專利名稱：鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于花卉栽培技術(shù)領(lǐng)域，特別是蕨類植物繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鳥巢蕨(Neottopteris nidus)多年生常綠大型附生植物。葉叢生于根狀莖頂部外 緣，向四周輻射狀排列，葉叢中心空如鳥巢。其孢子囊群生于側(cè)脈的上側(cè)，向葉邊伸達(dá)1/2。 原產(chǎn)熱帶、亞熱帶地區(qū)。喜溫暖、陰濕，不耐寒，宜疏松、排水及保水皆好的土壤。鳥巢蕨通常 用分株法和孢子播種繁殖，分株繁殖簡單易行，但易損壞株形，恢復(fù)很慢并且受季節(jié)限制； 孢子播種時孢子萌發(fā)率很低，很難分化出苗，不容易得到大量種苗。目前，也有使用組織培 養(yǎng)技術(shù)進行繁殖的，但是成本高，培養(yǎng)程序繁鎖。探索一個快速有效的鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種 技術(shù)勢在必行。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種鳥巢蕨孢子萌發(fā)技術(shù)。鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種方法，其特征在于將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來，進行 無菌處理，加入無菌水配成密度為1500 2000個/毫升的無菌孢子懸濁液；將上述無菌孢 子懸濁液與初培養(yǎng)基按1 4比例混合，初培養(yǎng)基為每升添加0. 2 1. Omg GA3，蔗糖20 60g,瓊脂6g，pH為5. 8 6. 0的MS培養(yǎng)基；混合均勻后倒平板，平板厚度為3 5mm，凝固 后，切成每份含600 800個孢子的薄片；將上述薄片放入加入MS液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中 培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度23 25°C，光照強度1500 2000Lx，每天16小時光照，直到孢子體 苗形成；待孢子體苗形成后，將孢子體苗轉(zhuǎn)移到每升添加30g蔗糖，pH為5. 8 6. 0的MS 液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，每10天換一次培養(yǎng)基；當(dāng)小苗長出3 6片葉子且根系發(fā)達(dá)時，移 栽到裝有移栽基質(zhì)的穴盤中煉苗，栽培條件為溫度22 25°C，相對濕度70%以上。所述的初培養(yǎng)基中蔗糖的添加量為30g/L。所述的無菌處理是將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來浸泡于2%次氯酸鈉水溶液 中消毒15分鐘后，用無菌水沖洗。所述的移栽基質(zhì)為草炭土和河沙的混合基質(zhì)，體積比為2 1。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明采用液體淺層靜置培養(yǎng)法，將孢子播種技術(shù)和組織 培養(yǎng)技術(shù)相結(jié)合，大大提高了孢子萌發(fā)率、孢子體萌發(fā)率及鳥巢蕨小苗的成活率，縮短了培 養(yǎng)時間，為鳥巢蕨的規(guī)模化生產(chǎn)提供了一條有效的途徑。
具體實施例方式用本發(fā)明方法為試驗組，以固體培養(yǎng)基培養(yǎng)方法作對照組。例1(試驗組)將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來，進行無菌處理，加入無菌水配成密度為 1500 2000個/毫升的無菌孢子懸濁液；將上述無菌孢子懸濁液與初培養(yǎng)基按1 4比例
3混合，初培養(yǎng)基為每升添加0. 2mg GA3,蔗糖20g，瓊脂6g，pH為5. 8 6. 0的MS培養(yǎng)基；混 合均勻后倒平板，平板厚度為3mm，凝固后，切成每份含600 800個孢子的薄片；將上述薄 片放入加入MS液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度23 25°C，光照強度1500 2000Lx，每天16小時光照，直到孢子體苗形成；待孢子體苗形成后，將孢子體苗轉(zhuǎn)移到每升 添加30g蔗糖，pH為5. 8 6. 0的MS液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，每10天換一次培養(yǎng)基；當(dāng)小 苗長出3 6片葉子且根系發(fā)達(dá)時，移栽到穴盤中煉苗，移栽基質(zhì)為草炭土和河沙的混合基 質(zhì)，體積比為2 1。栽培條件為溫度22 25°C，相對濕度70%以上。例2(試驗組)將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來，進行無菌處理，加入無菌水，配成密度為 1500 2000個/毫升的無菌孢子懸濁液；將上述無菌孢子懸濁液與初培養(yǎng)基按1 4比例 混合，初培養(yǎng)基為每升添加0. 5mg GA3,蔗糖60g，瓊脂6g，pH為5. 8 6. 0的MS培養(yǎng)基；混 合均勻后倒平板，平板厚度為5mm，凝固后，切成每份含600 800個孢子的薄片；將上述薄 片放入加入MS液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度23 25°C，光照強度1500 2000Lx，每天16小時光照，直到孢子體苗形成；待孢子體苗形成后，將孢子體苗轉(zhuǎn)移到每升 添加30g蔗糖，pH為5. 8 6. 0的MS液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，每10天換一次培養(yǎng)基；當(dāng)小 苗長出3 6片葉子且根系發(fā)達(dá)時，移栽到穴盤中煉苗，移栽基質(zhì)為草炭土和河沙的混合基 質(zhì)，體積比為2 1。栽培條件為溫度22 25°C，相對濕度70%以上。例3(試驗組)將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來，進行無菌處理，加入無菌水，配成密度為 1500 2000個/毫升的無菌孢子懸濁液；將上述無菌孢子懸濁液與初培養(yǎng)基按1 4比例 混合，初培養(yǎng)基為每升添加1. Omg GA3,蔗糖30g，瓊脂6g，pH為5. 8 6. 0的MS培養(yǎng)基；混 合均勻后倒平板，平板厚度為4mm，凝固后，切成每份含600 800個孢子的薄片；將上述薄 片放入加入MS液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度23 25°C，光照強度1500 2000Lx，每天16小時光照，直到孢子體苗形成；待孢子體苗形成后，將孢子體苗轉(zhuǎn)移到每升 添加30g蔗糖，pH為5. 8 6. 0的MS液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，每10天換一次培養(yǎng)基；當(dāng)小 苗長出3 6片葉子且根系發(fā)達(dá)時，移栽到穴盤中煉苗，移栽基質(zhì)為草炭土和河沙的混合基 質(zhì)，體積比為2 1。栽培條件為溫度22 25°C，相對濕度70%以上。對照組(固體培養(yǎng)基培養(yǎng)方法)將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來，進行無菌處理，加入無菌水，配成密度為 1500 2000個/毫升的無菌孢子懸濁液。將0. 5ml上述無菌孢子懸濁液均勻灑在培養(yǎng)基 表面上進行培養(yǎng)。培養(yǎng)基為每升添加蔗糖30g，瓊脂6g，pH值為5. 8 6. 0的MS固體培養(yǎng) 基。培養(yǎng)條件為溫度23 25°C，光照強度1500 2000Lx，每天16小時光照，直到孢子體 苗形成；待孢子體苗形成后，將孢子體苗轉(zhuǎn)移到每升添加30g蔗糖，pH為5. 8 6. 0的MS 液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，每10天換一次培養(yǎng)基；當(dāng)小苗長出3 6片葉子且根系發(fā)達(dá)時，移 栽到穴盤中煉苗，移栽基質(zhì)為草炭土和河沙的混合基質(zhì)，體積比為2 1。栽培條件為溫度 22 25°C，相對濕度70%以上。結(jié)果分析采用試驗組方法孢子萌發(fā)時間較對照組短，其中以例3最短，為8天，比對照組縮 短了 5天，并且萌發(fā)率提高了 12.92%。同時，片狀體及孢子體形成時間也縮短了。雖然孢子體百分率相近，但是孢子體苗的品質(zhì)差異很大。采用試驗組方法培養(yǎng)的孢子體苗生長勢 強，轉(zhuǎn)接后25天左右形成大量整齊、健壯的帶有根系的鳥巢蕨小苗，小苗根系根棕褐色，不 定根豐富；而采用對照組方法培養(yǎng)的孢子體苗轉(zhuǎn)接后，35天左右才形成鳥巢蕨小苗，鳥巢 蕨小苗長勢不一致，根系褐色偏黑。表1鳥巢蕨孢子萌發(fā)和生長情況
權(quán)利要求
1.鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種方法，其特征在于將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來，進行 無菌處理，加入無菌水配成密度為1500 2000個/毫升的無菌孢子懸濁液；將上述無菌孢 子懸濁液與初培養(yǎng)基按1 4比例混合，初培養(yǎng)基為每升添加0. 2 1. Omg GA3，蔗糖20 60g,瓊脂6g，pH為5. 8 6. 0的MS培養(yǎng)基；混合均勻后倒平板，平板厚度為3 5mm，凝固 后，切成每份含600 800個孢子的薄片；將上述薄片放入加入MS液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中 培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度23 25°C，光照強度1500 2000Lx，每天16小時光照，直到孢子體 苗形成；待孢子體苗形成后，將孢子體苗轉(zhuǎn)移到每升添加30g蔗糖，pH為5. 8 6. 0的MS 液體培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，每10天換一次培養(yǎng)基；當(dāng)小苗長出3 6片葉子且根系發(fā)達(dá)時，移 栽到裝有移栽基質(zhì)的穴盤中煉苗，栽培條件為溫度22 25°C，相對濕度70%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種方法，其特征在于所述的初培養(yǎng)基中 蔗糖的添加量為30g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種方法，其特征在于所述的無菌處理是 將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來浸泡于2%次氯酸鈉水溶液中消毒15分鐘后，用無菌水 沖洗。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種方法，其特征在于所述的移栽基質(zhì)為 草炭土和河沙的混合基質(zhì)，體積比為2 1。
全文摘要
鳥巢蕨孢子萌發(fā)育種方法，將收集的鳥巢蕨孢子用沙布包起來，進行無菌處理，加入無菌水配成密度為1500～2000個/毫升的無菌孢子懸濁液；將上述無菌孢子懸濁液與初培養(yǎng)基按1∶4比例混合，初培養(yǎng)基為每升添加0.2～1.0mg GA3，蔗糖20～60g，瓊脂6g，pH為5.8～6.0的MS培養(yǎng)基；混合均勻后倒平板，平板厚度為3～5mm，凝固后，切成每份含600～800個孢子的薄片；將上述薄片放入加入MS液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度23～25℃，光照強度1500～2000Lx，每天16小時光照，直到孢子體苗形成。
文檔編號A01H4/00GK102119656SQ20101053758
公開日2011年7月13日 申請日期2010年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月10日
發(fā)明者楊鐵順 申請人:天津濱海國際花卉科技園區(qū)股份有限公司