一種甜瓜的快速繁殖方法及應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種甜瓜的快速繁殖方法及應用，屬于植物組織培養(yǎng)【技術領域】。本發(fā)明所提供的方法是將甜瓜種子經過剝殼滅菌后切成胚塊，在依次經過啟動培養(yǎng)、不定芽培養(yǎng)、伸長培養(yǎng)和生根培養(yǎng)后，再對所得植株進行馴化，最終獲得甜瓜再生苗。本發(fā)明所提供的方法能夠明顯提高了甜瓜的繁殖系數、再生頻率和外植體再生芽數。同時，相比于傳統(tǒng)方法，可縮短培育周期13天。
【專利說明】-種甜瓜的快速繁殖方法及應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種甜瓜的快速繁殖方法及應用，屬于植物組織培養(yǎng)【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 甜瓜（化cumis melo L.)是葫蘆科黃瓜屬一年生蔓性草本植物，莖被短剛毛。卷 須不分叉，葉柄有短剛毛；葉片近圓形或腎形，長寬均8-15厘米，邊緣有銀齒。雌雄同株，花 彎裂片，花冠黃色，裂片卵狀矩圓形，果實的形狀、顏色因品種而已，有香味，果皮平滑，種子 呈白色。果實作為水果或蔬菜，瓜蒂和種子可藥用，廣泛栽培于溫帶至熱帶地區(qū)。
[0003] 目前，國內外對于甜瓜的快速繁殖的研究主要是通過對甜瓜組織進行離體培養(yǎng)， 進而獲得再生植株。國內目前已經能夠通過子葉、帶牙莖段、真葉、胚軸和莖尖等多種外植 體誘導再生出植株。如張大力從甜瓜子葉愈傷組織誘導獲得再生植株、蔡潤等分別利用甜 瓜的生長點、子葉、下胚軸為外植體進行離體培養(yǎng)，成功得到再生植株。國外已建立的甜瓜 離體再生體系包括子葉、真葉、下胚軸和莖等。如Nie化等人W幼齡甜瓜子葉為外植體，成 功建立了 4個厚皮甜瓜基因型的再生體系。雖然，現有技術已經能夠通過離體組織培養(yǎng)獲 得再生植株，但現有方法均存在繁殖周期長、繁殖系數不高，成活率低W及成本高等問題。


【發(fā)明內容】

[0004] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種甜瓜的快速繁殖方法，所采取的技術方案如 下：
[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種甜瓜的快速繁殖方法，該方法是將甜瓜種子經過剝殼 滅菌后切成胚塊，在依次經過啟動培養(yǎng)、不定芽培養(yǎng)、伸長培養(yǎng)和生根培養(yǎng)后，再對所得植 株進行馴化，最終獲得甜瓜再生苗。
[0006] 所述方法的步驟如下：
[0007] 1)將甜瓜的種子剝殼，滅菌后切成胚塊；
[0008] 2)將步驟1)中所得胚塊放到啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得啟動培養(yǎng)胚塊；
[0009] 3)將步驟2)中所得的啟動培養(yǎng)胚塊，轉移到不定芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得不定芽培 養(yǎng)胚塊；
[0010] 4)將步驟3)所得的不定芽培養(yǎng)胚塊轉移到伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得伸長培養(yǎng)胚 塊；
[0011] 5)去除步驟4)所得的伸長培養(yǎng)胚塊的不定芽，并移植到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得 再生植株；
[0012] 6)馴化步驟5)所得的再生植株，獲得甜瓜再生苗。
[0013] 其中，步驟1)所述滅菌，是用70%體積分數的酒精滅菌30s，再用0.05%質量分數 的升隸消毒；所述切成胚塊，是去除胚子葉前端和胚根部分。
[0014] 步驟2)所述啟動培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基組成為；1/8MS基本培養(yǎng)基+BA2. Omg/ L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L藏糖，P冊.8 ;培養(yǎng)條件為，28°C下，暗培養(yǎng)l-2d，然后至 人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天27-29°C，晚上24-26°C，黑暗7-化/d，光照15-1化/d，光 照強度為1800-22(K)Lx，培養(yǎng)時間為lOd。
[0015] 步驟3)所述不定芽培養(yǎng)，不定芽培養(yǎng)基組成為；MS基本培養(yǎng)基+BA1.0mg/ L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L藏糖，抑5. 8 ;培養(yǎng)條件為；白天28。晚上25。黑暗 她/山光照16h/d，光照強度為20(K)Lx，培養(yǎng)時間為20天。
[0016] 步驟4)所述伸長培養(yǎng)基，組成為；MS基本培養(yǎng)基+BA0. 05mg/L+IAA0. lmg/L+7. 5g/ L瓊脂+30g/L藏糖，p冊.8 ;培養(yǎng)條件為，28°C下，暗培養(yǎng)2d，然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條 件為白天27-29C，晚上24-26C，黑暗7-化/山光照15-1化/山光照強度為1800-2200LX，培 養(yǎng)時間為20天。
[0017] 步驟5)所述生根培養(yǎng)基，組成為；MS基本培養(yǎng)基+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/ L藏糖，抑5.8 ;培養(yǎng)條件為；28°C下，暗培養(yǎng)2d，然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天 27-29C，晚上24-26C，黑暗7-化/山光照15-1化/山光照強度為1800-2200LX，培養(yǎng)時間為 10天。
[0018] 所述方法的具體步驟如下：
[0019] 1)將甜瓜的種子剝殼，用70%體積分數的酒精滅菌30s，再用0. 05%質量分數的 升隸消毒，再去除胚子葉前端和胚根部分，獲得甜瓜胚塊；
[0020] 2)將步驟1)中所得胚塊放到啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為，28C暗培養(yǎng)2d，然 后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光照強度為 20(K)Lx，光照條件，培養(yǎng)10天，獲得啟動培養(yǎng)胚塊；
[0021] 所述啟動培養(yǎng)基的組成是；1/8MS基本培養(yǎng)基+BA2. Omg/L+IAAO. lmg/L+7. 5g/L瓊 脂+30g/L藏糖，p冊.8 ;
[0022] 3)將步驟2)所得的啟動培養(yǎng)胚塊均勻切成四小塊，并轉移到不定芽培養(yǎng)基中培 養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：白天28°C，晚上25°C，黑暗她/山光照16h/d，光照強度為2000LX，培養(yǎng)時 間為20天，獲得不定芽培養(yǎng)胚塊；
[0023] 所述不定芽培養(yǎng)基組成為；MS基本培養(yǎng)基+BA1. Omg/L+IAAO. lmg/L+7. 5g/L瓊脂 +30g/L 藏糖，p冊.8 ;
[0024] 4)將步驟3)所得的不定芽培養(yǎng)胚塊轉移到伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：白天 28°C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光照強度為20(K)Lx，培養(yǎng)20天，獲得伸長培養(yǎng)胚 塊；
[00巧]所述伸長培養(yǎng)基的組成是；MS基本培養(yǎng)基+BA0. 05mg/L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂 +30g/L 藏糖，p冊.8 ;
[0026] 5)去除步驟4)所得伸長胚塊中長于3cm的不定芽并移植到生根培養(yǎng)基中，白天 28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光照強度為2000LX光照條件，培養(yǎng)10天，獲得再生 植株；
[0027] 所述生根培養(yǎng)基，組成是；MS基本培養(yǎng)基+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L藏糖， 抑5. 8 ;
[0028] 6)將步驟5)中獲得的再生植株進行修剪后，栽植到營養(yǎng)±中馴化，獲得甜瓜再生 苗。
[0029] 所述方法用于甜瓜的遺傳育種和快速繁殖。
[0030] 本發(fā)明有益效果：
[0031] 1，提高繁殖系數，能在短時間獲得較多的組培苗。
[0032] 2,為甜瓜離體再生開辟了新的方法，大大解決甜瓜組組培苗再生率低的問題。
[0033] 3，大大縮短了甜瓜的繁殖周期。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0034] 圖1為實施例1再生植株的培養(yǎng)過程；
[0035] (A，種子接種到培養(yǎng)基中出苗；B，C切好的子葉節(jié)接種到啟動培養(yǎng)基中；D，30天 后產生不定芽；E，不定芽在伸長培養(yǎng)基上一周；F，再生植株在生根培養(yǎng)基上生根；G，再生 苗）。
[0036] 圖2為實施例2中甜瓜種子去皮切胚。
[0037] 圖3為實施例2中切好的胚塊在啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0038] 圖4為實施例2中在啟動培養(yǎng)基胚塊放在不定芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0039] 圖5為實施例2中胚塊在伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0040] 圖6為實施例2中再生植株的移栽成活。

【具體實施方式】
[0041] 下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明不受實施例的限制。
[0042] W下實施例所用的材料、試劑、儀器和方法，未經特殊說明，均為本領域中常規(guī)的 材料、試劑、儀器和方法。
[0043] 實施例1
[0044] 本實施例提供了一種傳統(tǒng)的繁殖甜瓜的方法，步驟如下：
[0045] 1.無菌苗的培養(yǎng)，取上述巧粒飽滿、大小均一的甜瓜種子，溫湯浸種4?化，流水 沖洗，在超凈工作臺上先用75%酒精浸泡Imin，再用0. 1% HgCls溶液浸泡10?15min，其 間輕輕搖動，最后用無菌水沖洗5?6次，將種子平放于1/2MS培養(yǎng)基（每升含藏糖30g、瓊 脂7肖，抑值5.8)。281：暗培養(yǎng)1?2(1，50%種子露白后轉至光下培養(yǎng)：251：，光照1611/(1， 黑暗她/山光照強度為20001X，培養(yǎng)時間為5d。
[0046] 2.不定芽的誘導，取5d左右兩片子葉脫離種皮、但未完全張開的甜瓜無菌苗，切 去生長點及下胚軸，兩片子葉均切去上半部分（1/2?1/3)，留取子葉下半部分，將子節(jié)葉 接種于芽誘導培養(yǎng)基：M1 (MS+0. 5mg/L6-BA+0mg/LIAA)、M2(MS+0. 5mg/L6-BA+0. Img/LIAA)、 M3(MS+0. 5mg/L6-BA+0.5mg/L lAA)、M4(MS+1. 0mg/L6-BA+0mg/L lAA)、M5(MS+1. Omg/ L6-BA+0. Img/L AA)、M6 (MS+1. 0mg/L6-BA+0. 5mg/L lAA)、M7 (MS+1. 5mg/L6-BA+0mg/L IM)、 M8(MS+1. 5mg/L6-BA+0. Img/L AA)、M9(MS+1. 5mg/L6-BA+0. 5mg/L lAA)、Mil(MS+2. Omg/ L6-BA+0mg/L lAA)。MIO(MS+2. 0mg/L6-BA+0. Img/L lAA)、MIO(MS+2. 0mg/L6-BA+0. 5mg/L lAA)每個處理設3次重復，每次重復10個外植體。培養(yǎng)條件：溫度25°C，光照16h/d，黑暗 她/山光照強度為20001X。每7?lOd繼代一次，30d后統(tǒng)計不定芽數目，計算再生頻率和 每外植體再生芽數。
[0047] 3.不定芽的伸長，W CM-15甜瓜自交系為試材，從子葉節(jié)外植體上將誘導出的 叢生芽切下，接種于伸長培養(yǎng)基：E0(M巧、EUMS+0. 01mg/L6-BA)、E2(MS+0. 05mg/L6-BA)、 E3 (MS+0. lmg/L6-BA)、E4 (MS+0. 15mg/L6-BA)，15d后統(tǒng)計芽的伸長量。每個處理設3次重 復，每次重復8個外植體。培養(yǎng)條件及數據處理方法同上。
[0048] 4.不定根的誘導將伸長良好、生長健壯的小苗從基部切下，轉接到生根培養(yǎng)基 (M巧上進行生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件與伸長培養(yǎng)條件相同。
[0049] 實施例2
[0050] 本實施了提供了一種根據本發(fā)明技術方案進行甜瓜快速繁殖的方法，步驟如下：
[0051] (1)取材滅菌，將甜瓜種子剝去殼后。用70 %酒精滅菌30s，再用0.05 %升隸消 毒10分鐘，在超凈工作臺上用滅菌水洗3-4次。每次泡1分鐘。滅菌完成后，用刀片去 除胚子葉前端和胚根部分（如圖2所示）。
[0052] (2)啟動培養(yǎng)，將滅菌后切好的胚塊放在啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)。首先在28C下暗培 養(yǎng)2d，然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光 照強度為2000LX，光照條件，培養(yǎng)10天。培養(yǎng)基組成為1/8MS+BA2. Omg/L+IAAO. Img/L，瓊 脂中（其中每升含藏糖30g、瓊脂7. 5g，抑值5. 8)，培養(yǎng)時間為lOd(如圖3所示），獲得啟 動培養(yǎng)胚塊。
[0053] (3)不定芽培養(yǎng)，將步驟（2)所得的所得的啟動培養(yǎng)胚塊均勻切成四小塊，并轉移 到不定芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：白天28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光照強 度為2000LX，培養(yǎng)時間為20天，獲得不定芽培養(yǎng)胚塊；
[0054] 其中不定芽培養(yǎng)基組成為；MS基本培養(yǎng)基+BA1. Omg/L+IAAO. lmg/L+7. 5g/L瓊脂 +30g/L藏糖，抑5. 8,然后轉移到MS+BAl. Omg/L+IAAO. Img/L見有不定芽叢長出后，轉移到 伸長培養(yǎng)基中MS+BA0. 05mg/L+IAA0. Img/L。圖4為在啟動培養(yǎng)基培養(yǎng)20天的胚塊。
[0055] (4)伸長培養(yǎng)，將啟動培養(yǎng)獲得的胚塊均勻切成四小塊，轉移到伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng) (圖5)。培養(yǎng)條件為：白天28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光照強度為2000LX，培 養(yǎng)20天，獲得伸長培養(yǎng)胚塊。
[0056] (5)去除步驟4)所得伸長胚塊中長于3cm的不定芽并移植到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 條件為：白天28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光照強度為2000LX光照條件，培養(yǎng)10 天，獲得再生植株；
[0057] 所述生根培養(yǎng)基，組成是；MS基本培養(yǎng)基+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L藏糖， 地5. 8。
[0058] (6)再生植株馴化，將生根的甜瓜苗取出，適當修剪，然后栽植到營養(yǎng)±幢石；草 炭=1:1中，注意保溫保濕，2周后與實生苗長勢相同（圖6)。
[00則 實施例3
[0060] 本實施了提供了另外一種根據本發(fā)明技術方案進行甜瓜快速繁殖的方法，步驟如 下：
[0061] (1)取材滅菌，將甜瓜種子剝去殼后。用70 %酒精滅菌30s，再用0. 05 %升隸消 毒10分鐘，在超凈工作臺上用滅菌水洗3-4次。每次泡1分鐘。滅菌完成后，用刀片去 除胚子葉前端和胚根部分。
[0062] (2)啟動培養(yǎng)，將滅菌后切好的胚塊放在啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)。首先在28C下暗培 養(yǎng)Id,然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天28C，晚上25C，黑暗化/山光照15h/d，光 照強度為2200LX，光照條件，培養(yǎng)10天。培養(yǎng)基組成為1/8MS+BA2. Omg/L+IAAO. Img/L，瓊 脂中（其中每升含藏糖30g、瓊脂7. 5g，抑值5. 8)，培養(yǎng)時間為lOd，獲得啟動培養(yǎng)胚塊。
[0063] (3)不定芽培養(yǎng)，將步驟（2)所得的所得的啟動培養(yǎng)胚塊均勻切成四小塊，并轉移 到不定芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：白天28C，晚上25C，黑暗化/山光照15h/d，光照強 度為22(K)Lx，培養(yǎng)時間為20天，獲得不定芽培養(yǎng)胚塊；
[0064] 其中不定芽培養(yǎng)基組成為；MS基本培養(yǎng)基+BA1. Omg/L+IAAO. lmg/L+7. 5g/L瓊脂 +30g/L藏糖，抑5. 8,然后轉移到MS+BAl. Omg/L+IAAO. Img/L見有不定芽叢長出后，轉移到 伸長培養(yǎng)基中 MS+BA0. 05mg/L+IAA0. Img/L。
[0065] (4)伸長培養(yǎng)，將啟動培養(yǎng)獲得的胚塊均勻切成四小塊，轉移到伸長培養(yǎng)基中培 養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：白天28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光照強度為2000LX，培養(yǎng)20 天，獲得伸長培養(yǎng)胚塊。
[0066] (5)生根培養(yǎng)，去除步驟4)所得伸長胚塊中長于3cm的不定芽并移植到生根培養(yǎng) 基中，培養(yǎng)條件為：白天28C，晚上24C，黑暗化/山光照15h/d，光照強度為2200LX光照條 件，培養(yǎng)10天，獲得再生植株；
[0067] 所述生根培養(yǎng)基，組成是；MS基本培養(yǎng)基+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L藏糖， 地5. 8。
[0068] (6)再生植株馴化，將生根的甜瓜苗取出，適當修剪，然后栽植到營養(yǎng)±幢石；草 炭=1:1中，注意保溫保濕，2周后與實生苗長勢相同。
[006引 實施例4
[0070] 本實施了提供了另外一種根據本發(fā)明技術方案進行甜瓜快速繁殖的方法，步驟如 下：
[0071] (1)取材滅菌，將甜瓜種子剝去殼后。用70 %酒精滅菌30s，再用0.05 %升隸消 毒10分鐘，在超凈工作臺上用滅菌水洗3-4次。每次泡1分鐘。滅菌完成后，用刀片去 除胚子葉前端和胚根部分。
[0072] (2)啟動培養(yǎng)，將滅菌后切好的胚塊放在啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)。首先在28C下暗培 養(yǎng)2d，然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天28C，晚上25C，黑暗她/山光照16h/d，光 照強度為2000LX，光照條件，培養(yǎng)10天。培養(yǎng)基組成為1/8MS+BA2. Omg/L+IAAO. Img/L，瓊 脂中（其中每升含藏糖30g、瓊脂7. 5g，抑值5. 8)，培養(yǎng)時間為lOd，獲得啟動培養(yǎng)胚塊。
[0073] (3)不定芽培養(yǎng)，將步驟（2)所得的所得的啟動培養(yǎng)胚塊均勻切成四小塊，并轉移 到不定芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：白天28C，晚上25C，黑暗化/山光照17h/d，光照強 度為1800LX，培養(yǎng)時間為20天，獲得不定芽培養(yǎng)胚塊；
[0074] 其中不定芽培養(yǎng)基組成為；MS基本培養(yǎng)基+BA1. Omg/L+IAAO. lmg/L+7. 5g/L瓊脂 +30g/L藏糖，抑5. 8,然后轉移到MS+BAl. Omg/L+IAAO. Img/L見有不定芽叢長出后，轉移到 伸長培養(yǎng)基中 MS+BA0. 05mg/L+IAA0. Img/L。
[0075] (4)伸長培養(yǎng)，將啟動培養(yǎng)獲得的胚塊均勻切成四小塊，轉移到伸長培養(yǎng)基中培 養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：白天28C，晚上25C，黑暗化/山光照17h/d，光照強度為1800LX，培養(yǎng)20 天，獲得伸長培養(yǎng)胚塊。
[0076] (5)生根培養(yǎng)，去除步驟4)所得伸長胚塊中長于3cm的不定芽并移植到生根培養(yǎng) 基中，培養(yǎng)條件為：白天28°C，晚上26°C，黑暗化/山光照17h/d，光照強度為1800LX光照條 件，培養(yǎng)10天，獲得再生植株；
[0077] 所述生根培養(yǎng)基，組成是：MS基本培養(yǎng)基+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L藏糖， 地5. 8。
[007引 做再生植株馴化，將生根的甜瓜苗取出，適當修剪，然后栽植到營養(yǎng)±幢石；草 炭=1:1中，注意保溫保濕，2周后與實生苗長勢相同。
[0079] 實施例5
[0080] 本實施例對實施例1-4所提供的方法的效果進行了測定。對甜瓜再生植株培育過 程中，繁殖系數、再生頻率、外植體再生芽數及培植周期進行了測定和統(tǒng)計，結果見表1。
[0081] 表1實施例1-4方法培植再生植株的效果
[0082]

【權利要求】
1. 一種甜瓜的快速繁殖方法，其特征在于，是將甜瓜種子經過剝殼滅菌后切成胚塊，在 依次經過啟動培養(yǎng)、不定芽培養(yǎng)、伸長培養(yǎng)和生根培養(yǎng)后，再對所得植株進行馴化，最終獲 得甜瓜再生苗。
2. 權利要求1所述方法，其特征在于，步驟如下： 1) 將甜瓜的種子剝殼，滅菌后切成胚塊； 2) 將步驟1)中所得胚塊放到啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得啟動培養(yǎng)胚塊； 3) 將步驟2)中所得的啟動培養(yǎng)胚塊，轉移到不定芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得不定芽培養(yǎng)胚 塊； 4) 將步驟3)所得的不定芽培養(yǎng)胚塊轉移到伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得伸長培養(yǎng)胚塊； 5) 去除步驟4)所得的伸長培養(yǎng)胚塊的不定芽，并移植到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得再生 植株； 6) 馴化步驟5)所得的再生植株，獲得甜瓜再生苗。
3. 權利要求2所述方法，其特征在于，步驟1)所述滅菌，是用體積分數70%的酒精滅 菌30s，再用質量分數0. 05%的升汞消毒；所述切成胚塊，是去除胚子葉前端和胚根部分。
4. 權利要求2所述方法，其特征在于，步驟2)所述啟動培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基組成為：1/8MS 基本培養(yǎng)基 +BA2. 0mg/L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L 瓊脂 +30g/L 蔗糖，pH5. 8 ;培養(yǎng)條件為， 28°C下，暗培養(yǎng)l-2d，然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天27-29°C，晚上24-26°C，黑 暗7-9h/d，光照15-17h/d，光照強度為1800-2200LX，培養(yǎng)時間為10d。
5. 權利要求2所述方法，其特征在于，步驟3)所述不定芽培養(yǎng)，不定芽培養(yǎng)基組成為： MS基本培養(yǎng)基+BA1. 0mg/L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH5. 8 ;培養(yǎng)條件為：白 天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)時間為20天。
6. 權利要求2所述方法，其特征在于，步驟4)所述伸長培養(yǎng)，伸長培養(yǎng)基組成為：MS 基本培養(yǎng)基 +BA0. 05mg/L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L 瓊脂 +30g/L 蔗糖，pH5. 8 ;培養(yǎng)條件為：28°C 下，暗培養(yǎng)2d，然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天27-29°C，晚上24-26°C，黑暗7-9h/ d，光照15-17h/d，光照強度為1800-2200Lx，培養(yǎng)時間為20天。
7. 權利要求2所述方法，其特征在于，步驟5)所述生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基組成為：MS 基本培養(yǎng)基+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L蔗糖，pH5. 8 ;培養(yǎng)條件為：28°C下，暗培養(yǎng) 2d，然后至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天27-29 °C，晚上24-26 °C，黑暗7-9h/d，光照 15-17h/d，光照強度為1800-2200LX，培養(yǎng)時間為10天。
8. 權利要求2所述方法，其特征在于，具體步驟如下： 1) 將甜瓜的種子剝殼，用70%體積分數的酒精滅菌30s，再用質量分數0.05%的升汞 消毒，再去除胚子葉前端和胚根部分，獲得甜瓜胚塊； 2) 將步驟1)中所得胚塊放到啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：28°C暗培養(yǎng)2d，然后 至人工氣候箱培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為白天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照強度為 2000Lx，光照條件，培養(yǎng)10天，獲得啟動培養(yǎng)胚塊； 所述啟動培養(yǎng)基的組成為：1/8MS基本培養(yǎng)基+BA2. 0mg/L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂 +30g/L 鹿糖，pH5. 8 ; 3) 將步驟2)所得的啟動培養(yǎng)胚塊均勻切成四小塊，并轉移到不定芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培 養(yǎng)條件為：白天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)時間為20 天，獲得不定芽培養(yǎng)胚塊； 所述不定芽培養(yǎng)基組成為：MS基本培養(yǎng)基+BA1. Omg/L+IAAO. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/ L 鹿糖，pH5. 8 ; 4) 將步驟3)所得的不定芽培養(yǎng)胚塊轉移到伸長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：白天 28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)20天，獲得伸長培養(yǎng) 胚塊；所述伸長培養(yǎng)基的組成是：MS基本培養(yǎng)基+BA0. 05mg/L+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂 +30g/L 鹿糖，pH5. 8 ; 5) 去除步驟4)所得伸長胚塊中長于3cm的不定芽并移植到生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條 件為：白天28°C，晚上25°C，黑暗8h/d，光照16h/d，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)10天，獲得再 生植株； 所述生根培養(yǎng)基，組成是：MS基本培養(yǎng)基+IAA0. lmg/L+7. 5g/L瓊脂+30g/L蔗糖， pH5. 8 ； 6) 將步驟5)中獲得的再生植株進行修剪后，栽植到營養(yǎng)土中馴化，獲得甜瓜再生苗。
9.權利要求1-8所述方法，其特征在于，用于甜瓜的遺傳育種和快速繁殖。
【文檔編號】A01H4/00GK104396743SQ201410597395
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年10月29日 優(yōu)先權日:2014年10月29日
【發(fā)明者】張慧君, 李桂萍, 李翠 申請人:淮北師范大學