專利名稱：一種制備卡介菌的培養(yǎng)基原料馬鈴薯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及質(zhì)控方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備卡介菌的培養(yǎng)基的原料馬鈴薯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控方法。
背景技術(shù)：
在《中國藥典》2010年第三部中對卡介菌的培養(yǎng)基的規(guī)定是采用蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基、改良蘇通綜合培養(yǎng)基或經(jīng)批準(zhǔn)的其他培養(yǎng)基。目前大部分企業(yè)所采用的是蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基。培養(yǎng)特性項(xiàng)下說明，于37 39°C陪養(yǎng)時(shí)，卡介菌在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基發(fā)育成干皺成團(tuán)略呈淺黃色的菌苔。在企業(yè)的生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，不同批次的原料馬鈴薯制備的馬鈴薯培養(yǎng)基上所獲得的卡介菌質(zhì)量不穩(wěn)定，有的質(zhì)地緊密，有的則枯黃稀疏，這些情況導(dǎo)致各批次間卡介菌的收率波動(dòng)較大。在將菌種接種到馬鈴薯培養(yǎng)基上接種滅菌后，可以看到有些馬鈴薯溶，有些土豆不溶。馬鈴薯溶與不溶的判定標(biāo)準(zhǔn)去皮的馬鈴薯切成長方形片狀，長約8cm，寬約2. 5cm, 厚約1cm，制成馬鈴薯培養(yǎng)基。將馬鈴薯片放入異型試管中，加入配制好的培養(yǎng)基至略高于異型試管凹進(jìn)部分，放入不銹鋼盒內(nèi)連同接種鏟一起在0. llMPa、12rC條件下，滅菌30分鐘。在冷卻室放至常溫。如果滅菌冷卻后的馬鈴薯仍然保持完整長方形狀，則為不溶的馬鈴薯；如果有部分散落，溶于培養(yǎng)液中，則為溶的馬鈴薯。經(jīng)過觀察統(tǒng)計(jì)后發(fā)現(xiàn)，溶的土豆制成的培養(yǎng)基使得卡介菌生長情況更加良好，收獲的卡介菌更加致密有型，不易松散。收獲得到的卡介菌得率較高、穩(wěn)定。目前尚沒有任何單位或個(gè)人建立馬鈴薯培養(yǎng)基的原料質(zhì)控方法，導(dǎo)致了馬鈴薯來源及標(biāo)準(zhǔn)無法統(tǒng)一，進(jìn)而無法有效控制卡介菌的質(zhì)量。發(fā)明人通過分析出馬鈴薯的有效成分變化、建立原料馬鈴薯質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和控制方法，使得生產(chǎn)得到的卡介菌的質(zhì)量均一穩(wěn)定，收率穩(wěn)定可控。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷和問題，而提供用來制備卡介菌的培養(yǎng)基的原料馬鈴薯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控方法，以直鏈淀粉占總淀粉比例> 20. 0%作為制備卡介菌的培養(yǎng)基的原料馬鈴薯的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，保證所培養(yǎng)出的卡介菌得率和質(zhì)量可控、均一穩(wěn)定。一種制備卡介菌的培養(yǎng)基的原料馬鈴薯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于直鏈淀粉占總淀粉比例彡20. 0%。所述的馬鈴薯的質(zhì)控方法，其特征在于包括如下步驟
(一)總淀粉的含量測定取切制好的大小合適的土豆塊片，用組織搗碎機(jī)搗碎，將適量試樣放于80目篩上沖洗，其纖維素等殘留于篩上，蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、糖果、可溶性物質(zhì)留于水中，稱為淀粉乳，而淀粉沉淀于下層，再過100目篩，將沉淀粉物用蒸餾水充分洗滌后，下層淀粉水量降至50%左右。上層混懸液用真空泵濾機(jī)吸濾，使含水量降至40%左右，經(jīng)脫水后的淀粉放于干燥箱中進(jìn)行干燥，干燥的溫度在< 60°C，干燥，冷卻，稱重，至2g連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。(二)直鏈淀粉的含量測定 (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取100. Omg直鏈淀粉純品，放入IOOmL容量瓶中，加入lmol/ LNaOH溶液10mL，在熱水中溶解后，取出，用蒸餾水定容至IOOmL,混勻，即為lmg/mL直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液。取標(biāo)準(zhǔn)溶液O、0. 1、0. 3、0. 5、0. 7、0. 9、1. 1、1. 3mL分別置于50mL容量瓶中，加 20 30mLH20,以0. lmol/LHCl調(diào)pH至3. 5，力口 0. 5mL碘試劑，定容，混勻，即得濃度為0、2、 6、10、14、20、22、26μ g/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取100. Omg支鏈淀粉純品，放入IOOmL容量瓶中，加入 Imol/LNaOH溶液10mL，在熱水中溶解后，取出，用蒸餾水定容至IOOmL,混勻，即為lmg/mL支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別取lmg/mL溶液0、l、2、3、4、5mL，分別置于50mL容量瓶中，加20 30mLH20,以 0. Imol/LHAC 調(diào) pH 至 3. 5，力口 0. 5mL 碘試劑，定容，混勻，得到 0、20、40、60、80、 100 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。(2)測定波長的選擇
各選一適宜濃度的直鏈淀粉(15 μ g/mL)和支鏈淀粉(60 μ g/mL)標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別在雙波長紫外-可見分光光度計(jì)上進(jìn)行400 IOOOnm光譜掃描，做出其光譜圖。雙波長法測定波長的確定用作圖法確定直鏈淀粉測定波長2工、參比波長2 2。結(jié)果用作圖法確定直鏈淀粉測定波長2 ^630^1、參比波長2 2=486nm。(3)含量測定
直鏈淀粉占總淀粉比例(％)稱取各品種100. Omg粗淀粉，放入IOOmL容量瓶中，加入 Imol/LNaOH溶液10mL，在熱水中溶解后，取出，用蒸餾水定容至IOOmL,混勻，即為lmg/mL粗淀粉。取lmg/mL溶液3mL，置于50mL容量瓶中，加20 30mLH20，以0. lmol/LHCl調(diào)pH至 3. 5，加0. 5mL碘試劑，定容，混勻，待測樣品。在不同波長測定吸光度，求得其直鏈淀粉量。 以蒸餾水作空白。支鏈淀粉占總淀粉比例(％) = 1-直鏈淀粉占總淀粉比例(％)
為更好的表明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，以下用影響馬鈴薯溶與不溶的物質(zhì)基礎(chǔ)指標(biāo)成分研究實(shí)驗(yàn)及效果來說明 1.實(shí)驗(yàn)對象
用于生產(chǎn)的十六批馬鈴薯。2.實(shí)驗(yàn)儀器與試劑
普通天平、萬分之一天平、低速離心機(jī)、組織搗碎機(jī)、渦旋混勻器、紫外分光光度計(jì)、高效液相色譜儀、超聲清洗儀、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、溶劑過濾器、80目藥典篩、100目藥典篩、真空泵、刀、常用玻璃儀器、塑料試管、離心試管、試管架、微量移液器、封口膜、馬鈴薯直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品、碘、碘化鉀、乙醇、甲醇、碘試液、石油醚、冰乙酸、氫氧化鈉。3. 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 3. 1水分測定
測定用的供試品，先破碎成直徑不超過3mm的顆粒或碎片。直徑和長度在3mm以下的可不破碎。減壓干燥法需通過二號(hào)篩。取供試品2 5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱瓶中， 厚度不超過5mm，疏松供試品不超過10mm，精密稱定，打開瓶蓋在100 105°C干燥5小時(shí)， 將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時(shí)，冷卻，稱重， 至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量(％)。結(jié)果見表1。 表1水分測定
權(quán)利要求
1.一種制備卡介菌的培養(yǎng)基的原料馬鈴薯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控方法，其特征在于直鏈淀粉占總淀粉比例彡20. 0%。
2.權(quán)利要求1所述的馬鈴薯的質(zhì)控方法，其特征在于包括如下步驟(1)總淀粉的制備取切制好的大小合適的土豆塊片，用組織搗碎機(jī)搗碎，將適量試樣放于80目篩上沖洗，其纖維素等殘留于篩上，蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、糖果、可溶性物質(zhì)留于水中，稱為淀粉乳，而淀粉沉淀于下層，再過100目篩，將沉淀粉物用蒸餾水充分洗滌后，靜止 6_7h，下層淀粉水量降至50%左右，上層混懸液用真空泵濾機(jī)吸濾，使含水量降至40%左右， 經(jīng)脫水后的淀粉放于干燥箱中進(jìn)行干燥，干燥的溫度在< 60°C，干燥，冷卻，稱重，至2g連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止；(2)直鏈淀粉占總淀粉比例測定稱取100.Omg粗淀粉，放入IOOmL容量瓶中，加入 lmol/L NaOH溶液10mL，在熱水中溶解后，取出，用蒸餾水定容至IOOmL,混勻，即為lmg/mL 粗淀粉；取lmg/mL粗淀粉3mL，置于50mL容量瓶中，加20 30mL H20,以0. lmol/L HAC調(diào) PH至3. 5，加0. 5mL碘試劑，定容，混勻，待測樣品；雙波長法測定吸光度，求得其直鏈淀粉量；以蒸餾水作空白，求得直鏈淀粉占總淀粉比例測定。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用來制備卡介菌的培養(yǎng)基原料馬鈴薯的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)控方法，以直鏈淀粉占總淀粉比例≥20.0%作為馬鈴薯原料的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，提高卡介菌收率和質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N21/31GK102359920SQ201110201369
公開日2012年2月22日 申請日期2011年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月19日
發(fā)明者盧捷, 容明強(qiáng), 袁莉, 谷陟欣, 辛秀 申請人:九芝堂股份有限公司