本發(fā)明涉及植物的雜交育種方法，具體涉及一種紅豆杉的雜交育種方法，屬于木本植物品種選育的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
紅豆杉，又稱紫杉，屬國(guó)家一級(jí)保護(hù)的珍貴樹種，天然林資源已枯竭。紅豆杉是常綠喬木，樹干通直，樹姿優(yōu)美，種子成熟時(shí)呈紅色，假皮鮮艷奪目，是優(yōu)良的盆景和綠化樹種。紅豆杉木材堅(jiān)固耐用，紋理秀麗，根、莖都是高檔的雕刻材料，是屬于特種用林材；它的根、莖、皮、葉均含有紫杉醇，是當(dāng)今世界公認(rèn)的治癌藥物，葉可通經(jīng)、利尿、降血壓，對(duì)防治糖尿病及心血管疾病有明顯效果，是價(jià)值昂貴的藥用林。近年紅豆杉盆景在花木市場(chǎng)也呼之欲出，成為令人矚目的新貴。紅豆杉盆景放在室內(nèi)具有明顯的驅(qū)趕蚊蟲和凈化空氣的效果，它吸收二氧化碳、一氧化碳、尼古丁、二氧化硫等有害物質(zhì)，還能吸收甲醛、苯、甲苯、二甲苯等致癌物質(zhì)，呼出氧氣，起到防癌抗癌保健和凈化空氣作用，是家庭居室、酒店、賓館及辦公場(chǎng)所美化環(huán)境的珍貴植物。紅豆杉屬植物，雌雄異株，雄球花單生于葉腋，雌球花的胚珠單生于花軸上部側(cè)生短軸的頂端，基部有圓盤狀假種皮，假種皮杯狀，紅色。本屬樹種為淺根植物，其主根不明顯、側(cè)根發(fā)達(dá)，耐蔭性強(qiáng)，耐修剪、耐寒、耐病蟲害，在天然林中生長(zhǎng)緩慢，分布星散，野生樹木日漸減少，是世界上公認(rèn)的瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物。由于紅豆杉屬植物不同種之間雄花的花期不同，且同種紅豆杉的雌雄株花期不同步，造成授粉困難，嚴(yán)重影響了紅豆杉屬植物的雜交育種進(jìn)程。雜交育種對(duì)紅豆杉的開發(fā)和推廣利用都具有著非常重要的意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供了一種紅豆杉的雜交育種方法，解決紅豆杉屬植株種間花期不同步導(dǎo)致授粉育種困難的問(wèn)題。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種紅豆杉的雜交育種方法，包括如下步驟：（1）花粉采集：于2月份，分別采集南方紅豆杉（Taxuswallichianavar.mairei）和曼地亞紅豆杉（Taxus×media）的雄株的花粉，自然干燥，剔除雜質(zhì)后，分別置于EP管4℃冷藏備用，并保持干燥；（2）授粉：到3月份，雌株進(jìn)入吐水期，取出儲(chǔ)存的花粉，室溫放置一小時(shí)使其恢復(fù)常溫；按照花粉：超純水=1:1000的重量比例配置成花粉液，按照南方紅豆杉花粉授粉曼地亞雌株，曼地亞紅豆杉花粉授粉南方紅豆杉雌株，分別噴施雌株，每隔四天使用噴壺噴施一次，共授粉3次；單株處理可采用滅菌棉簽沾花粉涂抹吐水期雌花進(jìn)行授粉；授粉后所有授粉植株進(jìn)行分株隔離以防止外來(lái)花粉的干擾。（3）施肥：授粉后，施肥，按照氮、磷、鉀比例為1:3:1，噴施3次葉面肥；（4）掛果：掛果后噴施營(yíng)養(yǎng)液，營(yíng)養(yǎng)液成分為：N200mg/L、P33mg/L、K66mg/L，磷肥以NH4H2PO4形式加入，鉀肥以KNO3形式加入，氮肥除以NH4H2PO4和KNO3的形式加入外，不足部分用（NH4）2SO4補(bǔ)充。保證植株養(yǎng)分供給；待種子成熟后，分別從母本植株上采集不同父本授粉育種種子，獲得純種和雜交種種子；（5）沙藏：將采集的種子冷水浸種5天，每天換水一次，浸種后將種子表面水分晾干，低溫沙藏，按沙子：種子3:1進(jìn)行；（6）播種：春季，將沙藏的種子滅菌后，進(jìn)行激素浸種，用300mg/LGA3+20mg/L6-BA+30mg/LKT+10mg/LABT浸泡種子24小時(shí)，后播種，獲得無(wú)菌試管苗。（7）移栽：將無(wú)菌試管苗自然光遮光度下煉苗10～15天，然后將其取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，將其根部浸泡在復(fù)合微生物制劑中，30min，促進(jìn)紅豆杉植株新根的生長(zhǎng)；所述復(fù)合微生物制劑包括以下重量配比的原料：假絲酵母菌發(fā)酵液：產(chǎn)黃纖維單胞菌發(fā)酵液：枯草芽孢桿菌發(fā)酵液：赤霉素：活性炭：磷酸氫二鈉＝5：3：1：2：1：1；所述假絲酵母菌具體為假絲酵母菌（Candidautilis）ATCCNo.22023;所述產(chǎn)黃纖維單胞菌具體為產(chǎn)黃纖維單胞菌（cellulomonasflavigena）ATCCNo.482所述枯草芽孢桿菌具體為枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）CGMCCNo：0954（參見CN1554744）；所述復(fù)合微生物制劑的制備方法為首先將假絲酵母菌、產(chǎn)黃纖維單胞菌、枯草芽孢桿菌按照常規(guī)方式活化、培養(yǎng)至菌液中活菌數(shù)達(dá)到1乘以108個(gè)/克獲得發(fā)酵液，將上述發(fā)酵液按照質(zhì)量比例5：3：1混合，按照重量配比添加活性炭、赤霉素和磷酸氫二鈉即得。移栽30天后成活率達(dá)到95%以上。本發(fā)明雜交育種方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：1、雜交親本：植物雜交育種領(lǐng)域，最重要的不同就在于針對(duì)的每一親本的不同選擇，選擇不同的親本就必須對(duì)具體的雜交組合的培育方法進(jìn)行多次重復(fù)試驗(yàn)，不同原始種間雜交敗育很高，雜交后，雖然有較高果實(shí)率，果實(shí)里面也有種子，但是檢測(cè)后種子里面沒有胚。南方紅豆杉生長(zhǎng)速度快、紫杉醇含量低；曼地亞紅豆杉生長(zhǎng)速度慢，紫杉醇含量高。紅豆杉是異花授粉植物。以南方紅豆杉作為與曼地亞紅豆杉雜交，得到雜交后代，使其兼有雙親優(yōu)勢(shì)，可以有效解決紫杉醇制藥原料短缺的問(wèn)題，且獲得雜交組合的F1代種子萌發(fā)率，可育率最高；2、層積前先用冷水進(jìn)行預(yù)處理，由于層積催芽是一個(gè)緩慢的吸水過(guò)程，同時(shí)也是一個(gè)緩慢的轉(zhuǎn)化和緩慢發(fā)芽的過(guò)程，種子萌動(dòng)與種子含水率相關(guān)，只有種子的含水率接近或達(dá)到飽和含水率時(shí)才開始萌動(dòng)，而達(dá)到飽和含水率所需要的時(shí)間與種子開始層積時(shí)的含水率相關(guān)，層積前含水率越低，吸水越緩慢，達(dá)到飽和含水率的時(shí)間越長(zhǎng)，適宜催芽的時(shí)間也會(huì)越長(zhǎng)；發(fā)明人通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，層積前將種子進(jìn)行冷水浸種5天，每天換水一次，這樣的預(yù)處理后，可以使得層積60天便達(dá)到飽和狀態(tài)，縮短催芽時(shí)間，且該預(yù)處理能夠增加田間發(fā)芽率。3、激素種類和濃度對(duì)種子的生長(zhǎng)發(fā)育有非常顯著的作用，由于紅豆杉屬植物種子萌發(fā)困難，本申請(qǐng)通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，用300mg/LGA3+20mg/L6-BA+30mg/LKT+10mg/LABT浸泡種子24小時(shí)，后播種，能夠顯著改善雜交種子的發(fā)芽率，單因子實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用該激素浸泡后，種子發(fā)芽率提高了35.7％，且大大縮短了萌發(fā)時(shí)間。4、移栽時(shí)，赤霉素的濃度適中，刺激根系細(xì)胞的伸展旺盛，搭配假絲酵母菌、產(chǎn)黃纖維單胞菌、枯草芽孢桿菌形成一個(gè)良好的微生態(tài)系統(tǒng)，各菌種之間合理配伍，共生協(xié)調(diào)，互不拮抗，微生物分泌根系促生素和抑菌素能夠呵護(hù)幼苗根系感染腐霉根腐病、疫霉根腐病、細(xì)菌性根腐病和莖基腐病及立枯病、猝倒病等苗期病害,從而有效控制苗期的死苗爛棵現(xiàn)象，磷酸氫二鈉給根系源源不斷供給營(yíng)養(yǎng)，維持苗強(qiáng)苗壯勢(shì)頭，極大的提高植株的適應(yīng)性，提高整個(gè)成活率。具體實(shí)施方式實(shí)施例1一種紅豆杉的雜交育種方法，包括如下步驟：（1）花粉采集：確定南方紅豆杉（Taxuswallichianavar.mairei）和曼地亞紅豆杉（Taxus×media）的雌雄株，并調(diào)查花期的具體時(shí)間。結(jié)果發(fā)現(xiàn)南方紅豆杉雄花的始花期比曼地亞紅豆杉的早10天以上，雌花的始花期基本一致；兩種紅豆杉雌花單花的吐水期2天，整株雌花吐水期持續(xù)2周左右。2月中旬采集南方紅豆杉雄株的花粉，2月下旬采集曼地亞紅豆杉的雄株的花粉，自然干燥，剔除雜質(zhì)后置于EP管4℃冷藏備用，并保持干燥。（2）授粉：3月1號(hào)起，觀察南方紅豆杉和曼地亞紅豆杉雌株上雌花吐水情況，自發(fā)現(xiàn)有雌花進(jìn)入吐水期開始第二天取出儲(chǔ)存的花粉，室溫放置一小時(shí)使其恢復(fù)常溫；按照花粉：超純水=1：1000的比例配置成花粉液，按照南方紅豆杉花粉授粉曼地亞雌株，曼地亞紅豆杉花粉授粉南方紅豆杉雌株，分別噴施雌株，每隔四天使用噴壺噴施一次，共授粉3次；單株處理可采用滅菌棉簽沾花粉涂抹吐水期雌花進(jìn)行授粉；授粉后所有授粉植株進(jìn)行分株隔離以防止外來(lái)花粉的干擾。（3）施肥：授粉后，施肥，按照氮、磷、鉀比例為1:3:1，噴施3次葉面肥；（4）掛果：掛果后噴施營(yíng)養(yǎng)液，營(yíng)養(yǎng)液成分為：N200mg/L、P33mg/L、K66mg/L，磷肥以NH4H2PO4形式加入，鉀肥以KNO3形式加入，氮肥除以NH4H2PO4和KNO3的形式加入外，不足部分用（NH4）2SO4補(bǔ)充。保證植株養(yǎng)分供給；待種子成熟后，分別從母本植株上采集不同父本授粉育種種子，獲得純種和雜交種種子；（5）沙藏：將采集的種子冷水浸種5天，每天換水一次，浸種后將種子表面水分晾干，低溫沙藏，按沙子：種子3:1進(jìn)行；（6）播種：春季，將沙藏的種子滅菌后，進(jìn)行激素浸種，用300mg/LGA3+20mg/L6-BA+30mg/LKT+10mg/LABT浸泡種子24小時(shí)，后播種，種子萌發(fā)率達(dá)到90.3%，獲得無(wú)菌試管苗。（7）移栽：將無(wú)菌試管苗自然光遮光度下煉苗10天，然后將其取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，將其根部浸泡在復(fù)合微生物制劑中，30min，促進(jìn)紅豆杉植株新根的生長(zhǎng)；所述復(fù)合微生物制劑包括以下重量配比的原料：假絲酵母菌發(fā)酵液：產(chǎn)黃纖維單胞菌發(fā)酵液：枯草芽孢桿菌發(fā)酵液：赤霉素：活性炭：磷酸氫二鈉＝5：3：1：2：1：1所述假絲酵母菌具體為假絲酵母菌（Candidautilis）ATCCNo.22023;所述產(chǎn)黃纖維單胞菌具體為產(chǎn)黃纖維單胞菌（cellulomonasflavigena）ATCCNo.482所述枯草芽孢桿菌具體為枯草芽孢桿菌枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）CGMCCNo：0954；所述復(fù)合微生物制劑的制備方法為首先將假絲酵母菌、產(chǎn)黃纖維單胞菌、枯草芽孢桿菌按照常規(guī)方式活化、培養(yǎng)至菌液中活菌數(shù)達(dá)到108個(gè)/克獲得發(fā)酵液，將上述發(fā)酵液按照質(zhì)量比例5：3：1混合，按照重量配比添加活性炭、赤霉素和磷酸氫二鈉即得。移栽30天后成活率達(dá)到95.7%，且所有成活植株均冬季耐寒；經(jīng)本發(fā)明方法獲得的紅豆杉植株，長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)健，抗病，能夠安全過(guò)冬，有效解決了紅豆杉市場(chǎng)資源的空缺，具有廣闊的應(yīng)用前景。按照本發(fā)明方法栽培的紅豆杉，生長(zhǎng)周期快，在二年左右即可以采收枝葉用于提取紫杉醇。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說(shuō)明及具體實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對(duì)之作一些修改或改進(jìn)，或在實(shí)施案例之外的樹種實(shí)施本方法，這對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改，改進(jìn)或范圍的擴(kuò)大，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。