一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，步驟為：S1.配置富含無(wú)機(jī)硒的液態(tài)培養(yǎng)基，滅菌后，接種黑曲霉孢子而進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng)，獲得黑曲霉液態(tài)菌種；S2.配置固態(tài)培養(yǎng)基，滅菌后，接種S1的黑曲霉液態(tài)培養(yǎng)基，進(jìn)行黑曲霉固態(tài)發(fā)酵；S3.配置液態(tài)培養(yǎng)基，滅菌后，接入黑柄炭角菌種子，進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng)以獲得黑柄炭角菌液態(tài)菌種；S4.將S2的黑曲霉固態(tài)發(fā)酵物滅菌后，接入S3的黑柄炭角菌液態(tài)菌種，然后進(jìn)行培養(yǎng)；S5.收獲S4生長(zhǎng)的烏靈參子實(shí)體，得到富含有機(jī)硒的烏靈參子實(shí)體；S6.洗滌經(jīng)采收后剩余的固態(tài)培養(yǎng)物，除去未經(jīng)轉(zhuǎn)化的無(wú)機(jī)硒后經(jīng)干燥，獲得固態(tài)發(fā)酵的富硒烏靈參。該方法在獲得高產(chǎn)富硒子實(shí)體的同時(shí)，獲得富硒的固態(tài)發(fā)酵菌絲體。
【專利說(shuō)明】—種同時(shí)獲得富砸固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富砸烏靈參子實(shí)體的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物發(fā)酵領(lǐng)域，尤其是涉及一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]烏靈參，又名雷震子，吊金鐘，是一種名貴的中藥材，具有除濕、鎮(zhèn)靜安神。造血以及提高機(jī)體免疫功能等功效，對(duì)于治療脾虛食少，產(chǎn)后及手術(shù)后失血過(guò)多，產(chǎn)后乳少，胃下垂，病氣，心悸失眠及小兒驚風(fēng)，跌打損傷等癥都有明顯的作用。研究表明，烏靈參是黑柄炭角菌(Xylaria nigripes (K1.) Sacc)在廢棄的白蟻巢穴里形成的菌核，民間又稱之為雞揪蛋。
[0003]在野外，黑柄炭角菌菌絲體通常密布于廢棄的蟻巢菌圃上，生長(zhǎng)后期部分菌絲密集成菌索向上生長(zhǎng)，穿過(guò)地面形成子實(shí)體，部分菌絲密集成菌絲組織體即形成菌核，懸于蟻巢腔壁上或菌圃上。需要說(shuō)明的是，子實(shí)體部分和菌核部分均可以入藥(陳士瑜，陳海因編著，蕈菌醫(yī)方集成)。
[0004]除可以作為藥用的子實(shí)體和菌核外，浙江佐力藥業(yè)股份有限公司還以液態(tài)發(fā)酵的方式，獲得了黑柄炭角菌的發(fā)酵菌絲體，即發(fā)酵烏靈菌粉，并于1998年獲得國(guó)家衛(wèi)生部頒發(fā)的一類中藥新藥證書(shū)。同時(shí)對(duì)新藥進(jìn)行了鎮(zhèn)靜安眠、益智健腦、抗貧血、扶正固本等相關(guān)的藥效試驗(yàn)。證明能明顯增強(qiáng)中樞神經(jīng)的鎮(zhèn)靜作用，改善各種記憶障礙；具有腦保護(hù)作用，能增強(qiáng)機(jī)體免疫力，在失血性貧血的情況下，能顯著地回升血紅蛋白和紅細(xì)胞的數(shù)量；同時(shí)還具有耐缺氧和抗疲勞作用，充分體現(xiàn)扶正固本、增強(qiáng)體質(zhì)的功效。有報(bào)道其對(duì)前列腺增生自覺(jué)癥狀的總有效率為96.9%，較前列康片93%高。此外中國(guó)專利CN96106492.7也公開(kāi)了一種通過(guò)液態(tài)深層發(fā)酵獲得烏靈參發(fā)酵菌絲體的方法，并發(fā)現(xiàn)該菌絲體具有增強(qiáng)免疫力，抗腫瘤促進(jìn)生長(zhǎng)、腦保護(hù)以及治療女性痛經(jīng)等效果。由此可見(jiàn)，其菌絲體亦可藥用。
[0005]翁榕安(黑柄炭角菌的人工栽培技術(shù)及部分活性成分研究，碩士學(xué)位論文，2009年)對(duì)黑柄炭角菌的人工栽培技術(shù)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，也分析了子實(shí)體和菌核的營(yíng)養(yǎng)成分。但其以獲得子實(shí)體為目的，完全忽略了固態(tài)菌絲體的應(yīng)用，同時(shí)，子實(shí)體的產(chǎn)量也過(guò)低。
[0006]硒為人體所必須得營(yíng)養(yǎng)微量元素，我國(guó)是國(guó)際公認(rèn)的缺硒大國(guó)。國(guó)外流行病學(xué)及地方病學(xué)研究表明，硒攝入量的不足是引起腫瘤，心腦血管疾病，肝病、糖尿病、克山病，白內(nèi)障、近視眼等40余種疾病的病因。研究表明，利用有機(jī)硒作為人體必需微營(yíng)養(yǎng)的補(bǔ)充劑型，在人體滯留時(shí)間長(zhǎng)， 對(duì)硒元素的代謝吸收和生物利用率高，在最大安全攝入量范圍內(nèi)無(wú)毒性反應(yīng)。且不與其他類藥物產(chǎn)生拮抗作用。若以無(wú)機(jī)硒鹽作為人體必需微營(yíng)養(yǎng)的補(bǔ)充劑型，無(wú)機(jī)硒在體內(nèi)停留時(shí)間短，人體吸收利用率低，最大安全量范圍內(nèi)，若短時(shí)間內(nèi)過(guò)量攝入，容易造成急性中毒。因此，長(zhǎng)期以來(lái)，人們首選有機(jī)硒作為補(bǔ)充硒的來(lái)源。因此，各種富含有機(jī)砸的方法和廣品不斷涌現(xiàn)，如富砸酵母，富砸大米等等。但富砸烏靈參子實(shí)體和固態(tài)發(fā)酵富硒烏靈參菌粉卻未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的就是為了解決上述問(wèn)題，提供一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其可以在獲得高產(chǎn)富硒子實(shí)體的同時(shí)，獲得富硒的固態(tài)發(fā)酵菌絲體。不但可以節(jié)約資源，還能使烏靈參子實(shí)體和菌絲體中的有機(jī)硒大幅提高，從而強(qiáng)化其功效。 [0008]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0009]一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，包括如下步驟:
[0010]S1.配置富含無(wú)機(jī)硒的液態(tài)培養(yǎng)基，在滅菌后，接種入黑曲霉孢子而后進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng)，獲得黑曲霉液態(tài)菌種；
[0011]S2.配置固態(tài)培養(yǎng)基，在滅菌后，接種入SI的黑曲霉液態(tài)培養(yǎng)基，進(jìn)行黑曲霉固態(tài)發(fā)酵；
[0012]S3.配置液態(tài)培養(yǎng)基，滅菌后，接入黑柄炭角菌種子，進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng)以獲得黑柄炭角菌液態(tài)菌種；
[0013]S4.將S2犾得的黑曲霉固態(tài)發(fā)酵物進(jìn)彳丁滅囷后,接入S3的黑柄炭角囷液態(tài)囷種，然后進(jìn)行培養(yǎng)；
[0014]S5.收獲S4生長(zhǎng)的烏靈參子實(shí)體,得到富含有機(jī)硒的烏靈參子實(shí)體；
[0015]S6.洗滌經(jīng)采收后剩余的固態(tài)培養(yǎng)物，除去其中未經(jīng)轉(zhuǎn)化的無(wú)機(jī)硒后經(jīng)干燥，獲得固態(tài)發(fā)酵的富硒烏靈參。
[0016]步驟SI中，滅菌條件為:溫度121°C，時(shí)間25min。
[0017]步驟SI中，接種入黑曲霉孢子而后進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng)，其條件為:150-200rpm(優(yōu)選180rpm)，28-37°C (優(yōu)選 35-37°C )下培養(yǎng) 48-96 (優(yōu)選 72)小時(shí)。
[0018]步驟SI中，液態(tài)培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)硒為亞硒酸鈉、硒酸鈉中的一種或者兩種的組合，且硒鹽的濃度為0.l-5g/L。
[0019]步驟SI中，液態(tài)培養(yǎng)基除無(wú)機(jī)硒外，還包括黑曲霉生長(zhǎng)所需的碳源、氮源以及微
量元素。
[0020]步驟S2中，滅菌條件為:121°C，時(shí)間45min。
[0021]步驟S2中，黑曲霉固態(tài)發(fā)酵時(shí)間為24_96h(優(yōu)選48_96h，進(jìn)一步優(yōu)化在于48-72h)，溫度28-37 0C (優(yōu)選32 °C )，靜止培養(yǎng)。
[0022]步驟S2中，固態(tài)培養(yǎng)基為可食用的大米、碎米、麥子、蕎麥、黃豆粉、麩皮、藥食同源的百合、蓮子、大豆、麥粒中的一種或者多種的組合物，固態(tài)培養(yǎng)基的含水量為30% -45%，優(yōu)選 40%。
[0023]步驟S2中，黑曲霉液態(tài)菌種的接種量為5-15% (V/W)，優(yōu)選8_10% (V/W)。
[0024]步驟S3中，培養(yǎng)條件:溫度28°C，相對(duì)濕度為80%，避光的條件下培養(yǎng)7_8天后，在1000lex散光條件下培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出的子實(shí)體變黑后，采收。
[0025]步驟S4中，滅菌條件為:121°C，時(shí)間lOmin。
[0026]步驟S4中，黑柄炭角菌液態(tài)菌種的接種量為8-15% (V/W)，優(yōu)選10_15% (V/W)。[0027]步驟S4中，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度22-30 V (優(yōu)選22-28攝氏度)，濕度60-90 %，避光培養(yǎng)，直到菌絲布滿整個(gè)發(fā)酵瓶后給予一定的散射光以利于子實(shí)體的形成待子實(shí)體粗壯，且完全變黑后，進(jìn)行采收，采收后的子實(shí)體進(jìn)行干燥，即獲得富含有機(jī)硒的烏靈參子實(shí)體。采收后的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)基上會(huì)二次長(zhǎng)出子實(shí)體。待其變黑后將其采收，干燥獲得富含有機(jī)硒的烏靈參子實(shí)體。將培養(yǎng)基倒出，用水洗滌未轉(zhuǎn)化的無(wú)機(jī)硒后將培養(yǎng)基干燥，即獲得富含有機(jī)硒的烏靈參固態(tài)發(fā)酵菌絲體。
[0028]固態(tài)發(fā)酵菌絲體是烏靈參經(jīng)過(guò)二次出菇后，留下的含有豐富有機(jī)硒烏靈參菌絲體的固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)。
[0029]發(fā)明人經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，在黑曲霉菌液態(tài)培養(yǎng)基中加入無(wú)機(jī)硒，使得黑曲霉經(jīng)歷了在液態(tài)、固態(tài)下長(zhǎng)時(shí)間的轉(zhuǎn)化，有利于更多的無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化成有機(jī)硒。剩余的無(wú)機(jī)硒，在黑柄炭角菌的二次轉(zhuǎn)化下，其轉(zhuǎn)化率更高。
[0030]本發(fā)明具有如下有益效果:
[0031](I)通過(guò)第一次黑曲霉菌種的發(fā)酵，并在液態(tài)培養(yǎng)基中加入無(wú)機(jī)硒，可以克服黑柄炭角菌將無(wú)機(jī)硒轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒能力不強(qiáng)的特點(diǎn)。
[0032](2)黑柄炭角菌在經(jīng)過(guò)黑曲霉發(fā)酵后的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)更為迅速?？梢钥s短整個(gè)生產(chǎn)周期。
[0033](3)黑柄炭角菌在經(jīng)過(guò)黑曲霉發(fā)酵后的培養(yǎng)基上其子實(shí)體的產(chǎn)量更大。 [0034](4)固態(tài)培養(yǎng)基采用完全可以食用的成分組成，使得其采收子實(shí)體后，可以作為固態(tài)發(fā)酵菌體應(yīng)用，從而極大提高資源的使用效率。
[0035](5)黑柄炭角菌在經(jīng)過(guò)黑曲霉發(fā)酵后的基質(zhì)上進(jìn)行二次發(fā)酵，更有利其主要活性成分腺苷的產(chǎn)生，從而提升其功效。
【具體實(shí)施方式】
[0036]為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0037]實(shí)施例1:
[0038]配置黑曲霉液態(tài)培養(yǎng)基:葡萄糖4%，蛋白胨2%，亞硒酸鈉lg/L，其余為水，滅菌條件為121°C，25min。冷卻到室溫后，接種黑曲霉孢子。在180rpm，35°C下培養(yǎng)72小時(shí)，SP得黑曲霉液態(tài)菌種。
[0039]固態(tài)培養(yǎng)基配置:碎米加入35%的水分，蒸熟透，倒出捏散，然后裝入發(fā)酵瓶中，滅菌條件:121°C，滅菌45min，就熱搖散。冷卻到室溫后，接種黑曲霉液態(tài)種，接種量為10%(V/W)。
[0040]黑曲霉發(fā)酵培養(yǎng):將接種好黑曲霉的固態(tài)培養(yǎng)物，置于32°C，培養(yǎng)72h。待培養(yǎng)結(jié)束后，在121 C條件下，滅囷lOmin。就熱搖散，然后接入黑柄炭角囷。接種量為10% (V/W)。
[0041]黑柄炭角菌的培養(yǎng):接種好黑柄炭角菌的固態(tài)培養(yǎng)物，置于28°C下，相對(duì)濕度為80%，避光的條件下濕度條件下培養(yǎng)8天后，在lOOOlex散光條件下培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出的子實(shí)體變黑后，采收。采收后的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，待二次長(zhǎng)出子實(shí)體且變黑后，采收。采收后的培養(yǎng)基，用水洗滌，干燥即獲得富含有機(jī)硒的烏靈參固態(tài)發(fā)酵菌絲體。[0042]對(duì)照試驗(yàn)(參見(jiàn)表1):對(duì)照實(shí)驗(yàn)為固態(tài)培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，直接接種黑柄炭角菌液態(tài)菌種，然后進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)二次采收子實(shí)體后，培養(yǎng)基質(zhì)經(jīng)水洗滌后，干燥即得。
[0043]表1
【權(quán)利要求】
1.一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，包括如下步驟: 51.配置富含無(wú)機(jī)硒的液態(tài)培養(yǎng)基，在滅菌后，接種入黑曲霉孢子而后進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng)，獲得黑曲霉液態(tài)菌種； 52.配置固態(tài)培養(yǎng)基，在滅菌后，接種入SI的黑曲霉液態(tài)培養(yǎng)基，進(jìn)行黑曲霉固態(tài)發(fā)酵； 53.配置液態(tài)培養(yǎng)基，滅菌后，接入黑柄炭角菌種子，進(jìn)行液態(tài)培養(yǎng)以獲得黑柄炭角菌液態(tài)菌種； 54.將S2獲得的黑曲霉固態(tài)發(fā)酵物進(jìn)行滅菌后，接入S3的黑柄炭角菌液態(tài)菌種，然后進(jìn)行培養(yǎng)； 55.收獲S4生長(zhǎng)的烏靈參子實(shí)體,得到富含有機(jī)硒的烏靈參子實(shí)體； 56.洗滌經(jīng)采收后剩余的固態(tài)培養(yǎng)物，除去其中未經(jīng)轉(zhuǎn)化的無(wú)機(jī)硒后經(jīng)干燥，獲得固態(tài)發(fā)酵的富硒烏靈參。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟SI中，液態(tài)培養(yǎng)基的無(wú)機(jī)硒為亞硒酸鈉、硒酸鈉中的一種或者兩種的組合，且硒鹽的濃度為0.l-5g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1 或2所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟Si中，液態(tài)培養(yǎng)基除無(wú)機(jī)硒外，還包括黑曲霉生長(zhǎng)所需的碳源、氮源以及微量元素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟S2中，黑曲霉固態(tài)發(fā)酵時(shí)間為24-96h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟S2中，固態(tài)培養(yǎng)基為可食用的大米、麥子、蕎麥、黃豆粉、麩皮、藥食同源的百合、蓮子、大豆中的一種或者多種的組合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟S2中，黑曲霉液態(tài)菌種的接種量為5-15% (V/W)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟S4中，黑曲霉發(fā)酵完成后，進(jìn)行滅菌條件為:滅菌溫度121°C、時(shí)間IOmin。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟S4中，黑柄炭角菌液態(tài)菌種的接種量為8-15% (V/W)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，步驟S4中，培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度22-30°C，濕度60-90%。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)獲得富硒固體發(fā)酵菌絲體和高產(chǎn)富硒烏靈參子實(shí)體的方法，其特征在于，固態(tài)發(fā)酵菌絲體是烏靈參經(jīng)過(guò)二次出菇后，經(jīng)過(guò)洗去無(wú)機(jī)硒后，留下的含有豐富有機(jī)硒烏靈參菌絲體的固態(tài)發(fā)酵基質(zhì)。
【文檔編號(hào)】C05D9/02GK103999691SQ201410242158
【公開(kāi)日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年5月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月30日
【發(fā)明者】陳小林, 趙敏, 邵麗芳, 王瑞 申請(qǐng)人:杭州桐君堂生物科技有限公司