3℃～8℃、空氣相對濕度65％、黑暗條件下培養(yǎng)30天；隨后于溫度21℃、空氣相對濕度65％、光照強(qiáng)度1000lx、光照時(shí)間16小時(shí)的條件下培養(yǎng)45天，培養(yǎng)至苗高5～10cm。
5、煉苗：采用聚苯乙烯泡沫穴盤基質(zhì)漂浮煉苗，基質(zhì)為腐葉土、葡萄葉、珍珠巖經(jīng)粉碎過10～30目篩的比例混合物，其質(zhì)量比為1：0.5：0.3，穴盤孔數(shù)為200穴/m2，每穴栽種1苗，基質(zhì)含水量為65％，光照強(qiáng)度在1000lx，日平均溫度18℃，每日光照時(shí)間10h，煉苗時(shí)間30天。
實(shí)驗(yàn)例
將公布號為CN103053377A，公布日為2013.04.24日，專利名為“一種刺葡萄的繁殖方法”的申請文件作為對比例，與本申請的實(shí)施例進(jìn)行比較，結(jié)果如表1所示。
表1各項(xiàng)目效果比較
從上表可知，使用本發(fā)明提供的刺葡萄繁殖方法，不僅成苗率大幅度提高，且產(chǎn)量也有了非常大的提升。
盡管已用具體實(shí)施例來說明和描述了本發(fā)明，然而應(yīng)意識到，在不背離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權(quán)利要求中包括屬于本發(fā)明范圍內(nèi)的所有這些變化和修改。