專利名稱：一株用于青貯苜蓿的植物乳桿菌及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株青貯用乳酸菌，具體是一株能夠改善苜蓿青貯飼料品質(zhì)的一株用于青貯苜蓿的植物乳桿菌及其使用方法。
背景技術(shù)：
紫花苜猜(Medicago sativa)是一種優(yōu)質(zhì)的多年生豆科牧草,其產(chǎn)量高,一年可以刈割多次，并且富含蛋白質(zhì)、維生素和礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。對(duì)于畜牧，苜蓿適口性好，瘤胃降解率高，粗蛋白含量高，因此苜蓿是畜牧業(yè)生產(chǎn)中不可缺少的優(yōu)質(zhì)牧草資源。然而長(zhǎng)期以來，苜蓿的保存主要以曬制干早為主，這種方法的最大缺點(diǎn)是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失嚴(yán)重。青貯飼料由于具有鮮嫩多汁、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、適口性好和長(zhǎng)期貯存的特性，已經(jīng)成為反芻動(dòng)物不可缺少的基礎(chǔ)飼料，所以苜蓿青貯逐漸成為近幾年人們研究的熱點(diǎn)。
青貯是通過乳酸發(fā)酵快速降低pH值并維持厭氧環(huán)境，以利于青貯作物長(zhǎng)期保存的一種貯藏方式。與飼草晾曬成干草相比，飼草青貯可以大幅度縮短從收割到貯藏的時(shí)間，避免不良天氣造成的飼草損失，使青綠飼草的營(yíng)養(yǎng)成分得到最大限度的保存。然而苜蓿水分含量高，糖分相對(duì)較低，緩沖能較高，所以一般條件下不易青貯。乳酸菌是近年來正在推廣的青貯微生物添加劑，其主要作用是有目的地調(diào)節(jié)青貯料內(nèi)微生物組成，調(diào)控青貯發(fā)酵過程，促進(jìn)乳酸菌大量繁殖，抑制有害菌活動(dòng)，更快地產(chǎn)生乳酸，促進(jìn)多糖與粗纖維的轉(zhuǎn)化，提高干物質(zhì)回收率，從而有效提高青貯飼料的質(zhì)量，具有較大潛力和廣闊的發(fā)展前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供能夠改善苜蓿青貯飼料品質(zhì)的一株用于青貯苜蓿的植物乳桿菌及其使用方法。本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一株植物乳桿菌,其特征在于所述植物乳桿菌(L. plantarum Ps_9)是從100株植物乳桿菌中篩選出來的具有良好的耐酸性、生長(zhǎng)能力強(qiáng)、產(chǎn)酸速度快的乳酸菌；該菌菌株已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，分類命名植物乳桿菌Lactobacillusplantarum，保藏號(hào)=CGMCC No. 5489，保藏日期為:2011 年 11 月 23 日。所述植物乳桿菌在苜蓿青貯中的應(yīng)用。植物乳桿菌的活化和培養(yǎng),其特征在于將冷凍保存的L. plantarum Ps_9接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37°C下培養(yǎng)18-22h，如此傳代培養(yǎng)2_3次得到所述的活化L. plantarum Ps_9菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、0. 2g硫酸鎂、
O.05g硫酸猛加入IOOOmL蒸懼水,調(diào)節(jié)pH至6. 5,121°C滅菌15min。菌液制備將上述活化的菌種離心后，加入適量的滅菌水，制成菌體懸浮液，使其含乳酸菌活菌數(shù)在I X 108cfu/mL。
植物乳桿菌在苜蓿青貯飼料中的使用方法，其特征在于包括下列步驟將苜蓿原料切碎至2-3cm，并控制水分含量在65% -70%，稱取IOOg原料裝入真空包裝塑料袋中，將制備的菌液以lX105cfu/g的接種量接種到苜蓿原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵。青貯苜蓿的品質(zhì)檢測(cè)青貯苜蓿發(fā)酵20-30天即發(fā)酵成熟后，取出部分青貯苜蓿進(jìn)行感官評(píng)定、微生物組成和發(fā)酵品質(zhì)分析等。植物乳桿菌在苜蓿半干青貯飼料中的使用方法，其特征在于包括下列步驟將紫花苜蓿在孕蕾期至初花期收割后，切碎至2-3cm，晾曬24-36h控制水分含量在45% -55%,稱取IOOg原料裝入真空包裝塑料袋中，制備的菌液以lX105CfU/g的接種量接種到苜蓿原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵。本發(fā)明提供的植物乳桿菌具有下述的積極效果本發(fā)明通過乳酸菌的生長(zhǎng)特性研究、對(duì)苜蓿青貯成熟和品質(zhì)的影響篩選出提高苜 猜青忙品質(zhì)等功能性強(qiáng)的菌種L. plantarum Ps_9。本發(fā)明還涉及將本發(fā)明菌種添加到青貯苜蓿中發(fā)酵成熟后，青貯苜蓿氣味芳香、呈黃綠色、組織結(jié)構(gòu)保持良好。經(jīng)檢驗(yàn)，在發(fā)酵前期可以快速降低PH值，乳酸菌數(shù)迅速增力口，加速發(fā)酵成熟，而且乳酸和乙酸的含量也得以提高，明顯改善了青貯發(fā)酵苜蓿的品質(zhì)。因此本發(fā)明所述的乳酸菌具有加速苜蓿青貯成熟和提高苜蓿青貯品質(zhì)等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明；下述實(shí)施例只是說明性的，并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特別說明，均為常規(guī)方法。實(shí)施例I :—株植物乳桿菌，所述植物乳桿菌(L. plantarum Ps_9)是從100株植物乳桿菌中篩選出來的具有良好的耐酸性、生長(zhǎng)能力強(qiáng)、產(chǎn)酸速度快的乳酸菌；該菌菌株已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，保藏號(hào)=CGMCC No. 5489。所述植物乳桿菌在苜蓿青貯中的應(yīng)用。 植物乳桿菌的活化和培養(yǎng)，將冷凍保存的L. plantarum Ps-9接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37°C下培養(yǎng)18-22h，如此傳代培養(yǎng)2-3次得到所述的活化L. plantarum Ps-9菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、0. 2g硫酸鎂、O. 05g硫酸錳加入IOOOmL蒸懼水，調(diào)節(jié)pH至6. 5,121°C滅菌15min。菌液制備將上述活化的菌種離心后，加入適量的滅菌水，制成菌體懸浮液，使其含乳酸菌活菌數(shù)在I X 108cfu/mL。植物乳桿菌在苜蓿青貯飼料中的使用方法，包括下列步驟將活化的菌種離心后，加入適量的滅菌水，制成菌體懸浮液，使其含乳酸菌活菌數(shù)在lX108cfu/mL。以lX105cfu/g的接種量接種到苜蓿原料中，添加同體積的滅菌蒸餾水作為對(duì)照組，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵30天后進(jìn)行微生物組成和發(fā)酵特性分析。
微生物組成分析包括乳酸菌、酵母菌、芽孢桿菌、霉菌、一般細(xì)菌和大腸桿菌的計(jì)數(shù)。稱取IOg發(fā)酵成熟的青貯飼料，加入90ml滅菌水，充分震蕩，再用滅菌水以十倍稀釋法對(duì)樣品進(jìn)行梯度稀釋，分別選取適當(dāng)?shù)南♂屢?00 μ L涂布于大腸菌群顯色培養(yǎng)基(BlueLight Broth)、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(Potato Dextrose Agar)、營(yíng)養(yǎng)瓊脂(NutrientsAgar)和梭狀芽孢桿菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基(Clostridia CountAgar)上,并置于30°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，其中梭狀芽孢桿菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基需要厭氧培養(yǎng)，以此分別對(duì)乳酸菌、大腸菌群、酵母菌、霉菌、好氧細(xì)菌和梭狀芽孢桿菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。取原液進(jìn)行pH、有機(jī)酸和氨態(tài)氮的測(cè)定，并取適量青貯飼料置于65°C烘箱中風(fēng)干至恒重，測(cè)定其含水量。將烘干的飼料粉碎后，稱取Ig左右進(jìn)行可溶性糖的測(cè)定。表I苜蓿青貯30天后的微生物組成
權(quán)利要求
1.一株適用于苜蓿青貯飼料發(fā)酵的植物乳桿菌，其特征在于所述植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum Ps_9)是從100株植物乳桿菌中篩選出來的耐酸、產(chǎn)酸能力強(qiáng)、生長(zhǎng)速度快的乳酸菌；該菌菌株已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，保藏號(hào)CGMCC No. 5489，保藏日期為2011年11月23日。
2.植物乳桿菌的應(yīng)用，其特征在于所述植物乳桿菌在加速苜蓿青貯成熟和提高苜蓿青貯品質(zhì)中的應(yīng)用。
3.植物乳桿菌的活化和培養(yǎng)，其特征在于將冷凍保存的L.plantarum Ps-9接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在溫度37°C下培養(yǎng)18-22h，如此傳代培養(yǎng)2_3次得到所述的活化L. plantarum Ps_9菌種；所述的MRS液體培養(yǎng)基組成如下IOg蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三鈉、ImL吐溫80、0. 2g硫酸鎂、·O. 05g硫酸猛加入IOOOmL蒸懼水,調(diào)節(jié)pH至6. 5,121°C滅菌15min。
4.植物乳桿菌菌液的制備，其特征在于將活化的菌種離心后，加入適量的滅菌水，制成菌體懸浮液，使其含乳酸菌活菌數(shù)在I X 108cfu/mL。
5.植物乳桿菌在苜蓿青貯飼料中的使用方法，其特征在于包括下列步驟將苜蓿原料切碎至2-3cm，并控制水分含量在65% -70%，稱取IOOg原料裝入真空包裝塑料袋中，將權(quán)利要求4制備的菌液以lX105cfu/g的接種量接種到苜蓿原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵。
6.植物乳桿菌在苜蓿半干青貯飼料中的使用方法，其特征在于包括下列步驟將紫花苜蓿在孕蕾期至初花期收割后，切碎至2-3cm，晾曬24-36h控制水分含量在45% -55%，稱取IOOg原料裝入真空包裝塑料袋中，將權(quán)利要求4制備的菌液以IX 105cfu/g的接種量接種到苜蓿原料中，采用真空包裝機(jī)真空包裝后，置于儲(chǔ)藏室進(jìn)行發(fā)酵。
全文摘要
一株能夠改善苜蓿青貯飼料品質(zhì)的一株用于青貯苜蓿的植物乳桿菌。技術(shù)方案是其特征在于所述植物乳桿菌(L.plantarum Ps-9)是從100株植物乳桿菌中篩選出來的具有良好的耐酸性、生長(zhǎng)能力強(qiáng)、產(chǎn)酸速度快的乳酸菌；該菌菌株已保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物菌種保藏中心，保藏號(hào)CGMCC No.5489，保藏日期為2011年11月23日。本發(fā)明還公開了其應(yīng)用方法。
文檔編號(hào)A23K3/03GK102864095SQ20121011520
公開日2013年1月9日 申請(qǐng)日期2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月18日
發(fā)明者于潔, 高鵬飛 申請(qǐng)人:北京和美科盛生物技術(shù)有限公司