一種珠子參β-香樹素合酶基因及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種珠子參β-香樹素合酶基因及其應(yīng)用，利用以珠子參cDNA為模板，利用P1：5'ATGTGGAAGCTTAAAATTGCAGAGG3'；反向引物P2:5'TCAGACGCTTTTAGATGGTAATCG3'進行PCR反應(yīng)，可獲得珠子參β-香樹素合酶基因，將珠子參β-香樹素合酶（PBβAS）基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)入珠子參，可獲得高齊墩果烷型皂苷含量的的轉(zhuǎn)基因植株，為獲得高皂苷含量的珠子參提供理論基礎(chǔ)和應(yīng)用實例，具有廣大的應(yīng)用前景。
【專利說明】—種珠子參β-香樹素合酶基因及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，主要涉及珠子參中β -香樹素合酶(β -amyrin
synthase)基因的克隆和應(yīng)用，

【背景技術(shù)】
[0002]珠子參(Panaxjaponicus C.A.Mey.var.major (Buck.) C.Y Wu et Κ.M.Fen g)是五加科人參屬(Panax L.)植物竹節(jié)參的變種，也是傳統(tǒng)的名貴中藥材之一，主要分布在我國陜西、四川、湖北、云南等省。具有較高的藥用價值，用于氣陰兩虛、煩熱口渴、虛勞咳嗽、跌撲損傷、關(guān)節(jié)疼痛、咳血、吐血、外傷出血等。其主要有效成分是三萜皂苷，以齊墩果烷型五環(huán)三萜類皂苷為主。
[0003]珠子參是中國藥典收載品種，具有廣闊的應(yīng)用前景和可觀的經(jīng)濟價值，通過研究珠子參中活性成分五環(huán)三萜皂苷生物合成的途徑及其調(diào)控的分子機制，找出其中的關(guān)鍵酶，實現(xiàn)其基因的定位、克隆及高效表達，在分子水平上對齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷生物合成進行人工調(diào)控，進一步實現(xiàn)齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷類化合物的規(guī)模生產(chǎn)，以提供醫(yī)藥市場的需求。
[0004]β-香樹素合酶(β-amyrin synthase, β AS)基因在三職類阜苷的生物合成途徑中起著重要的作用。β AS催化2，3-氧化角鯊烯生成β -香樹素，β -香樹素再經(jīng)一系列生化反應(yīng)生成齊墩果烷型皂苷。PAS被公認為是控制2，3-氧化角鯊烯流向齊墩果烷型皂苷合成途徑的關(guān)鍵酶。
[0005]本研究首次利用第二代Solexa HiSeq2000進行珠子參全株的轉(zhuǎn)錄組測序及Denovo拼接。分析找到珠子參中編碼香樹素合酶的候選基因并進行體外克隆表達，驗證其功能，為珠子參齊墩果烷型皂苷的生物合成提供理論基礎(chǔ)。
[0006]在本發(fā)明被公布之前，尚未有任何公開報道過本專利申請中所提及的珠子參香樹素合酶基因及其氨基酸序列，此基因編碼的酶在珠子參中齊墩果烷型皂的生物合成的過程中有重要的作用，本研究認為體外克隆該基因是利用基因工程方法和技術(shù)來調(diào)控珠子參中齊墩果烷型皂苷化合物生物合成的關(guān)鍵點。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種珠子參β_香樹素合酶(PBMS)基因，其序列為SEQID N0.1所示。該基因編碼的香樹素合酶催化2，3-氧化角鯊烯生成β-香樹素，在齊墩果烷型五環(huán)三萜皂苷合成途徑中起關(guān)鍵性作用，可通過調(diào)節(jié)酶量提高齊墩果烷型皂苷合成量。
[0008]本發(fā)明的第二個目的是提供一種珠子參香樹素合酶(PBPAS)基因編碼的蛋白質(zhì)，其序列為SEQ ID N0.2所示。
[0009]本發(fā)明的最后一個目的在于珠子參香樹素合酶(PBPAS)基因在提高珠子參齊墩果烷型皂苷含量中的應(yīng)用。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化將其導(dǎo)入到珠子參中，可提高珠子參中齊墩果烷型皂苷的含量。
[0010]為了達到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施:
[0011]一種珠子參β_香樹素合酶(PBMS)基因(以下稱為PB MS基因)，其制備方法如下:
[0012]以珠子參cDNA為模板，利用正向引物Pl:5’ATGTGGAAGCTTAAAATTGCAGAGG3’ ；反向引物 P2:5’TCAGACGCTTTTAGATGGTAATCG 3’ 進行 PCR 反應(yīng)。
[0013]反應(yīng)條件:35個PCR反應(yīng)循環(huán)，94°C變性lmin，42°C退火2min，75°C延伸3min。最后 75°C延伸 1min0
[0014]最終獲得了 PBPAS基因，其序列為SEQ ID N0.1所示，編碼的蛋白質(zhì)為SEQ IDN0.2所示。
[0015]一種珠子參香樹素合酶(PBPAS)基因在提高珠子參齊墩果烷型皂苷含量中的應(yīng)用，其應(yīng)用過程如下:
[0016]將珠子參β -香樹素合酶蛋白質(zhì)(SEQ ID N0.2所示)對應(yīng)的PB β AS基因(優(yōu)選SEQ ID N0.1所示核苷酸序列)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)入珠子參，可獲得高齊墩果烷型皂苷含量的的轉(zhuǎn)基因植株。
[0017]本發(fā)明的所要保護的內(nèi)容還包括:編碼SEQ ID N0.2所示氨基酸的核苷酸序列；優(yōu)選SEQ ID N0.1所示的核苷酸序列。
[0018]含有本發(fā)明的珠子參β -香樹素合酶(PB β AS)基因全序列或其ORF序列的重組載體，如原核類載體，真核類表達載體及RNAi載體均屬于本發(fā)明的保護范圍，包括但不限于 pBI121，pCAMBIA1301。
[0019]含有本發(fā)明的珠子參β_香樹素合酶(PBMS)基因全序列或其ORF序列的宿主細胞，如含有上述的重組載體的宿主細胞也屬于本發(fā)明的保護范圍，所述的宿主細胞包括但不限于酵母菌、大腸桿菌、珠子參。
[0020]本發(fā)明的珠子參香樹素合酶(PBiiAS)基因的應(yīng)用，包括用所述的重組載體，如植物表達載體轉(zhuǎn)化植物細胞；或者用所述含有該基因的農(nóng)桿菌與植物細胞共培養(yǎng)，得到轉(zhuǎn)基因的植物發(fā)根系；或者用所述的發(fā)根細胞再生植株；或者用所述的珠子參β -香樹素合酶(PBiiAS)基因全序列或其ORF序列的轉(zhuǎn)化獲得轉(zhuǎn)基因生物體，所述的轉(zhuǎn)基因生物體包括但不限于煙草、酵母、擬南芥、珠子參發(fā)根。
[0021]本發(fā)明中宿主細胞為原核細胞或者真核細胞。常用的原核宿主細胞包括大腸桿菌；常用的真核宿主細胞包括酵母細胞、煙草細胞和其它植物細胞。
[0022]利用本發(fā)明的珠子參香樹素合酶(PB β AS)，通過各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與珠子參β_香樹素合酶(PBPAS)發(fā)生相互作用的物質(zhì)，或者受體、抑制劑或拮抗劑等。
[0023]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點:
[0024]本發(fā)明所提供的珠子參香樹素合酶(PBPAS)基因是首次從珠子參植物中克隆制備所得，利用本發(fā)明的技術(shù)可以對珠子參等含有同類化合物的藥用植物進行基因工程改造，通過轉(zhuǎn)基因來提高植物體內(nèi)的齊墩果烷型皂苷的含量。珠子參β_香樹素合酶(PB β AS)基因可參與珠子參齊墩果烷型皂苷的生物合成，因此本專利為珠子參齊墩果烷型皂苷生物合成的進一步研究和工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。
[0025]進一步添加其產(chǎn)業(yè)上積極的效果本發(fā)明利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)得到了齊墩果烷型皂苷含量增加的高產(chǎn)株，為齊墩果烷型皂苷的的工業(yè)化生產(chǎn)提供了技術(shù)支撐。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1為珠子參總RNA電泳圖。
[0027]圖2為PB β AS功能域預(yù)測分析。
[0028]圖3為PB β AS系統(tǒng)進化樹。
[0029]圖4為表達載體pYES2-PB β AS構(gòu)建示意圖。
[0030]圖5為酶活力檢測示意圖。

【具體實施方式】
[0031]本發(fā)明所述方案如未特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)方案，所用試劑如未特別說明，均購自生化商店。
[0032]實施例1:
[0033]珠子參轉(zhuǎn)錄組測序及數(shù)據(jù)分析
[0034]1、樣品采集
[0035]珠子參(Panaxjaponicus C.A.Mey.var.major (Buck.) C.Y Wu et K.M.Fen g)植株來源于湖北恩施，分別取根莖、葉、花，果實置液氮中速凍后，在-80°C冰箱中冷凍保存?zhèn)溆谩?br> [0036]2、珠子參總RNA的分離和檢測
[0037]對_80°C保存的各類樣本于液氮中充分研磨，然后采用優(yōu)化的Trizol法對樣本進行總RNA的提取，全過程保證在低溫條件下進行，加入一定濃度的PVP溶液(聚乙烯吡咯烷酮)，并適當加大β -巰基乙醇的濃度，離心去除PVP和β -巰基乙醇后，采用高濃度NaAc溶液析出RNA，DNase去除殘留DNA完成RNA的純化。用1.0%瓊脂糖電泳檢測RNA的完整性(圖1)，用Nanodrop2000核酸定量儀測定A260、A280比值和濃度，RNA樣本置于_80°C冰箱備用。
[0038]3、轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-Seq)
[0039]用oligo(dT)的磁珠從總 RNA 中富集 mRNA,接加入 fragmentat1n buffer 將mRNA打斷成短片段，以mRNA為模板,用六堿基隨機引物(random hexamers)合成第一條cDNA鏈,然后加入緩沖液、dNTPs、RNase H和DNA polymerase I合成第二條cDNA鏈,在經(jīng)過QiaQuick PCR試劑盒純化并被EB緩沖液洗脫之后進行末端修復(fù)、加poly (A)并連接測序接頭，瓊脂糖凝膠電泳分離并選擇片段大小，PCR擴增構(gòu)建測序文庫，利用第二代SolexaHiSeq2000進行RNA測序，及De novo拼接。
[0040]4、候選基因初步篩選
[0041]通過GO注釋，Blast比對分析以及MEGA5.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(圖3)等軟件分析初步篩選到珠子參中編碼香樹素合酶的候選基因。
[0042]實施例2:
[0043]珠子參β -香樹素合酶基因的克隆
[0044]分析候選基因讀碼框范圍，以珠子參根莖cDNA文庫為模板利用正向引物Pl: 5' ATGTGGAAGCTTAAAATTGCAGAGG 3’ ；反向引物 P2:5’TCAGACGCTTTTAGATGGTAATCG 3’ 克隆候選基因全長序列，鏈接到克隆載體PMD18-T上并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細胞E.coliDH5a中，步驟如下:
[0045]a)從_80°C超低溫冰箱中取100 μ L感受態(tài)細胞懸液，解凍后置于冰上；
[0046]b)加入5 μ L連接產(chǎn)物，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min ；
[0047]c) 42°C熱激90s，迅速置冰上5min ；
[0048]d)向EP管中加入lmL LB液體培養(yǎng)基(不含抗生素)，37°C 200rpm 45min ；
[0049]e)搖菌后取100 μ L菌液涂布于含抗生素的平板上，37°C培養(yǎng)箱過夜；
[0050]f)挑取單菌落于4mL含抗生素的LB液體培養(yǎng)基中，37°C 200rpm振蕩培養(yǎng)過夜選取陽性克隆送樣測序。
[0051]至此獲得了珠子參β -香樹素合酶基因，其序列為SEQ ID N0.1所示。
[0052]實施例3:
[0053]ΡΒ β AS基因的生物信息學(xué)分析
[0054]本發(fā)明涉及的珠子參β -香樹素合酶(ΡΒβ AS)基因全長為2280bp，其序列為SEQID N0.1所示，其中開放讀碼框位于1?2280bp，編碼的蛋白質(zhì)序列為SEQ ID N0.2所示。將拼接分析好的β_香樹素合酶全長序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行Blast。該基因具有典型的ISOP REN_C2_like superfamily 結(jié)構(gòu)域，如圖 2。
[0055]實施例4:
[0056]ΡΒβ AS基因功能的研究
[0057]1、表達載體的構(gòu)建
[0058]依據(jù)珠子參β AS基因全長序列(SEQ ID N0.1)的0RF，設(shè)計擴增完整開放閱讀框的引物，分別在正、反向引物上分別弓丨入限制性酶切位點ΚρηΙ和Xhol，利用正向引物P1:5’ GGTACCATGTGGAAGCTTAAAATTGCAGAGG3’ 反向引物 P2:5’ CTCGAGTCAGACGCTTTTAGATGGTAATCG3’進行PCR反應(yīng)，進行瓊脂糖凝膠電泳，30min后照相，觀察膠圖，擴增片段為2292bp，ΤΑ克隆，提取質(zhì)粒。以ΚρηΙ和Xhol酶切擴增產(chǎn)物2h，利用回收試劑盒(Takara公司，中國)純化酶切產(chǎn)物。同時利用ΚρηΙ和Xhol酶在37°C下酶切pYES2載體2h，進行瓊脂糖凝膠電泳，觀察膠圖，并利用試劑盒回收大小約5856bp的片段。
[0059]二者經(jīng)連接酶在16°C連接過夜。轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞，在含有氨芐青霉素的LB平板上篩選重組子。PCR檢測陽性菌斑，提取陽性克隆質(zhì)粒，進行限制性內(nèi)切酶酶切電泳鑒定，保存且有正確目標的重組質(zhì)粒PYES2-PB β AS用于表達轉(zhuǎn)化。該表達載體命名為PYES2-PB β AS (圖 4)。
[0060]2、蛋白的誘導(dǎo)表達
[0061]以PYES2-PB β AS質(zhì)粒轉(zhuǎn)化突變酵母宿主菌GIL77，在缺少尿嘧啶的完全合成培養(yǎng)基SC-U(20ug/ml麥角固醇，13ug/ml血紅素，5mg/mlTween80)上30°C震蕩培養(yǎng)2d，收集細胞在不含葡萄糖的SC-υ培養(yǎng)基(20ug/ml麥角固醇，13ug/ml血紅素,5mg/mlTween80, 2%半乳糖)上30°C培養(yǎng)10h.收集細胞懸浮于0.1Μ，ρΗ7.0的磷酸鉀溶液中添加3%葡萄糖和血紅素30°C培養(yǎng)24h?；厥站w，分離微粒體，純化蛋白。
[0062]3、酶促反應(yīng)鑒定
[0063]對表達純化的β -香樹素合酶進行酶活力的檢測，加入2ug的純化表達蛋白到反應(yīng)體系0.1M磷酸鉀緩沖液(ρΗ7.5)，2，3-環(huán)氧角鯊烯，1禮的001'，111^/1111的BAS，0.05%的T riton Χ-100。2，3-環(huán)氧角鯊烯作為反應(yīng)底物，底物濃度越高產(chǎn)生的β -香樹素含量越高。反應(yīng)總體系在37°C下預(yù)孵20min。在100°C下加熱3min終止反應(yīng)，用氯仿提取反應(yīng)產(chǎn)物。檢測香樹素的含量，當添加的底物2，3-環(huán)氧角鯊烯濃度越高時產(chǎn)生的β-香樹素含量越高，反應(yīng)速率隨著香樹素合酶的減少而逐漸減少，如圖5。
[0064]實施例5:
[0065]珠子參香樹素合酶在提高珠子參中齊墩果烷型皂苷含量中的應(yīng)用，其步驟如下:
[0066]轉(zhuǎn)基因用的受體材料珠子參(Panaxjaponicus C.A.Mey.var.major (Buck.) C.Yffu et Κ.M.Feng)采自湖北恩施。
[0067]根據(jù)珠子參β -香樹素合酶基因的全長cDNA序列(SEQ ID N0.1)，在擴增編碼區(qū)的正反方向引物上引入限制性內(nèi)切酶位點(視選用的載體而定)，構(gòu)建植物表達載體，通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)入珠子參，篩選轉(zhuǎn)基因植株檢測其齊墩果烷型皂苷的含量。
[0068]以實施例2中獲得的含有ΡΒ β AS基因編碼區(qū)(SEQ ID N0.1所示)的pMD18_T為模版，在上述構(gòu)建的正向引物前引入BamH I酶切位點，在反向引物前引入Sac I酶切位點，正向引物 P1:5’ GGATCCATGTGGAAGCTTAAAATTGCAGAGG3';反向引物 P2:5’ GAGCTCTCAGACGCTTTTAGATGGTAATCG3’進行PCR擴增后，TA克隆，提取質(zhì)粒。以BamH I和Sac I酶切擴增產(chǎn)物4h，利用回收試劑盒(Takara公司，中國)純化酶切產(chǎn)物。同時利用BamH I和Sac I酶在37°C下酶切pBI121載體4h，，在16°C下利用T4連接酶連接產(chǎn)物過夜在保證閱讀框正確的前提下將珠子參PAS基因的編碼區(qū)克隆到植物表達載體pBI 121上，將酶切鑒定好的表達載體PBI121- β AS轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中，遺傳轉(zhuǎn)化珠子參。
[0069]利用發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的珠子參的遺傳轉(zhuǎn)化，所需的材料和操作步驟如下:
[0070]發(fā)根農(nóng)桿菌A4，使用前自冰箱中取出，用YEB培養(yǎng)基傳代2次，菌種在使用前接種于YEB液體培養(yǎng)基中，28 °C培養(yǎng)過夜。
[0071]取珠子參細嫩葉片，洗凈后置于70%酒精中浸泡lmin，棄酒精，加入2%次氯酸鈉消毒lOmin，期間搖動數(shù)次，棄去消毒液，用無菌水漂洗4?5次，置于無菌濾紙上晾干，用無菌刀片將珠子參葉片切成5mmX 5mm小片，置于預(yù)培養(yǎng)固體培養(yǎng)基上，在(23±1)°C暗箱培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)2d。
[0072]經(jīng)過夜培養(yǎng)的發(fā)根農(nóng)桿菌A4菌液離心后，菌體沉淀用1/2MS重懸，置于4°C中2h后取出。將預(yù)培養(yǎng)過的珠子參葉片浸泡于1/2MS重懸的菌液中5min，用無菌濾紙吸去多余菌液，放入含250-500mg/L卡那霉素的1/2MS固體培養(yǎng)基中，(23± 1) °C黑暗條件下培養(yǎng)，每2周轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基中1次，待長出毛狀根后分離毛狀根，轉(zhuǎn)移至含250-500mg/L卡那霉素的無激素1/2MS固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，每2周轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基中至無菌為止，然后再轉(zhuǎn)移至不含卡那霉素的無激素1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0073]把在固體培養(yǎng)基上的毛狀根繼代培養(yǎng)物接種于裝有150ml無激素1/2MS液體培養(yǎng)基的500ml三角瓶中，培養(yǎng)溫度、光照、轉(zhuǎn)速等培養(yǎng)條件與愈傷組織液體懸浮培養(yǎng)條件相同，培養(yǎng)25d后，將毛狀根從培養(yǎng)基中取出放入冷凍干燥機中進行干燥，然后稱重，貯存-80°C中備用。
[0074]陽性株篩選步驟如下:
[0075]提取具有卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)化珠子參植株的總RNA，利用Takara反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，半定量所用引物為珠子參珠子參β-香樹素合酶基因特異引物(正向引物 5’ -CACTGTCGGATGGTTTAT-3’ ；反向引物 5’ -TAGCGAGGTGCTTCTTG-3，)，反應(yīng)程序為 94°C時3分鐘，94°C變性30秒，61°C退火30秒，72°C延伸45秒，25個循環(huán)；循環(huán)完成后72°C延伸5分鐘。用植物beta-actin基因做為內(nèi)參基因(正向引物5’ -GGAAAAGATTTGGCATC-3’，反向引物5’ -GGGCGTAACCCTCATA-3’)。對珠子參的野生型和轉(zhuǎn)化系在相同生長狀態(tài)下進行目的基因表達水平的分析。選擇相對于野生型植株，基因表達量的Fold-change值高于4倍以上(P〈0.01)的轉(zhuǎn)化植株作為陽性株進行后續(xù)的目的物質(zhì)的含量檢測。
[0076]過表達珠子參香樹素合酶基因的轉(zhuǎn)基因珠子參發(fā)根的齊墩果烷型皂苷化合物含量測定:
[0077]根據(jù)2010版《中華人民共和國藥典》，人參屬植物中的皂苷都為三萜皂苷。
[0078]轉(zhuǎn)基因珠子參發(fā)根中齊墩果烷型皂苷的檢測可使用本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)，本發(fā)明具體采用以下步驟:
[0079]發(fā)根系樣品的前處理:用研缽將樣品研磨成粉末，過4號篩，各取0.lg放入具塞錐形瓶中，加入5ml甲醇，稱定重量，超聲處理(250 W、50 kHz)40min，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾；量取續(xù)濾液，回收溶劑至干，殘渣加20ml 25%鹽酸、25ml氯仿，力口熱水解lh，水解物用氯仿振搖提取(25mlX2)，合并提取液，回收溶劑至干，殘渣加甲醇溶液并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇定容，過濾，續(xù)濾液即為樣品溶液。
[0080]參考袁丁等(華西藥學(xué)雜志，2008，23 ￠) =692-694)的高效液相色譜法，對過表達珠子參β AS基因的轉(zhuǎn)基因發(fā)根系進行齊墩果烷型皂苷的含量測定，非轉(zhuǎn)基因的野生型珠子參的發(fā)根系為對照組，每組各測20株。標準品為齊墩果酸，購自中國藥品生物制品檢定所(批號:110709-200505)。
[0081]測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在過表達珠子參β AS基因的轉(zhuǎn)基因珠子參發(fā)根中齊墩果烷型皂苷的平均含量比非轉(zhuǎn)基因?qū)φ战M平均含量提高了 1.4倍(P〈0.05)。由此證明，珠子參β -香樹素合酶基因?qū)Υ龠M珠子參齊墩果烷型皂苷化合物含量的提高有顯著作用，珠子參β -香樹素合酶基因可用于利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高齊墩果烷型皂苷含量的研究和產(chǎn)業(yè)化中，具有一定的應(yīng)用前景。
【權(quán)利要求】
1.一種分離的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列為SEQ ID N0.2所示。
2.編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的核苷酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核苷酸序列，其序列為SEQID N0.1所示。
4.含有權(quán)利要求2所述核苷酸序列的植物表達載體。
5.含有權(quán)利要求4所述植物表達載體的轉(zhuǎn)基因植株。
6.權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)或權(quán)利要求2所述的基因在提高植物齊墩果烷型皂苷含量中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于:權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)或權(quán)利要求2所述的基因在提高珠子參齊墩果烷型皂苷含量中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)或權(quán)利要求2所述的基因在提高珠子參齊墩果烷型總皂苷含量中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01H5/00GK104293758SQ201410474222
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月17日
【發(fā)明者】陳平, 張紹鵬, 陳燕, 楊濤, 朱聞君, 曾萬勇, 霍夢蕊, 伍翀, 王如峰, 鄧琛 申請人:陳平, 張紹鵬, 陳燕, 楊濤, 朱聞君, 曾萬勇, 霍夢蕊, 伍翀, 王如峰, 鄧琛