相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用

根據(jù)35u.s.c.§119(e)，本申請(qǐng)要求于2014年12月22日提交的美國(guó)臨時(shí)專(zhuān)利申請(qǐng)第62/095,393號(hào)的權(quán)益。上述專(zhuān)利申請(qǐng)的內(nèi)容在此以引用的方式納入本公開(kāi)內(nèi)容中。

本發(fā)明涉及在植物中由長(zhǎng)喙殼屬種(ceratocystisspp.)、特別是在甘蔗中由奇異長(zhǎng)喙殼菌(ceratocystisparadoxa)(鳳梨病)引起的病害的生物防治。

背景技術(shù)：

甘蔗是有重要經(jīng)濟(jì)意義的禾本科植物。甘蔗的種植面積正在不斷增加，且其用途包括生產(chǎn)糖、法勒諾姆(falernum)、糖蜜、朗姆酒、甘蔗酒(巴西的國(guó)魂)和燃料乙醇。甘蔗破碎后殘留的甘蔗渣既可用于提供工廠中所使用的熱能，又可提供通常出售給用戶(hù)電網(wǎng)的電能，以及作為用于生產(chǎn)乙醇的原料。

甘蔗屬于叢生禾草科植物。甘蔗通過(guò)種植整個(gè)甘蔗莖或含有一個(gè)或更多個(gè)芽的甘蔗莖的插條(cutting)進(jìn)行繁殖。這些插條有時(shí)是指種塊或種段(billet)。商業(yè)甘蔗種植涉及人工或機(jī)械地種植整個(gè)甘蔗莖或種塊。

鳳梨病是經(jīng)濟(jì)上重要的甘蔗病害，其出現(xiàn)在幾乎所有種植甘蔗的國(guó)家。該病害是真菌奇異長(zhǎng)喙殼菌引起的，這種真菌導(dǎo)致種塊在種植后腐爛。這種病害的名字來(lái)源于種塊腐爛過(guò)程中所產(chǎn)生的氣味，該氣味與成熟菠蘿的氣味相似。

合成的殺真菌劑通常是非特異性的，因此可作用于除了目標(biāo)生物以外的其他生物，包括其他天然存在的有益生物。全世界的消費(fèi)者越來(lái)越關(guān)注與化學(xué)殘留物相關(guān)的潛在的環(huán)境和健康問(wèn)題，尤其是在食品方面。這導(dǎo)致越來(lái)越多的來(lái)自消費(fèi)者的減少化學(xué)(即合成)農(nóng)藥的使用或者至少減少其用量的壓力。因此，需要控制食物鏈的需求，同時(shí)仍可有效地防治害蟲(chóng)。

使用合成殺真菌劑所帶來(lái)的另一個(gè)問(wèn)題是，重復(fù)且單獨(dú)地施用一種殺真菌劑通常導(dǎo)致選擇出抗性微生物。通常，這類(lèi)菌株還對(duì)其他具有相同作用方式的活性成分產(chǎn)生交叉抗性。然后，就不再可能采用所述活性化合物來(lái)有效地防治病原體了。然而，具有新的作用機(jī)理的活性成分的研發(fā)既困難又昂貴。

病原體群體的抗性發(fā)展的風(fēng)險(xiǎn)以及對(duì)環(huán)境和人類(lèi)健康的關(guān)注促進(jìn)了在鑒定用于控制植物害蟲(chóng)和病害的合成殺真菌劑的替代物方面的興趣。

使用生物防治劑(bca)是一種替代方案。在某些情況下，大多數(shù)bca的功效尚未達(dá)到與傳統(tǒng)殺真菌劑相同的水平，特別是在嚴(yán)重感染壓力的情況下。因此，在某些情況下，生物防治劑、其突變體和由其產(chǎn)生的代謝物，特別是在低施用率的情況下，并不能完全令人滿(mǎn)意。

因此，持續(xù)需要開(kāi)發(fā)新的、替代的植物保護(hù)劑，其至少在某些領(lǐng)域有助于滿(mǎn)足上述需求。具體而言，需要更有效的方法來(lái)防治甘蔗的鳳梨病。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

鑒于此，本發(fā)明的一個(gè)特別的目的是提供表現(xiàn)出對(duì)抗植物病原體(如，奇異長(zhǎng)喙殼菌)的活性的組合物。此外，本發(fā)明另一特定的目的是減少生物防治劑和/或合成殺真菌劑的施用率并拓寬其活性譜，并從而提供這樣一種組合物，其優(yōu)選地在所施用的活性化合物總量降低的情況下，具有提高的對(duì)抗植物病原體的活性。特別地，本發(fā)明的另一目的是提供這樣一種組合物，當(dāng)其施用于作物時(shí)，能減少作物上的殘留物的量，從而降低抗性形成的風(fēng)險(xiǎn)，但是仍然可提供有效的害蟲(chóng)和/或病害防治。

因此，已發(fā)現(xiàn)這些目的至少部分地由以下所定義的本發(fā)明的組合物和方法解決。本發(fā)明的組合物優(yōu)選地滿(mǎn)足上述需求。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，將本發(fā)明的組合物施用于植物、植物部位、采收的水果、蔬菜和/或植物生長(zhǎng)位點(diǎn)優(yōu)選能夠有效地防治植物病原體，且特別是鳳梨病的病原體——奇異長(zhǎng)喙殼菌。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種用于防治植物中的長(zhǎng)喙殼屬種和/或減少采收作物的損失的方法，所述方法包括將有效量的至少一種選自枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)、短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)、其產(chǎn)生的代謝物及其結(jié)合物的生物防治劑施用于植物和/或植物生長(zhǎng)位點(diǎn)。所述長(zhǎng)喙殼屬種可為多脂長(zhǎng)喙殼(ceratocystisadipose)、天藍(lán)色長(zhǎng)喙殼(ceratocystiscoerulescens)、ceratocystisfagacearum、甘薯長(zhǎng)喙殼(ceratocystisfimbriata)、奇異長(zhǎng)喙殼菌、毛長(zhǎng)喙殼菌(ceratocystispilifera)、ceratocystisplatani、ceratocystispluriannulata或其結(jié)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述長(zhǎng)喙殼屬種為奇異長(zhǎng)喙殼菌。

在某些方面，所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌qst713或其突變體。在其他方面，所述枯草芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌qst713、枯草芽孢桿菌qst30002、枯草芽孢桿菌qst30004，或枯草芽孢桿菌qst713、枯草芽孢桿菌qst30002，或枯草芽孢桿菌qst30004的突變體。在其他方面，所述短小芽孢桿菌為短小芽孢桿菌qst2808或其突變體。

在其他實(shí)施方案中，在施用之前鑒定植物和/或植物生長(zhǎng)位點(diǎn)是否需要處理。所述植物可包含繁殖材料。繁殖材料的非限制性實(shí)例包括幼苗、根莖、苗圃植物、插條和種子。

所述植物可為甘蔗、鳳梨、香蕉、可可、椰子和油棕櫚中的任一種。在某些實(shí)施方案中，所述植物為甘蔗。

本發(fā)明還提供處理植物以防治長(zhǎng)喙殼屬種的方法，其中所述方法包括將有效量的至少一種選自枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、其產(chǎn)生的代謝物及其結(jié)合物的生物防治劑施用于植物、植物部位和/或植物周?chē)奈稽c(diǎn)(例如施用于植物生長(zhǎng)培養(yǎng)基)。

在一些實(shí)施方案中，這種施用提高了產(chǎn)量和/或改善了植物健康。因此，例如，本發(fā)明還提供這樣的方法，其中將本發(fā)明的組合物施用于土壤。例如，所述組合物可在植物或植物部位與土壤接觸之前、接觸過(guò)程中或接觸之后施用。作為其他實(shí)施例，本發(fā)明的方法包括但不限于，使用例如土壤表面浸透、插柄(shanked-in)、注入或沿犁溝施用的施用方法來(lái)施用所述組合物。在一些方面，將枯草芽孢桿菌qst713、短小芽孢桿菌qst2808或其突變體施用于與植物根系接觸的土壤或植物基部的土壤。

在某些方面，所述方法還包含將殺蟲(chóng)劑和/或殺真菌劑施用于植物和/或植物生長(zhǎng)位點(diǎn)。所述殺蟲(chóng)劑和/或殺真菌劑可與枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和/或其產(chǎn)生的代謝物依序或同時(shí)施用。

在其他方面，所述至少一種生物防治劑為發(fā)酵產(chǎn)物。例如，所述發(fā)酵產(chǎn)物可包含枯草芽孢桿菌qst713細(xì)胞或枯草芽孢桿菌qst713的突變體細(xì)胞、代謝物和殘余發(fā)酵液。在另一方面，所述發(fā)酵產(chǎn)物包含短小芽孢桿菌qst2808細(xì)胞和/或短小芽孢桿菌qst2808的突變體細(xì)胞、代謝物和殘余發(fā)酵液。

在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含至少一種生物防治劑的組合物用于防治植物中的長(zhǎng)喙殼屬種的用途，其中所述至少一種生物防治劑選自枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、其產(chǎn)生的代謝物及其結(jié)合物。在一些方面，所述至少一種生物防治劑為枯草芽孢桿菌qst713或其突變體。在其他方面，所述至少一種生物防治劑為枯草芽孢桿菌qst713。在一些實(shí)施方案中，所述至少一種生物防治劑為短小芽孢桿菌qst2808或其突變體。

附圖說(shuō)明

圖1描繪了未處理的對(duì)照(utc)植物、以不同施用率采用aso(枯草芽孢桿菌qst713)處理的植物和采用(甲氧乙氯汞)處理的植物所出現(xiàn)的甘蔗芽的平均數(shù)。aso(枯草芽孢桿菌qst713)和(甲氧乙氯汞)各自與500ec(毒死蜱(chlorpyrifos))結(jié)合施用。

圖2示出了奇異長(zhǎng)喙殼菌被枯草芽孢桿菌qst713(圖2a)和短小芽孢桿菌qst2808(圖2b)抑制的區(qū)域。

具體實(shí)施方式

所有公開(kāi)物、專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)，包括文中的任何附圖和附錄通過(guò)引證的方式納入本說(shuō)明書(shū)，其引用程度就如同說(shuō)明每一份單個(gè)公開(kāi)物或?qū)＠暾?qǐng)?zhí)貏e且單獨(dú)地通過(guò)引證的方式納入本說(shuō)明書(shū)一樣。

以下描述包括有助于理解本發(fā)明的信息。但這并不是承認(rèn)本文提供的任何信息都是現(xiàn)有技術(shù)或者與本發(fā)明有關(guān)，或者明確或隱含地參考的任何出版物都是現(xiàn)有技術(shù)。

產(chǎn)品(epa登記號(hào)69592-12)含有枯草芽孢桿菌的唯一菌株(菌株qst713)和許多不同的脂肽，它們發(fā)揮協(xié)同作用以破壞病害病原體并提供優(yōu)異的抗微生物活性。產(chǎn)品被用于保護(hù)植物，例如蔬菜、水果、堅(jiān)果和蔓生作物以抵抗病害，例如火疫病、灰霉病、酸腐病、銹病、菌核病、白粉病、細(xì)菌性斑點(diǎn)病、白霉病。產(chǎn)品以可通過(guò)葉面處理和/或土壤處理而施用的液體制劑和/或干制劑的形式獲得。產(chǎn)品的epa主標(biāo)簽的副本(包括aso、max、optimum(或opti)和serenade)可通過(guò)國(guó)家農(nóng)藥信息檢索系統(tǒng)usepa/opp農(nóng)藥產(chǎn)品標(biāo)簽系統(tǒng)(ppls)而公開(kāi)地獲得。

aso(水性懸浮液-有機(jī))含有1.34％的干的qst713作為活性成分和98.66％的其他成分。aso被配制成含有最少1×10⁹cfu/g的qst713，且qst713的最大量被確定為3.3×10¹⁰cfu/g。aso的替代商品名包括serenadeserenade和gardendisease。對(duì)于其他信息，參見(jiàn)于2010年1月4日的aso的u.s.epa主標(biāo)簽和serenade其各自在此以引證的方式全部納入本發(fā)明書(shū)中。

max含有14.6％的干的qst713作為活性成分和85.4％的其他成分。max被配制成含有最少7.3×10⁹cfu/g的qst713，而qst713的最大量被確定為7.9×10¹⁰cfu/g。對(duì)于其他信息，參見(jiàn)max的u.s.epa主標(biāo)簽，其全部?jī)?nèi)容在此以引用的方式納入本說(shuō)明書(shū)中。

optimum(或opti)含有26.2％的干的qst713作為活性成分和73.8％的其他成分。optimum(或opti)被配制成含有最少1.31×10¹⁰cfu/g的qst713。對(duì)于其他信息，參見(jiàn)optimum(或opti)的u.s.epa主標(biāo)簽，其全部?jī)?nèi)容在此以引用的方式納入本說(shuō)明書(shū)中。

短小芽孢桿菌qst2808的合適制劑可以以商品名(epa登記號(hào)264-1153)購(gòu)得，其含有1.38％的干的qst2808，并且其被配制成含有最少1×10⁹cfu/g的qst2808。短小芽孢桿菌qst2808的另一合適的制劑可以以商品名plus(epa登記號(hào)69592-13)購(gòu)得，其含有1.38％的干的qst2808，并且被配制成含有最少1×10¹⁰cfu/g的qst2808。

nrrl是美國(guó)農(nóng)業(yè)研究培養(yǎng)物保藏中心(agriculturalresearchserviceculturecollection)的簡(jiǎn)稱(chēng)，是一個(gè)在《國(guó)際承認(rèn)用于專(zhuān)利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯公約》之下的用于保藏微生物菌種的國(guó)際保藏單位，其地址是：美國(guó)伊利諾伊州peroira市北部大學(xué)街1815號(hào)，美國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)研究服務(wù)局農(nóng)業(yè)應(yīng)用研究國(guó)家中心，郵編61604。

短小芽孢桿菌qst713、其突變體、其上清液和其脂肽代謝物，以及它們用于防治植物病原體和昆蟲(chóng)的方法詳細(xì)地記載于美國(guó)專(zhuān)利第6,060,051、6,103,228、6,291,426、6,417,163和6,638,910號(hào)中，在此以引證的方式將它們各自所教導(dǎo)的一切具體且完整地納入本說(shuō)明書(shū)中。在這些美國(guó)專(zhuān)利中，菌株是指aq713，其與qst713同義?？莶菅挎邨U菌qst713根據(jù)《國(guó)際承認(rèn)用于專(zhuān)利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯公約》的規(guī)定于1997年5月7日保藏于nrrl，登記號(hào)b-21661。在該說(shuō)明書(shū)中，任何對(duì)qst713的提及均是指產(chǎn)品中存在的枯草芽孢桿菌qst713(akaaq713)，其保藏在nrrl登記號(hào)b-21661下，或在刺激產(chǎn)生產(chǎn)品的條件下在生物反應(yīng)器或搖瓶中制備。

在1998年提交美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第09/074,870號(hào)(其對(duì)應(yīng)于上述專(zhuān)利)時(shí)，基于經(jīng)典的生理學(xué)、生化和形態(tài)學(xué)方法將qst713菌株稱(chēng)為枯草芽孢桿菌。特別是鑒于遺傳學(xué)和測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步，芽孢桿菌屬種的分類(lèi)學(xué)從那時(shí)起已經(jīng)逐步地發(fā)展，因此物種命名主要基于dna序列而不是1998年使用的方法。在對(duì)解淀粉芽孢桿菌(b.amyloliquefaciens)fzb42，枯草芽孢桿菌168和qst713蛋白質(zhì)序列進(jìn)行比對(duì)后，在解淀粉芽孢桿菌fzb42中發(fā)現(xiàn)的約95％的蛋白質(zhì)與qst713中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)具有85％或更高的同一性。然而，即使通過(guò)更加可靠的遺傳學(xué)，在相關(guān)科學(xué)文獻(xiàn)和法規(guī)文件中仍然存在模糊的分類(lèi)，這反映了過(guò)去15年來(lái)對(duì)芽孢桿菌屬分類(lèi)學(xué)的不斷變化的認(rèn)識(shí)。例如，基于枯草芽孢桿菌株fzb24(其與qst713以及fzb42的親緣關(guān)系密切)的農(nóng)藥產(chǎn)品在環(huán)境保護(hù)機(jī)構(gòu)的文檔中的分類(lèi)為枯草芽孢桿菌解淀粉芽孢桿菌變種(b.subtilisvar.amyloliquefaciens)。由于命名的這些復(fù)雜性，這種特定的芽孢桿菌屬種被不同地定名——取決于文件——枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌解淀粉芽孢桿菌變種。因此，我們保留了qst713的枯草芽孢桿菌的定名，而不是將其改變?yōu)榻獾矸垩挎邨U菌，如目前僅基于序列比較以及所推斷的分類(lèi)學(xué)而預(yù)期的。由于各國(guó)的監(jiān)管部門(mén)可能需要根據(jù)任何一種可能的分類(lèi)學(xué)的分類(lèi)進(jìn)行注冊(cè)，為了本專(zhuān)利申請(qǐng)的目的，應(yīng)理解作為枯草芽孢桿菌qst713而保藏的菌株和被指定為nrrl保藏號(hào)b-21661的菌株等同于解淀粉芽孢桿菌qst713。

如在國(guó)際專(zhuān)利公開(kāi)第wo2012/087980號(hào)(在此以引證的方式將其全部?jī)?nèi)容納入本說(shuō)明書(shū)中)中所詳細(xì)說(shuō)明的，枯草芽孢桿菌qst713的培養(yǎng)物實(shí)際上是野生型細(xì)胞和相對(duì)較小百分比的變異細(xì)胞類(lèi)型的混合物，根據(jù)它們的菌落的形態(tài)，將其稱(chēng)為“砂紙細(xì)胞”。

枯草芽孢桿菌菌株aq30002(akaqst30002)或aq30004(akaqst30004)，其以登記號(hào)nrrlb-50421和nrrlb-50455保藏，記載于國(guó)際專(zhuān)利出版物第wo2012/087980號(hào)中；或者這些具有枯草芽孢桿菌菌株aq30002(akaqst30002)或aq30004(akaqst30004)所有生理和形態(tài)特征的枯草芽孢桿菌菌株的突變體也可用于本發(fā)明的方法中，可單獨(dú)使用或以與枯草芽孢桿菌qst713混合物的形式使用。

短小芽孢桿菌qst2808、其突變體、上清液和用于防治植物病原體和昆蟲(chóng)的方法詳細(xì)地記載于美國(guó)專(zhuān)利第6,245,551和6,586,231號(hào)中；在此以引證的方式將它們各自所教導(dǎo)的一切具體且完整地納入本說(shuō)明書(shū)中。在這些美國(guó)專(zhuān)利中，菌株是指nrrlno.b-30087，其與qst2808同義。短小芽孢桿菌qst2808根據(jù)《國(guó)際承認(rèn)用于專(zhuān)利程序的微生物保藏布達(dá)佩斯公約》的規(guī)定于1999年1月14日保藏于nrrl，登記號(hào)b-30087。在本說(shuō)明書(shū)中，任何關(guān)于qst2808的提及均是指短小芽孢桿菌qst2808。

在一些實(shí)施方案中，所述枯草芽孢桿菌菌株為枯草芽孢桿菌aq30002或枯草芽孢桿菌aq30004。在其他實(shí)施方案中，所述枯草芽孢桿菌菌株為枯草芽孢桿菌3610。

術(shù)語(yǔ)“突變體”是指衍生自qst713或qst2808的遺傳變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述突變體具有qst713或qst2808的所有鑒定特征。在一個(gè)特定的實(shí)例中，所述突變體至少與親本qst713或qst2808菌株同樣防治植物病原體(例如長(zhǎng)喙殼屬種)。在另一實(shí)施方案中，突變體為基因組序列與qst713或qst2808菌株具有大于約85％、大于約90％、大于約95％、大于約98％、更大于約99％的序列同一性的遺傳變體。突變體可通過(guò)以下方式獲得：使用化學(xué)品或輻射處理qst713或qst2808細(xì)胞或通過(guò)選擇來(lái)自qst713或qst2808細(xì)胞種群的自發(fā)突變體(例如抗噬菌體突變體)或通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的其他方式。

本發(fā)明的組合物可通過(guò)根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法培養(yǎng)枯草芽孢桿菌qst713或其突變體而獲得，包括使用美國(guó)專(zhuān)利第6,060,051號(hào)中記載的培養(yǎng)基和其他方法。在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可通過(guò)根據(jù)本領(lǐng)域熟知的方法培養(yǎng)短小芽孢桿菌，且特別是短小芽孢桿菌菌株qst2808而獲得，其包括使用美國(guó)專(zhuān)利第6,245,551號(hào)中記載的培養(yǎng)基和其他方法。常規(guī)的大規(guī)模微生物培養(yǎng)方法包括深層發(fā)酵、固態(tài)發(fā)酵或液體表面發(fā)酵。在發(fā)酵結(jié)束時(shí)，由于營(yíng)養(yǎng)物耗盡，枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌細(xì)胞開(kāi)始從生長(zhǎng)階段轉(zhuǎn)變?yōu)殒咦有纬呻A段，使得發(fā)酵的最終產(chǎn)物主要為孢子、代謝物和殘余發(fā)酵培養(yǎng)基。孢子形成是枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的自然生命周期的一部分且通常由細(xì)胞響應(yīng)營(yíng)養(yǎng)限制而引發(fā)。設(shè)置發(fā)酵條件以獲得高水平的枯草芽孢桿菌和短小芽孢桿菌的菌群形成單位，并促進(jìn)孢子形成。由發(fā)酵產(chǎn)生的于培養(yǎng)基中的細(xì)菌細(xì)胞、孢子和代謝物可以直接使用或通過(guò)常規(guī)工業(yè)方法(例如離心、切向流過(guò)濾、濾床過(guò)濾和蒸發(fā))濃縮。發(fā)酵培養(yǎng)液和培養(yǎng)液濃縮物在本文中均是指“發(fā)酵產(chǎn)物”。本發(fā)明的組合物包括發(fā)酵產(chǎn)物。在一些實(shí)施方案中，經(jīng)濃縮的發(fā)酵培養(yǎng)液例如通過(guò)滲濾方法洗滌以除去殘余的發(fā)酵培養(yǎng)液和代謝物。

使用常規(guī)干燥過(guò)程或方法(如噴霧干燥、冷凍干燥、盤(pán)式干燥、流化床干燥、轉(zhuǎn)鼓式干燥或蒸發(fā))、添加或不添加載體來(lái)干燥發(fā)酵培養(yǎng)液或培養(yǎng)液濃縮物。

所得干燥產(chǎn)物可例如通過(guò)研磨或造粒進(jìn)一步處理以實(shí)現(xiàn)特定粒度或物理形式。下文描述的載體也可在干燥后加入。

本發(fā)明的芽孢桿菌的新變體和菌株的發(fā)酵液的無(wú)細(xì)胞制劑可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法獲得，例如發(fā)酵培養(yǎng)液的萃取、離心和/或過(guò)濾。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，所謂的無(wú)細(xì)胞制劑不可能沒(méi)有細(xì)胞，而是在很大程度上是無(wú)細(xì)胞的或基本上無(wú)細(xì)胞，這取決于去除細(xì)胞所使用的技術(shù)(例如，離心速度)。所得無(wú)細(xì)胞制劑可以進(jìn)行干燥和/或采用有助于其施用于植物或植物生長(zhǎng)培養(yǎng)基的組分進(jìn)行配制。上述用于發(fā)酵培養(yǎng)液的濃縮方法和干燥技術(shù)也適用于無(wú)細(xì)胞制劑。

枯草芽孢桿菌的代謝物可通過(guò)美國(guó)專(zhuān)利第6,060,051號(hào)中所述的方法獲得。短小芽孢桿菌(包括短小芽孢桿菌菌株qst2808)的代謝物可通過(guò)美國(guó)專(zhuān)利第6,245,551號(hào)中所述的方法獲得。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)“代謝物”可以是指半純的和純的或基本上純的代謝物或是指尚未與枯草芽孢桿菌和/或短小芽孢桿菌分離的代謝物。在一些實(shí)施方案中，在通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)液的離心而制備無(wú)細(xì)胞制劑后，代謝物可通過(guò)尺寸排阻過(guò)濾進(jìn)行純化，所述尺寸排阻過(guò)濾為例如sephadex樹(shù)脂，包括lh-20、g10、g15和g25，由于脂肽的分子量在800道爾頓與1600道爾頓之間，所述sephadex樹(shù)脂基于截留分子量將代謝物分成不同流分，例如分子量小于約2000道爾頓、小于約1500道爾頓、小于約1000道爾頓等的流分。

上述用于發(fā)酵培養(yǎng)液的制劑的濃縮方法和干燥技術(shù)也適用于代謝物。

本發(fā)明的組合物可包括加入到包含細(xì)胞、無(wú)細(xì)胞制劑或代謝物的組合物中的制劑惰性物，以改善功效、穩(wěn)定性和可用性和/或有利于加工、包裝和最終應(yīng)用。這種制劑惰性物和成分可包括載體、穩(wěn)定劑、營(yíng)養(yǎng)物或物理性能改進(jìn)劑，其可單獨(dú)或組合地添加。在一些實(shí)施方案中，所述載體可包括液體材料，例如水、油和其他有機(jī)或無(wú)機(jī)溶劑；以及固體材料，例如礦物質(zhì)、聚合物、生物學(xué)上衍生的或通過(guò)化學(xué)合成衍生的聚合物復(fù)合物。在一些實(shí)施方案中，所述載體為促進(jìn)組合物粘附于植物部位(例如種子或根)的粘合劑(binder)或粘結(jié)劑(adhensive)。參見(jiàn)，例如taylor，a.g.，etal.，“conceptsandtechnologiesofselectedseedtreatments”，annu.rev.phytopathol.28：321-339(1990)。所述穩(wěn)定劑可包括防結(jié)塊劑、抗氧化劑、干燥劑、保護(hù)劑或防腐劑。所述營(yíng)養(yǎng)物可包括碳源、氮源和磷源，例如糖、多糖、油、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪酸和磷酸鹽。所述物理性能改進(jìn)劑可包括填充劑、潤(rùn)濕劑、增稠劑、ph調(diào)節(jié)劑、流變改性劑、分散劑、佐劑、表面活性劑、防凍劑或著色劑。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)發(fā)酵而制備的包含細(xì)胞、無(wú)細(xì)胞制劑或代謝物的組合物中可加入或不加入作為稀釋劑的水而直接使用，而無(wú)需制備成任何其它制劑。在一些實(shí)施方案中，所述制劑惰性物在濃縮發(fā)酵培養(yǎng)液之后且在干燥過(guò)程中和/或之后加入。

本發(fā)明的組合物可包括載體，所述載體為加入到包含含脂肽的發(fā)酵產(chǎn)物、脂肽的無(wú)細(xì)胞制劑或脂肽的純化的、半純化的或粗的提取物的組合物中的惰性制劑成分，以改進(jìn)回收、功效或物理性能和/或有助于包裝和管理。這樣的載體可以單獨(dú)或組合地添加。

在本文中以其“通用名”所示的活性成分是已知的且記載于例如農(nóng)藥手冊(cè)(“thepesticidemanual”，14thed.，britishcropprotectioncouncil2006)中或可在互聯(lián)網(wǎng)中搜索(如http://www.alanwood.net/pesticides)。

本發(fā)明用于防治長(zhǎng)喙殼屬種(如，奇異長(zhǎng)喙殼菌，鳳梨病的致病菌)的組合物可與其他化學(xué)品和非化學(xué)添加劑、佐劑和/或處理混合使用和/或依序使用，其中這種處理包括但不限于化學(xué)和非化學(xué)的殺真菌劑、殺蟲(chóng)劑、殺螨劑、殺線蟲(chóng)劑、肥料、營(yíng)養(yǎng)物、礦物質(zhì)、植物生長(zhǎng)素、生長(zhǎng)刺激劑等。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)本發(fā)明的組合物與其他化學(xué)品和非化學(xué)添加劑、佐劑和/或處理混合或依序使用時(shí)，在防治長(zhǎng)喙殼屬種中產(chǎn)生協(xié)同或超加和效果。

在一個(gè)實(shí)施方案中，將枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和/或其產(chǎn)生的代謝物與殺蟲(chóng)劑混合和/或依序使用。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，優(yōu)選的殺蟲(chóng)劑選自：

(1)乙酰膽堿酯酶(ache)抑制劑，例如

氨基甲酸酯類(lèi)，例如，棉鈴?fù)?alanycarb)(i1)、涕滅威(aldicarb)(i2)、噁蟲(chóng)威(bendiocarb)(i3)、丙硫克百威(benfuracarb)(i4)、丁酮威(butocarboxim)(i5)、丁酮砜威(butoxycarboxim)(i6)、甲萘威(carbaryl)(i7)、克百威(carbofuran)(i8)、丁硫克百威(carbosulfan)(i9)、乙硫苯威(ethiofencarb)(i10)、仲丁威(fenobucarb)(i11)、伐蟲(chóng)脒(formetanate)(i12)、呋線威(furathiocarb)(i13)、異丙威(isoprocarb)(i14)、甲硫威(methiocarb)(i15)、滅多威(methomyl)(i16)、速滅威(metolcarb)(i17)、殺線威(oxamyl)(i18)、抗蚜威(pirimicarb)(i9)、殘殺威(propoxur)(i20)、硫雙威(thiodicarb)(i21)、久效威(thiofanox)(i22)、唑蚜威(triazamate)(i23)、混殺威(trimethacarb)(i24)、xmc(i25)和滅殺威(xylylcarb)(i26)；或

有機(jī)磷酸酯類(lèi)，例如，乙酰甲胺磷(acephate)(i27)、甲基吡惡磷(azamethiphos)(i28)、益棉磷(azinphos-ethyl)(i29)、保棉磷(azinphos-methyl)(i30)、硫線磷(cadusafos)(i31)、氯氧磷(chlorethoxyfos)(i32)、毒蟲(chóng)畏(chlorfenvinphos)(i33)、氯甲硫磷(chlormephos)(i34)、毒死蜱(chlorpyrifos)(i35)、甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)(i36)、蠅毒磷(coumaphos)(i37)、殺螟腈(cyanophos)(i38)、甲基內(nèi)吸磷(demeton-s-methyl)(i39)、二嗪磷(diazinon)(i40)、敵敵畏/ddvp(dichlorvos/ddvp)(i41)、百治磷(dicrotophos)(i42)、樂(lè)果(dimethoate)(i43)、甲基毒蟲(chóng)畏(dimethylvinphos)(i44)、乙拌磷(disulphoton)(i45)、苯硫磷(epn)(i46)、乙硫磷(ethion)(i47)、滅線磷(ethoprophos)(i48)、伐滅磷(famphur)(i49)、苯線磷(fenamiphos)(i50)、殺螟硫磷(fenitrothion)(i51)、倍硫磷(fenthion)(i52)、噻唑磷(fosthiazate)(i53)、庚烯磷(heptenophos)(i54)、imicyafos(i55)、異柳磷(isofenphos)(i56)、o-(甲氧基氨基硫代磷?；?水楊酸異丙酯(isopropylo-(methoxyaminothio-phosphoryl)salicylate)(i57)、異噁唑磷(isoxathion)(i58)、馬拉硫磷(malathion)(i59)、滅蚜磷(mecarbam)(i60)、甲胺磷(methamidophos)(i61)、殺撲磷(methidathion)(i62)、速滅磷(mevinphos)(i63)、久效磷(monocrotophos)(i64)、二溴磷(naled)(i65)、氧樂(lè)果(omethoate)(i66)、亞砜磷(oxydemeton-methyl)(i67)、對(duì)硫磷(parathion)(i68)、甲基對(duì)硫磷(parathion-methyl)(i69)、稻豐散(phenthoate)(i70)、甲拌磷(phorate)(i71)、伏殺硫磷(phosalone)(i72)、亞胺硫磷(phosmet)(i73)、磷胺(phosphamidon)(i74)、辛硫磷(phoxim)(i75)、甲基嘧啶磷(pirimiphos-methyl)(i76)、丙溴磷(profenofos)(i77)、胺丙畏(propetamphos)(i78)、丙硫磷(prothiofos)(i79)、吡唑硫磷(pyraclofos)(i80)、噠嗪硫磷(pyridaphenthion)(i81)、喹硫磷(quinalphos)(i82)、治螟磷(sulfotep)(i83)、丁基嘧啶磷(tebupirimfos)(i84)、雙硫磷(temephos)(i85)、特丁硫磷(terbufos)(i86)、殺蟲(chóng)畏(tetrachlorvinphos)(i87)、甲基乙拌磷(thiometon)(i88)、三唑磷(triazophos)(i89)、敵百蟲(chóng)(triclorfon)(i90)和蚜滅磷(vamidothion)(i91)；

(2)gaba門(mén)控氯離子通道拮抗劑類(lèi)，例如

環(huán)戊二烯有機(jī)氯類(lèi)，例如，氯丹(chlordane)(i92)和硫丹(endosulfan)(i93)；或

苯基吡唑類(lèi)(fiproles)，例如，乙蟲(chóng)腈(ethiprole)(i94)、氟蟲(chóng)腈(fipronil)(i95)；

(3)鈉通道調(diào)節(jié)劑/電壓依賴(lài)性鈉通道阻斷劑，例如擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)，例如，氟丙菊酯(acrinathrin)(i96)、烯丙菊酯(allethrin)(i97)、(d-順-反)烯丙菊酯(d-cis-transallethrin)(i98)、(d-反)烯丙菊酯(d-transallethrin)(i99)、氟氯菊酯(bifenthrin)(i100)、生物烯丙菊酯(bioallethrin)(i101)、生物烯丙菊酯-s-環(huán)戊烯基異構(gòu)體(bioallethrins-cyclopentenylisomer)(i102)、生物芐呋菊酯(bioresmethrin)(i103)、乙氰菊酯(cycloprothrin)(i104)、氟氯氰菊酯(cyfluthrin)(i105)、β-氟氯氰菊酯(beta-cyfluthrin)(i106)、氯氟氰菊酯(cyhalothrin)(i107)、λ-氯氟氰菊酯(iambda-cyhalothrin)(i108)、γ-氯氟氰菊酯(gamma-cyhalothrin)(i109)、氯氰菊酯(cypermethrin)(i110)、α-氯氰菊酯(alpha-cypermethrin)(i111)、β-氯氰菊酯(beta-cypermethrin)(i112)、θ-氯氰菊酯(theta-cypermethrin)(i113)、ζ-氯氰菊酯(zeta-cypermethrin)(i114)、苯醚氯菊酯(1r-反式異構(gòu)體)(cyphenothrin[(1r)-transisomers])(i115)、溴氰菊酯(deltamethrin)(i116)、烯炔菊酯((ez)-(1r)異構(gòu)體)(empenthrin[(ez)-(1r)isomers))(i117)、高氰戊菊酯(esfenvalerate)(i118)、醚菊酯(etofenprox)(i119)、甲氰菊酯(fenpropathrin)(i120)、氰戊菊酯(fenvalerate)(i121)、氟氰戊菊酯(flucythrinate)(i122)、氟氯苯菊酯(flumethrin)(i123)、τ-氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)(i124)、芐螨醚(halfenprox)(i125)、炔咪菊酯(imiprothrin)(i126)、噻恩菊酯(kadethrin)(i127)、氯菊酯(permethrin)(i128)、苯醚菊酯((1r)-反式異構(gòu)體)(phenothrin[(1r)-transisomer))(i129)、右旋炔丙菊酯(prallethrin)(i130)、除蟲(chóng)菊素(除蟲(chóng)菊)(pyrethrine(pyrethrum))(i131)、芐呋菊酯(resmethrin)(i132)、氟硅菊酯(silafluofen)(i133)、七氟菊酯(tefluthrin)(i134)、胺菊酯(tetramethrin)(i135)、胺菊酯(1r異構(gòu)體)(tetramethrin[(1r)isomers)])(i136)、四溴菊酯(tralomethrin)(i137)、四氟菊酯(transfluthrin)(i138)；或ddt(i139)；或甲氧滴滴涕(methoxychlor)(i140)；

(4)煙堿乙酰膽堿受體(nachr)激動(dòng)劑類(lèi)，例如新煙堿，例如，啶蟲(chóng)脒(acetamiprid)(i141)、噻蟲(chóng)胺(clothianidin)(i142)、呋蟲(chóng)胺(dinotefuran)(i143)、吡蟲(chóng)啉(imidacloprid)(i144)、烯啶蟲(chóng)胺(nitenpyram)(i145)、噻蟲(chóng)啉(thiacloprid)(i146)、噻蟲(chóng)嗪(thiamethoxam)(i147)；或煙堿(nicotine)(i148)；或砜蟲(chóng)啶(sulfoxaflor)(i149)；

(5)煙堿乙酰膽堿受體(nachr)變構(gòu)激活劑，例如多殺霉素類(lèi)(spinosyns)，例如乙基多殺霉素(spinetoram)(i150)和多殺菌素(spinosad)(i151)；

(6)氯離子通道激活劑類(lèi)，例如阿維菌素類(lèi)(avermectins)/米爾貝霉素類(lèi)(milbemycins)，例如，阿維菌素(abamectin)(i152)、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(emamectinbenzoate)(i153)、雷皮菌素(lepimectin)(i154)彌拜菌素(milbemectin)(i155)；

(7)保幼激素模擬物，例如保幼激素類(lèi)似物類(lèi)，例如，烯蟲(chóng)乙酯(hydroprene)(i156)、烯蟲(chóng)炔酯(kinoprene)(i157)、烯蟲(chóng)酯(methoprene)(i158)；或苯氧威(fenoxycarb)(i159)；吡丙醚(pyriproxifen)(i160)；

(8)其他非特異性(多位點(diǎn))抑制劑，例如烷基鹵化物類(lèi)，例如，溴甲烷(methylbromide)(i161)和其他烷基鹵化物；或氯化苦(chloropicrin)(i162)；或硫酰氟(sulfurylfluoride)(i163)；或硼砂(borax)(i164)；或吐酒石(tartaremetic)(i165)；

(9)選擇性同翅目昆蟲(chóng)進(jìn)食阻斷劑類(lèi)，例如，吡蚜酮(pymetrozine)(i166)；或氟啶蟲(chóng)酰胺(flonicamid)(i167)；

(10)螨生長(zhǎng)抑制劑類(lèi)，例如，四螨嗪(clofentezine)(i168)、噻螨酮(hexythiazox)(i169)、氟螨嗪(diflovidazin)(i170)、乙螨唑(etoxazole)(i171)；

(11)昆蟲(chóng)腸膜的微生物干擾劑，例如蘇云金芽孢桿菌以色列亞種(bacillusthuringiensissubspeciesisraelensis)(i172)、蘇云金芽胞桿菌鲇澤亞種(bacillusthuringiensissubspeciesaizawai)(i173)、蘇云金芽孢桿菌庫(kù)爾斯塔克亞種(i174)、蘇云金芽孢桿菌擬步行甲亞種(bacillusthuringiensissubspeciestenebrionis)(i175)，以及b.t.作物蛋白：cry1ab、cry1ac、cry1fa、cry1a.105、cry2ab、vip3a、mcry3a、cry3ab、cry3bb、cry34ab1/35ab1(i176)；或球形芽孢桿菌(bacillussphaericus)(i177)；

(12)線粒體atp合成酶抑制劑，例如丁醚脲(diafenthiuron)(i178)；或有機(jī)錫殺螨劑類(lèi)，例如三唑錫(azocyclotin)(i179)、三環(huán)錫(cyhexatin)(i180)、苯丁錫(fenbutatinoxide)(i181)；或炔螨特(propargite)(i182)；或三氯殺螨砜(tetradifon)(i183)；

(13)通過(guò)破壞質(zhì)子梯度而起作用的氧化磷酸化解偶聯(lián)劑類(lèi)，例如蟲(chóng)螨腈(chlorfenapyr)(i184)、二硝甲酚(dnoc)(i185)、氟蟲(chóng)胺(sulfluramid)(i186)；

(14)煙堿乙酰膽堿受體(nachr)通道阻斷劑類(lèi)，例如殺蟲(chóng)磺(bensultap)(i187)、殺螟丹鹽酸鹽(cartaphydrochloride)(i188)、殺蟲(chóng)環(huán)(thiocylam)(i189)和殺蟲(chóng)雙(thiosultap-sodium)(i190)；

(15)0型幾丁質(zhì)生物合成抑制劑類(lèi)例如，雙三氟蟲(chóng)脲(bistrifluron)(i191)、定蟲(chóng)隆(chlofluazuron)(i192)、氟脲殺(diflubenzuron)(i193)、氟螨脲(flucycloxuron)(i194)、氟蟲(chóng)脲(flufenoxuron)(i195)、氟鈴脲(hexaflumuron)(i196)、氟丙氧脲(lufenuron)(i197)、雙苯氟脲(novaluron)(i198)、多氟脲(noviflumuron)(i199)、伏蟲(chóng)磷(teflubenzuron)(i200)和殺蟲(chóng)隆(triflumuron)(i201)；

(16)1型幾丁質(zhì)生物合成抑制劑類(lèi)，例如噻嗪酮(buprofezin)(i202)；

(17)脫皮干擾劑類(lèi)，例如滅蠅胺(cyromazine)(i203)；

(18)蛻皮激素受體激動(dòng)劑類(lèi)，例如環(huán)蟲(chóng)酰肼(chromafenozide)(i204)、氯蟲(chóng)酰肼(halofenozide)(i205)、甲氧蟲(chóng)酰肼(methoxyfenozide)(i206)和蟲(chóng)酰肼(tebufenozide)(i207)；

(19)章魚(yú)胺受體激動(dòng)劑類(lèi)，例如雙甲脒(amitraz)(i208)；

(20)線粒體復(fù)合體iii電子轉(zhuǎn)移抑制劑類(lèi)，例如滅蟻腙(hydramethylnone)(i209)；或滅螨醌(acequinocyl)(i210)；或嘧螨酯(fluacrypyrim)(i211)；

(21)線粒體復(fù)合體i電子轉(zhuǎn)移抑制劑類(lèi)，例如

meti殺螨劑類(lèi)，例如喹螨醚(fenazaquin)(i212)、唑螨酯(fenpyroximate)(i213)、嘧螨醚(pyrimidifen)(i214)、噠螨靈(pyridaben)(i215)、吡螨胺(tebufenpyrad)(i216)、唑蟲(chóng)酰胺(tolfenpyrad)(i217)；或魚(yú)藤酮(rotenone(derris))(i218)；

(22)電壓依賴(lài)性鈉離子通道阻斷劑，例如茚蟲(chóng)威(i219)；或氰氟蟲(chóng)胺(i220)；

(23)乙酰輔酶a羧化酶抑制劑類(lèi)，例如特窗酸和特特拉姆酸衍生物，例如螺螨酯(spirodiclofen)(i221)、螺甲螨酯(spiromesifen)(i222)和螺蟲(chóng)乙酯(spirotetramat)(i223)；

(24)線粒體復(fù)合體iv電子轉(zhuǎn)移抑制劑，例如膦類(lèi)，例如磷化鋁(aluminiumphosphide)(i224)、磷化鈣(calciumphosphide)(i225)、膦(phosphine)(i226)、磷化鋅(zincphosphide)(i227)；或氰化物(cyanide)(i228)；

(25)線粒體復(fù)合體ii電子轉(zhuǎn)移抑制劑類(lèi)，例如，β-開(kāi)托利(β-ketonitrile)衍生物，例如唑螨氰(cyenopyrafen)(i229)和丁氟螨酯(cyflumetofen)(i230)；

(26)蘭尼堿(ryanodine)受體調(diào)節(jié)劑類(lèi)，例如，二酰胺類(lèi)，例如氯蟲(chóng)酰胺(chlorantraniliprole)(i231)、溴氰蟲(chóng)酰胺(cyantraniliprole)(i232)、氟蟲(chóng)酰胺(flubendiamide)(i233)；

其他作用機(jī)理未知或不確定的活性化合物，例如磺胺螨酯(amidoflumet)(i234)、印楝素(azadirachtin)(i235)、benclothiaz(i236)、苯螨特(benzoximate)(i237)、聯(lián)苯肼酯(bifenazate)(i238)、溴螨酯(bromopropylate)(i239)、滅螨錳(chinomethionat)(i240)、冰晶石(cryolite)(i241)、三氯殺螨醇(dicofol)(i242)、氟螨嗪(diflovidazin)(i243)、5-氯-2-[(3，4，4-三氟丁-3-烯-1-基)磺?；鵠-1，3-噻唑(fluensulfone)(i244)、嘧蟲(chóng)胺(flufenerim)(i245)、丁烯氟蟲(chóng)腈(flufiprole)(i246)、氟吡菌酰胺(fluopyram)(i247)、呋喃蟲(chóng)酰肼(fufenozide)(i248)、氯噻啉(imidaclothiz)(i249)、異菌脲(iprodione)(i250)、氯氟醚菊酯(meperfluthrin)(i251)、啶蟲(chóng)丙醚(pyridalyl)(i252)、pyrifluquinazon(i253)、四氟醚菊酯(tetramethylfluthrin)(i254)、碘甲烷(iodomethane)(i255)；以及基于堅(jiān)硬芽孢桿菌(bacillusfirmus)(包括但不限于菌株cncmi-1582，例如，bionem，votivo^tm)(i256)的產(chǎn)品，或下列已知的活性化合物之一：3-溴-n-{2-溴-4-氯-6-[(1-環(huán)丙基乙基)氨基甲?；鵠苯基}-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-甲酰胺(i257)(已知于wo2005/077934)、4-{[(6-溴吡啶-3-基)甲基](2-氟乙基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i258)(已知于wo2007/115644)、4-{[(6-氟吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i259)(已知于wo2007/115644)、4-{[(2-氯-1，3-噻唑-5-基)甲基](2-氟乙基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i260)(已知于wo2007/115644)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2-氟乙基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i261)(已知于wo2007/115644)、flupyradifurone(i262)、4-{[(6-氯-5-氟吡啶-3-基)甲基](甲基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i263)(已知于wo2007/115643)、4-{[(5，6-二氯吡啶-3-基)甲基](2-氟乙基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i264)(已知于wo2007/115646)、4-{[(6-氯-5-氟吡啶-3-基)甲基](環(huán)丙基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i265)(已知于wo2007/115643)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](環(huán)丙基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i266)(已知于ep-a-0539588)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](甲基)氨基}呋喃-2(5h)-酮(i267)(已知于ep-a-0539588)、{[1-(6-氯吡啶-3-基)乙基](甲基)氧-λ4-亞硫烷基}氨腈(i268)(已知于wo2007/149134)及其非對(duì)映異構(gòu)體(a){[(1r)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基](甲基)氧-λ4-亞硫烷基}氨腈(i269)和(b){[(1s)-1-(6-氯吡啶-3-基)乙基](甲基)氧-λ4-亞硫烷基}氨腈(i270)(同樣已知于wo2007/149134)以及非對(duì)映異構(gòu)體(a1)[(r)-甲基(氧){(1r)-1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-λ4-亞硫烷基]氨腈(i271)和(a2)[(s)-甲基(氧){(1s)-1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-λ4-亞硫烷基]氨腈(i272)，被稱(chēng)為非對(duì)映異構(gòu)體組a(已知于wo2010/074747、wo2010/074751)，(b1)[(r)-甲基(氧){(1s)-1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-λ4-亞硫烷基]氨腈(i273)和(b2){(s)-甲基(氧){(1r)-1-[6-(三氟甲基)吡啶-3-基]乙基}-λ4-亞硫烷基]氨腈(i274)，被稱(chēng)為非對(duì)映異構(gòu)體組b(同樣已知于wo2010/074747、wo2010/074751)，和11-(4-氯-2，6-二甲基苯基)-12-羥基-1，4-二氧雜-9-氮雜二螺[4.2.4.2]十四-11-烯-10-酮(i275)(已知于wo2006/089633)、3-(4′-氟-2，4-二甲基聯(lián)苯-3-基)-4-羥基-8-氧雜-1-氮雜螺[4.5]癸-3-烯-2-酮(i276)(已知于wo2008/067911)、1-[2-氟-4-甲基-5-[(2，2，2-三氟乙基)亞磺?；鵠苯基]-3-(三氟甲基)-1h-1，2，4-三唑-5-胺(i277)(已知于wo2006/043635)、afidopyropen[(3s，4ar，12r，12as，12bs)-3-[(環(huán)丙基羰基)氧基]-6，12-二羥基-4，12b-二甲基-11-氧代-9-(吡啶-3-基)-1，3，4，4a，5，6，6a，12，12a，12b-十氫-2h，11h-苯基[f]吡喃[4，3-b]苯并吡喃-4-基]環(huán)丙基甲酸甲酯(i278)(已知于wo2008/066153)、2-氰基-3-(二氟甲氧基)-n，n-二甲基苯磺酰胺(i279)(已知于wo2006/056433)、2-氰基-3-(二氟甲氧基)-n-甲基苯磺酰胺(i280)(已知于wo2006/100288)、2-氰基-3-(二氟甲氧基)-n-乙基苯磺酰胺(i281)(已知于wo2005/035486)、4-(二氟甲氧基)-n-乙基-n-甲基-1，2-苯并噻唑-3-胺1，1-二氧化物(i282)(已知于wo2007/057407)、n-[1-(2，3-二甲基苯基)-2-(3，5-二甲基苯基)乙基]-4，5-二氫-1，3-噻唑-2-胺(i283)(已知于wo2008/104503)、{1′-[(2e)-3-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-基]-5-氟螺[吲哚-3，4′-哌啶]-1(2h)-基}(2-氯吡啶-4-基)甲酮(i284)(已知于wo2003/106457)、3-(2，5-二甲基苯基)-4-羥基-8-甲氧基-1，8-二氮雜螺[4.5]癸-3-烯-2-酮(i285)(已知于wo2009/049851)、3-(2，5-二甲基苯基)-8-甲氧基-2-氧代-1，8-二氮雜螺[4.5]癸-3-烯-4-基碳酸乙酯(i286)(已知于wo2009/049851)、4-(丁-2-炔-1-基氧基)-6-(3，5-二甲基哌啶-1-基)-5-氟嘧啶(i287)(已知于wo2004/099160)、(2，2，3，3，4，4，5，5-入氟戊基)(3，3，3-三氟丙基)丙二腈(i288)(已知于wo2005/063094)、(2，2，3，3，4，4，5，5-八氟戊基)(3，3，4，4，4-五氟丁基)丙二腈(i289)(已知于wo2005/063094)、8-[2-(環(huán)丙基甲氧基)-4-(三氟甲基)苯氧基]-3-[6-(三氟甲基)噠嗪-3-基]-3-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷(i290)(已知于wo2007/040280)、flometoquin(i291)、pf1364(cas注冊(cè)號(hào)1204776-60-2)(i292)(已知于jp2010/018586)、5-[5-(3，5-二氯苯基)-5-(三氟甲基)-4，5-二氫-1，2-噁唑-3-基]-2-(1h-1，2，4-三唑-1-基)苯甲腈(i293)(已知于wo2007/075459)、5-[5-(2-氟吡啶-4-基)-5-(三氟甲基)-4，5-二氫-1，2-噁唑-3-基]-2-(1h-1，2，4-三唑-1-基)苯甲腈(i294)(已知于wo2007/075459)、4-[5-(3，5-二氯苯基)-5-(三氟甲基)-4，5-二氫-1，2-噁唑-3-基]-2-甲基-n-{2-氧代-2-[(2，2，2-三氟乙基)氨基]乙基}苯甲酰胺(i295)(已知于wo2005/085216)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](環(huán)丙基)氨基}-1，3-噁唑-2(5h)-酮(i296)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](2，2-二氟乙基)氨基}-1，3-噁唑-2(5h)-酮(i297)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](乙基)氨基}-1，3-噁唑-2(5h)-酮(i298)、4-{[(6-氯吡啶-3-基)甲基](甲基)氨基}-1，3-噁唑-2(5h)-酮(i299)(全部已知于wo2010/005692)、pyflubumiden-[4-(1，1，1，3，3，3-六氟-2-甲氧基丙-2-基)-3-異丁基苯基]-n-異丁酰基-1，3，5-三甲基-1h-吡唑-4-甲酰胺(i300)(已知于wo2002/096882)、2-[2-({[3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-基]羰基}氨基)-5-氯-3-甲基苯甲酰基]-2-甲基肼甲酸甲酯(i301)(已知于wo2005/085216)、2-[2-({[3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-基]羰基}氨基)-5-氰基-3-甲基苯甲?；鵠-2-乙基肼甲酸甲酯(i302)(已知于wo2005/085216)、2-[2-({[3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-基]羰基}氨基)-5-氰基-3-甲基苯甲?；鵠-2-甲基肼甲酸甲酯(i303)(已知于wo2005/085216)、2-[3，5-二溴-2-({[3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-基]羰基}氨基)苯甲酰基]-1，2-二乙基肼甲酸甲酯(i304)(已知于wo2005/085216)、2-[3，5-二溴-2-({[3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-基]羰基}氨基)苯甲?；鵠-2-乙基肼甲酸甲酯(i305)(已知于wo2005/085216)、(5rs，7rs；5rs，7sr)-1-(6-氯-3-吡啶基甲基)-1，2，3，5，6，7-六氫-7-甲基-8-硝基-5-丙氧基咪唑并[1，2-a]吡啶(i306)(已知于wo2007/101369)、2-{6-[2-(5-氟吡啶-3-基)-1，3-噻唑-5-基]吡啶-2-基}嘧啶(i307)(已知于wo2010/006713)、2-{6-[2-(吡啶-3-基)-1，3-噻唑-5-基]吡啶-2-基}嘧啶(i308)(已知于wo2010/006713)、1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲?；?苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-1h-四唑-1-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺(i309)(已知于wo2010/069502)、1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲?；?苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-2h-四唑-2-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺(i310)(已知于wo2010/069502)、n-[2-(叔丁基氨基甲?；?-4-氰基-6-甲基苯基]-1-(3-氯吡啶-2-基)-3-{[5-(三氟甲基)-1h-四唑-1-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺(i311)(已知于wo2010/069502)、n-[2-(叔丁基氨基甲?；?-4-氰基-6-甲基苯基]-1-(3-氯吡啶-2-基)-3-{[5-(三氟甲基)-2h-四唑-2-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺(i312)(已知于wo2010/069502)、(1e)-n-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]-n′-氰基-n-(2，2-二氟乙基)乙脒(ethanimidamide)(i313)(已知于wo2008/009360)、n-[2-(5-氨基-1，3，4-噻二唑-2-基)-4-氯-6-甲基苯基]-3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-甲酰胺(i314)(已知于cn102057925)、2-[3，5-二溴-2-({[3-溴-1-(3-氯吡啶-2-基)-1h-吡唑-5-基]羰基}氨基)苯甲酰基]-2-乙基-1-甲基肼甲酸甲酯(i315)(已知于wo2011/049233)和(i316)包含三種萜烯α-萜品烯、對(duì)異丙基甲苯和檸檬烯，以及任選地少量萜烯成分的農(nóng)藥萜烯混合物，包括包含三種萜烯(即，α-萜品烯、對(duì)異丙基甲苯和檸檬烯)且作為銷(xiāo)售的仿天然農(nóng)藥。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述殺蟲(chóng)劑為合成殺蟲(chóng)劑。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“合成的”定義不是從生物防治劑獲得的化合物。具體而言，合成的殺蟲(chóng)劑或殺真菌劑不是本發(fā)明生物防治劑的代謝物。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，所述殺蟲(chóng)劑選自：阿維菌素(i152)、高滅磷(i27)、啶蟲(chóng)脒(i141)、氟丙菊酯(i96)、α-氯氰菊酯(i111)、β-氟氯氰菊酯(i106)、聯(lián)苯菊酯(i100)、噻嗪酮(i202)、噻蟲(chóng)胺(i142)、氯蟲(chóng)酰胺(i231)、蟲(chóng)螨腈(i184)、毒死蜱(i35)、克百威(i8)、溴氰蟲(chóng)酰胺(i232)、唑螨氰(i229)、丁氟螨酯(i230)、氟氯氰菊酯(i105)、氯氰菊酯(i110)、溴氰菊酯(i116)、丁醚脲(i178)、呋蟲(chóng)胺(i143)、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(i153)、乙蟲(chóng)腈(i94)、唑螨酯(i213)、氟蟲(chóng)腈(i95)、flometoquin(i291)、氟蟲(chóng)酰胺(i233)、5-氯-2-[(3，4，4-三氟丁-3-烯-1-基)磺?；鵠-1，3-噻唑(i244)、氟吡菌酰胺(i247)、flupyradifurone(i262)、γ-氯氟氰菊酯(i109)、吡蟲(chóng)啉(i144)、茚蟲(chóng)威(i219)、λ-氯氟氰菊酯(i108)、氟丙氧脲(i197)、氰氟蟲(chóng)胺(i220)、甲硫威(i15)、甲氧蟲(chóng)酰肼(i206)、彌拜菌素(i155)、丙溴磷(i77)、pyflubumide(i300)、pyrifluquinazone(i253)、乙基多殺霉素(i150)、多殺菌素(i151)、螺螨酯(i221)、螺甲螨酯(i222)、螺蟲(chóng)乙酯(i223)、砜蟲(chóng)啶(i149)、吡螨胺(i216)、七氟菊酯(i134)、噻蟲(chóng)啉(i146)、噻蟲(chóng)嗪(i147)、硫雙威(i21)、殺蟲(chóng)隆(i201)、1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲?；?苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-1h-四唑-1-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺(i309)(已知于wo2010/069502)、1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲酰基)苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-2h-四唑-2-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺(i310)(已知于wo2010/069502)和1-{2-氟-4-甲基-5-[(2，2，2-三氟乙基)亞磺?；鵠苯基}-3-(三氟甲基)-1h-1，2，4-三唑-5-胺(i277)、afidopyropen(i278)。

在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述殺蟲(chóng)劑選自阿維菌素(i152)、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌(i256)、克百威(i8)、噻蟲(chóng)胺(i142)、溴氰蟲(chóng)酰胺、環(huán)氧蟲(chóng)啶、氯氰菊酯(i110)、乙蟲(chóng)腈(i94)、氟蟲(chóng)腈(i95)、氟吡菌酰胺(i247)、吡蟲(chóng)啉(i144)、甲硫威(i15)、rynaxypyr、多殺菌素(i151)、砜蟲(chóng)啶(i149)、七氟菊酯(i134)、噻蟲(chóng)嗪(i147)、硫雙威(i21)。

在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，所述殺蟲(chóng)劑選自甲硫威(i15)、硫雙威(i21)、氟蟲(chóng)腈(i95)、β-氟氯氰菊酯(i105)、七氟菊酯(i134)、噻蟲(chóng)胺(i142)、吡蟲(chóng)啉(i144)、噻蟲(chóng)啉(i146)、砜蟲(chóng)啶(i149)、乙基多殺霉素(i150)、多殺菌素(i151)、氯蟲(chóng)酰胺(i231)、溴氰蟲(chóng)酰胺(i232)、氟蟲(chóng)酰胺(i233)、1-{2-氟-4-甲基-5-[(2，2，2-三氟乙基)亞磺?；鵠苯基}-3-(三氟甲基)-1h-1，2，4-三唑-5-胺(i277)、1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲?；?苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-2h-四唑-2-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺(i310)。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括施用以下結(jié)合物之一，其中枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和/或其產(chǎn)生的代謝物稱(chēng)為“b1”：

b1+i1、b1+i2、b1+i3、b1+i4、b1+i5、b1+i6、b1+i7、b1+i8、b1+i9、b1+b10、b1+i11、b1+i12、b1+i13、b1+i14、b1+i15、b1+i16、b1+i17、b1+i18、b1+i19、b1+i20、b1+i21、b1+i22、b1+i23、b1+i24、b1+i25、b1+i26、b1+i27、b1+i28、b1+i29、b1+i30、b1+i31、b1+i32、b1+i33、b1+i34、b1+i35、b1+i36、b1+i37、b1+i38、b1+i39、b1+i40、b1+i41、b1+i42、b1+i43、b1+i44、b1+i45、b1+i46、b1+i47、b1+i48、b1+i49、b1+i50、b1+i51、b1+i52、b1+i53、b1+i54、b1+i55、b1+i56、b1+i57、b1+i58、b1+i59、b1+i60、b1+i61、b1+i62、b1+i63、b1+i64、b1+i65、b1+i66、b1+i67、b1+i68、b1+i69、b1+i70、b1+i71、b1+i72、b1+i73、b1+i74、b1+i75、b1+i76、b1+i77、b1+i78、b1+i79、b1+i80、b1+i81、b1+i82、b1+i83、b1+i84、b1+i85、b1+i86、b1+i87、b1+i88、b1+i89、b1+i90、b1+i91、b1+i92、b1+i93、b1+i94、b1+i95、b1+i96、b1+i97、b1+i98、b1+i99、b1+i100、b1+i101、b1+i102、b1+i103、b1+i104、b1+i105、b1+i106、b1+i107、b1+i108、b1+i109、b1+i110、b1+i111、b1+i112、b1+i113、b1+i114、b1+i115、b1+i116、b1+i117、b1+i118、b1+i119、b1+i120、b1+i121、b1+i122、b1+i123、b1+i124、b1+i125、b1+i126、b1+i127、b1+i128、b1+i129、b1+i130、b1+i131、b1+i132、b1+i133、b1+i134、b1+i135、b1+i136、b1+i137、b1+i138、b1+i139、b1+i140、b1+i141、b1+i142、b1+i143、b1+i144、b1+i145、b1+i146、b1+i147、b1+i148、b1+i149、b1+i150、b1+i151、b1+i152、b1+i153、b1+i154、b1+i155、b1+i156、b1+i157、b1+i158、b1+i159、b1+i160、b1+i161、b1+i162、b1+i163、b1+i164、b1+i165、b1+i166、b1+i167、b1+i168、b1+i169、b1+i170、b1+i171、b1+i172、b1+i173、b1+i174、b1+i175、b1+i176、b1+i177、b1+i178、b1+i179、b1+i180、b1+i181、b1+i182、b1+i183、b1+i184、b1+i185、b1+i186、b1+i187、b1+i188、b1+i189、b1+i190、b1+i191、b1+i192、b1+i193、b1+i194、b1+i195、b1+i196、b1+i197、b1+i198、b1+i199、b1+i200、b1+i201、b1+i202、b1+i203、b1+i204、b1+i205、b1+i206、b1+i207、b1+i208、b1+i209、b1+i210、b1+i211、b1+i212、b1+i213、b1+i214、b1+i215，b1+i216、b1+i217、b1+i218、b1+i219、b1+i220、b1+i221、b1+i222、b1+i223、b1+i224、b1+i225、b1+i226、b1+i227、b1+i228、b1+i229、b1+i230、b1+i231、b1+i232、b1+i233、b1+i234、b1+i235、b1+i236、b1+i237、b1+i238、b1+i239、b1+i240、b1+i241、b1+i242、b1+i243、b1+i244、b1+i245、b1+i246、b1+i247、b1+i248、b1+i249、b1+i250、b1+i251、b1+i252、b1+i253、b1+i254、b1+i255、b1+i256、b1+i257、b1+i258、b1+i259、b1+i260、b1+i261、b1+i262、b1+i263、b1+i264、b1+i265、b1+i266、b1+i267、b1+i268、b1+i269、b1+i270、b1+i271、b1+i272、b1+i273、b1+i274、b1+i275、b1+i276、b1+i277、b1+i278、b1+i279、b1+i280、b1+i281、b1+i282、b1+i283、b1+i284、b1+i285、b1+i286、b1+i287、b1+i288、b1+i289、b1+i290、b1+i291、b1+i292、b1+i293、b1+i294、b1+i295、b1+i296、b1+i297、b1+i298、b1+i299、b1+i300、b1+i301、b1+i302、b1+i303、b1+i304、b1+i305、b1+i306、b1+i307、b1+i308、b1+i309、b1+i310、b1+i311、b1+i312、b1+i313、b1+i314、b1+i315、b1+i316；

優(yōu)選地，本發(fā)明的方法包括施用一種選自以下的結(jié)合物：

b1+i8、b1+i15、b1+i21、b1+i27、b1+i35、b1+i77、b1+i94、b1+i95、b1+i96、b1+i100、b1+i105、b1+i106、b1+i108、b1+i109、b1+i110、b1+i111、b1+i116、b1+i134、b1+i141、b1+i142、b1+i143、b1+i144、b1+i146、b1+i147、b1+i149、b1+i150、b1+i151、b1+i152、b1+i153、b1+i155、b1+i178、b1+i184、b1+i197、b1+i201、b1+i202、b1+i206、b1+i213、b1+i213、b1+i216、b1+i219、b1+i220、b1+i221、b1+i222、b1+i223、b1+i229、b1+i230、b1+i231、b1+i232、b1+i233、b1+i244、b1+i253、b1+i262、b1+i272、b1+i277、b1+i278、b1+i291、b1+i300、b1+i309、b1+i310。

在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括施用一種選自以下的結(jié)合物：

b1+i15、b1+i21、b1+i95、b1+i105、b1+i134、b1+i142、b1+i144、b1+i146、b1+i149、b1+i150、b1+i151、b1+i231、b1+i232、b1+i233、b1+i277、b1+i310。

在一個(gè)非常優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種方法，其包括施用協(xié)同有效量的枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和/或其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物以及至少一種選自以下的殺蟲(chóng)劑：阿維菌素、乙酰甲胺磷、啶蟲(chóng)脒、氟丙菊酯、α-氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、聯(lián)苯菊酯、噻嗪酮、噻蟲(chóng)胺、氯蟲(chóng)酰胺、蟲(chóng)螨腈、毒死蜱、克百威、溴氰蟲(chóng)酰胺、唑螨氰、丁氟螨酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、丁醚脲、呋蟲(chóng)胺、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、乙蟲(chóng)腈、唑螨酯、氟蟲(chóng)腈、flometoquin、氟蟲(chóng)酰胺、fluensulfone、氟吡菌酰胺、flupyradifurone、γ-氯氟氰菊酯、吡蟲(chóng)啉、茚蟲(chóng)威、λ-氯氟氰菊酯、氟丙氧脲、氰氟蟲(chóng)胺、甲硫威、甲氧蟲(chóng)酰肼、彌拜菌素、丙溴磷、pyflubumide、pyrifluquinazone、乙基多殺霉素、多殺菌素、螺螨酯、螺甲螨酯、螺蟲(chóng)乙酯、砜蟲(chóng)啶、吡螨胺、七氟菊酯、噻蟲(chóng)啉、噻蟲(chóng)嗪、硫雙威、殺蟲(chóng)隆、1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲?；?苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-1h-四唑-1-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺、1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲?；?苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-2h-四唑-2-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺、1-{2-氟-4-甲基-5-[(2，2，2-三氟乙基)亞磺?；鵠苯基}-3-(三氟甲基)-1h-1，2，4-三唑-5-胺和afidopyropen。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，優(yōu)選的殺蟲(chóng)劑選自：

啶蟲(chóng)脒、涕滅威、雙甲脒、β-氟氯氰菊酯、甲萘威、噻蟲(chóng)胺、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、硫丹、乙硫磷、乙蟲(chóng)腈、滅線磷、苯線磷、仲丁威、倍硫磷、氟蟲(chóng)腈、氟蟲(chóng)酰胺、氟吡菌酰胺、伐蟲(chóng)脒、庚烯磷、吡蟲(chóng)啉、甲胺磷、甲硫威、滅多威、氯硝柳胺、亞砜磷、伏殺硫磷、氟硅菊酯、螺螨酯、螺甲螨酯、螺蟲(chóng)乙酯、噻蟲(chóng)啉、硫雙威、四溴菊酯、三唑磷、殺蟲(chóng)隆、蚜滅磷、1-{2-氟-4-甲基-5-[(r)-(2，2，2-三氟乙基)亞磺?；鵠苯基}-3-(三氟甲基)-1h-1，2，4-三唑-5-胺和1-(3-氯吡啶-2-基)-n-[4-氰基-2-甲基-6-(甲基氨基甲?；?苯基]-3-{[5-(三氟甲基)-2h-四唑-2-基]甲基}-1h-吡唑-5-甲酰胺和包含三種萜烯α-萜品烯、對(duì)異丙基甲苯和檸檬烯以及任選地少量萜烯成分的農(nóng)藥萜烯混合物，包括作為銷(xiāo)售的包含三種萜烯(即，α-萜品烯、對(duì)異丙基甲苯和檸檬烯)的仿天然農(nóng)藥。

在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述殺蟲(chóng)劑為合成殺蟲(chóng)劑。如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“合成的”定義不是從生物防治劑獲得的化合物。特別地，合成的殺蟲(chóng)劑或殺真菌劑不是本發(fā)明生物防治劑的代謝產(chǎn)物。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，所述殺蟲(chóng)劑選自：毒死蜱、噻蟲(chóng)胺、氯氰菊酯、乙蟲(chóng)腈、氟蟲(chóng)腈、氟吡菌酰胺、吡蟲(chóng)啉、甲硫威和硫雙威。

將本發(fā)明的組合物和菌株施用于或處理植物繁殖材料、特別是種子的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括對(duì)繁殖材料進(jìn)行包衣、涂覆、造粒和浸泡施用的方法。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的施用方法部分用于保護(hù)植物繁殖材料免受害蟲(chóng)的侵害，根據(jù)本發(fā)明，所述植物繁殖材料為在種植或播種到種植或播種位點(diǎn)后能發(fā)育成完整植物的任何植物材料，例如幼苗、根莖、苗圃植物、插條或特別是種子，例如果實(shí)、塊莖、谷?；蝼[莖，所述施用方法的特征在于，例如，將合適的組合物以這樣的方式施用，即空間上緊密接近所述繁殖材料種植或播種于種植或播種位點(diǎn)的方式，或者空間上與所述繁殖材料種植或播種于種植或播種位點(diǎn)一起的方式。根據(jù)本發(fā)明，以空間上緊密接近所述繁殖材料種植或播種于種植或播種位點(diǎn)的方式施用這些組合物優(yōu)選發(fā)生在種植或播種繁殖材料之前，通過(guò)土壤施用直接將組合物施用于繁殖材料種植或播種位點(diǎn)而進(jìn)行，例如優(yōu)選發(fā)生在播種至播種溝或靠近種植或播種繁殖材料的位點(diǎn)周?chē)薅ǖ膮^(qū)域內(nèi)之前。在空間上可與繁殖材料種植或施用于種植或播種的位點(diǎn)一起進(jìn)行的這種組合物的施用應(yīng)理解為表示可根據(jù)預(yù)期目的和當(dāng)前環(huán)境將已采用這些組合物預(yù)處理的繁殖材料種植或播種在種植或播種的位點(diǎn)，對(duì)于所述繁殖材料的預(yù)處理例如通過(guò)將組合物噴灑、噴霧、撒粉或撒播在繁殖材料上或?qū)⒔M合物刷在或傾倒在繁殖材料上，或者在種子的情況下還特別地通過(guò)拌種而進(jìn)行。當(dāng)進(jìn)行拌種(即，干種、濕拌種、液體拌種或漿液拌種)時(shí)，在將種子于拌種設(shè)備中進(jìn)行播種之前，將枯草芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和/或其代謝物加入至種子并例如通過(guò)將拌種設(shè)備中的內(nèi)容物進(jìn)行攪拌和/或通過(guò)旋轉(zhuǎn)和/或振蕩整個(gè)拌種設(shè)備而使組合物均勻地分布于種子上。這種拌種處理的特別的實(shí)施方案包括，例如將種子浸沒(méi)在液體組合物中、采用固體組合物包被種子(種子包衣)或通過(guò)將組合物加入用于預(yù)浸泡種子的水中而實(shí)現(xiàn)使活性成分滲入種子(浸種)。

可以使用常規(guī)的處理技術(shù)和機(jī)器(例如流化床技術(shù)、滾壓機(jī)法、旋轉(zhuǎn)靜態(tài)種子處理器和轉(zhuǎn)筒式包衣機(jī))將本發(fā)明的組合物和菌株施用于種子。也可以使用其它方法如噴動(dòng)床。種子可以在包膜前預(yù)先選擇大小。包膜后，通常將種子干燥并隨后轉(zhuǎn)移至徑選機(jī)(sizingmachine)以選擇大小。這種選擇大小和處理的方法是本領(lǐng)域中已知的。

在一個(gè)實(shí)施方案中，可通過(guò)不引發(fā)萌芽的方法將本發(fā)明的組合物和菌株施用于植物繁殖材料或?qū)Ψ敝巢牧线M(jìn)行處理；通常浸泡種子會(huì)引起萌芽，因?yàn)樗梅N子的含水量過(guò)高。因此，施用(或處理)植物繁殖材料如種子的合適方法的實(shí)例是拌種、種子包衣或種子造粒等。

在一個(gè)典型的實(shí)施方案中，所述植物繁殖材料為種子。盡管本方法被認(rèn)為可以施用于任何生理狀態(tài)的種子，然而優(yōu)選種子處于能夠足夠耐受的狀態(tài)，從而在處理過(guò)程中不引起損傷。通常，種子可以是收獲自田間、從植物中分離的、與任何穗軸、莖、外殼和周?chē)墓饣蚱渌欠N子植物材料分離的種子。種子還可以?xún)?yōu)選是生物學(xué)上穩(wěn)定的，使得處理不會(huì)對(duì)種子造成生物學(xué)損傷。認(rèn)為可以在種子收獲和種子播種之間或在播種過(guò)程期間的任何時(shí)間處理種子(針對(duì)種子的施用)。還可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉的技術(shù)在處理之前或之后使種子做好準(zhǔn)備。

在繁殖材料處理期間希望活性成分均勻地分布并粘附于種子。處理可以發(fā)生變化，從在植物繁殖材料如種子上含有本發(fā)明的組合物和菌株的制劑的薄膜(種衣)(此時(shí)，原始尺寸和/或形狀是可辨認(rèn)的)，到中間狀態(tài)(如包衣)，然后直到具有多層不同材料(例如載體，如粘土；不同的制劑，如其他活性成分的制劑；聚合物；以及著色劑)的較厚的膜(例如造粒)(此時(shí)不再能夠辨認(rèn)出種子的原始形狀和/或尺寸)。

在一些實(shí)施方案中，種子處理發(fā)生在未播種的種子上，術(shù)語(yǔ)“未播種的種子”意在包括介于種子收獲與出于植物萌芽和生長(zhǎng)目的而將種子播種在土地中之間的任何時(shí)期的種子。

對(duì)未播種種子的處理并不意圖包括其中活性成分被施用于土壤中的那些實(shí)踐，但是將包括在種植過(guò)程期間任何針對(duì)種子的施用實(shí)踐。

在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選地，處理在種子播種之前發(fā)生，因此已采用本發(fā)明的組合物和菌株預(yù)處理過(guò)所述播種的種子。特別地，種子包膜或種子造粒在采用本發(fā)明的組合物和菌株的處理中是優(yōu)選的。作為處理的結(jié)果，本發(fā)明的組合物和菌株附著于種子表面并因此可用于防治害蟲(chóng)和/或病害。

以與任何其它活性成分處理種子的方式相同的方式，可以貯藏、處理、播種和耕作所述經(jīng)處理的種子。

在某些方面，本發(fā)明提供一種防治植物中的長(zhǎng)喙殼屬種的方法。所述長(zhǎng)喙殼屬種可為多脂長(zhǎng)喙殼、天藍(lán)色長(zhǎng)喙殼(ceratocystiscoerulescens、ceratocystisfagacearum、甘薯長(zhǎng)喙殼、奇異長(zhǎng)喙殼菌、毛長(zhǎng)喙殼菌、ceratocystisplatani、ceratocystispluriannulata或其結(jié)合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述長(zhǎng)喙殼屬種為奇異長(zhǎng)喙殼菌。奇異長(zhǎng)喙殼菌還稱(chēng)為chalaraparadoxa和奇異根串珠霉(thielaviopsisparadoxa)[無(wú)性型]。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)“奇異長(zhǎng)喙殼菌”和“奇異根串珠霉”可互換使用。

長(zhǎng)喙殼屬是一個(gè)重要的植物病原體屬且其引起主要的樹(shù)木病害。奇異長(zhǎng)喙殼菌引起甘蔗的鳳梨病，以及鳳梨、香蕉、可可、椰子和油棕櫚的病害。鳳梨病在經(jīng)濟(jì)上是重要的且出現(xiàn)在幾乎所有生長(zhǎng)甘蔗的國(guó)家。其是一種芽段(sett)的病害并在種植后引起種塊腐爛。腐爛的種塊聞起來(lái)像成熟的鳳梨，這是因?yàn)橛烧婢a(chǎn)生了乙酸乙酯。病原體通過(guò)芽段的切割端進(jìn)入，并摧毀節(jié)間的薄壁組織。這減緩了出芽和苗發(fā)育，因此影響早期苗活力。受感染的芽段因?yàn)楫a(chǎn)生了真菌孢子而由紅色變成褐黑色。這些孢子在種塊腐爛時(shí)被釋放到土壤中并作為下一批作物的接種物。病害有時(shí)出現(xiàn)在直立的作物中，因?yàn)椴≡w通過(guò)由先前的病害侵襲所產(chǎn)生的受傷的莖桿進(jìn)入。病害主要是通過(guò)土壤傳播，并且通過(guò)主要存在于土壤頂部25厘米的真菌孢子傳播。深植、濕潤(rùn)或干燥的土壤條件、低溫、短期或長(zhǎng)期熱水處理(用于防治其他病害)增加了易感性。

在一些實(shí)施方案中，根據(jù)種子的大小，將本發(fā)明的菌株和組合物以約1×10²至約1×10⁷cfu/種子的施用率施用。在一些實(shí)施方案中，施用率為約1×10³至約1×10⁶cfu/種子。

當(dāng)用作土壤處理時(shí)，可將本發(fā)明的組合物以土壤表面浸透、插柄、注入和/或犁溝施用或通過(guò)與灌溉水混合的形式進(jìn)行施用。可在種植時(shí)、播種過(guò)程中或播種后、在移植后和在植物生長(zhǎng)的任何階段施用的浸透土壤處理的施用率通常為約4×10¹¹至約1×10¹³cfu/英畝。在一些實(shí)施方案中，施用率為約4×10¹¹至約8×10¹²cfu/英畝。在一些實(shí)施方案中，施用率為約4×10¹¹至約1×10¹²cfu/英畝。在種植時(shí)施用的犁溝處理的施用率為約1×10¹⁰至約1×10¹²cfu/1000排英尺(rowfeet)。在一些實(shí)施方案中，施用率為約5×10¹⁰至約7.5×10¹¹cfu/1000排英尺。在其他實(shí)施方案中，施用率為約1×10¹⁰cfu/1000排英尺至約5×10¹¹cfu/1000排英尺。

在某些方面，在與土壤接觸之前，將本發(fā)明的組合物作為經(jīng)由多個(gè)噴嘴噴出的噴霧施用于切割的種段(即，播種用芽段或甘蔗繁殖材料)，以確保覆蓋整個(gè)種段塊(billetpiece)(特別是病原體進(jìn)入的切割端)。這可在種植機(jī)的拋出種段時(shí)進(jìn)行，因?yàn)榇藭r(shí)正在供給切割的種段。在一個(gè)實(shí)施方案中，水體積足以充分潤(rùn)濕植物材料的全部表面(約500-800l/ha，這取決于每公頃種植的種段的量)。

以下實(shí)施例僅用于闡述本發(fā)明而不意圖限制本發(fā)明。

實(shí)施例

實(shí)施例1.采用枯草芽孢桿菌qst713防治鳳梨病

進(jìn)行田間試驗(yàn)，以測(cè)定作為固定噴霧施用的aso(最少1×10⁹cfu/g的枯草芽孢桿菌qst713)是否與化學(xué)殺真菌劑(甲氧乙氯汞)相似，可防治甘蔗的鳳梨病，并評(píng)估在種植時(shí)施用于甘蔗的aso(枯草芽孢桿菌qst713)的任何植物毒性。

經(jīng)處理的甘蔗地塊為兩排，約130米。未處理的甘蔗地塊為單排，用于對(duì)比。將aso(枯草芽孢桿菌qst713)在種植時(shí)在犁溝中以最大限度覆蓋切割的芽段的方式施用。將機(jī)動(dòng)的背包噴霧器固定在種植機(jī)上并設(shè)定在100kpa下排出7.9l/100m-排的在水中稀釋的aso(枯草芽孢桿菌qst713)濃縮物。濃縮物的施用率為135ml/100m-排。按照常規(guī)操作，在種植時(shí)采用pto泵將標(biāo)準(zhǔn)(甲氧乙氯汞)施用于切割的甘蔗芽段。(甲氧乙氯汞)的施用率為125ml/100l水。

在種植后21天(dap)、35天(dap)和92天(dap)評(píng)估甘蔗的出芽。在地塊中以10米的長(zhǎng)度計(jì)算出芽數(shù)，報(bào)告每個(gè)地塊的五次或六次單獨(dú)的評(píng)估。對(duì)于每個(gè)處理組，每10米的出芽平均數(shù)示于表1中。

表1.在21dap、35dap和92dap評(píng)估每10米的甘蔗出芽。

存在與地塊中的病害通過(guò)實(shí)驗(yàn)室分析確定為由奇異長(zhǎng)喙殼菌引起的鳳梨病。向甘蔗施用aso(枯草芽孢桿菌qst713)沒(méi)有對(duì)植物產(chǎn)生任何顯著的植物毒性。如表1所示，采用aso(枯草芽孢桿菌qst713)所實(shí)現(xiàn)的鳳梨病的防治效果與采用標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)殺真菌劑(甲氧乙氯汞)所觀察到的防治效果類(lèi)似。當(dāng)進(jìn)行評(píng)估時(shí)，aso(枯草芽孢桿菌qst713)促進(jìn)出芽和保護(hù)甘蔗免受鳳梨病的功效在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)中都是一致的。

實(shí)施例2.采用較低施用率的枯草芽孢桿菌qst713防治鳳梨病

進(jìn)行另一田間試驗(yàn)，以確定在低于實(shí)施例1中所用施用率的施用率下作為固定噴霧而施用的aso(最少1×10⁹cfu/g的枯草芽孢桿菌qst713)對(duì)甘蔗鳳梨病的防治是否與化學(xué)殺真菌劑(甲氧乙氯汞)相似。

田間試驗(yàn)的設(shè)置類(lèi)似于實(shí)施例1的描述，不同之處在于，用水稀釋的aso(枯草芽孢桿菌qst713)濃縮物以30ml/100m-排和65ml/100m-排的量施用。

在種植四周后，以20m或30m的區(qū)域?qū)Ω收岢鲅窟M(jìn)行計(jì)數(shù)，并將三次獨(dú)立重復(fù)的每米平均出芽數(shù)報(bào)告于表2中。

表2.在種植4周后評(píng)估每米的平均甘蔗出芽

在最低施用率為30ml/100m-排下采用aso(枯草芽孢桿菌qst713)所實(shí)現(xiàn)的鳳梨病的防治效果與采用標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)殺真菌劑(甲氧乙氯汞)所觀察到的防治效果類(lèi)似。

實(shí)施例3.采用枯草芽孢桿菌qst713結(jié)合殺蟲(chóng)劑處理后的甘蔗出芽

進(jìn)行類(lèi)似于實(shí)施例1和2的另一田間試驗(yàn)，其在30ml/100m-排(3.33l/ha)、65ml/100m-排(7.22l/ha)、100ml/100m-排(11.1l/ha)或135ml/100m-排(15.00l/ha)下施用aso(最少1×10⁹cfu/g的枯草芽孢桿菌qst713)。以125ml/100l水的施用率施用(甲氧乙氯汞)。在種植時(shí)，將500ec(毒死蜱)與aso或一起以4l/100l水的施用率施用。在進(jìn)行該試驗(yàn)的田間存在相對(duì)高的鳳梨病壓力。

在施用后27天(daa)、39天(daa)、49天(daa)和67天(daa)，評(píng)估每米出芽的平均數(shù)，并將結(jié)果示于圖1中。aso(枯草芽孢桿菌qst713)以及化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)在各測(cè)試的施用率下的性能始終一致。

實(shí)施例4.枯草芽孢桿菌qst713和短小芽孢桿菌qst2808對(duì)奇異長(zhǎng)喙殼菌菌絲生長(zhǎng)的抑制的評(píng)估

為了評(píng)估枯草芽孢桿菌qst713或短小芽孢桿菌qst2808對(duì)奇異長(zhǎng)喙殼菌菌絲生長(zhǎng)的抑制，設(shè)計(jì)了這樣的研究，其測(cè)量了采用奇異長(zhǎng)喙殼菌和各芽孢桿菌菌株的混合培養(yǎng)物在培養(yǎng)皿上抑制的區(qū)域。將直徑為0.5cm的含有各芽孢桿菌菌落的圓盤(pán)置于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(pda)板的一端。在將這些板在25℃下孵育2天后，將含有奇異長(zhǎng)喙殼菌病原體的圓盤(pán)置于相對(duì)的一端。對(duì)照pda板僅含有奇異長(zhǎng)喙殼病原體。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)完全隨機(jī)地重復(fù)七次。在將病原體圓盤(pán)置于pda板上4天后評(píng)估抑制區(qū)域。

枯草芽孢桿菌qst713和短小芽孢桿菌qst2808均顯示出對(duì)奇異長(zhǎng)喙殼菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果，這通過(guò)在含有各芽孢桿菌菌株的圓盤(pán)周?chē)纬梢种普婢L(zhǎng)的區(qū)域而得到證明(參見(jiàn)圖2和表3)。僅含有奇異長(zhǎng)喙殼菌病原體的對(duì)照pda板被菌絲生長(zhǎng)完全覆蓋。

表3.在4天后，在芽孢桿菌菌株和奇異長(zhǎng)喙殼菌病原體之間的抑制區(qū)域(cm)。

實(shí)施例5.通過(guò)aso(枯草芽孢桿菌qst713)和(短小芽孢桿菌qst2808)中的化合物對(duì)病原體生長(zhǎng)的抑制

將配制的aso(1.34％的含有最少1×10⁹cfu/g的枯草芽孢桿菌qst713)和(1.38％的含有最少1×10⁹cfu/g的短小芽孢桿菌qst2808)進(jìn)行加熱滅菌以消除活菌的作用并僅評(píng)估存在于各產(chǎn)品中的熱穩(wěn)定化合物的直接作用。將aso(枯草芽孢桿菌qst713)或(短小芽孢桿菌qst2808)加入至pda培養(yǎng)基中，最終濃度為0％、0.001％、0.01％、0.1％、1％或10％。然后將pda培養(yǎng)基在120℃下高壓滅菌20分鐘。在滅菌后，將含有aso(枯草芽孢桿菌qst713)或(短小芽孢桿菌qst2808)的pda培養(yǎng)基倒入至培養(yǎng)皿中并在室溫下固化。然后將含有奇異長(zhǎng)喙殼菌的圓盤(pán)置于各板的中央并在25℃下孵育。在將圓盤(pán)置于板上4天后，測(cè)量病原體生長(zhǎng)的直徑。將實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)完全隨機(jī)重復(fù)7次。

在aso(枯草芽孢桿菌qst713)或(短小芽孢桿菌qst2808)的各濃度下對(duì)病原體生長(zhǎng)的平均抑制示于表4中。aso(枯草芽孢桿菌qst713)在pda培養(yǎng)基中的濃度為10％和1％時(shí)完全抑制病原體的菌絲生長(zhǎng)。采用較低濃度的aso(枯草芽孢桿菌qst713)觀察到了劑量響應(yīng)。(短小芽孢桿菌qst2808)僅在10％和1％的濃度下抑制菌絲生長(zhǎng)。奇異長(zhǎng)喙殼菌病原體對(duì)aso(枯草芽孢桿菌qst713)中的熱穩(wěn)定化合物比對(duì)(短小芽孢桿菌qst2808)中的熱穩(wěn)定化合物更加敏感。

表4.奇異長(zhǎng)喙殼菌在含有不同濃度的熱滅菌的aso(枯草芽孢桿菌qst713)或(短小芽孢桿菌qst2808)的pda培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的平均直徑

＊為了進(jìn)行方差分析，將數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化成√x+0.5。相同字母前的平均值通過(guò)圖基(tukey)檢驗(yàn)在5％的概率下沒(méi)有差異。

實(shí)施例6.aso(枯草芽孢桿菌qst713)和(短小芽孢桿菌qst2808)在自然病原體壓力下的產(chǎn)量效果

進(jìn)行田間試驗(yàn)，其中奇異長(zhǎng)喙殼菌和鐮刀菌屬(fusarium)均天然存在于土壤中。單獨(dú)使用aso(枯草芽孢桿菌qst713)或(短小芽孢桿菌qst2808)或與(嘧菌酯+環(huán)唑醇)結(jié)合處理甘蔗，如表5所示。

使用機(jī)械種植機(jī)以1.5m犁溝的間隔種植甘蔗的rb92579品種。在苗圃中準(zhǔn)備長(zhǎng)40cm且各含有三至四個(gè)芽的幼苗并用于田間試驗(yàn)。將幼苗種植在犁溝中，18至20個(gè)芽/米溝槽。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，重復(fù)四次。使用背包噴霧器對(duì)幼苗和周?chē)耐寥肋M(jìn)行處理。

在收獲時(shí)間，使用機(jī)械收割機(jī)收獲各地塊的所有品系，并將甘蔗段稱(chēng)重。將重量測(cè)量轉(zhuǎn)換成每公頃可磨碎的甘蔗(莖桿)的噸數(shù)(tmh)。取出來(lái)自各地塊的甘蔗段的樣品，置于塑料袋中，并送入實(shí)驗(yàn)室來(lái)測(cè)量以千克/噸表示的總的可回收的糖(trs)，其對(duì)應(yīng)于原料中可利用的糖的量減去工業(yè)處理中的損失。然后通過(guò)以下公式將這兩個(gè)參數(shù)用于計(jì)算每公頃糖的噸數(shù)(tsh)：tsh＝tmh×trs/1000。來(lái)自各處理組的甘蔗的tmh和tsh值報(bào)告于表6中。

表5.配制的aso(枯草芽孢桿菌qst713)、(短小芽孢桿菌qst2808)，和(嘧菌酯+環(huán)唑醇)用于在田間試驗(yàn)的施用率

＊sc：懸浮濃縮劑

表6.在單獨(dú)使用aso(枯草芽孢桿菌qst713)或(短小芽孢桿菌qst2808)或與(嘧菌酯+環(huán)唑醇)結(jié)合處理的甘蔗中，每公頃可磨碎的甘蔗(莖桿)的噸數(shù)(tmh)、每公頃糖的噸數(shù)(tsh)，以及與未處理的對(duì)照的tsh的百分比差異(δ％-tsh)。

＊與未處理對(duì)照的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；ns：與未處理對(duì)照無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過(guò)scott-knott檢驗(yàn)確定統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

在天然存在的病原體壓力的條件下，如tmh和tsh所示，除了處理8之外的各處理均導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的產(chǎn)量增加。(短小芽孢桿菌qst2808)單獨(dú)以2.0l/ha施用時(shí)特別有效并產(chǎn)生了類(lèi)似于使用化學(xué)標(biāo)準(zhǔn)(即，嘧菌酯+環(huán)唑醇)所觀察到的產(chǎn)量增加。

實(shí)施例7.aso(枯草芽孢桿菌qst713)與(枯草芽孢桿菌rm303)相比的抗真菌活性

進(jìn)行田間試驗(yàn)，其中奇異長(zhǎng)喙殼菌(莖腐病或鳳梨病)天然存在于土壤中。在與土壤接觸前的種植時(shí)，采用在水中稀釋的以下市售產(chǎn)品之一對(duì)各組糖甘蔗播種芽段進(jìn)行充分噴霧：aso(枯草芽孢桿菌qst713)、(枯草芽孢桿菌rm303)或250ec(丙環(huán)唑)。將aso(枯草芽孢桿菌qst713)以15、30、60或135毫升產(chǎn)品/100米的排(ml/100排-米)進(jìn)行施用，(枯草芽孢桿菌rm303)以150ml/100排-米進(jìn)行施用。將250ec(丙環(huán)唑)以20毫升產(chǎn)品/100升混合物(ml/100l)進(jìn)行施用，且包括采用合成殺真菌劑的對(duì)照處理。

在施用后第15天(daa)、21天(daa)、35天(daa)、84天(daa)和140天(daa)測(cè)定每米的平均出芽(參見(jiàn)表7)。隨著aso(枯草芽孢桿菌qst713)的施用率的增加，出芽數(shù)也增加，在60ml/100排-米和135ml/100排-米的施用率下觀察到最大的效果。在該田間試驗(yàn)和其他相關(guān)試驗(yàn)中，證明了aso(枯草芽孢桿菌qst713)比(枯草芽孢桿菌rm303)更加一致地防治奇異長(zhǎng)喙殼菌(莖腐病或鳳梨病)。

表7.在種植時(shí)采用aso(枯草芽孢桿菌qst713)、(枯草芽孢桿菌rm303)或250ec(丙環(huán)唑)處理的糖甘蔗中每米的出芽

＊具有相同字母的數(shù)字表示沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異

除非另有定義，本文中的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)的含義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的含義相同。所引用的所有出版物、專(zhuān)利和專(zhuān)利出版物通過(guò)引用整體納入本文用于所有目的。雖然已經(jīng)結(jié)合本發(fā)明的具體實(shí)施方案描述了本發(fā)明，但是應(yīng)當(dāng)理解，其能夠進(jìn)行進(jìn)一步的修改，并且本申請(qǐng)旨在覆蓋本發(fā)明的任何變化、用途或改編，其大體上遵循本發(fā)明的原則并且包括偏離本發(fā)明的內(nèi)容，只要該偏離的內(nèi)容在本發(fā)明所屬領(lǐng)域中已知的或常規(guī)的操作范圍內(nèi)，而且可應(yīng)用于上文所述的基本特征，并落在所附的權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。