本發(fā)明涉及生物繁殖培養(yǎng)的技術(shù)領(lǐng)域，特別是昆蟲病原線蟲的人工培養(yǎng)基的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

斯氏線蟲科Steinernematidae的斯氏線蟲屬Steinernema線蟲和異小桿線蟲科Heterorhabditidae的異小桿線蟲屬Heterorhabditis線蟲是昆蟲病原線蟲，它們是目前國際上新型的生物殺蟲劑。與其它生物殺蟲劑相比，這類線蟲具有廣泛的寄主范圍；對寄主具主動搜索能力，特別對土棲性及鉆蛀性害蟲；對人畜、植物及有益生物安全，在歐美的一些國家可以豁免注冊使用；易于大量培養(yǎng)；使用方便；在環(huán)境中可循環(huán)利用；能與多種化學(xué)和生物殺蟲劑混用；并可用傳統(tǒng)藥械或灌溉設(shè)施來施用等優(yōu)點(diǎn)。

近年來，作為新型生物殺蟲劑，昆蟲病原線蟲已廣泛應(yīng)用于農(nóng)林、牧草和衛(wèi)生害蟲的安全防治，受到國內(nèi)外學(xué)者及商業(yè)部門的高度重視，并走向商品化生產(chǎn)。在工業(yè)化國家的生物農(nóng)藥市場中，此類線蟲的市場銷售額排生物殺蟲劑第二位。目前全球已有超過60個國家的100多個實(shí)驗(yàn)室在研究此類有益生物。在我國，昆蟲病原線蟲也已經(jīng)商業(yè)化生產(chǎn)，并應(yīng)用于防治多種農(nóng)林、草地、花卉以及衛(wèi)生害蟲等，結(jié)果令人鼓舞。

昆蟲病原線蟲的培養(yǎng)經(jīng)歷了從活體培養(yǎng)到離體培養(yǎng)的過程，離體培養(yǎng)又從無菌培養(yǎng)到單菌培養(yǎng)。目前，線蟲的商業(yè)化生產(chǎn)主要是通過無菌操作技術(shù)于人工培養(yǎng)基中加入單一共生細(xì)菌和無菌線蟲完成的，即體外單菌培養(yǎng)系統(tǒng)。根據(jù)培養(yǎng)基質(zhì)可分為固體培養(yǎng)和液體發(fā)酵培養(yǎng)，兩者在技術(shù)上不盡相同，如培養(yǎng)容器、培養(yǎng)基配比、培養(yǎng)過程等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是解決現(xiàn)有技術(shù)中的問題，提出一種昆蟲病原線蟲的人工培養(yǎng)基，考慮不同線蟲的營養(yǎng)需求、培養(yǎng)基來源的便利及成本，能夠提高侵染期線蟲產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提出了一種昆蟲病原線蟲的人工培養(yǎng)基，包括營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的組分為：動物組織勻漿25g～50g、豆粉80～150g、豬油120～200g、蛋黃粉60～200g、瓊脂8～15g、酵母粉12～20g、水800ml～1200ml。

作為優(yōu)選，所述營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的組分為：動物組織勻漿40g、豆粉100g、豬油140g、蛋黃粉100g、瓊脂10g、酵母粉15g、水900ml。

作為優(yōu)選，所述營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的組分為：動物組織勻漿35g、豆粉120g、豬油150g、蛋黃粉150g、瓊脂12g、酵母粉16g、水1100ml。

作為優(yōu)選，所述營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的使用方法為按比例調(diào)配好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基均勻混入120g碎海綿，裝入透氣金屬培養(yǎng)盒，進(jìn)行高溫滅菌消毒，冷卻待用；將培養(yǎng)好的共生菌接入消毒后的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4天后接種線蟲。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明針對固體培養(yǎng)方法，培養(yǎng)基配方的選擇考慮不同線蟲的營養(yǎng)需求、培養(yǎng)基來源的便利及成本。固體培養(yǎng)方法的生產(chǎn)成本要明顯低于液體培養(yǎng)方法，固體培養(yǎng)方法生產(chǎn)的線蟲致病力也要明顯高于液體培養(yǎng)方法。因此，當(dāng)市場需求量增大，固體培養(yǎng)方法更具產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)發(fā)展前景，本發(fā)明的對昆蟲病原線蟲的規(guī)模化生產(chǎn)具有重要的意義，培養(yǎng)基中的黃粉蟲干粉可以使線蟲一級種的退化時間延長一倍以上，能夠提高侵染期線蟲產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本，發(fā)展前景好。

本發(fā)明的特征及優(yōu)點(diǎn)將通過實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明。

【具體實(shí)施方式】

本發(fā)明一種昆蟲病原線蟲的人工培養(yǎng)基，包括營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的組分為：動物組織勻漿25g～50g、豆粉80～150g、豬油120～200g、蛋黃粉60～200g、瓊脂8～15g、酵母粉12～20g、水800ml～1200ml。

所述動物組織勻漿選用黃粉蟲干粉，水選用超凈水。所述營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的使用方法為按比例調(diào)配好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基均勻混入120g碎海綿，裝入透氣金屬培養(yǎng)盒，進(jìn)行高溫滅菌消毒，冷卻待用；將培養(yǎng)好的共生菌接入消毒后的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4天后接種線蟲。

實(shí)施例1：

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的組分為：動物組織勻漿40g、豆粉100g、豬油140g、蛋黃粉100g、瓊脂10g、酵母粉15g、水900ml。

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的使用方法為按比例調(diào)配好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基均勻混入120g碎海綿，裝入透氣金屬培養(yǎng)盒，進(jìn)行高溫滅菌消毒，冷卻待用；

確定適宜的培養(yǎng)溫度，范圍為19～28℃，將培養(yǎng)好的共生菌接入消毒后的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4天后，接種線蟲。每培養(yǎng)一億尾線蟲的最佳接種量在20萬尾～60萬尾。

實(shí)施例2：

作為優(yōu)選，所述營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的組分為：動物組織勻漿35g、豆粉120g、豬油150g、蛋黃粉150g、瓊脂12g、酵母粉16g、水1100ml。

營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的使用方法為按比例調(diào)配好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基均勻混入120g碎海綿，裝入透氣金屬培養(yǎng)盒，進(jìn)行高溫滅菌消毒，冷卻待用；

確定適宜的培養(yǎng)溫度，范圍為19～28℃，將培養(yǎng)好的共生菌接入消毒后的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4天后，接種線蟲。每培養(yǎng)一億尾線蟲的最佳接種量在20萬尾～60萬尾。

本發(fā)明達(dá)到的技術(shù)效果

線蟲產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

整齊度：在解剖鏡下對線蟲的侵染期線蟲的比例進(jìn)行檢測，使用本發(fā)明的培養(yǎng)基生產(chǎn)的侵染期線蟲能達(dá)到95％以上。

致病力：以黃粉蟲作為侵染對象，在25±1℃下對黃粉蟲侵染96個小時，黃粉蟲的死亡率可以達(dá)到80％以上。

存活率：成品線蟲包裝為硅藻土粉劑吸附包裝，帶有保溫材料，線蟲的存活率可以達(dá)到90％以上。

線蟲一級種蟲經(jīng)過多代繁殖后，會遇到種蟲退化的問題，具體表現(xiàn)為線蟲活力、產(chǎn)量下降，培養(yǎng)基中的黃粉蟲干粉可以使線蟲一級種的退化時間延長一倍以上。

本發(fā)明針對固體培養(yǎng)方法，培養(yǎng)基配方的選擇考慮不同線蟲的營養(yǎng)需求、培養(yǎng)基來源的便利及成本。固體培養(yǎng)方法的生產(chǎn)成本要明顯低于液體培養(yǎng)方法，固體培養(yǎng)方法生產(chǎn)的線蟲致病力也要明顯高于液體培養(yǎng)方法。因此，當(dāng)市場需求量增大，固體培養(yǎng)方法更具產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)發(fā)展前景，本發(fā)明的對昆蟲病原線蟲的規(guī)?；a(chǎn)具有重要的意義，能夠提高侵染期線蟲產(chǎn)量，降低生產(chǎn)成本，發(fā)展前景好。

上述實(shí)施例是對本發(fā)明的說明，不是對本發(fā)明的限定，任何對本發(fā)明簡單變換后的方案均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。