專利名稱：草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基，特別是草菇液體菌種的深層發(fā)酵
培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
草菇一直使用固體菌種進(jìn)行生產(chǎn)。在草菇工廠化周年生產(chǎn)中，由于草菇生產(chǎn)周期 極短，所以菌種需求量很大，因此固體菌種完全不能適應(yīng)草菇工廠化周年生產(chǎn)的需要。目前 使用的草菇液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)還存在很多問(wèn)題，具體為(l)使用通用型培養(yǎng)基進(jìn)行 母種繁殖，因此母種繁殖時(shí)間較長(zhǎng)，菌絲質(zhì)量不高；(2)多是將用母種培養(yǎng)基培養(yǎng)的固體菌 種不經(jīng)過(guò)均質(zhì)化處理，直接進(jìn)行一級(jí)搖瓶培養(yǎng)，這樣生產(chǎn)菌球的時(shí)間長(zhǎng)、菌球大小不一，不 利于菌球的生長(zhǎng)，影響草菇液體菌種的質(zhì)量。(3)液體菌種所用的培養(yǎng)基含有大量的葡萄 糖、蔗糖等成份，使培養(yǎng)環(huán)境與栽培環(huán)境產(chǎn)生很大的反差，生產(chǎn)的液體菌種在栽培接種后往 往產(chǎn)生不吃料的現(xiàn)象，嚴(yán)重影響成品生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服現(xiàn)有草菇液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)方法的不足，設(shè)計(jì)一種既能培養(yǎng)出大小均
勻適中的菌種又能縮短培養(yǎng)時(shí)間的草菇液體菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)方法，具體包括 提供一種在草菇液體菌種培養(yǎng)過(guò)程中用于母種繁殖的專用母種培養(yǎng)基，該母種培
養(yǎng)基能促使菌絲生長(zhǎng)旺盛、生長(zhǎng)時(shí)間短、菌絲強(qiáng)壯，菌絲質(zhì)量高。 提供一種在草菇液體菌種培養(yǎng)過(guò)程中使用的以稻草粉和棉籽殼粉為主的草菇原 種專用培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基既能提供生長(zhǎng)旺盛、發(fā)育均勻的菌絲片段；又能易于在一級(jí)搖瓶培 養(yǎng)中進(jìn)行菌種的均質(zhì)化處理后形成均勻的漿質(zhì)菌種。該培養(yǎng)基同時(shí)能將原種長(zhǎng)期安全的保 藏。 提供一種在草菇液體菌種培養(yǎng)過(guò)程中使用的培養(yǎng)擴(kuò)增培養(yǎng)基。 提供一種在草菇液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中使用的深層發(fā)酵培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基能降 低成本，利于產(chǎn)生高質(zhì)量液體草菇菌種。
本發(fā)明的技術(shù)方案為 (1)在草菇專用母種培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行母種培養(yǎng)。
(2)將在母種培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)長(zhǎng)滿試管的母種菌絲移種到草菇原種專用培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)
行過(guò)渡培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度3o士rc，黑暗培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿。 (3)將專用原種充分打碎后立即移種到搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行均質(zhì)化處理后形成 均勻的漿質(zhì)菌種。
(4)在搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增。 (5)將一級(jí)搖瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)2-4天的菌液移入盛有新鮮搖瓶液體培養(yǎng)基的二級(jí)搖瓶中 進(jìn)行二級(jí)搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)增。
(6)將二級(jí)搖瓶出來(lái)的菌液移入盛有液體培養(yǎng)基的血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理即可得
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到成品草菇液體菌種。
上述草菇專用母種培養(yǎng)基原料部分的成分和重量百分比含量范圍為蘋果汁(碾 碎榨汁)10% _30%瓊脂1% -3%草菇菌糠浸出液70% -90% ;用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至 6.4-7.4.母種培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)條件為溫度30士rC，黑暗培養(yǎng)，待菌絲長(zhǎng)滿即可。
上述草菇專用原種培養(yǎng)基原料部分的成分和重量百分比含量范圍為稻草粉 30 % -50 % ，棉籽殼粉30 % -50 % ;麩皮或米糠4 % -16 % ，石膏1 % -4 % ，含水量50 % -70 % 。
草菇專用原種培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)條件為溫度30±rC ;待菌絲長(zhǎng)到試管底時(shí)即可。
上述草菇專用原種的保藏方法是將試管用塑料袋包好在2(TC恒溫保藏，這樣草
菇專用原種可以保藏4個(gè)月左右?？梢园瓷a(chǎn)需要隨時(shí)用于進(jìn)行一級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增。
上述搖瓶液體培養(yǎng)基為一級(jí)和二級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增培養(yǎng)基，其原料部分的成 分和重量百 分比含量范圍為黃豆粉1% _4%玉米粉1_4%蔗糖0. 5% _2%葡萄糖 0.5% -2%酵母膏0. 15% -0. 6%蛋白胨0. 05-0. 2%磷酸二氫鉀0. 05% -0. 2%硫酸鎂 0. 025% -0. 1% Ph7. 8-8。 上述一級(jí)和二級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增是在三角瓶?jī)?nèi)進(jìn)行的。 上述一級(jí)和二級(jí)搖瓶?jī)?nèi)液體菌種培養(yǎng)擴(kuò)增的培養(yǎng)條件是溫度32±1°C ;震蕩頻 率125-155轉(zhuǎn)/分鐘；接種量10%_15%;培養(yǎng)時(shí)間一級(jí)和二級(jí)搖瓶分別為3_4天和2_3天。 上述液體菌種在血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理的液體培養(yǎng)基為深層發(fā)酵培養(yǎng)基， 其原料部分的成分和重量百分比含量范圍為豆餅粉1% _5%玉米粉1% _5%蔗糖
0. 5% -2%葡萄糖0. 5% _2%蛋白胨0. 15-0. 6%豆科類植物油0. 25% -0. 5%;磷酸二氫鉀 0. 05% -0. 2%硫酸鎂0. 025% -0. 1% Ph7. 8-8。
上述液體菌種在血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理的培養(yǎng)條件溫度32-35士rC通氣量 1 : 0. 5(體積比)；通氣壓力0. 5kg/cm2 ;培養(yǎng)時(shí)間50小時(shí)。
技術(shù)效果 本發(fā)明的草菇液體菌種的培養(yǎng)方法，在通常的液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)工藝中增加了均 質(zhì)化處理步驟，即在草菇原種專用培養(yǎng)基中的過(guò)渡培養(yǎng)和在搖瓶液體培養(yǎng)基中對(duì)原種進(jìn)行 均質(zhì)化處理，而形成均勻的漿質(zhì)菌種。該步驟有效的解決了液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)工藝中接種 用菌種均質(zhì)化處理的技術(shù)難題，由于草菇專用原種培養(yǎng)基中的稻草粉和棉籽殼粉本身具有 細(xì)小的間隙，草菇菌絲在該培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)一段時(shí)間后可以在接種時(shí)被充分打碎，增加了大 量菌絲片段，在搖瓶液體培養(yǎng)基內(nèi)先形成均勻的漿狀菌種，進(jìn)而培養(yǎng)出大小均勻適中的菌 種且縮短培養(yǎng)時(shí)間。通過(guò)草菇專用原種培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌種接種后形成了大量細(xì)小的有效菌 球，直徑在0-2mm之間最具有活力的有效菌球達(dá)90%以上。而直接通過(guò)母種培養(yǎng)基培養(yǎng)的 菌種接種的菌球大小不一，大的菌球由于直徑太大，已失去活力。 草菇原種專用培養(yǎng)基是一種加入了稻草粉，棉籽殼粉，麩皮或米糠，石膏的培養(yǎng) 基，稻草粉，棉籽殼粉，麩皮或米糠的細(xì)小間隙有利于蕾絲生長(zhǎng)，麩皮或米糠等其他營(yíng)養(yǎng)成 分的加入，可以使蕾絲生長(zhǎng)旺盛。 草菇原種專用培養(yǎng)基內(nèi)的原種在2(TC恒溫保藏條件下可以保藏4個(gè)月左右， 一次 育種后按可以生產(chǎn)需要隨時(shí)用于進(jìn)行一級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增。特別適合草菇工廠化周年生產(chǎn)。
由于草菇專用母種培養(yǎng)基是一種針對(duì)草菇液體菌種培養(yǎng)母鐘的專用培養(yǎng)基，因此 在該培養(yǎng)基中加入了草菇菌糠浸出液。由于在草菇菌糠中含有原來(lái)菌絲分解多糖時(shí)所用 的激素物質(zhì)和含有被原菌絲分解、但沒(méi)有被吸收完的多糖營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，故加入了草菇菌糠浸 出液的專用母種培養(yǎng)基，既縮短了母種培養(yǎng)時(shí)間，又使母種菌絲生長(zhǎng)特別旺盛，菌絲特別強(qiáng) 壯。 深層發(fā)酵培養(yǎng)基與原有的液體培養(yǎng)基不同點(diǎn)，在于減少了單糖成份(葡萄糖)，菌 球生長(zhǎng)所需的糖源來(lái)自多糖的玉米粉和淀粉，這兩種物質(zhì)的使用，既降低了培養(yǎng)基的成本， 也使培養(yǎng)基的碳氮比在更接近自然的環(huán)境。提高了栽培接種后草菇的產(chǎn)量。
具體實(shí)施例方式
本實(shí)施例為較優(yōu)實(shí)施例，其具體步驟是。 (1)在草菇專用母種培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行母種培養(yǎng)。取0. 5cm2見(jiàn)方草菇母種，接種至專用
母種培養(yǎng)基培養(yǎng)，在30± rc條件下，黑暗培養(yǎng)，進(jìn)行菌種活化和繼代，形成一支試管母種。
本步驟的專用母種培養(yǎng)基配制的含量及成分為蘋果汁(碾碎榨汁)200ml瓊脂30g草菇菌 糠浸出液800ml ;用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7. 4. (2)將在母種培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)長(zhǎng)滿試管的母種菌絲移種到草菇原種專用培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn) 行過(guò)渡培養(yǎng)由步驟(1)所得的滿瓶菌絲移種到150ml的三角瓶中，可移栽六瓶，然后進(jìn)行
暗培養(yǎng)，溫度條件為3o士rc，待菌絲滿三角瓶時(shí)即可。草菇原種專用培養(yǎng)基配制的含量及 成分為稻草粉45%棉籽殼粉45%麩皮或米糠8%，石膏2%含水量50%-70%。配置方法 為將稻草和棉籽殼粉碎后用40目和60目篩子篩出；將篩出的稻草粉和棉籽殼粉與麩皮 或米糠和石膏充分拌勻；將原料與水按比例混合而得，調(diào)節(jié)ra值為7. 4。
(3)將培養(yǎng)好的專用原種充分打碎后立即移種到搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行均質(zhì)化處 理，形成均勻的漿質(zhì)菌種。將上述六瓶培養(yǎng)好的原種接種到六個(gè)500毫升的一級(jí)搖瓶，接種 的同時(shí)要充分將原種打碎，使原種形成大量的菌絲碎片，將一級(jí)搖瓶高速震蕩直至形成均 勻的漿質(zhì)菌種 (4)在搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增一級(jí)搖瓶的擴(kuò)增培養(yǎng)條件 為.溫度32±1°C ;震蕩頻率125-155轉(zhuǎn)/分鐘；接種量10 % ，液體培養(yǎng)基裝料系數(shù)為
100ml-150ml/500ml (三角瓶)，培養(yǎng)天數(shù)為3天。 (5)將一級(jí)搖瓶?jī)?nèi)的菌液移入盛有新鮮搖瓶液體培養(yǎng)基的二級(jí)搖瓶中進(jìn)行擴(kuò)增 將一級(jí)搖瓶?jī)?nèi)的菌液接種到六個(gè)5000毫升的搖瓶中，培養(yǎng)條件與一級(jí)搖瓶相同。上述(4) (5)步驟中一級(jí)和二級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增所用的搖瓶液體培養(yǎng)基配制的含量及成分為黃豆 粉2%玉米粉2%蔗糖1%葡萄糖1%酵母膏0.3%蛋白胨0. 1%磷酸二氫鉀0. 1%硫酸鎂 0. 05% Ph7. 8。 (6)將二級(jí)搖瓶出來(lái)的菌液移入盛有液體培養(yǎng)基的血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理。在 血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理的液體培養(yǎng)基為深層發(fā)酵培養(yǎng)基，其配制的含量及成分為豆餅粉 2. 5%玉米粉2. 5%蔗糖1%葡萄糖1%蛋白胨0. 3%豆科類植物油0. 5%;磷酸二氫鉀0. 1% 硫酸鎂0. 05% Ph7. 8。首先將二級(jí)搖瓶出來(lái)的茸球接種到六個(gè)200L含有80%深層發(fā)酵培 養(yǎng)基的血清瓶?jī)?nèi)，然后在溫度32-35士rC通氣量1 : 0. 5(體積比)；通氣壓力O. 5kg/cm2 的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)50小時(shí)即可生成草菇液體菌種。
權(quán)利要求
一種草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法。其特征在于包括如下步驟(1)在草菇專用母種培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行母種培養(yǎng)。(2)將在母種培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)的合格的母種菌絲移種到草菇原種專用培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行過(guò)渡培養(yǎng)，(3)將專用原種充分打碎后立即移種到搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行均質(zhì)化處理后形成均勻的漿質(zhì)菌種。(4)在搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增；(5)將一級(jí)搖瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)2-4天的菌液移入新鮮搖瓶液體培養(yǎng)基進(jìn)行二級(jí)搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)增(6)將二級(jí)搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)增出的菌液移入盛有深層發(fā)酵液體培養(yǎng)基的血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理即可得到成品草菇液體菌種。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法其特征在于所述草菇液 體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法各步驟的培養(yǎng)條件為草菇專用母種培養(yǎng)基內(nèi)的培養(yǎng)條件為溫度3o士rc，黑暗培養(yǎng)；草菇專用原種培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件為溫度3o士rc，黑暗培養(yǎng)。搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)搖瓶和二級(jí)搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)增的培養(yǎng)條件為溫度32±1°C ;震蕩頻 率125-155轉(zhuǎn)/分鐘；接種量10% _15% ;培養(yǎng)時(shí)間一級(jí)和二級(jí)搖瓶分別為3_4天和 2-3天；草菇液體菌種在血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理的培養(yǎng)條件為溫度32-35±l°C ;通氣量 1 : 0. 5(體積比);通氣壓力0. 5kg/cm2 ;培養(yǎng)時(shí)間50小時(shí)。
3. 權(quán)利要求l-2之一所述的草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法所涉及的母種培養(yǎng)基 為草菇專用母種培養(yǎng)基，其特征在于草菇專用母種培養(yǎng)基原料部分的成分和重量百分比含量范圍為蘋果汁(碾碎榨汁)10% -30% ;瓊脂1% _3% ;草菇菌糠浸出液70% _90 % ;用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6. 4-7.4。
4. 權(quán)利要求1-2之一所述的草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法所涉及的原種培養(yǎng)基為草菇原種專用培養(yǎng)基其特征在于所述草菇原種專用培養(yǎng)基為含有稻草粉的培養(yǎng)基。
5. 權(quán)利要求l-2之一所述的草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法所涉及的原種培養(yǎng)基為草菇原種專用培養(yǎng)基其特征在于所述草菇原種專用培養(yǎng)基為含有棉子殼粉的培養(yǎng)基。
6. 權(quán)利要求l-2之一所述的草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法所涉及的原種培養(yǎng)基為草菇原種專用培養(yǎng)基其特征在于所述草菇專用原種培養(yǎng)基為含有稻草粉、棉子殼粉和麩皮或米糠的培養(yǎng)基。
7. 權(quán)利要求l-2所述的草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)方法所涉及的原種培養(yǎng)基為草菇原種專用培養(yǎng)基，其特征在于該培養(yǎng)基原料部分的成分和重量百分比含量范圍為稻草粉30% _50%，棉籽殼粉30% -50% ;麩皮或米糠4% _16%，石膏1% _4%，含水量 50% -70%。
8. 權(quán)利要求l-2之一所述的搖瓶液體培養(yǎng)基為一級(jí)和二級(jí)搖瓶的培養(yǎng)擴(kuò)增所涉及 的培養(yǎng)基為搖瓶液體培養(yǎng)基，其特征在于搖瓶液體培養(yǎng)基的原料部分的成分和重量百 分比含量范圍為黃豆粉1% _4%玉米粉1-4%蔗糖0.5% -2%葡萄糖0.5% -2%酵母 膏O. 15% -0. 6%蛋白胨0. 05-0. 2%磷酸二氫鉀0. 05% -0. 2%硫酸鎂0. 025% -0. 1% Ph7. 8-8。
9. 權(quán)利要求1-2之一所述的草菇液體菌種在血清瓶中進(jìn)行發(fā)酵處理的液體培養(yǎng) 基為深層發(fā)酵液體培養(yǎng)基，其特征在于草菇液體菌種在血清瓶中進(jìn)行深層發(fā)酵處理 的深層發(fā)酵液體培養(yǎng)基的原料部分的成分和重量百分比含量范圍為豆餅粉1% -5% 玉米粉1% -5%蔗糖0. 5% -2%葡萄糖0. 5% -2%蛋白胨0. 15-0.6%豆科類植物油 0. 25% -0.5% ;磷酸二氫鉀0. 05% -0. 2%硫酸鎂0. 025% -0. 1% Ph7. 8-8。
全文摘要
本發(fā)明涉及菌種深層發(fā)酵培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基。本發(fā)明解決現(xiàn)有培養(yǎng)技術(shù)中母種繁殖時(shí)間長(zhǎng)、菌絲質(zhì)量差、菌球生產(chǎn)時(shí)間長(zhǎng)、菌球大小不一、生產(chǎn)成本較高等技術(shù)缺陷。本發(fā)明用于草菇液體菌種的深層發(fā)酵培養(yǎng)。本發(fā)明包括(1)在草菇專用母種培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行母種培養(yǎng)。(2)在草菇原種專用培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行過(guò)渡培養(yǎng)，(3)原種經(jīng)均質(zhì)化處理后得到均勻的漿質(zhì)菌種。(4)在搖瓶液體培養(yǎng)基中進(jìn)行一級(jí)搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)增；(5)二級(jí)搖瓶培養(yǎng)擴(kuò)增(6)在深層發(fā)酵液體培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵處理，得到成品草菇液體菌種。本發(fā)明涉及草菇母種專用培養(yǎng)基、草菇原種專用培養(yǎng)基、搖瓶液體培養(yǎng)基和深層發(fā)酵液體培養(yǎng)基。
文檔編號(hào)A01G1/04GK101699969SQ20091021174
公開(kāi)日2010年5月5日 申請(qǐng)日期2009年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月5日
發(fā)明者張紀(jì)明 申請(qǐng)人:張紀(jì)明