本發(fā)明涉及一種塊菌菌根苗的合成方法。
背景技術：
塊菌（truffles）為了囊菌類、塊菌目（tuberales）、塊菌科（tuberaceae）、塊菌屬（tuber），是一類與維管束植物形成共生關系，具有很高營養(yǎng)價值與經濟開發(fā)價值的地下名貴食用真菌、除具有較高的維生素b1、維生素b2與獨特的口感及香味外，其內所含的雄性酮類成份是其它類食用菌所無法與之相比的，特別是歐美等國家塊菌號稱“黑色鉆石”。
過去塊菌主要靠自然生長，隨著需求量的增長，掠奪式的采挖已導致自然野生產量逐年下降，目前已成為瀕危物種。近年來，逐步開展了人工栽培塊菌的研究，但一是接種塊菌菌種均為子囊果均漿液，菌種純度低，二是宿主植物苗和塊菌菌根幼苗的培育在有菌的環(huán)境下進行，受外界雜菌的影響，造成塊菌菌根苗合成的感染率只有60%以下，寄生成功率較低。
技術實現要素：
本發(fā)明的目的是針對上述存在的問題，提供一種感染率高的塊菌菌根苗合成方法。
本發(fā)明是這樣實現的：包括宿主植物苗的培育、塊菌菌種接種、塊菌菌根苗初期培育、塊菌菌根苗后期培育，其特征是：
1、宿主植物苗的培育：宿主植物選用云南松、華山松、板栗、釣栲的任意一種，宿主植物的種子經消毒處理后，在無菌的環(huán)境下，使用無菌的基質培育80～100天；
2、塊菌菌種接種：在裝有空氣凈化器的無菌接種間內進行塊菌菌種接種，作業(yè)前開起空氣凈化器30～50分種，將步驟1培養(yǎng)的宿主植物苗剪去根段末端1/3，根部按順序蘸生根液和高純度液體塊菌菌種后，放入裝有1/3基質的黑色育苗杯內，用接種槍瞄準宿主植物苗根部射入10～13ml高純度液體塊菌菌種，宿主植物苗扶正后加入基質至距杯上口1.0～1.5cm，生根液為吲哚乙酸水溶液濃度為1~2mg/l，基質為過2目砂窗過篩腐殖土、蛭石、石英砂按體積比2：1:1比例混勻后、調整水份30~35%，調整ph值7～8.5，經128℃高壓滅菌2小時；
3、塊菌菌根苗初期培育：將步驟2接種后的宿主植物苗放入到在裝有空氣凈化器的無菌育苗室培育，1～3天育苗室溫度控制在18～26℃，3天后，育苗室溫度控制在晝26±1℃，夜15±1℃，每天光照時長10～12小時，光照度為1200～1500lx，每天開起空氣凈化器30～50分鐘，培育15天后，菌根苗可移入塑料大棚培育；
4、塊菌菌根苗后期培育：將步驟3菌根苗移入塑料大棚，3～5天內進行遮陽，遮光率為55～65%，5天后在大棚自然環(huán)境下培育，5～6個月后可到大田移栽。
本發(fā)明中一是接種塊菌菌種使用了
本技術：
人生產的高純度液體塊菌菌種，二是宿主植物苗和塊菌菌根苗初期培育在無菌的環(huán)境下進行，未受外界雜菌的影響，三是宿主植物苗蘸生根液和高純度液體塊菌菌種后，用接種槍瞄準宿主植物苗根部射入高純度液體塊菌菌種，宿主植物苗根部及周圍菌種密布，為此，塊菌菌根苗合成的感染率高，可以達到90%以上，比現有技術高出30%。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明作具體說明。
1、宿主植物苗的培育：
（1）宿主植物種子的篩選和保存
宿主植物選用云南松、華山松、板栗、釣栲（大葉櫧）任意一種，云南松、華山松種子用水洗去除空殼后晾干，裝在玻璃罐或紗布袋中儲藏備用；板粟、釣栲種子水洗去除霉爛變質與不飽滿的種子、晾干表面水份，種子與濕度為25～35%的潔凈河砂按體積比1：2的比例混合裝入紙箱中并置于4～6℃的冷藏柜中保存?zhèn)溆茫?/p>
（2）種子處理：
使用云南松、華山松種子時；用0.1%高錳酸鉀溶液浸泡30分種，用清水沖洗2～3遍，再用30%h2o2溶液浸泡4小時，并用戴有防護橡膠手套的手搓洗，使種子表面堅硬的臘層盡量去除，以利種子吸收水份和播種后萌發(fā)，用無菌水沖洗3～4遍后，再用無菌水浸泡96小時，浸泡時至少每24小時更換一次無菌水，接著瀝干水份后備用；使用板粟、釣栲（大葉櫧）樹種子時，用0.1%高錳酸鉀溶液浸泡30分鐘，用清水沖洗2～3遍后再用30%h2o2溶液浸泡2小時，浸泡時應隨時搓洗，除去表面臘層，用無菌水沖洗3～4遍后，再用無菌水浸泡48小時，浸泡時至少每24小時更換一次無菌水，接著瀝干水份后備用；
（3）育苗基質制備：過2目砂窗過篩腐殖土、蛭石、石英砂按體積比1:1:1比例混勻，加水調至含水量30～35%后，在128℃高壓滅菌2小時備用；
（4）播種：基質裝入專用塑料培養(yǎng)筐內，并將處理后的種子播入基質中培育，植入深度為2cm左右。
（5）育苗：播種后用無菌水澆灌、濕度控制在50～60%，播種后15天左右開始出芽，30天后苗基本上出齊，苗齡在90天后可開始接塊菌種。
2、塊菌菌種接種：在裝有空氣凈化器的無菌接種間內進行塊菌菌種接種，作業(yè)前開起空氣凈化器30～50分種，將步驟1培養(yǎng)的宿主植物苗剪去根段末端1/3，根部按順序蘸生根液和高純度液體塊菌菌種后，放入裝有1/3基質的黑色育苗杯內，用接種槍瞄準宿主植物苗根部射入10～13ml高純度液體塊菌菌種，宿主植物苗扶正后加入基質至距杯上口1.0～1.5cm，生根液為吲哚乙酸水溶液濃度為1~2mg/l，基質為過2目砂窗過篩腐殖土、蛭石、石英砂按體積比2：1:1比例混勻后、調整水份30~35%，用石灰粉調整調整ph值7～8.5，經128℃高壓滅菌2小時；
3、塊菌菌根苗初期培育：接種后的1-3天是菌種能否成活的關鍵時期，而接種后的7-15天又是菌種與植株共生能否成功的關鍵期，為此，將步驟2接種后的宿主植物苗放入在裝有空氣凈化器的無菌育苗室培育，1～3天育苗室溫度控制在18～26℃，3天后育苗室溫度控制在晝26±1℃，夜15±1℃，每天光照時長10～12小時，光照度為1200～1500lx，每天開起空氣凈化器30～50分鐘，培育15天后，菌根苗可移入塑料大棚培育；
4、塊菌菌根苗后期培育：將步驟3菌根苗移入塑料大棚，3～5天內進行遮陽，遮光率為55～65%，5天后在大棚自然環(huán)境下培育，5～6個月后可到大田移栽。