本發(fā)明是一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理裝置及方法，屬于害蟲抗逆性技術(shù)研究領(lǐng)域，尤其涉及一種利用簡(jiǎn)易裝置進(jìn)行瓜實(shí)蠅溫度脅迫的方法。

背景技術(shù)：

瓜實(shí)蠅（Bactrocera(Zeugodacus)cucurbitae）屬實(shí)蠅科（Tephritidae），廣泛分布于亞熱帶地區(qū)，是一種重要的入侵性害蟲。其把卵產(chǎn)在蘆科和茄科植物如南瓜、甜瓜、苦瓜、西瓜、桃和番茄等內(nèi)為害并隨其運(yùn)輸擴(kuò)散。環(huán)境溫度是影響昆蟲生命活動(dòng)的重要因素，昆蟲的地理分布和擴(kuò)散都直接受到環(huán)境溫度的影響。溫度脅迫耐受性的研究在預(yù)測(cè)害蟲發(fā)生分布區(qū)、建立物候?qū)W模型、模擬種群動(dòng)態(tài)、檢疫處理、引進(jìn)天敵、改進(jìn)害蟲控制策略和評(píng)估其地理擴(kuò)散能力等方面具有重要的指導(dǎo)意義。研究表明，昆蟲對(duì)高溫或低溫的耐受性同體內(nèi)熱激蛋白家族部分基因的表達(dá)有著密切的關(guān)系，因此研究者通過(guò)研究在特定的高溫或低溫下短時(shí)間脅迫昆蟲，然后研究其體內(nèi)那種熱激蛋白基因發(fā)生了上調(diào)或下調(diào)表達(dá)，從而進(jìn)一步了解昆蟲的溫度耐受性。

對(duì)昆蟲進(jìn)行溫度脅迫的儀器主要是人工氣候箱，但人工氣候箱價(jià)格較為昂貴且占用空間較大，對(duì)于短時(shí)間溫度脅迫處理昆蟲來(lái)說(shuō)，使用起來(lái)并不方便。因此，研究出一種簡(jiǎn)易方便的昆蟲溫度脅迫處理方法對(duì)于從事此方面的研究來(lái)說(shuō)是非常有必要的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明目的是提供一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理裝置及方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題,本發(fā)明使用方便，便于操作，穩(wěn)定性好，可靠性高。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過(guò)如下的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理裝置，包括水浴鍋、玻璃瓶以及LED潛水燈，所述玻璃瓶以及LED潛水燈放置在水浴鍋內(nèi)，所述玻璃瓶的底部安裝有鐵片，所述玻璃瓶的上方安裝有瓶蓋，所述瓶蓋的頂部開有圓孔，所述圓孔內(nèi)放置有塑料管以及溫度計(jì)探針，所述溫度計(jì)探針通過(guò)連接線連接溫度計(jì)，所述LED潛水燈的外表面安裝有潛水燈吸盤，所述LED潛水燈的上端連接有電源線。

進(jìn)一步地，所述水浴鍋的底部放置有磁鐵。

進(jìn)一步地，開設(shè)在瓶蓋上方的圓孔設(shè)有三個(gè)，所述圓孔的直徑為6mm，塑料管設(shè)有兩個(gè)，兩個(gè)塑料管放置在兩個(gè)圓孔內(nèi)，剩余一個(gè)圓孔內(nèi)放置有溫度計(jì)探針。

進(jìn)一步地，所述塑料管的外徑、內(nèi)徑以及長(zhǎng)分別為6mm、4mm和50mm，塑料管的底部連接有紗網(wǎng)，所述紗網(wǎng)的目數(shù)為為40目。

進(jìn)一步地，所述塑料管和溫度計(jì)探針是利用熱熔膠進(jìn)行黏結(jié)封閉在圓孔內(nèi)。

進(jìn)一步地，所述LED潛水通過(guò)電源線連接外部電路。

進(jìn)一步地，所述鐵片通過(guò)熱熔膠進(jìn)行黏結(jié)在玻璃瓶的下方，所述鐵片呈圓形，所述鐵片的直徑為2.5cm。

進(jìn)一步地，所述水浴鍋為一種冷熱型水浴鍋。

進(jìn)一步地，所述玻璃瓶為透明玻璃瓶，玻璃瓶的體積為100ml。

一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理方法，包括以下步驟：

步驟一、在100ml透明帶蓋玻璃瓶的瓶蓋頂部開三個(gè)直徑6mm直徑的圓孔；

步驟二、把兩根外徑、內(nèi)徑以及長(zhǎng)分別為6mm、4mm以及50mm的塑料管底部封上40目的紗網(wǎng)，然后將塑料管用熱熔膠黏結(jié)在瓶蓋上的兩個(gè)圓孔內(nèi)，用熱熔膠把溫度計(jì)探針黏結(jié)在剩余的一個(gè)圓孔中且深入瓶蓋中50mm；

步驟三、在玻璃瓶外底部黏貼一塊直徑2.5cm的圓鐵片；

步驟四、將待處理的瓜實(shí)蠅引入玻璃瓶中，蓋上瓶蓋，在其中一個(gè)塑料管中放入一個(gè)棉球，并滴加5%-10%的蜂蜜水作為食物；

步驟五、在水浴鍋內(nèi)壁放置LED潛水燈，作為光源；

步驟六、把水浴鍋調(diào)制所需溫度，采用磁鐵把玻璃瓶固定在水浴鍋中，倒入水，水淹過(guò)瓶蓋，根據(jù)設(shè)置的光照和處理時(shí)間，完后取出試蟲；

步驟七、采用熒光定量PCR技術(shù)分析瓜實(shí)蠅熱脅迫后體內(nèi)hsp90基因的相對(duì)表達(dá)量。

進(jìn)一步地，在步驟四中，具體的步驟為，把待處理羽化3-5天的瓜實(shí)蠅成蟲雌雄各4頭引入到玻璃瓶中，蓋上瓶蓋。

進(jìn)一步地，在步驟五中，玻璃瓶與LED潛水燈的距離在5-10cm之間。

進(jìn)一步地，在步驟六中，水浴鍋設(shè)定的溫度40℃，對(duì)照溫度為26℃，待玻璃瓶?jī)?nèi)溫度達(dá)到所需溫度后開始計(jì)時(shí)，處理時(shí)間分別為1h、3h和5h，處理結(jié)束后取出瓜實(shí)蠅，室溫恢復(fù)1h，進(jìn)行后續(xù)步驟。

進(jìn)一步地，在步驟七中，室溫恢復(fù)1h后的瓜實(shí)蠅采用Trizol試劑提取其總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，根據(jù)瓜實(shí)蠅hsp90和actin基因序列， 以各個(gè)處理樣本的cDNA為模板，熒光定量PCR分析溫度脅迫后hsp90基因的相對(duì)表達(dá)量。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明的一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理裝置及方法，靈活簡(jiǎn)單，不僅僅可以用于瓜實(shí)蠅，也可以用于其它昆蟲的脅迫處理。

附圖說(shuō)明

通過(guò)閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯：

圖1為本發(fā)明一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理裝置及方法的LED潛水燈結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理裝置及方法的結(jié)構(gòu)爆炸圖；

圖3為40℃高溫分別脅迫1h、3h和5h下瓜實(shí)蠅成蟲hsp90基因相對(duì)表達(dá)量結(jié)果圖。26℃處理的蟲子作為對(duì)照，每個(gè)處理三個(gè)重復(fù)，圖中柱子表示相對(duì)表達(dá)量±SE，柱上不同字母表示在5%水平（Tkey’s test）上差異顯著。Hsp90基因相對(duì)定量表達(dá)量采用2^-△△t分析方法，其中A為雌成蟲，B為雄成蟲。

圖中： 1-水浴鍋、2-玻璃瓶、3-LED潛水燈、21-鐵片、22-磁鐵、23-瓶蓋、24-圓孔、25-塑料管、26-溫度計(jì)探針、27-連接線、28-溫度計(jì)、31-電源線、32-潛水燈吸盤。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體實(shí)施方式，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。

請(qǐng)參閱圖1、圖2，本發(fā)明提供一種技術(shù)方案：一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理裝置，包括水浴鍋1、玻璃瓶2以及LED潛水燈3，玻璃瓶2以及LED潛水燈3放置在水浴鍋1內(nèi)，玻璃瓶2的底部安裝有鐵片21，玻璃瓶2的上方安裝有瓶蓋23，瓶蓋23的頂部開有圓孔24，圓孔24內(nèi)放置有塑料管25以及溫度計(jì)探針26，溫度計(jì)探針26通過(guò)連接線27連接溫度計(jì)28，LED潛水燈3的外表面安裝有潛水燈吸盤32，LED潛水燈3的上端連接有電源線31。

水浴鍋1的底部放置有磁鐵22，鐵片21通過(guò)熱熔膠進(jìn)行黏結(jié)在玻璃瓶2的下方，鐵片21呈圓形，鐵片21的直徑為2.5cm，水浴鍋1為一種冷熱型水浴鍋。

開設(shè)在瓶蓋23上方的圓孔24設(shè)有三個(gè)，圓孔24的直徑為6mm，塑料管25設(shè)有兩個(gè)，兩個(gè)塑料管25放置在兩個(gè)圓孔24內(nèi)，剩余一個(gè)圓孔24內(nèi)放置有溫度計(jì)探針26。

塑料管25的外徑、內(nèi)徑以及長(zhǎng)分別為6mm、4mm和50mm，塑料管25的底部連接有紗網(wǎng)，紗網(wǎng)的目數(shù)為為40目，塑料管25和溫度計(jì)探針26是利用熱熔膠進(jìn)行黏結(jié)封閉在圓孔24內(nèi)。

LED潛水通過(guò)電源線31連接外部電路，玻璃瓶2為透明玻璃瓶2，玻璃瓶2的體積為100ml。

做為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，提供一種簡(jiǎn)易的瓜實(shí)蠅溫度脅迫處理方法，包括以下步驟：

步驟一、在100ml透明帶蓋玻璃瓶2的瓶蓋23頂部開三個(gè)直徑6mm直徑的圓孔24；

步驟二、把兩根外徑、內(nèi)徑以及長(zhǎng)分別為6mm、4mm以及50mm的塑料管25底部封上40目的紗網(wǎng)，然后將塑料管25用熱熔膠黏結(jié)在瓶蓋23上的兩個(gè)圓孔24內(nèi)，用熱熔膠把溫度計(jì)探針26黏結(jié)在剩余的一個(gè)圓孔24中且深入瓶蓋23中50mm；

步驟三、在玻璃瓶2外底部黏貼一塊直徑2.5cm的圓鐵片；

步驟四、將待處理的瓜實(shí)蠅引入玻璃瓶2中，蓋上瓶蓋23，在其中一個(gè)塑料管25中放入一個(gè)棉球，并滴加5%-10%的蜂蜜水作為食物；

步驟五、在水浴鍋1內(nèi)壁放置LED潛水燈3，作為光源；

步驟六、把水浴鍋1調(diào)制所需溫度，采用磁鐵把玻璃瓶2固定在水浴鍋1中，倒入水，水淹過(guò)瓶蓋23，根據(jù)設(shè)置的光照和處理時(shí)間，完后取出試蟲；

步驟七、采用熒光定量PCR技術(shù)分析瓜實(shí)蠅熱脅迫后體內(nèi)hsp90基因的相對(duì)表達(dá)量。

在步驟四中，具體的步驟為，把待處理羽化3-5天的瓜實(shí)蠅成蟲雌雄各4頭引入到玻璃瓶2中，蓋上瓶蓋23。

在步驟五中，玻璃瓶2與LED潛水燈3的距離在5-10cm之間。

在步驟六中，水浴鍋1設(shè)定的溫度40℃，對(duì)照溫度為26℃，待玻璃瓶2內(nèi)溫度達(dá)到所需溫度后開始計(jì)時(shí)，處理時(shí)間分別為1h、3h和5h，處理結(jié)束后取出瓜實(shí)蠅，室溫恢復(fù)1h，進(jìn)行后續(xù)步驟。

在步驟七中，室溫恢復(fù)1h后的瓜實(shí)蠅采用Trizol試劑提取其總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，根據(jù)瓜實(shí)蠅hsp90和actin基因序列， 采用primer5.0軟件設(shè)計(jì)合成用于熒光定量分析的引物：hsp90-F/R：ACTTCCACTATGGGCTAC/ CCACCGCTTTGAGTATCT, actin-F/R：ATGAATTGCCTGATGGTC/ GAATGAGGGTTGGAAGAGT; 以各個(gè)處理樣本的cDNA為模板，熒光定量PCR分析溫度脅迫后hsp90基因的相對(duì)表達(dá)量。

瓜實(shí)蠅熱脅迫后hsp90基因表達(dá)結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示在40℃分別熱脅迫瓜實(shí)蠅1h、3h和5h后，在雌雄蟲體內(nèi)hsp90基因相對(duì)表達(dá)量同26℃對(duì)照相比較均發(fā)生了顯著性上調(diào)表達(dá)；表達(dá)量最高的均為40℃脅迫1h處理，雌蟲體內(nèi)hsp90表達(dá)量上調(diào)了11.25倍，雄蟲體內(nèi)hsp90表達(dá)量上調(diào)了7.64倍；當(dāng)40℃脅迫3h處理時(shí)，雌蟲體內(nèi)hsp90表達(dá)量上調(diào)了5.42倍，雄蟲體內(nèi)hsp90表達(dá)量上調(diào)了4.98倍；當(dāng)40℃脅迫5h處理時(shí)，雌蟲體內(nèi)hsp90表達(dá)量上調(diào)了4.21倍，雄蟲體內(nèi)hsp90表達(dá)量上調(diào)了4.96倍。實(shí)例結(jié)果表明，瓜實(shí)蠅體內(nèi)hsp90基因的上調(diào)表達(dá)可能和其耐熱性相關(guān)，且其上調(diào)表達(dá)并不是隨熱脅迫的時(shí)間延長(zhǎng)而升高，反而隨時(shí)間的增加而下降。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn),對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無(wú)論從哪一點(diǎn)來(lái)看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說(shuō)明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所涉及的權(quán)利要求。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說(shuō)明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說(shuō)明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說(shuō)明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。