一種添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基、發(fā)酵工藝及發(fā)酵制品的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng) 基、發(fā)酵工藝及發(fā)酵制品。
【背景技術】
[0002] 姬松鸞（Agaricus blazei Murill)是典型的食藥兼用菌。其子實體肉質鮮嫩、氣 香味美，且富含有蛋白質、核酸、多糖類、留醇、維生素等多種活性物質，營養(yǎng)價值極高。其中 的多糖類物質經試驗證明具有顯著的抗腫瘤活性，在具有抗癌功效的己知真菌中居首位。 其在治療癌癥、糖尿病、高血脂、慢性肝炎等方面也具有顯著的醫(yī)療保健作用，是一種極具 開發(fā)價值的食藥用真菌。
[0003] 山藥作為藥食兩用的食品，富含淀粉、氨基酸，還含有黏液多糖、多酚氧化酶、甾體 化合物等。留體化合物具有抗炎、抗過敏、抗腫瘤、解毒等藥理作用，在臨床上有廣泛的用 途。山藥皮作為生活垃圾丟棄，污染環(huán)境浪費資源，不利于資源的綜合利用和建設資源節(jié)約 型環(huán)境友好型社會。近年來，有關姬松茸液體培養(yǎng)基的篩選已有研宄，但以廢棄山藥皮為基 質發(fā)酵姬松茸的有關研宄尚未見報道。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明針對現有技術的不足，目的在于提供一種添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培 養(yǎng)基、發(fā)酵工藝及發(fā)酵制品。
[0005] 為實現上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用的技術方案為：
[0006] 一種添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基，由山藥皮處理液和PDA液體培養(yǎng)基組 成，所述山藥皮處理液為將山藥皮進行超微粉碎處理后的超微粉加水得到的山藥皮超微粉 懸濁液、將山藥皮經水提處理獲得的山藥皮超聲波水提取濃縮液和將山藥皮經醇提處理獲 得的山藥皮醇提取濃縮液中的一種或幾種的組合。
[0007] 按上述方案，所述山藥皮處理液和PDA液體培養(yǎng)基的體積比為1:2~1: 5。
[0008] 按上述方案，每100mL的山藥皮處理液中，所述山藥皮的處理量為9g~llg。
[0009] 按上述方案，所述山藥皮處理液組合時，優(yōu)選為山藥皮超微粉懸濁液：山藥皮超聲 波水提取濃縮液體積比=1:1的組合，或山藥皮超微粉懸濁液：山藥皮超聲波水提取濃縮 液：山藥皮醇提取濃縮液體積比=1:1:1的組合，或山藥皮超聲波水提取濃縮液：山藥皮醇 提取濃縮液體積比=1:1的組合。
[0010] 按上述方案，所述山藥皮超聲波水提取濃縮液是通過如下方法獲得：將廢棄山藥 皮粉碎后加入到水中進行超聲波提取，而后濃縮成濃縮液；所述山藥皮醇提濃縮液通過如 下方法獲得：將廢棄山藥皮粉碎后加入到醇中進行閃式提取，而后濃縮成濃縮液。
[0011] 按上述方案，所述超聲波提取為200W超聲波提取Ih。
[0012] 按上述方案，所述閃式提取的轉速5000r/min，時間為lOmin。
[0013] 按上述方案，所述PDA液體培養(yǎng)基為：將去皮土豆200份加水煮沸后過濾，再加入 蛋白胨2重量份，酵母膏2重量份，磷酸二氫鉀3重量份，硫酸鎂2重量份，加水定容至1000 重量份，pH值自然。
[0014] -種基于上述添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基的姬松茸發(fā)酵工藝，包括如下 步驟：
[0015] (1)姬松茸菌種的活化；
[0016] (2)液體發(fā)酵培養(yǎng)：將活化后的姬松茸菌株接種至添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵 培養(yǎng)基中，調節(jié)培養(yǎng)基的pH為4~7,置于20~28°C下搖床培養(yǎng)5~8d，發(fā)酵結束后，發(fā)酵 液經后處理后得到姬松茸發(fā)酵制品。
[0017] 按上述方案，所述姬松茸菌種的活化為：將姬松茸菌株接種到PDA固體培養(yǎng)基中， 置于25°C下培養(yǎng)3d。
[0018] 按上述方案，所述搖床培養(yǎng)的裝液量為20% -60%，搖床轉速為150r/min。
[0019] 按上述方案，所述的后處理為：將發(fā)酵液離心分離后得上清液①和菌絲體，將菌絲 體干燥、粉碎后置于水中進行超聲波處理、離心，得上清液②，合并上清液①和②并噴霧干 燥。
[0020] 上述發(fā)酵工藝制備得到的姬松茸發(fā)酵制品。
[0021] 本發(fā)明的有益效果為：
[0022] (1)廢棄山藥皮中的淀粉含量較高，可作為姬松茸液體發(fā)酵的碳源，為姬松茸生長 提供充足的碳源，本發(fā)明首次將加工副產物廢棄山藥皮作為發(fā)酵基質添加到姬松茸液體發(fā) 酵培養(yǎng)基中，實現了對廢棄副產物山藥皮的綜合利用，顯著降低了生產成本。進一步，本發(fā) 明利用添加廢棄山藥皮的液體發(fā)酵培養(yǎng)基進行姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)，還可以有效縮短發(fā)酵 時間，提高發(fā)酵效率，還可以顯著提高發(fā)酵液中多糖黃酮的總含量、姬松茸菌絲體的生物量 及菌絲體中多糖黃酮的含量。
[0023] (2)本發(fā)明發(fā)酵制品包含了姬松茸發(fā)酵的胞內提取物和胞外提取物，相比常規(guī)的 姬松茸發(fā)酵制品僅包括單一的胞內提取物而言，本發(fā)明發(fā)酵制品中含有更多的活性物質且 活性物質的抗氧化活性強。
[0024] (3)本發(fā)明所述的發(fā)酵制品可作為活性物質加入功能食品。
【附圖說明】
[0025] 圖1為本發(fā)明姬松茸發(fā)酵工藝路線圖。
[0026] 圖2為對比例和實施例的上清液①和上清液②的DPPH自由基、羥基自由基、超氧 自由基清除率。
【具體實施方式】
[0027] 為了更好地理解本發(fā)明，下面結合實施例進一步闡明本發(fā)明的內容，但本發(fā)明的 內容不僅僅局限于下面的實施例。
[0028] 實施例1
[0029] 一種基于添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基的姬松茸發(fā)酵工藝，具體包括如下 步驟：
[0030] (1)山藥皮處理液：將廢棄山藥皮進行超微粉碎后，取超微粉30g加入300ml水配 置成廢棄山藥皮超微粉懸濁液；
[0031] (2) PDA液體培養(yǎng)基：土豆（去皮）200g加水煮沸半小時過濾，加入蛋白胨2g，酵母 膏2g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂2g，pH值自然定容到1000 ml，取700ml待用；
[0032] (3)混合步驟（1)廢棄山藥皮超微粉水溶液和步驟（2)的PDA液體培養(yǎng)基（山藥 皮處理液/PDA液體培養(yǎng)基=3:7)，得到添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基，調節(jié)培養(yǎng)基 口!1值為6，分裝在25〇1111三角瓶，每瓶裝液量20%(5〇1111)，121°0滅菌151^11 ;
[0033] (4)用已滅菌的鑷子取5mmX 5mm大小、平板活化好的姬松茸菌株接種于步驟（3) 的發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)溫度25°C，轉速150r/min，培養(yǎng)7d ;
[0034] (5)培養(yǎng)結束后分離醪液，得上清液①，抽濾得到菌絲體，干燥至恒重，稱重得到姬 松茸發(fā)酵的菌絲體生物量；
[0035] (6)將姬松茸菌絲體干粉粉碎后加入20倍體積水超聲波200w超聲處理Ih后離 心，得上清液②，合并上清液①和②，并噴霧干燥，得到姬松茸胞內外提取物制品，即姬松茸 發(fā)酵制品。
[0036] 實施例2
[0037] 一種基于添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基的姬松茸發(fā)酵工藝，具體包括如下 步驟：
[0038] (1)山藥皮處理液：取粉碎后的山藥皮25g，加500ml水200w超聲波提取lh，離心 取上清液并濃縮到250ml，即為廢棄山藥皮超聲波水提取濃縮液；
[0039] (2) PDA液體培養(yǎng)基：土豆（去皮）200g加水煮沸半小時過濾，加入蛋白胨2g，酵母 膏2g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂2g，pH值自然定容到1000 ml，取750ml待用；
[0040] (3)混合步驟（1)的廢棄山藥皮超聲波水提取濃縮液和步驟（2)的PDA液體培養(yǎng) 基（山藥皮處理液/PDA液體培養(yǎng)基=1:3)，得到添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基，調 節(jié)培養(yǎng)基pH值為4,分裝在250ml三角瓶，每瓶裝液量30% (75ml)，121 °C滅菌15min ;
[0041] (4)用已滅菌的鑷子取5mmX 5mm大小、平板活化好的姬松茸菌株接種于步驟（3) 的發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)溫度26°C，轉速150r/min，培養(yǎng)5d ;
[0042] (5)培養(yǎng)結束后分離醪液，得上清液①，抽濾得到菌絲體，干燥至恒重，稱重得到姬 松茸發(fā)酵的菌絲體生物量；
[0043] (6)將姬松茸菌絲體干粉粉碎后加入20倍體積水超聲波200w超聲處理Ih后離 心，得上清液②，合并上清液①和②以后噴霧干燥，得到姬松茸胞內外提取物制品，即姬松 茸發(fā)酵制品。
[0044] 實施例3
[0045] 一種基于添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基的姬松茸發(fā)酵工藝，具體包括如下 步驟：
[0046] (1)山藥皮處理液：取粉碎后的山藥皮20g，加入600ml 30vt% (體積濃度）乙醇 閃式提取l〇min，所述閃式提取的轉速5000r/min，離心取上清液揮干乙醇，濃縮到200ml， 即為廢棄山藥皮醇提取濃縮液；
[0047] (2) PDA液體培養(yǎng)基：土豆（去皮）200g加水煮沸半小時過濾，加入蛋白胨2g，酵母 膏2g，磷酸二氫鉀3g，硫酸鎂2g，pH值自然定容到1000 ml，取800ml待用；
[0048] (3)混合步驟⑴的廢棄山藥皮醇提取濃縮液和步驟⑵的PDA液體培養(yǎng)基（山 藥皮處理液/PDA液體培養(yǎng)基=1:4)，得到添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基，調節(jié)培養(yǎng) 基pH值為5,分裝在250ml三角瓶，每瓶裝液量40% (100ml)，121°C滅菌15min ;
[0049] (4)用已滅菌的鑷子取5mmX 5mm大小、平板活化好的姬松茸接種于步驟（3)的發(fā) 酵培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)溫度28°C，轉速150r/min，培養(yǎng)6d ;
[0050] (5)培養(yǎng)結束后分離醪液，得上清液①，抽濾得到菌絲體，干燥至恒重，稱重得到姬 松茸發(fā)酵的菌絲體生物量；
[0051] (6)將姬松茸菌絲體干粉粉碎后加入20倍體積水超聲波200w超聲處理Ih后離 心，得上清液②，合并上清液①和②以后噴霧干燥，得到姬松茸胞內外提取物制品，即姬松 茸發(fā)酵制品。
[0052] 實施例4
[0053] 一種基于添加山藥皮的姬松茸液體發(fā)酵培養(yǎng)基的姬松茸發(fā)酵工藝，具體包括如下 步驟：
[0054] (1)山藥皮處理液：將山藥皮經過氣流式超微粉碎機粉碎，取超微粉15g加入 150ml水配置成廢棄山藥皮超微粉懸濁液；取粉碎后的山藥皮15g，加30