專利名稱：番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種農(nóng)作物品種的選育技術(shù)方法，具體地說是一種番茄品種的育種技術(shù)方法。
背景技術(shù)：
番茄營養(yǎng)豐富，適應(yīng)性廣，用途廣泛，不僅可作為蔬菜水果，而且可作為各種加工制品，還有保健功能，防治多種疾病的作用。
因此番茄是世界上主要栽培蔬菜之一。在我國蔬菜供應(yīng)中番茄也起著舉足輕重的作用，在農(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整中占有重要的地位。隨著日光溫室發(fā)展，我國保護地蔬菜栽培面積不斷擴大，達到136.9萬公頃，保護地中番茄的栽種面積占40％左右。同時番茄又是我國發(fā)展外向型農(nóng)業(yè)的主要出口產(chǎn)品，遠銷俄羅斯等國家。特別是中國加入WTO后，蔬菜的出口無論從成本上還是價格上有比較強的競爭優(yōu)勢。
目前，荷蘭和以色列等國家的許多品種先后打入我國，這些品種植株生長勢強，持續(xù)坐果能力好，果實均勻，果肉硬，畸形與裂果少，貨架壽命長，抗多種病害，對我國的番茄市場產(chǎn)生了巨大的沖擊。
我國番茄育種在過去20年，無論在育種技術(shù)上還是在品種選育上取得長足進步，尤其在抗病育種方面與國際先進水平差距明顯縮小。但是我國番茄育種水平仍然很低。主要表現(xiàn)在，育種的定向程度較低，育成品種特性的隨機性大，品種間相似系數(shù)較高。番茄的平均單產(chǎn)仍然低于世界水平。荷蘭溫室型番茄長季節(jié)栽培的平均產(chǎn)量是50kg/m2，最高是65kg/m2，我國缺乏耐貯運、耐逆境(耐低溫弱光或耐熱)適合溫室栽培的番茄專用品種。我國外銷的番茄品種種子，大多采用荷蘭、以色列等國家的進口種子，價格昂貴，番茄每千克為8-10萬元，是我國番茄種子價格200倍。因此選育適合溫室長季節(jié)栽培，耐貯運、抗多種病害、耐低溫弱光或耐熱番茄新品種是當(dāng)務(wù)之急，替代以色列、荷蘭、法國等國家的品種是我們的目標(biāo)。著重提高番茄的產(chǎn)量和果實耐貯運性和長貨架期，同時提高外觀品質(zhì)，要求是無畸形果，無裂果，著色好，果臍細小，果實大小均勻、光滑圓整、商品性好、平均單果重160-200克。除了基礎(chǔ)材料缺乏以外，其主要原因是在育種過程中缺乏科學(xué)的、規(guī)范的選擇程序和有效的選擇、評價方法和手段。如果這個問題不能解決，我國的番茄育種就難以適應(yīng)21世紀(jì)蔬菜生產(chǎn)發(fā)展的需要。因此，開展番茄抗病、抗逆鑒定技術(shù)進行研究，建立有效可靠的選擇程序和技術(shù)體系，不斷提高我國番茄定向育種的水平。使之有能力培育出適應(yīng)于各種栽培方式、各種消費需求的專用品種。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于為培育抗病、抗逆、適合保護地及露地栽培番茄品種提供番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的包括對番茄進行抗多種病害鑒定技術(shù)和抗逆鑒定技術(shù)方法，其中抗多種病害鑒定包括分別進行(1)TMV、葉霉病、枯萎病苗期人工接種多抗性鑒定；(2)TMV、葉霉病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定，(3)葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；(4)TMV、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性人工接種多抗性鑒定；(5)TMV、葉霉病、黃萎病苗期人工接種多抗性鑒定；(6)TMV、葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲苗期人工接種多抗性鑒定。
抗多種病害鑒定的各種病害病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)為(1)葉霉病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀；1級接種葉出現(xiàn)褪綠至黃色病斑；3級接種葉病斑上產(chǎn)生少量白色菌絲，無孢子；5級接種葉病斑上產(chǎn)生菌絲和孢子；7級接種葉病斑上產(chǎn)生大量菌絲和大量孢子，并且菌絲發(fā)展到上部葉，但無孢子；9級接種葉病斑上產(chǎn)生有大量孢子，上部葉也出現(xiàn)孢子；群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為0高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜5抗病(R)5＜病情指數(shù)＜15耐病(T)15＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30(2)根結(jié)線蟲病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無根結(jié)線蟲和卵塊1級1-2個根結(jié)和卵塊2級3-10個根結(jié)和卵塊3級11-30個根結(jié)和卵塊4級31-100個根結(jié)和卵塊5級100個以上根結(jié)和卵塊病情指數(shù)計算方法 群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為＝0。
高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜1.0抗病(R)1.0＜病情指數(shù)＜2.0耐病(T)2.0＜病情指數(shù)＜3.0感病(S)3.0＜病情指數(shù)＜4.0高感(HS)病情指數(shù)＞4.0(3)黃萎病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀
1級1-2片真葉或兩片子葉變黃，以致脫落。
2級1-2片真葉變黃或全株變黃，葉萎蔫下垂。
3級全株嚴重萎蔫，以致枯死。
群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為0。
高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜10抗病(R)10＜病情指數(shù)＜30中抗(MR)30＜病情指數(shù)＜40耐病(T)40＜病情指數(shù)＜60感病(S)病情指數(shù)＞60(4)枯萎病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級一片真葉或兩片子葉變黃，以致脫落。
2級1-2片真葉變黃或全株變黃，葉萎蔫下垂。
3級全株嚴重萎蔫，以致枯死。
群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜10抗病(R)10＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30TMV、CMV復(fù)合侵染的分類標(biāo)準(zhǔn)TMV、CMV復(fù)合侵染的單株分類標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級葉子不平展，輕花葉3級葉片嚴重皺縮，重花葉5級重花葉，葉片輕度變形，蕨葉7級重花葉，嚴重變形，線葉9級植株停止生長或近乎死亡(5)TMV、CMV群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜5抗病(R)5＜病情指數(shù)＜10耐病(T)10＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30抗逆鑒定技術(shù)方法包括耐弱光鑒定和耐低溫鑒定。
其中耐弱光鑒定方法為選擇已知耐弱光性較強和耐弱光性較差的品種對照，與待鑒定的材料同期在正常光照條件下用營養(yǎng)缽播種育苗，每個材料植株不少于30株，第一片真葉展開后，每個材料選擇整齊、均勻的幼苗，分為兩組，每組10株，一組仍然置于正常光照下，作為對照，另一組用黑色遮陽網(wǎng)進行遮光處理。對照和處理區(qū)的所有材料按完全隨機排列，對照和處理應(yīng)安排在同一設(shè)施內(nèi)，以保證對照和處理的溫度一致，在第一花序花蕾明顯可見時，調(diào)查每株的株高和葉面積，根據(jù)調(diào)查的數(shù)據(jù)計算每個材料在遮光下葉面積、株高相對于正常光照下的相對變化量，計算公式相對變化量＝(遮光處理的數(shù)值-正常光照數(shù)值)×100％，將待鑒定材料的葉面積、株高的相對變化量與耐弱光的對照進行相對比較；耐弱光鑒定方法的苗期耐弱光理想回歸方程為①y＝-0.7029x1-0.0550 x1相對株高莖粗比值②y＝-0.7173x2-0.0869 x2相對葉綠素b/a值③y＝-0.596x1-0.303x2-0.015y耐弱光指數(shù)開花坐果期耐弱光回歸方程為④y＝-2.21x1+1.104 x1相對株高莖粗比值⑤y＝--0.524x2-0.1757 x2相對葉綠素b/a值y耐弱光指數(shù)耐低溫鑒定方法為分別選耐寒性強和耐寒性弱的番茄為對照，與待鑒定的材料同期播種于塑料營養(yǎng)缽中，按常規(guī)管理，當(dāng)番茄長到第4片真葉展開、5片真葉初現(xiàn)時，每份材料取20株移到2℃黑暗或弱光條件下，48小時后，調(diào)查冷害級別；分別選耐寒性強和弱的番茄為對照，與待鑒定的材料同期播種于塑料營養(yǎng)缽中育苗，定植在大棚或溫室中，按常規(guī)進行管理，去掉第一花序，待第二花序的第一朵花完全開放時，取其花粉，在固體培養(yǎng)基上，于8-12℃低溫下觀察萌發(fā)情況，培養(yǎng)基的的制作將80ml/L硼酸、0.8％瓊脂、10％蔗糖培養(yǎng)基煮開混勻后，加入一滴到凹形載玻片上制作成固體培養(yǎng)基，放入8-12℃的生長箱中，等溫度平衡后，用毛發(fā)沾取新采集的花粉播在培養(yǎng)基表面，可播2-4行，每隔15分鐘在顯微鏡下觀察一次，用測微尺測量花粉管長度并統(tǒng)計花粉萌發(fā)率和測量花粉管的長度耐低溫鑒定方法中(1)番茄種子萌發(fā)期的低溫鑒定指標(biāo)是15℃條件下種子發(fā)芽指數(shù)；(2)以抗冷指數(shù)和低溫處理后幼苗的前兩穗果的相對坐果率做抗冷的直接指標(biāo)，同時進行相關(guān)分析，認為相對電導(dǎo)率，可溶性糖和可溶性蛋白可以作為耐低溫性的間接指標(biāo)y＝-0.6380x+2.6272 x相對電導(dǎo)率y＝0.3397x+1.5130x相對蛋白質(zhì)含量(3)開花坐果期的鑒定指標(biāo)為減數(shù)分裂期低溫處理后的花粉生活力，苗期，芽期耐低溫性一致，而花期不一致。
番茄冷害的分級0級植株葉片正常，未受冷害；1級僅少數(shù)葉片邊緣有輕度的皺縮萎蔫；2級半數(shù)以下的葉片萎蔫死亡；3級半數(shù)以上的葉片萎蔫死亡；4級植株全部死亡。
根據(jù)調(diào)查的冷害級別，計算每個材料冷害指數(shù)和抗冷指數(shù)。
冷害指數(shù)＝∑xa/(n∑x)＝(X1a1+X2a2)/nT式中X1、X2、X3、......Xn表示各級冷害的番茄數(shù)，a1、a2、a3、......an表示各冷害等級，T為調(diào)查的總著述?？估渲笖?shù)為冷害指數(shù)的倒數(shù)。
本發(fā)明具體提出1.抗ToMV、葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病、黃萎病等病害中三種以上病害苗期人工接種鑒定方法、接種濃度、接種苗齡、接種順序，每種病害單株和群體分級標(biāo)準(zhǔn)。2.番茄耐弱光的鑒定方法。利用相對株高和莖粗比與相對葉綠素b/a值可以作為番茄苗期弱光性的鑒定指標(biāo)，相對株高、莖粗比值與相對可溶性蛋白質(zhì)含量可以用作開花座果期耐弱光材料的鑒定指標(biāo)。3.耐低溫鑒定方法，利用抗冷指標(biāo)和低溫處理后幼苗的前兩穗果的相對座果率作為苗期抗冷的直接指標(biāo)，相對電導(dǎo)率，可溶性糖和可溶性蛋白可以作為耐低溫性的間接指標(biāo)，減數(shù)分裂期低溫處理后的花粉生活力強弱可作為開花座果期的鑒定標(biāo)準(zhǔn)。并提出番茄冷害的分級標(biāo)準(zhǔn)，計算冷害指數(shù)和抗冷指數(shù)公式以及低溫下花粉萌發(fā)方法。通過本發(fā)明的方法可以選育出抗多種病害，耐低溫弱光的優(yōu)良番茄品種。
(四)具體實施方案下面舉例對本發(fā)明做更詳細地描述本發(fā)明包括對番茄進行抗多種病害(番茄ToMV、CMV、葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病、黃萎病、早疫病等主要的病害中的三種以上病害)苗期人工接種鑒定技術(shù)和抗逆(耐低溫弱光)鑒定技術(shù)方法。
1.番茄苗期多抗性鑒定方法(1)TMV、葉霉病、枯萎病苗期鑒定方法①接種順序TMV→葉霉病→枯萎?、诮臃N苗齡2片真葉→3片真葉→4片真葉③接種濃度TMV1克病葉加0.01Mph7.0的磷酸緩沖液或蒸餾水10ml，接種后第三天復(fù)接一次。
葉霉病106個孢子/ml枯萎病107個孢子/ml④接種方法TMV摩擦法葉霉病噴霧法枯萎病灌根法⑤調(diào)查日期TMV接種后20天葉霉病接種后18天枯萎病接種后21天(2)TMV、葉霉病、根結(jié)線蟲病苗期鑒定方法①接種順序根結(jié)線蟲→TMV→葉霉?、诮臃N苗齡2片真葉→3片真葉→4片真葉③接種濃度TMV1克病葉加0.01Mph7.0的磷酸緩沖液或蒸餾水10ml，接種后第三天復(fù)接一次。
葉霉病106個孢子/ml
根結(jié)線蟲病5000條/株④接種方法TMV摩擦法葉霉病噴霧法根結(jié)線蟲病灌根法⑤調(diào)查日期TMV接種后20天葉霉病接種后18天根結(jié)線蟲病接種后45天(3)葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期鑒定方法①接種順序根結(jié)線蟲→葉霉病→枯萎?、诮臃N苗齡2片真葉→3片真葉→4片真葉③接種濃度根結(jié)線蟲病5000條/株葉霉病106個孢子/ml枯萎病107個孢子/ml④接種方法枯萎病灌根法葉霉病噴霧法根結(jié)線蟲病灌根法⑤調(diào)查日期枯萎病接種后21天葉霉病接種后18天根結(jié)線蟲病接種后45天(4)TMV、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期鑒定方法①接種順序根結(jié)線蟲→TMV→枯萎病②接種苗齡2片真葉→3片真葉→4片真葉③接種濃度TMV1克病葉加0.01Mph7.0的磷酸緩沖液或蒸餾水10ml，接種后第三天復(fù)接一次根結(jié)線蟲病5000條/株葉霉病106個孢子/ml枯萎病107個孢子/ml④接種方法TMV摩擦法根結(jié)線蟲病灌根法枯萎病灌根法⑤調(diào)查日期枯萎病接種后21天TMV接種后20天根結(jié)線蟲病接種后45天(5)TMV、葉霉病、黃萎病苗期鑒定方法①接種順序TMV→葉霉病→黃萎?、诮臃N苗齡2片真葉→3片真葉→4片真葉③接種濃度TMV1克病葉加0.01Mph7.0的磷酸緩沖液或蒸餾水10ml，接種后第三天復(fù)接一次。
葉霉病106個孢子/ml黃萎病107個孢子/ml④接種方法TMV摩擦法葉霉病噴霧法黃萎病灌根法⑤調(diào)查日期TMV接種后20天葉霉病接種后18天黃萎病接種后15天(6)TMV、葉霉病、枯萎病根結(jié)線蟲苗期鑒定方法①接種順序根結(jié)線蟲病→TMV→葉霉病→枯萎病②接種苗齡2片真葉→3片真葉→4片真葉→5片真葉③接種濃度TMV1克病葉加0.01Mph7.0的磷酸緩沖液或蒸餾水10ml，接種后第三天復(fù)接一次。
葉霉病106個孢子/ml枯萎病107個孢子/ml根結(jié)線蟲病5000條/株④接種方法TMV摩擦法葉霉病噴霧法枯萎病灌根法根結(jié)線蟲病灌根法⑤調(diào)查日期TMV接種后20天葉霉病接種后18天枯萎病接種后21天根結(jié)線蟲病接種后45天各種病害病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)葉霉病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級接種葉出現(xiàn)褪綠至黃色病斑
3級接種葉病斑上產(chǎn)生少量白色菌絲，無孢子。
5級接種葉病斑上產(chǎn)生菌絲和孢子。
7級接種葉病斑上產(chǎn)生大量菌絲和大量孢子，并且菌絲發(fā)展到上部葉，但無孢子。
9級接種葉病斑上產(chǎn)生有大量孢子，上部葉也出現(xiàn)孢子。
群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為0。
高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜5抗病(R)5＜病情指數(shù)＜15耐病(T)15＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30根結(jié)線蟲病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無根結(jié)線蟲和卵塊1級1-2個根結(jié)和卵塊2級3-10個根結(jié)和卵塊3級11-30個根結(jié)和卵塊4級31-100個根結(jié)和卵塊5級100個以上根結(jié)和卵塊病情指數(shù)計算方法 群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為＝0。
高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜1.0抗病(R)1.0＜病情指數(shù)＜2.0耐病(T)2.0＜病情指數(shù)＜3.0感病(S)3.0＜病情指數(shù)＜4.0高感(HS)病情指數(shù)＞4.0黃萎病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級1-2片真葉或兩片子葉變黃，以致脫落。
2級1-2片真葉變黃或全株變黃，葉萎蔫下垂。
3級全株嚴重萎蔫，以致枯死。
群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為0。
高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜10抗病(R)10＜病情指數(shù)＜30
中抗(MR)30＜病情指數(shù)＜40耐病(T)40＜病情指數(shù)＜60感病(S)病情指數(shù)＞60枯萎病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級一片真葉或兩片子葉變黃，以致脫落。
2級1-2片真葉變黃或全株變黃，葉萎蔫下垂。
3級全株嚴重萎蔫，以致枯死。
群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜10抗病(R)10＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30TMV、CMV復(fù)合侵染的分類標(biāo)準(zhǔn)TMV、CMV復(fù)合侵染的單株分類標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級葉子不平展，輕花葉3級葉片嚴重皺縮，重花葉5級重花葉，葉片輕度變形，蕨葉7級重花葉，嚴重變形，線葉9級植株停止生長或近乎死亡TMV、CMV群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜5抗病(R)5＜病情指數(shù)＜10耐病(T)10＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30三、番茄耐弱光鑒定方法1.鑒定方法(1)番茄苗期和開花座果期各自的耐弱光性并不相關(guān)，相對株高和莖粗比值與相對葉綠素b/a值可以作為番茄苗期耐弱光性的鑒定指標(biāo)，相對株高、莖粗比值與相對可溶性蛋白含量可以用作開花座果期耐弱光材料的鑒定指標(biāo)，并建立回歸方程如下苗期耐弱光理想回歸方程①y＝-0.7029x1-0.0550 x1相對株高莖粗比值②y＝-0.7173x2-0.0869 x2相對葉綠素b/a值③y＝-0.596x1-0.303x2-0.015 y耐弱光指數(shù)開花座果期耐弱光回歸方程如下④y＝-2.21x1+1.104x1相對株高莖粗比值⑤y＝--0.524x2-0.1757 x2相對葉綠素b/a值y耐弱光指數(shù)
(2)選擇已知耐弱光性較強(如caruso，中雜9，佳粉等)和耐弱光性較差(如中蔬6等)的品種對照，與待鑒定的材料同期在正常光照條件下用營養(yǎng)缽播種育苗。每個材料(包括對照材料)植株不少于30株。
第一片真葉展開后，每個材料選擇整齊、均勻的幼苗，分為兩組，每組10株。一組仍然置于正常光照下，作為對照，另一組用黑色遮陽網(wǎng)進行遮光處理.對照和處理區(qū)的所有材料按完全隨機排列。對照和處理應(yīng)安排在同一設(shè)施內(nèi)，以保證對照和處理的溫度一致。
在第一花序花蕾明顯可見時，調(diào)查每株的株高和面積。根據(jù)調(diào)查的數(shù)據(jù)計算每個材料在遮光下葉面積、株高相對于正常光照下的相對變化量(％)。
計算公式相對變化量＝(遮光處理的數(shù)值-正常光照數(shù)值)×100(％)，將待鑒定材料的葉面積、株高的相對變化量與耐弱光的對照進行相對比較。
四、耐低溫鑒定方法1.耐低溫鑒定方法(1)番茄種子萌發(fā)期的低溫鑒定指標(biāo)是15℃條件下種子發(fā)芽指數(shù)。
(2)以抗冷指數(shù)和低溫處理后幼苗的前兩穗果的相對座果率做抗冷的直接指標(biāo)，同時進行相關(guān)分析，認為相對電導(dǎo)率，可溶性糖和可溶性蛋白可以作為耐低溫性的間接指標(biāo)y＝-0.6380x+2.6272 x相對電導(dǎo)率y＝0.3397x+1.5130 x相對蛋白質(zhì)含量(3)開花座果期的鑒定指標(biāo)為減數(shù)分裂期低溫處理后的花粉生活力，苗期，芽期耐低溫性一致，而花期不一致。
2.苗期低溫處理法分別選耐寒性強和弱的番茄為對照，與待鑒定的材料同期播種與塑料營養(yǎng)缽中，按常規(guī)管理。當(dāng)番茄長到第4片真葉展開、5片真葉初現(xiàn)時，每份材料取20株移到2℃黑暗或弱光條件下。48小時后，調(diào)查冷害級別。冷害的分級可參考下面的標(biāo)準(zhǔn)。
番茄冷害的分級0級植株葉片正常，未受冷害；1級僅少數(shù)葉片邊緣有輕度的皺縮萎蔫；2級半數(shù)以下的葉片萎蔫死亡；3級半數(shù)以上的葉片萎蔫死亡；4級植株全部死亡。
根據(jù)調(diào)查的冷害級別，計算每個材料冷害指數(shù)和抗冷指數(shù)。
冷害指數(shù)＝∑xa/(n∑x)＝(X1a1+X2a2)/nT式中X1、X2、X3、......Xn表示各級冷害的番茄數(shù)，a1、a2、a3、......an表示各冷害等級，T為調(diào)查的總著述。抗冷指數(shù)為冷害指數(shù)的倒數(shù)。將待鑒定的材料的抗冷指數(shù)與抗寒和不抗寒的對照進行比較，做出相應(yīng)的評價。
3.低溫下花粉萌發(fā)分別選耐寒性強和弱的番茄為對照，與待鑒定的材料同期播種與塑料營養(yǎng)缽中育苗，定植在棚或溫室中，按常規(guī)進行管理。
去掉第一花序。待第二花序的第一朵花完全開放時，取其花粉。在固體培養(yǎng)基上，于8-12℃低溫下觀察萌發(fā)情況。培養(yǎng)基的的制作將80ml/L硼酸、0.8％瓊脂、10％蔗糖培養(yǎng)基煮開混勻后，加入一滴到凹形載玻片上制作成固體培養(yǎng)基，放入8-12℃的生長箱中，等溫度平衡后，用毛發(fā)沾取新采集的花粉播在培養(yǎng)基表面，可播2-4行。每隔15分鐘在顯微鏡下觀察一次，用測微尺測量花粉管長度并統(tǒng)計花粉萌發(fā)率和測量花粉管的長度。
權(quán)利要求
1.一種番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法，其特征是包括對番茄進行抗多種病害鑒定技術(shù)和抗逆鑒定技術(shù)方法，其中抗多種病害鑒定包括分別進行(1)TMV、葉霉病、枯萎病苗期人工接種多抗性鑒定；(2)TMV、葉霉病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；(3)葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；(4)TMV、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；(5)TMV、葉霉病、黃萎病苗期人工接種多抗性鑒定；(6)TMV、葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；抗逆鑒定技術(shù)方法包括耐弱光鑒定和耐低溫鑒定，其中耐弱光鑒定方法為選擇已知耐弱光性較強和較差的品種做對照，與待鑒定的材料同期在正常光照條件下用營養(yǎng)缽播種育苗，每個材料植株不少于30株，第一片真葉展開后，每個材料選擇整齊、均勻的幼苗，分為兩組，每組10株，一組仍然置于正常光照下，作為對照，另一組用黑色遮陽網(wǎng)進行遮光處理，對照和處理區(qū)的所有材料按完全隨機排列，對照和處理應(yīng)安排在同一設(shè)施內(nèi)，以保證對照和處理的溫度一致，在第一花序花蕾明顯可見時，調(diào)查每株的株高和面積，根據(jù)調(diào)查的數(shù)據(jù)計算每個材料在遮光下葉面積、株高相對于正常光照下的相對變化量，計算公式相對變化量＝(遮光處理的數(shù)值-正常光照數(shù)值)×100％，將待鑒定材料的葉面積、株高的相對變化量與耐弱光的對照進行相對比較；耐低溫鑒定方法為分別選耐寒性強和弱的番茄為對照，與待鑒定的材料同期播種與塑料營養(yǎng)缽中，按常規(guī)管理，當(dāng)番茄長到第4片真葉展開、5片真葉初現(xiàn)時，每份材料取20株移到2℃黑暗或弱光條件下，48小時后，調(diào)查冷害級別；分別選耐寒性強和耐寒性弱的番茄為對照，與待鑒定的材料同期播種與塑料營養(yǎng)缽中育苗，定植在大棚或溫室中，按常規(guī)進行管理，去掉第一花序，待第二花序的第一朵花完全開放時，取其花粉，在固體培養(yǎng)基上，于8-12℃低溫下觀察萌發(fā)情況，培養(yǎng)基的的制作將80ml/L硼酸、0.8％瓊脂、10％蔗糖培養(yǎng)基煮開混勻后，加入一滴到凹形載玻片上制作成固體培養(yǎng)基，放入8-12℃的生長箱中，等溫度平衡后，用毛發(fā)沾取新采集的花粉播在培養(yǎng)基表面，可播2-4行，每隔15分鐘在顯微鏡下觀察一次，用測微尺測量花粉管長度并統(tǒng)計花粉萌發(fā)率和測量花粉管的長度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法，其特征是抗多種病害鑒定的各種病害病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)為(1)葉霉病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)，單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀；1級接種葉出現(xiàn)褪綠至黃色病斑；3級接種葉病斑上產(chǎn)生少量白色菌絲，無孢子；5級接種葉病斑上產(chǎn)生菌絲和孢子；7級接種葉病斑上產(chǎn)生大量菌絲和大量孢子，并且菌絲發(fā)展到上部葉，但無孢子；9級接種葉病斑上產(chǎn)生有大量孢子，上部葉也出現(xiàn)孢子；群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為0高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜5抗病(R)5＜病情指數(shù)＜15耐病(T)15＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30(2)根結(jié)線蟲病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無根結(jié)線蟲和卵塊1級1-2個根結(jié)和卵塊2級3-10個根結(jié)和卵塊3級11-30個根結(jié)和卵塊4級31-100個根結(jié)和卵塊5級100個以上根結(jié)和卵塊病情指數(shù)計算方法 群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為＝0，高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜1.0抗病(R)1.0＜病情指數(shù)＜2.0耐病(T)2.0＜病情指數(shù)＜3.0感病(S)3.0＜病情指數(shù)＜4.0高感(HS)病情指數(shù)＞4.0(3)黃萎病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級1-2片真葉或兩片子葉變黃，以致脫落，2級1-2片真葉變黃或全株變黃，葉萎蔫下垂，3級全株嚴重萎蔫，以致枯死，群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)免疫(I)不侵染，病情指數(shù)為0，高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜10抗病(R)10＜病情指數(shù)＜30中抗(MR)30＜病情指數(shù)＜40耐病(T)40＜病情指數(shù)＜60感病(S)病情指數(shù)＞60(4)枯萎病病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)單株病情分級標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級一片真葉或兩片子葉變黃，以致脫落，2級1-2片真葉變黃或全株變黃，葉萎蔫下垂，3級全株嚴重萎蔫，以致枯死，群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜10抗病(R)10＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30TMV、CMV復(fù)合侵染的分類標(biāo)準(zhǔn)TMV、CMV復(fù)合侵染的單株分類標(biāo)準(zhǔn)0級無癥狀1級葉子不平展，輕花葉3級葉片嚴重皺縮，重花葉5級重花葉，葉片輕度變形，蕨葉7級重花葉，嚴重變形，線葉9級植株停止生長或近乎死亡(5)TMV、CMV群體抗病分級標(biāo)準(zhǔn)高抗(HR)0＜病情指數(shù)＜5抗病(R)5＜病情指數(shù)＜10耐病(T)10＜病情指數(shù)＜30感病(S)病情指數(shù)＞30
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法，其特征是耐弱光鑒定方法的苗期耐弱光想回歸方程為①y＝-0.7029x1-0.0550 x1相對株高莖粗比值②y＝-0.7173x2-0.0869 x2相對葉綠素b/a值③y＝-0.596x1-0.303x2-0.015 y耐弱光指數(shù)開花坐果期耐弱光回歸方程為④y＝-2.21x1+1.104x1相對株高莖粗比值⑤y＝--0.524x2-0.1757 x2相對葉綠素b/a值y耐弱光指數(shù)
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法，其特征是耐低溫鑒定方法中(1)番茄種子萌發(fā)期的低溫鑒定指標(biāo)是15℃條件下種子發(fā)芽指數(shù)；(2)以抗冷指數(shù)和低溫處理后幼苗的前兩穗果的相對坐果率做抗冷的直接指標(biāo)，同時進行相關(guān)分析，認為相對電導(dǎo)率，可溶性糖和可溶性蛋白可以作為耐低溫性的間接指標(biāo)y＝-0.6380x+2.6272 x相對電導(dǎo)率y＝0.3397x+1.5130 x相對蛋白質(zhì)含量(3)開花坐果期的鑒定指標(biāo)為減數(shù)分裂期低溫處理后的花粉生活力，苗期、芽期耐低溫性一致，而花期不一致，番茄冷害的分級0級植株葉片正常，未受冷害；1級僅少數(shù)葉片邊緣有輕度的皺縮萎蔫；2級半數(shù)以下的葉片萎蔫死亡；3級半數(shù)以上的葉片萎蔫死亡；4級植株全部死亡，根據(jù)調(diào)查的冷害級別，計算每個材料冷害指數(shù)和抗冷指數(shù)，冷害指數(shù)＝∑xa/(n∑x)＝(X1a1+X2a2)/nT式中X1、X2、X3、......Xn表示各級冷害的番茄數(shù)，a1、a2、a3、......an表示各冷害等級，T為調(diào)查的總著述?？估渲笖?shù)為冷害指數(shù)的倒數(shù)。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法，其特征是耐低溫鑒定方法中(1)番茄種子萌發(fā)期的低溫鑒定指標(biāo)是15℃條件下種子發(fā)芽指數(shù)；(2)以抗冷指數(shù)和低溫處理后幼苗的前兩穗果的相對坐果率做抗冷的直接指標(biāo)，同時進行相關(guān)分析，認為相對電導(dǎo)率，可溶性糖和可溶性蛋白可以作為耐低溫性的間接指標(biāo)y＝-0.6380x+2.6272 x相對電導(dǎo)率y＝0.3397x+1.5130 x相對蛋白質(zhì)含量(3)開花坐果期的鑒定指標(biāo)為減數(shù)分裂期低溫處理后的花粉生活力，苗期、芽期耐低溫性一致，而花期不一致，番茄冷害的分級0級植株葉片正常，未受冷害；1級僅少數(shù)葉片邊緣有輕度的皺縮萎蔫；2級半數(shù)以下的葉片萎蔫死亡；3級半數(shù)以上的葉片萎蔫死亡；4級植株全部死亡，根據(jù)調(diào)查的冷害級別，計算每個材料冷害指數(shù)和抗冷指數(shù)，冷害指數(shù)＝∑xa/(n∑x)＝(X1a1+X2a2)/nT式中X1、X2、X3、......Xn表示各級冷害的番茄數(shù)，a1、a2、a3、......an表示各冷害等級，T為調(diào)查的總著述，抗冷指數(shù)為冷害指數(shù)的倒數(shù)。
全文摘要
本發(fā)明提供的是一種番茄抗多種病害和抗逆育種鑒定技術(shù)方法。包括對番茄進行抗多種病害鑒定技術(shù)和抗逆鑒定技術(shù)方法。其中抗多種病害鑒定包括分別進行TMV、葉霉病、枯萎病苗期人工接種多抗性鑒定；TMV、葉霉病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；TMV、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；TMV、葉霉病、黃萎病苗期人工接種多抗性鑒定；TMV、葉霉病、枯萎病、根結(jié)線蟲病苗期人工接種多抗性鑒定；抗逆鑒定技術(shù)方法包括耐弱光鑒定和耐低溫鑒定。通過本發(fā)明的方法可以選育出抗多種病害，耐低溫弱光的優(yōu)良番茄品種。
文檔編號A01H1/04GK1623371SQ200310107739
公開日2005年6月8日 申請日期2003年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月5日
發(fā)明者李景富, 杜永臣, 許向陽, 王富, 侯興亮 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)