專利名稱：團(tuán)頭魴異源四倍體的建立方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及魚(yú)類的選育領(lǐng)域，更具體地涉及通過(guò)利用染色體組操作技術(shù)建立團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的方法。
背景技術(shù)：
自20世紀(jì)70年代中期以來(lái)，國(guó)內(nèi)外在十多種養(yǎng)殖魚(yú)類中進(jìn)行過(guò)染色體組操作研究，取得了一定的進(jìn)展，表現(xiàn)在如下方面1.同源四倍體的誘導(dǎo)通過(guò)物理休克(冷休克、熱休克和靜水壓)誘導(dǎo)技術(shù)，抑制魚(yú)類受精卵的第一次有絲分裂可獲得四倍體。迄今為止，各國(guó)學(xué)者進(jìn)行過(guò)奧利亞羅非魚(yú)、虹鱒、金鱸、丁 、鯰、鳙、水晶彩鯽、鯉等魚(yú)類的四倍體誘導(dǎo)。
2.異源四倍體的誘導(dǎo)遠(yuǎn)緣雜交可誘導(dǎo)產(chǎn)生四倍體。遠(yuǎn)緣雜交是指雜交親本之間的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，超過(guò)種內(nèi)關(guān)系的雜交。遠(yuǎn)緣雜交可分為種間雜交、屬間雜交、亞科間雜交等。由于受卵子的成熟狀態(tài)、精卵的相互作用或異種精卵和分裂周期差異的影響，遠(yuǎn)緣雜交可促使雜合胚胎或受精卵的染色體組復(fù)制，使得雜種胚胎或受精卵的核內(nèi)有絲分裂受阻，從而產(chǎn)生四倍體胚胎，進(jìn)而自發(fā)形成四倍化個(gè)體。國(guó)內(nèi)外異源四倍體可育群體的建立主要通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交自發(fā)形成這一單一方式獲得，如遠(yuǎn)緣雜交四倍體“湘鯽”和興國(guó)紅鯉♀×紅鯽♂異源四倍體。然而，遠(yuǎn)緣雜交的難點(diǎn)在于尋找到理想的遠(yuǎn)緣雜交對(duì)象，許多魚(yú)類因?yàn)槿狈线m的遠(yuǎn)緣雜交對(duì)象而無(wú)法進(jìn)行異源四倍體的誘導(dǎo)。
目前，通過(guò)理化誘導(dǎo)或遠(yuǎn)緣雜交產(chǎn)生性成熟的人工同源四倍體有一定困難。主要表現(xiàn)在誘導(dǎo)率低、畸形率高及非整倍體比率高等，這些問(wèn)題導(dǎo)致四倍體魚(yú)在幼魚(yú)階段即過(guò)早夭折，難以建立四倍體的繁育群體。至今國(guó)內(nèi)外學(xué)者誘導(dǎo)的大多數(shù)四倍體魚(yú)不能正常生長(zhǎng)和發(fā)育，尤其是長(zhǎng)成的雌魚(yú)一般都不可育或繁殖力很差，從而嚴(yán)重限制了四倍體繁育群體的建立及其應(yīng)用。
然而，可育四倍體奠基群體一旦建立，就有可能采用倍間雜交的方式來(lái)批量地生產(chǎn)不育三倍體，這種途徑不僅可以避免人工直接誘導(dǎo)三倍體魚(yú)所帶來(lái)的休克損傷，從而提高三倍體魚(yú)的早期存活率，實(shí)現(xiàn)三倍體魚(yú)的大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。另外，三倍體魚(yú)是否長(zhǎng)的快，除了與其生產(chǎn)方法(是通過(guò)直接誘導(dǎo)，還是倍間雜交)有關(guān)外，還與其是同源三倍體還是異源三倍體魚(yú)有關(guān)。一般認(rèn)為，異源三倍體的生長(zhǎng)速度要快一些。例如，湘云鯽的父本是異源四倍體，其母本日本白鯽是鯽魚(yú)中生長(zhǎng)較快的品種，因此，湘云鯽是異源三倍體魚(yú)，其生長(zhǎng)速度得到很大提高。
因此，獲得魚(yú)類異源四倍體的可育群體，進(jìn)而采用異源四倍體×二倍體獲得異源倍間雜交三倍體魚(yú)是魚(yú)類種質(zhì)創(chuàng)新的一種有效的途徑。而可育魚(yú)類異源四倍體的建立迫切需要選擇合適的遠(yuǎn)緣雜交組合；建立合適的四倍體誘導(dǎo)加倍條件；建立準(zhǔn)確、快速的四倍體篩選技術(shù)。
團(tuán)頭魴“浦江1號(hào)”是一種新選育的魚(yú)類良種，生長(zhǎng)較快、體型較好、純度高。中國(guó)專利申請(qǐng)CN02110699.1中公開(kāi)了其選育方法。然而，為了進(jìn)一步提高魚(yú)的經(jīng)濟(jì)性狀、生長(zhǎng)速度，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)不育但個(gè)體大的團(tuán)頭魴；而制備可育團(tuán)頭魴四倍體魚(yú)群體是其先決條件。然而，目前還沒(méi)有一種有效的產(chǎn)生可育的團(tuán)頭魴四倍體的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可以有效地建立團(tuán)頭魴可育異源四倍體的方法。
在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供一種團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的建立方法，它包括步驟(a)將團(tuán)頭魴與三角魴作為雜交組合，選取成熟的雌雄親魚(yú)，進(jìn)行正交和/或反交，從而獲得雜種受精卵；(b)對(duì)步驟(a)的雜種受精卵進(jìn)行誘導(dǎo)，抑制受精卵的第一次有絲分裂，并阻止第一次胚胎分裂，從而形成四倍體胚胎；
(c)培養(yǎng)步驟(b)中獲得的四倍體胚胎，從而獲得四倍體幼魚(yú)；(d)對(duì)步驟(c)中的幼魚(yú)進(jìn)行檢測(cè)，從而排除二倍體幼魚(yú)，獲得團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，在步驟(a)中，其中的正交為二倍體團(tuán)頭魴♀×二倍體三角魴♂，反交為二倍體三角魴♀×二倍體團(tuán)頭魴♂。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，采用的誘導(dǎo)方法選自熱休克，冷休克、靜水壓或其組合。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，在步驟(b)中還包括對(duì)步驟(b)的成活胚胎進(jìn)行胚胎期染色體制片和成活率統(tǒng)計(jì)，根據(jù)胚胎期的四倍化比例和成活率之間的關(guān)系，確定誘導(dǎo)條件，并根據(jù)確定的誘導(dǎo)條件進(jìn)行誘導(dǎo)。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，在步驟(d)之后，還包括步驟(e)進(jìn)行形態(tài)特征分析和性腺發(fā)育程度檢測(cè)，以獲得可育四倍體。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，當(dāng)步驟(a)為正交時(shí)，在步驟(b)中的熱休克誘導(dǎo)條件為對(duì)受精后1.40τ0的受精卵，采用40.0℃熱休克持續(xù)2分鐘。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，當(dāng)步驟(a)為反交時(shí)，在步驟(b)中的熱休克誘導(dǎo)條件為對(duì)受精后1.30τ0的受精卵，采用39.0℃熱休克持續(xù)2分鐘。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，步驟(a)中，還包括用促排卵素2號(hào)(LHRHa)和絨毛膜促性腺激素(HCG)對(duì)雌魚(yú)進(jìn)行混合催產(chǎn)；或者在雜交時(shí)采用干法授精法進(jìn)行雜交。
在另一優(yōu)選例中，在步驟(c)中，獲得的四倍體幼魚(yú)的體重大于或等于50g。
在本發(fā)明的第二方面，提供一種用所述的方法制備的團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)。
在另一優(yōu)選例中，還提供了用所述的方法制備的團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的用途，它被用于制備三倍體魚(yú)。
在本發(fā)明的第三方面，提供一種團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的四倍體的體細(xì)胞或其二倍體的生殖細(xì)胞，它是用所述的方法制備的團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的四倍體的體細(xì)胞或其二倍體的生殖細(xì)胞。


圖1是在本發(fā)明一種優(yōu)選例中所誘導(dǎo)的正交(團(tuán)頭魴♀×三角魴♂)的異源四倍體雌魚(yú)的照片。該魚(yú)與團(tuán)頭魴接近，表明具有較強(qiáng)的母本效應(yīng)。
圖2是在本發(fā)明一種優(yōu)選例中所誘導(dǎo)的正交(團(tuán)頭魴♀×三角魴♂)的異源四倍體雄魚(yú)的照片。該魚(yú)與團(tuán)頭魴接近，表明具有較強(qiáng)的母本效應(yīng)。
圖3顯示了對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)生的魚(yú)進(jìn)行快速倍性鑒定的照片，上圖為未加倍的二倍體，下圖為四倍體，四倍體的紅細(xì)胞核體積為二倍體的2倍。
具體實(shí)施例方式
發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究和試驗(yàn)，意外地發(fā)現(xiàn)三角魴特別適合作為與團(tuán)頭魴進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交的對(duì)象。本發(fā)明人將三角魴與團(tuán)頭魴進(jìn)行遠(yuǎn)緣雜交，首次制備了可育的團(tuán)頭魴四倍體魚(yú)。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明人還經(jīng)過(guò)條件優(yōu)化，進(jìn)一步提高了生產(chǎn)團(tuán)頭魴四倍體魚(yú)的效率。
在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明方法高度集成了遠(yuǎn)緣雜交、細(xì)胞工程誘導(dǎo)和快速倍性檢測(cè)一是采用種間遠(yuǎn)緣雜交，利用雜種精卵的相互作用或異種精卵和分裂周期的差異，促使雜合胚胎或受精卵的染色體組復(fù)制，增加四倍體的誘導(dǎo)比例。
二是用細(xì)胞工程誘導(dǎo)技術(shù)，采用不同的熱休克溫度、處理持續(xù)時(shí)間和誘導(dǎo)起始時(shí)間組合，以便確立合適的四倍體誘導(dǎo)條件。
三是用大量誘導(dǎo)結(jié)合快速檢測(cè)技術(shù)，形成較大的二倍體和四倍體混合群體，從中篩選出一定數(shù)量的四倍體，進(jìn)而檢測(cè)出性成熟個(gè)體以建立奠基群體。
可用于本發(fā)明的遠(yuǎn)緣雜交方法沒(méi)有特別限制，可以采用本領(lǐng)域常規(guī)的遠(yuǎn)緣雜交和選育技術(shù)。在一優(yōu)選例中，本發(fā)明的四倍體建立方法可包括遠(yuǎn)緣雜交；細(xì)胞工程誘導(dǎo)；快速倍性檢測(cè)；強(qiáng)化培育；性腺發(fā)育檢測(cè)；形態(tài)學(xué)分析等方面，所涉及的技術(shù)詳細(xì)描述如下(1)選擇合適的遺傳交配組合。
親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的生物彼此雜交所得的雜種，因生理功能不協(xié)調(diào)、生殖系統(tǒng)遭受擾亂而不能成活。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，團(tuán)頭魴和三角魴種間分類關(guān)系較接近，其雜種可以成活。但是，由于關(guān)系接近，雜種胚胎或受精卵的核內(nèi)有絲分裂不發(fā)生紊亂，因此，僅通過(guò)雜交不能誘導(dǎo)產(chǎn)生多倍體，還必須加以誘導(dǎo)才能獲得四倍體。
(2)細(xì)胞工程誘導(dǎo)。
可采用常規(guī)的誘導(dǎo)技術(shù)抑制受精卵的第1次有絲分裂，從而阻止第1次胚胎分裂，以形成一定比例的四倍體胚胎。
在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明人還在不同的誘導(dǎo)條件下進(jìn)行大量試驗(yàn)，對(duì)成活胚胎進(jìn)行胚胎期染色體制片和成活率統(tǒng)計(jì)，研究胚胎期的四倍化比例和成活率之間的關(guān)系，探索出了最佳的誘導(dǎo)條件。
(3)大量誘導(dǎo)和快速檢測(cè)技術(shù)。
可采用常規(guī)的檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)四倍體。然而，由于四倍體誘導(dǎo)率和成活率均很低，需要進(jìn)行大量誘導(dǎo)，獲得大量不同倍性個(gè)體。然而，誘導(dǎo)產(chǎn)生的大量幼魚(yú)在外形上很難區(qū)分出來(lái)，因此，尋求一個(gè)準(zhǔn)確而又簡(jiǎn)便的方法來(lái)確定染色體的倍性就顯得十分重要。目前，所采用的方法如染色體計(jì)數(shù)(準(zhǔn)確但費(fèi)時(shí)，且要傷及魚(yú))、DNA含量測(cè)定(費(fèi)用昂貴，難以大規(guī)模測(cè)定)、血涂片測(cè)紅細(xì)胞體積(耗時(shí)、受涂片質(zhì)量影響及誤差較大)等各具有優(yōu)缺點(diǎn)。
在本發(fā)明的優(yōu)選例中，采用顆粒計(jì)數(shù)儀(Coulter counter)自動(dòng)分析紅細(xì)胞核體積的分布范圍，方便、快速、準(zhǔn)確，對(duì)四倍體檢測(cè)的可靠率近乎100％，因而適合于生產(chǎn)上大規(guī)模檢測(cè)。
(4)強(qiáng)化培育技術(shù)強(qiáng)化培育技術(shù)為任選步驟。由于誘導(dǎo)產(chǎn)生的四倍體生命力較弱，因此如果需要，可在優(yōu)選例中通過(guò)常規(guī)的強(qiáng)化培育，以便提高四倍體的檢測(cè)比例。
(5)性腺發(fā)育檢測(cè)在優(yōu)選例中，還可通過(guò)常規(guī)的性腺發(fā)育情況檢測(cè)可獲得性成熟的四倍體，以進(jìn)行四倍體群體的繁衍和傳代。
(6)形態(tài)鑒別。
在本發(fā)明的優(yōu)選例中，還通過(guò)對(duì)魚(yú)體進(jìn)行形態(tài)學(xué)測(cè)量和框架分析，獲得四倍體有別于雙親的形態(tài)特征標(biāo)記，以便進(jìn)行區(qū)分和鑒別。
獲得的正交異源四倍體魚(yú)雄魚(yú)與團(tuán)頭魴接近，具有母本效應(yīng)，形態(tài)差異主要由軀干部引起，可作為四倍體的遺傳標(biāo)記。
本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)在于(1)本發(fā)明選擇屬于同一屬、但不同種、親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的三角魴與團(tuán)頭魴進(jìn)行雜交，首次獲得了團(tuán)頭魴異源四倍體的可育群體。
(2)首次把不同的遺傳距離組合與物理誘導(dǎo)相結(jié)合，即利用魚(yú)類種間雜交白發(fā)形成四倍體的趨勢(shì)，結(jié)合物理休克處理，提高四倍體的誘導(dǎo)比例。
(3)本發(fā)明在建立最佳誘導(dǎo)模式后，進(jìn)行大量誘導(dǎo)和快速倍性檢測(cè)相結(jié)合，大量誘導(dǎo)可獲得大量的不同倍性個(gè)體，而快速倍性檢測(cè)能夠準(zhǔn)確又簡(jiǎn)便地確定染色體的倍性。
(4)本發(fā)明采用物理誘導(dǎo)與子代篩選相結(jié)合，誘導(dǎo)并建立了團(tuán)頭魴同源四倍體的基礎(chǔ)繁育群體，為實(shí)現(xiàn)團(tuán)頭魴種質(zhì)的進(jìn)一步創(chuàng)新，為生產(chǎn)具有肉質(zhì)改良和生態(tài)安全特點(diǎn)的倍間雜交三倍體良種創(chuàng)制了四倍體中間育種材料。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，未詳細(xì)說(shuō)明的技術(shù)為常規(guī)技術(shù)。
實(shí)施例1最佳誘導(dǎo)條件的建立正交為二倍體團(tuán)頭魴♀×二倍體三角魴♂；反交為二倍體三角魴♀×二倍體團(tuán)頭魴♂。
設(shè)置從受精后1.0τ0～2.6τ0(即水溫為22℃時(shí)從27min～60min；24℃時(shí)從17min～50min，τ0與水溫和時(shí)間成正比)，在團(tuán)頭魴受精卵第1次有絲分裂期的不同階段，每隔3min，分別以41.0℃、40.0℃與39.0℃三種不同的溫度進(jìn)行熱休克處理，處理持續(xù)時(shí)間為2min或3min。受精卵粘于培養(yǎng)皿上，熱休克在恒溫水浴箱內(nèi)進(jìn)行，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)3-4個(gè)平行，進(jìn)行胚胎期染色體分析以便確立合適的四倍體誘導(dǎo)條件。
結(jié)果可知，正交的熱休克誘導(dǎo)條件為采用40.0℃熱休克持續(xù)2min，分別對(duì)受精后1.40τ0的受精卵進(jìn)行處理，測(cè)得胚胎期四倍體化比例高達(dá)18.2％；反交的熱休克誘導(dǎo)條件為采用39.0℃熱休克持續(xù)2min，分別對(duì)受精后1.30τ0的受精卵進(jìn)行處理，測(cè)得胚胎期四倍體化比例高達(dá)16.6％。
實(shí)施例2團(tuán)頭魴異源四倍體的建立本實(shí)施例中，共分三個(gè)組進(jìn)行試驗(yàn)試驗(yàn)組1采用以下(1)-(7)的異源四倍體建立步驟；試驗(yàn)組2采用以下(1)-(7)的異源四倍體建立步驟；試驗(yàn)組3僅進(jìn)行團(tuán)頭魴♀×三角魴♂種間雜交，不經(jīng)過(guò)熱休克誘導(dǎo)步驟。
(1)選擇不同的遠(yuǎn)緣雜交遺傳距離組合正交為團(tuán)頭魴♀×三角魴♂；反交為三角魴♀×團(tuán)頭魴♂。
(2)選取成熟良好的雌、雄親魚(yú)，采用促排卵素2號(hào)(LHRHa)和絨毛膜促性腺激素(HhCG)進(jìn)行混合催產(chǎn)、干法授精。
(3)進(jìn)行正反雜交。
(4)對(duì)前述正反雜交獲得的雜種受精卵進(jìn)行熱休克誘導(dǎo)，采用實(shí)施例1中獲得的誘導(dǎo)條件。
(5)對(duì)成活下來(lái)的魚(yú)進(jìn)行養(yǎng)殖，獲得大量的二倍體和四倍體混合幼魚(yú)，規(guī)格在50g以上。
(6)采用倍性測(cè)量?jī)x(Coulter counter，Beckman-Coulter Company，USA)對(duì)步驟(g)中的幼魚(yú)進(jìn)行快速檢測(cè)，獲得四倍體。
(7)通過(guò)培育獲得四倍體成魚(yú)，進(jìn)行形態(tài)特征分析和性腺發(fā)育程度檢測(cè)，獲得可育四倍體群體。
表1團(tuán)頭魴異源四倍體的建立結(jié)果

由表1可見(jiàn)，獲得的異源四倍體魚(yú)雌雄比例為4♀∶5♂，性別比例較為正常。在試驗(yàn)1獲得的340尾成活個(gè)體中共鑒定出異源四倍體34尾，比例為9.33％；在試驗(yàn)2獲得的1100尾幼魚(yú)中，共鑒定出異源四倍體34尾，比例為3.1％。
采用顆粒計(jì)數(shù)儀自動(dòng)分析紅細(xì)胞核體積的分布范圍，發(fā)現(xiàn)異源四倍體和雜交二倍體的紅細(xì)胞核平均體積分別為19.1±0.3μm3和9.8±0.3μm3，可見(jiàn)異源四倍體的紅細(xì)胞核體積為雜交二倍體的2倍。
對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)生的魚(yú)進(jìn)行快速倍性鑒定的照片見(jiàn)圖3，上圖為未加倍的二倍體，下圖為四倍體，四倍體的紅細(xì)胞核體積為二倍體的2倍。
本實(shí)驗(yàn)獲得的幼魚(yú)能夠正常生長(zhǎng)和發(fā)育，雄魚(yú)在2+齡、雌魚(yú)在3+齡可正常性成熟。
在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的建立方法，其特征在于，它包括步驟(a)將團(tuán)頭魴與三角魴作為雜交組合，選取成熟的雌雄親魚(yú)，進(jìn)行正交和/或反交，從而獲得雜種受精卵；(b)對(duì)步驟(a)的雜種受精卵進(jìn)行誘導(dǎo)，抑制受精卵的第一次有絲分裂，并阻止第一次胚胎分裂，從而形成四倍體胚胎；(c)培養(yǎng)步驟(b)中獲得的四倍體胚胎，從而獲得四倍體幼魚(yú)；(d)對(duì)步驟(c)中的幼魚(yú)進(jìn)行檢測(cè)，從而排除二倍體幼魚(yú)，獲得團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(a)中，其中的正交為二倍體團(tuán)頭魴♀×二倍體三角魴♂，其中的反交為二倍體三角魴♀×二倍體團(tuán)頭魴♂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，采用的誘導(dǎo)方法選自熱休克、冷休克、靜水壓或其組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中還包括對(duì)步驟(b)的成活胚胎進(jìn)行胚胎期染色體制片和成活率統(tǒng)計(jì)，根據(jù)胚胎期的四倍化比例和成活率之間的關(guān)系，確定誘導(dǎo)條件，并根據(jù)確定的誘導(dǎo)條件進(jìn)行誘導(dǎo)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(d)之后，還包括步驟(e)進(jìn)行形態(tài)特征分析和性腺發(fā)育程度檢測(cè)，以獲得可育四倍體。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，當(dāng)步驟(a)為正交時(shí)，在步驟(b)中的熱休克誘導(dǎo)條件為對(duì)受精后1.40τ0的受精卵，采用40.0℃熱休克持續(xù)2分鐘。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，當(dāng)步驟(a)為反交時(shí)，在步驟(b)中的熱休克誘導(dǎo)條件為對(duì)受精后1.30τ0的受精卵，采用39.0℃熱休克持續(xù)2分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(a)中，還包括用促排卵素2號(hào)和絨毛膜促性腺激素對(duì)雌魚(yú)進(jìn)行混合催產(chǎn)；或者在雜交時(shí)采用干法授精法進(jìn)行雜交。
9.一種用權(quán)利要求1所述的方法制備的團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)。
10.一種團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的四倍體的體細(xì)胞或其二倍體的生殖細(xì)胞，其特征在于，它是用權(quán)利要求1所述的方法制備的團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)的四倍體的體細(xì)胞或其二倍體的生殖細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種團(tuán)頭魴異源四倍體的建立方法。本發(fā)明將親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的三角魴與團(tuán)頭魴進(jìn)行雜交，把不同的遺傳距離組合與物理誘導(dǎo)相結(jié)合，利用魚(yú)類種間雜交自發(fā)形成四倍體的趨勢(shì)，結(jié)合物理休克處理，提高四倍體的誘導(dǎo)比例，從而成功地獲得了可育的團(tuán)頭魴異源四倍體。將團(tuán)頭魴異源四倍體魚(yú)與與團(tuán)頭魴二倍體魚(yú)雜交可獲得異源倍間雜交三倍體魚(yú)，從而提供了魚(yú)類種質(zhì)創(chuàng)新的一種有效的新途徑。
文檔編號(hào)A01K67/027GK1969616SQ20051011074
公開(kāi)日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2005年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月25日
發(fā)明者李思發(fā), 鄒曙明, 蔡完其 申請(qǐng)人:李思發(fā)